производные бис-нафталимидов, их энантиомерные или диастереомерные формы, или их смеси, или их фармацевтически приемлемые соли, противоопухолевая композиция и способ лечения

Формула изобретения

1. Производные бис-нафталимидов общей формулы



или их энантиомерные или диастереомерные формы, или их смеси, или их фармацевтически приемлемые соли

где R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ независимо представляют собой водород или метил,

X и X¹ H или NO₂,

Y и Y¹ Н или NO₂ при условии, что по крайней мере один из X, X¹, Y, Y¹ представляет собой NO₂.

2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п.1, представляющая /R, R/-2,2¹-/1,2-этандиил-бис/имино(1-метил-2, 1-этандиил)//-бис/5-нитро-1Н-бенз/de/-изохинолин-1,3-(2Н)-дион/.

3. Противоопухолевая композиция, содержащая активное начало и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что она содержит в качестве активного начала соединение общей формулы



или их энантиомерные или диастереомерные формы, или их смеси, или их фармацевтически приемлемые соли,

где R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ независимо представляют водород или метил,

X и X¹ H или NO₂,

Y и Y¹ Н или NO₂ при условии, что по крайней мере один из X, X¹, Y, Y¹ представляет NО₂,

в количестве 0,5 95 мас.

4. Противоопухолевая композиция по п. 3, отличающаяся тем, что она содержит в качестве активного начала /R, R/-2,2¹-/1,2-этандиил-бис/имино(1-метил-2,1-этандиил)//- бис /5-нитро-1Н-бенз / de/ изохинолин-1,3(2Н)-дион/.

5. Способ лечения твердой опухолевой карциномы у млекопитающих путем введения лекарственных веществ, отличающийся тем, что млекопитающему назначают соединение общей формулы по п. 3 в суточной дозе 5 400 мг/кг массы в 2 4 приема.

6. Способ лечения по п. 5, отличающийся тем, что млекопитающему назначают соединение, представляющее собой /R,R/-2,2¹- /1,2-этандиил-бис/имино(1-метил-2,1-этандиил)//-бис/5-нитро-1Н-бенз/de /изохинолин-1,3-(2Н)-дион/.

Описание изобретения к патенту

Данное изобретение относится к бис-нафталимидам, включающим 2,2"-[1-2-этандиилбис[имино(1-метил-2,1-этандиил)]-бис[5-нитро -1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион] и 2,2"-[1,2-этандиилбис[имино/2-метил-2,1-этандиил/]-бис[5-нитро -1Н-бенз/de/изохинолин-1,3-/2H/-дион] к способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим их, и к способам использования их для лечения злокачественных опухолей, особенно твердых опухолевых карцином, у животных.

Harnisch и др. патент США 4841052, выданный 20 июня 1989 г. описывают имиды нафталевой кислоты, полезные в качестве веществ, регулирующих заряд в электрофотографических тонерах.

Авторы Brana и др. патент США 4874863, выданный 17 октября 1989 г. раскрывают противораковые соединения формулы:



где Х¹, X²,X³ и Х⁴ являются одинаковыми или различными и каждый представляет собой Н, NO₂, NH₂, /1-6C/алкиламино, ди-/1-6C/алкиламино, ОН, /1-6C/алкокси, галоген, тригалоидметил, /1-6C/алкилформил, /1-6C/алкилкарбонил, уреил, /1-6C/алкилуреил и R представляет прямую цепь или разветвленный /4-10C/алкилен, который прерывается в одной или двух точках в цепи вторичной или третичной аминогруппой, где 2 атома азота могут быть дополнительно связаны друг с другом алкиленовой группой, или их соли с физиологически приемлемыми кислотами.

Данное изобретение предоставляет бис-фталимидные соединения, имеющие формулу /1/:



или их энантиомерные или диастереомерные формы, или смеси этантиомерных или диастереомерных форм их, или их фармацевтически приемлемые соли, где:

R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ независимо представляют собой водород или метил;

X и X¹ представляют собой Н или NO₂; и

Y и Y¹ представляют Н или NO₂, при условии, что по крайней мере один из Х, Х¹, Y и Y¹ представляет NO₂.

Предпочтительные соединения настоящего изобретения включают те соединения формулы /i/, в которой:

R¹ и R⁷ представляют метил;

R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ представляют Н;

X и X¹ представляют NO₂, где заместитель находится в 3-положении нафталимида /т.е. 5-положение 1Н-бенз/де/изохинолин-1,3/2H/-диона/ и

Y и Y¹ представляет Н.

Предпочтительные соединения настоящего изобретения также включают те соединения формулы /i/, в которой:

R² и R⁶ представляют метил;

R¹, R³, R⁴, R⁵ и R⁷ представляют водород;

X и X¹ представляют NO₂, где заместитель находится в 3-положении нафталимида /т.е. 5-положение 1Н-бенз/де/изохинолин-1,3/2H/-диона/; и

Y и Y¹ представляют водород.

Особенно предпочтительными соединениями настоящего изобретения являются следующие:

/S, S/-2,2¹-[1,2-этандиилбис[имино/1-метил-2,1-этандиил/] -бис[5-нитро-1Н-бенз/de/ихохинолин-1,3/2H/-дион]

/Рацемический + Мезо/-2,2¹-[1,2-этандиилбис[имино(1-метил-2,1-этандиил)] -бис[5-нитро-1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]

/R, R/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(1-метил-2,1-этандиил)] -бис[5-нитро-1Н-бенз)de/ихохинолин-1,3/2H/-дион]

/Мезо/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(1-метил-2,1-этандиил)] -бис[5-нитро-1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]

/S, S/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(2-метил-2,1-этандиил)]-бис[5-нитро-1 Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]

/Рацемический+Мезо/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(2-метил-2,1-этандиил)] -бис[5-нитро-1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]

/R, R/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(2-метил-2,1-этандиил)]-бис[5-нитро1Н-бенз/de/изохинолин-1,3-/2H/-дион] или

/Мезо/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(2-метил-2,1-этандиил)] -бис-[5-нитро -1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]

и их фармацевтически приемлемые соли.

Данным изобретением также охватываются способы получения соединений формулы /i/, фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы /i/, и способы использования этих соединений для лечения рака, особенно твердых опухолевых карцином, у млекопитающих.

Синтез. Настоящее изобретение описывает ряд бис-нафталимидов, полезных для лечения злокачественных опухолей, содержащих линкеры, происходящие из восстановленных пептидов. Соединения данного изобретения являются более растворимыми в водных средах, чем известные соединения, не содержащие этих восстановленных пептидных линкеров.

Соединения данного изобретения могут синтезироваться с помощью взаимодействия двух эквивалентов ангидрида формулы /ii/ c одним эквивалентом полиамина формулы /iii/ в инертном растворителе, таком, как этанол или диметилформамид или тетрагидрофуран, например, при температуре в интервале от температуры окружающей среды до температуры кипения растворителя /Схема А/. Получающаяся в результате суспензия может затем фильтроваться, давая свободное основание формулы /i/, или она может подкисляться соответствующей минеральной или органической кислотой, давая фармацевтически приемлемую соль, которая может получаться с помощью фильтрования. Соли свободных оснований могут также получаться с помощью подкисления суспензии свободного основания в этиловом спирте или дихлорметане соответствующей минеральной или органической кислотой и сбора образовавшегося твердого вещества с помощью фильтрования. В некоторых случаях свободное основание формулы /i/ требует очистки с помощью хроматографии на колонке перед тем, как может получаться его соль, как описано выше.

Схема А





Исходный ангидрид /ii/ является промышленно доступным или может быть получен согласно процедурам, описанным авторами Hodgsen и др. J. Chem. Soc. стр. 90 /1945/. Восстановленные пептиды формулы /iii/ могут получаться согласно методам, описанным ниже /Схемы I-IV/.

Синтез соединений формулы Va /см. Схему 1 ниже/ может выполняться с помощью реакции т-ВОС /S/-аланина /соединение а/ c 1,1"-карбонилдимидазолом с последующим взаимодействием с этилендиамином в обычных условиях. Кислотный гидролиз т-ВОС /N-трет-бутоксикарбонил/ защитной группы в соединении Ia может проводиться в стандартных условиях, давая соединение IIa. Та же самая процедура используется для получения соединения IIb или IIc, начиная последовательность реакций с соответствующего /R/-аланина (соединение b/ или рацемического аланина /cоединение с/.

Восстановление соединения IIa /дихлоргидратная соль/ дибораном в тетрагидрофуране при температуре дефлегмации давало соединение IIIa. IIIa затем нейтрализовалось этилатом натрия, и чистое свободное основание IVa получалось с помощью перегонки Кугельрора. IVa подвергался реакции с соответствующим нафталевым ангидридом в этаноле или тетрагидрофуране при температуре дефлегмации для получения Va. Соединения Vb и Vc получаются аналогичным образом с помощью использования соответственно соответствующих соединений IVb или IVc.

Схема 1





Бис-нафтамилиды формулы /XIX/, где R¹ R³ R⁴ R⁵ R⁷ H, R² R⁶ CH₃ и Х и Y представляют NO₂ или Н, могут быть получены по схеме III. Реакция /S/-аланин-метилового эфира с оксалилхлоридом в бензоле при температуре дефлегмации давала амид XVa. Амид XVa превращался в амид XVIa c помощью аммиака в метаноле в стандартных условиях. Амид XVIa восстанавливается дибораном в тетрагидрофуране, давая амин XVIIa в виде тетрагидрохлоргидратной соли, которая впоследствии нейтрализовалась этилатом натрия, давая свободный амин XVIIIa. Амин XVIIIa конденсировался с соответствующим нафталевым ангидридом, давая соединение XIXa. Соединения XIXb и XIXc могут получаться аналогично с помощью использования соответствующих соединений XVIIIb и XVIIIc, соответственно. В дополнение к сказанному, соединения XXa, XXVIIIb и XXIXb можно получать с помощью конденсации амина XVIIIb соответствующими нафталевыми ангидридами.

Схема III







На схеме III положение Х и Y указывается с использованием нумерации положения в соответствующем нафталевом ангидриде, а не нумерации для 1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-диона.

Для соединений формулы /XXVII/ синтез показан на схеме IV. Реакция т-ВОС/S/-аналина с изобутилхлорформиатом в присутствии N-метилморфолина с последующей реакцией с аминоацетонитрилом /получаемым нейтрализацией его HCl соли N-метилморфолином/, давала XXI.

Данное соединение гидрировалось с использованием гидроокиси палладия в уксусной кислоте, давая XXII. Реакция т-ВОС-/R/-аланина с 1,1"-карбонилдиимидазолом с последующим добавлением соединения XXII в стандартных условиях давала XXIII. Кислотный гидролиз т-ВОС защитной группы соединения XXIII осуществлялся в стандартных условиях, давая XXIV. Последующее восстановление дибераном в дефлегмирующем тетрагидрофуране давало XXV, которое нейтрализовалось этилатом натрия, давая XXVI. Амин XXVI конденсировался с соответствующим нафталевым ангидридом, давая XXVII.

Схема IV





Для соединения формулы /XXXX/ синтез показан на схеме V. /т-ВОС/-аланил-аланин подвергался реакции с изобутилхлорформиатом в метиленхлориде при -10^oC-15^oC в присутствии N-метилморфолина с последующим добавлением хлоргидрата метилового эфира /S/-аланина, давая соединение XXXV. Сложный эфир XXXV превращался в его амид XXXVI c помощью барботирования аммиака в метаноле. т-ВОС защитная группа удалялась с помощью кислотного гидролиза, давая XXXVII. Последующее восстановление дибораном трипептидного амида XXXVII в дефлегмирующем тетрагидрофуране давало тетрахлоргидрат полиамина XXXVIII, который нейтрализовался этилатом натрия, давая XXXIX. Амин XXXIX конденсировался с соответствующим нафталевым ангидридом, давая XXXX.

Схема V



Асимметрические бис-нафталимиды формулы /XXXXVI/ могут синтезироваться, как показано на схеме VI /ниже/. Реакция XXII c 1,1"-карбонилдиимидазолом с последующим добавлением /R/-бензилоксикарбонилаланина давала XXXXI. Последующая реакция с пятисернистым фосфором в тетрагидрофуране давала соответствующий тиоамид XXXXII. Обработка XXXXII никелем Ренея давала амин XXXXIII. Амин XXXXIII конденсировался с 3-нитро-1,8-нафталевым ангидридом, давая нафталимид XXXXIV. Защитная /т-ВОС/-группа гидролизовалась и в стандартных условиях, давая XXXXV, который в свою очередь конденсировался с еще одним нафталевым ангидридом, давая несимметричные бис-нафталимиды формулы XXXXVI.

Схема VI



Данное изобретение можно дополнительно понять, обращаясь к следующим примерам и представленным ниже таблицам.

ПРИМЕР 1. /S,S/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино/-1-метил/-2,1-этандиил]-бис[5-нитро1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/ /VIa/

Часть A: /IIIa/ /S, S/-N¹,N²-1,2-этандиилбис[1,2-пропандиамин]тетрахлоргидрат

К суспензии соединения IIa /2,75 г, 10 ммолей/ в ТГФ /80 мл/ добавлялось 200 мл 1 М ВН₃, ТГФ комплекса медленно. Смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 1,5 ч, а затем нагревалась на протяжении ночи, образуя светлый раствор. После охлаждения до комнатной температуры раствор осторожно гасился добавлением 100 мл метанола, а затем нагревался с обратным холодильником на протяжении ночи. Растворитель выпаривался, и к оставшейся жидкости добавлялось 20 мл метанола и 5 мл концентрированной HCl. Получающееся в результате более твердое вещество собиралось на фильтре в атмосфере азота, давая 1,92 г /60%/ соединения IIIA; т.пл. 210-215^oC.

¹H-ЯМР /D₂O/ 3,60 /м. 2Н, 2 СН/, 3,40 /c. 4H, 2 CH₂/, 3,27 /м. 4Н, 2 СН₂ и 1,30 /д. 6Н, I 6,9 Гц, 2 СН₃/. MC /DCl/ м/e 175 /M+1, свободное основание/. //_D 2,31^o /c -0,606, H₂O/.

Раздел В: /IVa/ /S,S/-N¹,N¹-1,2-этандиилбис[1,2-пропандиамин]

Натрий /1,03 г, 45 ммолей/ добавлялся к 50 мл безводного этанола и смесь перемешивалась в течение 1,5 ч до тех пор, пока весь натрий не растворялся. К раствору добавлялось 3,2 г /10 ммолей/ соединения IIIa. После перемешивания в течение 2 ч осадок хлорида натрия удалялся с помощью фильтрования; и растворитель в фильтрате выпаривался. Перегонка Кугельрора /120-140^oC при 1,4 мм/ давала 1,29 г /74%/ соединения IVa в виде светлой жидкости.

¹H-ЯМР /CDCl₃/ d 2,96 /м. 2Н, 2 СН/, 2,71 /м. 4Н, 2 СН₂/, 2,60 /м. 2Н, СН₂/, 2,40 /м. 2Н, СН₂/, 1,46 /широкий, 6Н, NH₂ и 2 NH/ и 1,06 /д. 6Н, I 6,2 Гц, 2 СН₃/. MC /DCl м/e 175 /M+1/.

Раздел С: /VA/ /S,S/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино/1-метил-2,1-этандиил/] -бис[5-нитро-1 Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/.

Смесь 3-нитро-1,8-нафталевого ангидрида /2,43 г, 10 ммолей/ и IVa /0,87 г, 5 ммолей/ перемешивалась при комнатной температуре в течение 4 ч, нагревалась с обратным холодильником в течение 2 ч, а затем охлаждалась до комнатной температуры на протяжении ночи. Растворитель в смеси выпаривался и остаток очищался с помощью хроматографии на колонке, давая 0,87 г /27,9%/ коричневого твердого вещества. К свободному основанию /0,84 г, 1,3 ммоля/ в 70 мл метиленхлорида добавлялось 0,26 г метансульфоновой кислоты. После перемешивания на протяжении ночи при комнатной температуре растворитель в смеси выпаривался, и к остатку добавлялось 45 мл метанола. После нагревания с обратным холодильником в течение 2 ч желтое твердое вещество собиралось на фильтре, сушилось в вакууме при 78^oC в течение 2 ч, давая 0,86 г /81%/ соединения Va; т.пл. 212-213^oC /разлож./.

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ d 9,53 /д. 2Н, I 2,2 Гц, ароматические протоны/, 8,96 /д. 2Н, I 2,2 Гц, ароматические протоны/, 8,83 /д. 2Н, I 7,7 Гц, ароматические протоны/, 8,69 /д. 2Н, I 7,3 Гц, ароматические протоны/, 8,7-8,8 /широкий, 4Н, 2 NH⁺₂/, 8,09 /т. 2Н, I 7,9 Гц, ароматические протоны/, широкий, 4Н, 2 NH⁺₂/, 8,09 /т. 2Н, I 7,9 Гц, ароматические протоны/, 5,46 /м. 2Н, 2 СН/, 3,86 /м. 2Н/, 3,2-3,5 /м. 6Н/, 2,20 /c. 6H, 2 CH₃/ и 1,57 /д. 6Н, I 6,9 Гц, 2 СН₃/, MC /DCl/ м/e 625 /M+1/.

Анализ для С₃₂H₂₈N₆O₈ x 2 CH₃SO₃H /MB 816.81/:

Вычислено, C 50,00; H 4,44; N 10,29; S 7,85

Найдено, C 49,88; H 4,39, N 10,14; S 7,86.

Аналогично могут быть получены соединения по примерам 2 и 3 и охарактеризованы.

ПРИМЕР 2. /рацемат + мезо/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино/1-метил-2,1-этандиил/] -бис[5 -нитро-1Н/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/ /Vc/

Светло-желтое твердое вещество /18% выход/; т.пл. 220-221^oC /разл./

¹H-ЯМР соединения Vc почти идентичен данным анализа соединения Va за исключением того, что Vc показывает дд. при 1,59 млн. дол. вследствие присутствия d1 пар и мезо. МС /DCl/ м/e 625 /M+1/.

Анализ для С₃₂H₂₈N₆O₈2CH₂SO₃HH ₂O /MB 834.83/:

Вычислено, C 48,92; H 4,59; N 10,07; S 7,68

Найдено, C 49,10, 49,01; H 4,45, 4,40; N 10,02, 9,96; S 7,39, 7,45

ПРИМЕР 3. /R,R/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(1-метил-2,1-этандиил)]-бис [5-нитро-1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/ Vb/

Светло-желтое твердое вещество /25% выход/; т.пл. 210-211^oC /разл./.

Данные ¹H-ЯМР соединения Vb идентичны данным соединения Va. MC /DCl/ м/e 625 /M+1/.

Анализ для C₃₂H₂₈N₆O₈2CH₃SO₃H /MB 816.81/:

Вычислено, C 50,00; H 4,44; N 10,29; S 7,85

Найдено, C 49,88; H 4,41; N 10,14; S 7,81.

ПРИМЕР 26. /Мезо/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(1-метил-2,1-этандиил)] -бис[5-нитро-1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/ /XXVII/

Раздел А: /XXI/ 1,1-Диметилэтил-/S/-[2-[/Цианометил/амино]-1-метил-2-оксоэтил]карбамат.

Смесь хлоргидрата аминоацетонитрила /9,25 г, 100 ммолей/ и N-метилморфолина /10,1 г, 100 ммолей/ в 100 мл ТГФ перемешивалась в течение 15 минут, N-т-ВОС-/S/-аланин /18,9 г, 100 мл/ и N-метилморфолин /10,1 г, 100 ммолей/ в 100 мл ТГФ перемешивались на соле-ледяной бане. Добавлялся изобутилхлорформиат /12,97 мл, 100 ммолей/ с такой скоростью, чтобы температура смеси не превышала 10^oC, и добавлялась спустя 2 минуты смеси суспензии нитрил-N-метилморфолина.

Смесь перемешивалась при комнатной температуре на протяжении ночи. Хлоргидрат N-метилморфолина удалялся с помощью фильтрования, а растворитель в фильтрате выпаривался. Оставшаяся жидкость разбавлялась метиленхлоридом /500 мл/, промывалась некоторым количеством карбоната калия /2 x 100 мл/, водой /1 x 100 мл/. Слои разделялись и органический слой сушился над безводным сульфатом магния, фильтровался и выпаривался, давая 15,85 г /69,75%/ неочищенного продукта. Данный продукт очищался с помощью хроматографии на колонке, давая чистое соединение XXI /14,88 г, 65,5%/; т.пл. 99-100^oC.

¹H-ЯМР /CDCl₃/ d 7,32 /широкий, 1Н, NH/, 5,12 /д. 1Н, I 5,8 Гц, NH/, 4,15 /м. 3Н, СН и СН₂/, 1,46 /c. 9H, 3 CH₃/ и 1,39 /д. 3Н, I 7,0 Гц, СН₃/. MC /Cl/ м/e 228 /M+1/.

Раздел В: /XXII/ 1,1-диметилэтил-/S/-[2-[/2-аминоэтил/-амино]-1-метил-2-оксоэтил]карбамат.

Смесь соединения XXI /2,0 г, 8,8 ммоля/ и гидроокиси палладия /0,5 г/ в 15 мл уксусной кислоты гидрировалась /50 фунт/дюйм² /3,515 кг/см²/ во встряхивателе Парра в течение 1,5 ч. Катализатор в смеси удалялся с помощью фильтрования. Уксусная кислота в фильтрате удалялась с помощью перегонки в вакууме, давая светло-желтую вязкую жидкость, к которой добавлялось 15 мл метанола и 1 г бикарбоната натрия. Смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение нескольких часов. Ацетат натрия удалялся с помощью фильтрования и растворитель в фильтрате выпаривался, давая неочищенный продукт. Данный продукт очищался с помощью хроматографии на колонке, давая чистое XXII /0,92 г, 45,2%/, в виде вязкой жидкости.

¹H-ЯМР /CDCl₃/ d 7,08 /широкий, 1Н, NH/, 5,28 /широкий, 1Н, NH/, 3,28-3,26 /м. 2Н, СН₂/, 2,84 /т. 2Н, I 5,9 Гц, СН₂/, 1,41 /c. 9H, 3 CH₃/, и 1,34 /д. 3Н, I 6,9 Гц, СН₃/, MC /Cl/ м/e 232 /M+1/.

Раздел С: /XXIII/ 1,1-Диметилэтил /мезо/-[1,2-этандиилбис[имино/-1-метил-2-оксо-2,1-этандиил/]-бис(карбамат)

Смесь N-т-ВОС-/R/-аланина /0,74 г, 3,9 ммоля/ и 1,1"-карбонилдиимидазола /0,64 г, 3,9 ммоля/ в 20 мл метиленхлорида перемешивалась на ледяной бане при охлаждении в течение 1,5 ч. К смеси добавлялось соединение XXII /0,91 г, 3,9 ммоля/ в 10 мл метиленхлорида при охлаждении на ледяной бане. Смесь перемешивалась при температуре окружающей среды в течение ночи. Продукт собирался на фильтре, давая XXIII /1,22 г, 77,9%/ в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ d 7,83 /широкий, 2Н, 2 NH/, 6,85 /м. 2Н, 2 NH/, 3,90 /м. 2Н, 2 СН/, 3,13 /м. 4Н, 2 СН₂/, 1,40 /e, 10H, 6 CH₃/ и 1,18 /д, 6Н, 2 СН₃/. MC /Cl/ м/e 403 /M+1/.

Раздел D: /XXIV/ Дихлоргидрат /мезо/-N,N"-1,2-этандиилбис/2-аминопропанамида/.

Смесь соединения XXIII /1,18 г, 2,9 ммоля/ и 2,7 мл 4,4 норм. HCl в 40 мл диоксана нагревалась до дефлегмации в течение 5 ч, а затем охлаждалась на протяжении ночи до комнатной температуры. Растворитель в смеси выпаривался, давая XXIV /0,75 г, 94%/, в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ d 8,81 /широкий, 2Н, 2 NH/, 8,33 /широкий, 4Н, 2 NH₂/, 3,83 /кв. 2Н, I 6,9 Гц= 2 СН/, 3,21 /широкий, с. 4Н, 2 СН₂/ и 1,37 /д. 6Н, I 6,9 Гц, 2 СН₃/.

Раздел Е: /XXV/ /Мезо/-N¹, N¹-1,2-этандиилбис[1,2-пропандиамин]-тетрахлоргидрат

К 30 мл 1 М боран-ТГФ комплекса добавлялось 0,75 г /2,7 ммоля/ XXIV. Cмесь нагревалась с обратным холодильником на протяжении ночи. После охлаждения до комнатной температуры к реакционной смеси медленно добавлялся метанол /15 мл/. Смесь затем нагревалась с обратным холодильником в течение 3 дней. Растворители в смеси выпаривались. К остатку добавлялось 20 мл метанола и 1,5 мл конц. HCl. Смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 4 ч, а затем растворитель и избыток HCl выпаривались, давая XXV /0,81 г, 93,7%/ в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР /D20/ d 3,66 /м. 2Н/ 3,37 /c. 4H/, 3,24 /м. 4Н/, и 1,29 /д. 6Н, I 7,0 Гц, 2 CH₃/. MC /CD1/ м/e 175 /M+1/.

Раздел F: /XXVI/ /Мезо/-N¹, N^1"-1,2-этандиилбис-/1,2-пропандиамин/

К свежеприготовленному раствору этилата натрия в этаноле /0,26 г натрия в 40 мл этанола/ добавлялось 0,81 г XXV. Смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 1 ч. Хлористый натрий удалялся с помощью фильтрования, а растворитель в фильтрате выпаривался. Продукт отделялся от остатка с помощью перегонки Кугельрора /88-96^oC при 0,4 мм/, давая XXVI /0,32 г, 73,4%/, в виде светлой жидкости.

¹H-ЯМР /CDCl₃/ d 2,88 /м. 2Н: 2 CH/, 2,63 /м. 4Н, 2 СН₂/, 2,48 /м. 2Н, СН₂/, 2,29 /м. 2Н, СН/₂/, 1,54 /широкий с. 6Н, 2 NH₂ и 2 NH/ и 0,96 /д. 6Н, I 6,2 Гц, 2 СН₃/. MC /C1/ м/e 175 /M+1/.

Раздел G: /XXVII/ /Мезо-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино/1-метил-2,1-этандиил/]-бис[5-нитро-1H- бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/

Смесь 3-нитро-1,8-нафталевого ангидрида /0,78 г, 3,2 ммоля/ и соединения XXVI /0,28 г, 1,6 ммоля/ в 26 мл этанола перемешивалась при комнатной температуре на протяжении ночи, а затем нагревалась до температуры дефлегмации в течение 2 и 2/3 ч. Растворитель в смеси выпаривался, давая неочищенные продукты. Полученное вещество очищалось с помощью хроматографии на колонке, давая чистый продукт /0,39 г, 39%/ в виде его свободного основания. Данное вещество превращалось в его метансульфонатную соль XXVII: /0,33 г, 25,3%/; т.пл. 243-244,5^oC /разл./

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ d 9,53 /c. 2H, ароматические протоны/, 8,96 /c. 2H, ароматические протоны/, 8,82 /д. 2Н, I 8,0 Гц, ароматические протоны/, 8,77, 8,74 /широкий, 4Н, 2 NH⁺₂/, 8,70 /д. 2Н, I 6,9 Гц, ароматические протоны/, 8,09 /т. 2Н, I 7,7 Гц, ароматические протоны/, 5,47 /м. 2Н, 2 СН/, 3,87 /м. 2Н/, 3,43 /м. 2Н/, 3,27 /широкий, 4Н/, 2,20 /c. 6H, 2 CH₃SO₃H/ и 1,58 /д. 6Н, I 6,6 Гц, 2 CH₃/. ИК /KBг/ 3445 /NH/, 1770, 1668 /C=O/ см^-1. MC /DC1/ м/e 625 /M+1/.

Анализ для С₃₂H₂₈N₆O₈2СH₃SO₃1/2 H₂O /MB 826,53/:

Вычислено, C 49,41; H 4,60; N 10,17; S 7,76

Найдено, C 49,45, 49,41; H 4,33, 4,29; N 10, 10,21; S 7,50, 7,58.

ПРИМЕР 27. /S,S/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(2-метил-2,1-этандиил)] -бис[5-нитро-1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/ /XIXa/

Раздел A: /XVy/ Диметил N,N"-1,2-диоксо-1,2-этандиил/бис/S-аланин/

Смесь хлоргидрата метилового эфира /S/-аланина /14 г, 100 ммолей/ и оксалилхлорида /4,9 мл, 55 ммолей/ в 150 мл бензола нагревалась на протяжении ночи с обратным холодильником. После охлаждения до комнатной температуры на фильтре собиралось белое твердое вещество, давая 12,36 г /95%/ соединения XVa; т.пл. 167-170^oC.

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ 9,15 /д. 2Н, 2 NH/, 4,40 /квинтет, 2Е, 2 СH/, 3,67 /c. 6H, 2 OCH₃/ и 1,40 /д. 6Н, 2 СН₃/. MC /DC1/ м/e 261 /M+1/ /a/^Д-65,32^o /c 1,012, AcOH/.

Раздел B: /XVIa/ /S,S/-N,N"-бис/2-имино-1-метил-2-оксоэтил/этандиамин.

Соединение XVa /5,21 г, 20 ммолей/ добавлялось к метанольному раствору, насыщенному аммиаком, при охлаждении на ледяной бане. Смесь затем дополнительно подвергалось барботированию через нее аммиака в течение 1 ч, а затем перемешивалась при комнатной температуре на протяжении ночи. Белое твердое вещество собиралось на фильтре, давая 3,65 Гц, /79%/ соединения XVIa.

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ d 8,50 /д. 2Н, I 7,7 Гц, 2 NH/, 7,50 /c. 2H, NH₂/, 7,21 /c. 2H, NH₂/, 4,25 /квинтет, 2Н, I 7,3 Гц, 2 СН/, и 1,31 /д. 6Н, I 7,3 Гц, 2 СН₃/. MC /DC1/ м/e 231 /M+1/ /a/_Д + 69,14^o /c 0,418 ДМФ/.

Раздел С: /XVIIa/ /S, S/-N², N^2"-1,2-этандиилбис/-1,2/-пропандиамин/ тетрахлоргидрат.

К смеси соединения XVIa /3,5 г, 15,2 ммоля/ в 100 мл ТГФ добавлялось 150 мл 1 М BH₃ ТГФ комплекса. После нагревания с обратным холодильником на протяжении ночи реакционная смесь охлаждалась до комнатной температуры, и медленно добавлялось 80 мл метанола. Смесь нагревалась с обратным холодильником на протяжении ночи, и небольшое количество присутствующего осадка удалялось с помощью фильтрования. Растворители в фильтрате выпаривались, и к оставшейся жидкости добавлялось 30 мл метанола и 7,5 мл конц. HCl при охлаждении на ледяной бане. После перемешивания в течение 1,5 ч смесь растиралась с этиловым эфиром, и на фильтре собирался продукт, давая 3,92 г /81%/ соединения XVIIa.

¹H-ЯМР /D₂O/ d 3,54 /м. 2Н, 2 СН/, 3,31 /м. 6Н/, 3,06 /м. 2Н/ и 1,28 /д. 6Н, I 6,6 Гц, 2 СН₃/. MC /DC1 м/e 175 /M+1, свободное основание/ /a/_Д + 8,39^o /c 0,632, H₂O/.

Раздел D: /XVIIIa/ /S,S/-N²,N^2"-1,2-этандиилбис/1,2-пропандиамин/.

Соединение XVIIa /3,2 г, 10 ммолей/ добавлялось к свежеприготовленному раствору этилата натрия в этаноле /1,03 г натрия в 50 мл этанола/. После перемешивания при комнатной температуре на протяжении ночи хлористый натрий из смеси удалялся фильтрованием, а растворитель в фильтрате выпаривался. Оставшаяся смесь очищалась с помощью перегонки Кугельрора /110-124^oC при 0,7 мм/, давая 1,43 /82%/ соединения XVIIIa в виде светлой жидкости.

¹H-ЯМР /CDCl₃/ d 2,8-2,4 /м. 10Н, 4 СН₂ и 2 СН/, 1,57 /широкий, 6Н, 2 NH₂ и 2 NH/ и 0,91 /д. 6Н, I 5,9 Гц, 2 CH₃/ /a/_Д + 120^o /c 0,310 бензол/.

Раздел E: /XIXa/ /S,S/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино/-2-метил-2,1-этандиил)]-бис[5-нитро-1Н -бенз/de/изохинолил-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/.

Смесь 3-нитро-1,8-нафталевого ангидрида /1,46 г, 6,0 ммолей/ и XVIIIa /0,52 г, 3 ммоля/ в 30 мл этанола перемешивалась при комнатной температуре на протяжении ночи. К смеси добавлялось 0,63 г метансульфоновой кислоты. После перемешивания на протяжении ночи продукт выделялся с помощью фильтрования и очищался путем нагревания в 50 мл метанола на протяжении ночи, давая 1,37 г /55%/ соединения XIXa; т.пл. 254-255^oC /разл./

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ d 9,55 /д. 2Н, I 1,9 Гц, ароматические протоны/, 9,0 /д. 2Н, I 1,9 Гц, ароматические протоны/, 8,85 /д. 2Н, I 8,1 Гц, ароматические протоны/, 8,73 /д. 2Н, I 7,0 Гц, ароматические протоны/, 8,11 /т. 2Н, I 7,9 Гц, ароматические протоны/, 4,39-4,27 /м. 4Н, 2 CH₂/, 3,75 /м. 2Н, 2 СН/, 2,26 /c. 6H, 2 CH₃/, и 1,35 /д. 6Н, I 5,9 Гц, 2 СН₃/. MC /DC1/ м/e 625 /M+1/.

Анализ для C₃₂H₂₈N₆O₈2CH₃SO₃H H₂O /MB 834,83/:

Вычислено, C 48,92; H 4,59; N 10,07; S 7,68

Найдено, C 48,97, 48,84; H 4,43, 4,46; N 10,16, 10,13; S 7,83, 7,84

ПРИМЕР 28. /S,S/-2,2"-[1,2-этандиилбис-[имино(2метил-2,1 -этандиил)]-бис[1H-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/ /XXa/

C помощью замены 3-нитро-1,8-нафталевого ангидрида 1,8-нафталевым ангидридом может быть получено соединение XXa.

Белое твердое вещество /78% выход/; т.пл. 289-290^oC /разл./

¹H-ЯМР-/DMCO-d₆/ d 8,96 /широкий, 2Н, NH⁺₂/, 8,80 /широкий, 2Н, NH⁺₂/, 8,57-8,53 /м. 8Н, ароматические протоны/, 7,94 /т. 4Н, I 7,7 Гц, ароматические протоны, 4,45-4,23 /м. 4Н, 2 СН₂/, 3,81 /м. 2Н, 2 СН/, 2,28 /c. 6H, 2 CH₃/ и 1,36 /д. 6Н, I 6,6 Гц, 2 CH₃/. MC /DC1/ м/e 535 /M+1/, свободное основание/.

Анализ для С₃₂H₃₀N₄O₄2CH₃SO₃H H₂O /MB 744,83/:

Вычислено, C 54,83; H 5,41; N 7,42; S 8,61

Найдено, C 55,18, 55,29; H 5,17, 5,24; N 7,42, 7,47; S 8,66, 8,64.

ПРИМЕР 29. /R,R/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино(2-метил)-2,1-этандиил)] -бис[5-нитро-1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион]-метансульфонат /1:2/ /XIXb/

Светло-коричневое твердое вещество /34,5% выход/; т.пл. 248-251^oC /разл. /.

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ 9,54 /д. 2Н, I 2,2 Гц, ароматические протоны/, 8,99 /д. 2Н, I 1,9 Гц, ароматические протоны/, 8,83 /д. 2Н, I 8,0 Гц, ароматические протоны/, 8,72 /д. 2Н, I 6,9 Гц, ароматические протоны/, 8,10 /т. 2Н, I 7,9 Гц, ароматические протоны/, 4,33-4,18 /м. 4Н, 2 СН₂/, 3,46 /м. 6Н/, 2,28 /c. 6H, 2 CH₃/ и 1,28 /c. 6H, 2 CH₃/. MC /C1/ м/e 625 /M+1/.

Анализ для C₃₂H₂₈N₆O₈2CH₃SO₃H /MB 716,81/

Вычислено, C 50,00; H 4,44; N 10,09; S 7,85

Найдено, C 50,16; H 4,34; N 10,19; S 7,62

ПРИМЕР 30. /Рацемический + Мезо/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино[-2-метил-2,1-этандиил] -бис[5-нитро-1Н -бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-/дион]-метансульфонат /1:2/ /XIXc/

Желтое твердое вещество /18,9% выход/; т.пл. 278-281^oC /разл./

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ d 9,58 /д. 2Н, ароматические протоны/, 9,0 /д. 2Н, ароматические протоны/, 8,85 /д. 2Н, ароматические протоны/, 4,50-4,25 /м. 4Н, 2 CH₂/, 3,80 /м. 2Н, 2 СН/, 3,40 /м. 4Н, 2 СН₂/, 2,30 /c. 6H, 2 CH₃/ и 1,38 /д. 6Н, 2 СН₃/. MC /C1/ м/e 625 /M+1/

Анализ для C₃₂H₂₈N₆O₈2CH₃SO₃H /MB 816,81/:

Вычислено, C 50,00; H 4,44; N 10,09; S 7,85

Найдено, C 49,62; H 4,42; N 10,07; S 7,80

ПРИМЕР 31. /R,R/-2,2" -[1,2-этандиилбис[имино[2-метил-2,1-этандиил]-бис[6-нитро-1Н -бенз/de/изозинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/ /XXVIIIb/

Желтое твердое вещество /17,0% выход/; т.пл. 230-233^oC /разл./

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ d 9,03 /широкий, 2Н, NH⁺₂/, 8,93 /широкий, 2Н, NH⁺₂/ 8,76 /д. 2Н, I 8,8 Гц, ароматические протоны/, 8,68-8,57 /м. 6Н, ароматические протоны/, 8,13 /т. 2Н, I 7,7 Гц, ароматические протоны/, 4,37-4,26 /м. 4Н, 2 CH₂/, 3,77 /м. 2Н, 2 СН/, 3,36 /c. 4H, 2 CH₂/, 2,25 /c, 5,4 H, 1,8 CH₃SO₃H/ и 1,35 /д. 6Н, 2СН₃/. MC /C1/ м/e 625 /M+1/.

Анализ для C₃₂H₂₈N₆O₈1,8 CH₃SO₃H /MB 797,59/

Вычислено, C 50,90; H 4,45; N 10,54; S 7,24

Найдено, C 50,90, 50,56; H 4,36; N 10,22, 10,18; S 6,96, 6,96.

ПРИМЕР 32. /R, R/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино/2метил-2,1-этандиил)]-бис[5,8-динитро -1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-дион] метансульфонат /1: 2/ /XXIXb/

Светло-коричневое твердое вещество /21,1% выход/; т.пл. 227-230^oC /разл. /

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ 9,84 /д. 4Н, I 1,5 Гц, 4 ароматических протона/, 9,13 /д. 4Н, I 1,4 Гц, ароматические протоны/, 9,02 /широкий, 2H, NH⁺₂/, 8,86 /широкий, 2Н, NH⁺₂/, 4,50-4,25 /м. 4Н, 2 СН₂/, 3,81 /м. 2Н, 2 СН/, 3,34 /широкий, 4Н, 2 СH₂/, 2,24 /c. 6H, 2 CH₃/ и 1,39 /д. 6Н, I 4,7 Гц, 2 CH₃/. Анализ для C₃₂H₂₈N₆O₁₂2CH₃SO₃H /MB 906,80/:

Вычислено, C 45,03; H 3,75; N 12,36; S 7,06

Найдено, C 44,75; H 3,69; N 12,21; S 6,87

ПРИМЕР 42. /Рацемический/-2,2"-[1,2-этандиилбис[имино[-2-метил-2,1-этандиил] -бис[5 -нитро-1Н-бенз/de/изохинолин-2-1,3/2H/-дион] метансульфонат /1:2/ /XXXIV/

Данное соединение получалось с помощью смешения равных количеств соответствующих /S,S/ и /R,R/ этантиомеров /т.е. XIXa, и XIXb, соответственно/. Светло-коричневое твердое вещество /90% выход/; т.пл. 254-255^oC /разл./. ЯМР-спектр идентичен с данными спектра соединения XIXa и XIXb.

Анализ для C₃₂H₂₈N₆O₈2CH₃SO₃H /MB 816,81/

Вычислено, C 50,00; H 4,44; N 10,29; S 7,85

Найдено, C 49,69; H 4,21; N 10,19; S 7,66

ПРИМЕР 43. S, S, S/-5-нитро-2-[2-[[2-[[2 -(5-нитро-1,3-диоксо-1Н-бенз/de/изохинолин-2/3H/-ил)-1-метилэтил] амино] -1-метилэтил]амино]-1-метилэтил]-1H-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/ -дион]метансульфонат /1:2/ /XXXX/

Раздел A: /XXXV/ Метил N-[N-[N-[/1,1-диметилэтокси)карбонил]-L-аланил] -L-аланил]-L-аланин.

К ТГФ раствору /50 мл/ /т-ВОС/-Ala-Ala-OH /5,0 г, 19,2 ммоля/ и N-метилморфолина /3,88 г, 38,4 ммоля/ добавлялся изобутилхлорформиат /2,62 г, 19,2 г ммоля/ по каплям для поддержания температуры между 10-15^oC. После того как добавление завершалось, реакционная смесь перемешивалась еще в течение 15 минут. К смеси добавлялось 2,68 г /19,2 ммоля/ хлоргидрата метилового эфира /S/ аланина". После перемешивания при комнатной температуре на протяжении ночи с помощью фильтрования удалялся хлоргидрат N-метилморфолина, а растворитель в фильтрате выпаривался. Оставшаяся жидкость разбавлялась метиленхлоридом /350 мл/, промывалась 5% бикарбонатом натрия /2 x 150 мл/, водой /1 x 150 мл/, 0,1 норм. HCl /1 x 150 мл/, водой /1 x 150 мл/, cолевым раствором /1 x 100 мл/, сушилась над безводным сульфатом магния, фильтровалась и выпаривалась, давая 4,32 г белого твердого вещества XXXV /65,1% выход/; т.пл. 168-172^oC.

¹H-ЯМР /CDCl₃/ 6,70 /м. 2Н, 2 NH/, 4,98 /широкий, 1Н/, 4,48 /м. 2Н, 2 СН/, 3,70 /c. 3H, CH₃/, 1,38 /c. 18H, 6 CH₃/, и 1,30 /м. 6Н, 2 СH₃/. MC /C1/ м/e 346 /M+1/. ИК /KBг/ 3391, 3319, 3275 /NH/, 1742, 1710, 1674, 1638 /C=O/ см^-1. ()²_D⁵ 50,33^o /C 0,600, CH₂Cl₂/.

Раздел B: /XXXVI/ N-[(1,1-диметилэтокси)карбонил]-L-аланил-L-аланил-L-аланинамид.

К 80 мл метанола, насыщенного аммиаком, добавлялось 2,75 г /7,96 ммоля/ соединения XXXV. Реакционная смесь охлаждалась с помощью ледяной бани, а затем подвергалось дополнительно реакции с аммиаком в течение 10 минут, реакционная смесь перемешивалась при температуре окружающей среды на протяжении ночи. Растворитель в растворитель выпаривался, давая желтое твердое вещество, XXXVI /2,45 г, 93% выход/; т.пл. 202-208^oC.

¹H-ЯМР /DMCO-d₆/ 7,83-7,95 /м. 2Н, 2 NH/, 7,25 /широкий, 1Н, NH/, 7,01 /широкий, 2Н, NH₂/, 4,2 /м. 2Н, 2 СН/, 3,83 /м. 1Н, СН/, 1,38 /c. 9H. 3 CH₃/ и 1,20 /м. 9Н, 3 CH₃/. MC /DC1/ м/e 331 /M+1/. ()²_D⁵ 66,00^o /c 0,0600, DMCO/.

Раздел С: /XXXVII/ L-аланил-L-аланил-L-аланинамид хлоргидрат.

Смесь соединения XXXVI /1,95 г, 5,9 ммоля/ и 4,4 М HCl /2,68 мл/ в диоксане добавлялась в 40 мл диоксана при 0^oC в течение 2 ч, а затем подогревалась до комнатной температуры на протяжении ночи. Растворитель в смеси выпаривался досуха, давая 1,77 г соединения XXXVII в виде не совсем белого твердого вещества; т.пл. 237-240^oC /разл./

¹H-ЯМР /D₂O/ 4,2-4,05 /м. 2Н, 2 CH/, 2,95-3,85 /м. 1Н, СН/, и 1,25 /м. 9Н, 3 СН₃/. MC /C1/ м/e 231 /M+1/. ИК /KBг/ 3438, 3294 /NH₂/, 1676, 1639 /C= O/ см^-1. ()²_D⁵ 19,96^o /C 0,606, метанол/.

Раздел D: /XXXVIII/ /S, /S, S/-N¹-/2-амино-1-метилэтил/-N²-/2-амино-пропил/ -1,2-пропандиамин тетрахлоргидрат.

К смеси XXXVII /1,70 г, 6,37 ммоля/ в 150 мл ТГФ добавлялось 58 мл 1 М комплекса BH₃ТГФ. Смесь нагревалась с обратным холодильником на протяжении ночи, превращаясь в прозрачный раствор. Раствор охлаждался на ледяной бане и гасился добавлением по каплям 50 мл метанола. Раствор нагревался с обратным холодильником на протяжении ночи. Растворители в реакционном растворе удалялись с помощью вращательного испарения. К оставшейся жидкости добавлялся метанол /50 мл/ и жидкость снова выпаривалась для удаления триметилбората. Жидкость разбавлялась метанолом /25 мл/ с последующим добавлением 4,0 мл конц. HCl. После перемешивания в течение 2 ч реакционная масса растиралась с этиловым эфиром, фильтровалась, давая 1,10 г /51,7% выход/ cоединения

XXXVIII в виде белого твердого вещества; т.пл. 277-278^oC /разл./. MC /DC1/ м/e 189 /M+1/. ИК /KBг 3436 /NH, NH₂/, cм^-1.

Раздел E: /XXXIX/ /S,S,S/-N¹-/2-амино-1-метилэтил/-N²-/2-амино-пропил/ -1,2-пропандиамин.

К свежеприготовленному раствору этилата натрия /0,32 г натрия и 20 мл этанола/ добавлялось 1,05 г /3,1 ммоля/ соединения XXXVIII. Смесь перемешивалась при комнатной температуре на протяжении ночи. Хлористый натрий удалялся с помощью фильтрования, и растворитель в фильтрате выпаривался. Оставшаяся жидкость очищалась с помощью перегонки Кугельрора /0,4 мм, 94-104^oC/, давая 0,41 г соединения XXXIX в виде светло-желтой жидкости /70,2% выход/.

¹H-ЯМР /CDCl₃/ 2,90 /м. 1Н, СН/, 2,80 /м. 2Н, 2 СН/, 2,53-2,30 /м. 6Н, 3 СН₂/, 1,58 /широкий, 6Н, NH₂ и 2 NH/ и 0,98 /м. 9Н, 3 CH₃/.

Раздел F: /XXXX/ /S,S,S/-5-нитро-2-[2-[[2-[[2-(5-нитро-1,3-диоксо-1Н-бенз/de/изохинолин -2(3Н)-ил)-1-метилэтил]амино]1-метил-этил]амино]-1-метилэтил]-1H-бенз /de/изохинолин-1,3/2H/-дион]метансульфонат /1:2/

Смесь 3-нитро-1,8-нафталевого ангидрида /1,06 г, 4,4 ммоля/ и соединения XXXIX /0,41 г, 2,2 ммоля/ в 25 мл этанола перемешивалась при комнатной температуре на протяжении ночи, а затем нагревалась до температуры дефлегмации в течение 1 и 1/4 ч. Растворитель в смеси выпаривался, и оставшийся темный осадок очищался c помощью хроматографии на колонке, давая 0,83 г свободного основания в виде светло-коричневого твердого вещества /59,1% выход/, которое затем превращалось в его метансульфонат, XXXX /0,65 г, 35,6% выход/; т.пл. 189-192^oC /сморщивается/.

¹H-ЯМР /CDCl₃/ d 9,28 /д. 1Н, I 1,9 Гц, ароматический протон/, 9,25 /д. 1Н, I 2,2 Гц, ароматический протон/, 9,15 /д. 1Н, I 2,2 Гц, ароматический протон/, 9,12 /д. 1Н, I 2,2 Гц, ароматический протон/, 8,81 /д. 1Н, I 7,3 Гц, ароматический протон/, 8,76 /д. 1Н, I 7,3 Гц, ароматический протон/, 8,46 /д. 1Н, I 8,1 Гц, ароматический протон/, 8,42 /д. 1Н, I 8,4 Гц, ароматический протон/, 7,98 /т. 1Н, I 7,7 Гц, ароматический протон/ 7,94 /т. 1Н, I 7,92 Гц, ароматический протон/, 5,76 /м. 1Н, СН/, 4,59 /м. 1Н/, 4,36 /м. 2Н/, 4,04 /м. 1Н/, 3,91 /м. 1Н/, 3,96 /м. 1Н/, 3,39 /м. 2Н/, 1,99 /c. 6H, 2 CH₃/ 1,64 /д. 3Н, I 7,0 Гц, СН₃/, 1,54 /д. 3Н, I 6,6 Гц, СН₃/ и 1,48 /д. 3Н, I 6,6 Гц, СН₃/. MC /ДСЙ/ м/e 639 /M+1/.

Анализ для C₃₃H₃₀N₆O₈2 CH₃SO₃H /MB 830,44/:

Вычислено, C 50,60; H 4,61; N 10,12; S 7,72

Найдено, C 50,70; H 4,61; N 9,98; S 7,69.

В таблице 1 положение Х и Y указывается с использованием нумерации положения в соответствующем нафталевом ангидриде, а не нумерация для 1Н-бенз/de/изохинолин-1,3/2H/-диона.

В таблице 2 положение Х и Y показано с использованием нумерации положения в соответствующем нафталевом ангидриде, а не нумерация для 1Н бенз /de/изохинолин-1,3/2H/-диона.

Полезность. Активность по ингибированию роста in vitro.

Клетки L 1210 выдерживались в RPMI-1640 среде с добавкой 10% инактивированной теплом зародышевой бычьей сыворотки и 50 мл меркаптоэтанола /литр среды/ RPMI-L/. Клетки В16 выдерживались в RPMI-1640 среде с добавкой 15% инактивированной теплом зародышевой бычьей сыворотки и антибиотиков /RPMI-C/.

Экспонентно растущие белковолейкозные клетки L 1210 /1 x 10³ клеток/ в 0,1 мл среды высевались в 0 день на пластину микротитратора с 96 ячейками. В 1 день количество 0,1 мкл среды, содержащей градиентные концентрации испытываемых аналогов, добавлялось к первоначальному объему. После инкубирования при 37^oC в увлажняемом инкубаторе в течение 3 дней пластины центрифугировались непродолжительно, и 100 мл ростовой среды удалялось. Культуры клеток инкубировались с 50 мкл бромистого 3 /4,5-диметилтиазол-2-ил/-2,5-дифенилтетразолия /MTT; 1 мг/мл в фосфатно-буферном солевом растворе Dul-вессо/ в течение 4 ч при 37^oC. Получающийся в результате пурпурный осадок формазана солюбизировался с 200 мкл 0,04 норм. HCl в изопропиловом спирте. Абсорбция считывалась на сканирующем ячеистом спектрофотометре Titertek Multiskan MCC /Флоу Лабораториз/ при опытной длине волны 570 нм и справочной длине волны 630 нм.

Величины ID₅₀ определялись с помощью компьютерной программы, которая вводила все данные /8 определений на концентрацию и 12 концентраций на испытываемый аналог/ в следующее уравнение:

Y /(Aм Ао)/(1 + (X/ID₅₀)n/ + Aо,

где Ам абсорбция контрольных клеток; Ао абсорбция клеток в присутствии самой высокой концентрации лекарства; Y наблюдаемая абсорбция; Х концентрация лекарства; ID₅₀ доза лекарства, которая ингибирует рост клеток наполовину по сравнению с контрольными клетками.

Результаты испытания по ингибированию роста L1210 in vitro показаны в таблице 3.

Опухолевые модели ин виво. Характерные представители соединений настоящего изобретения широко испытывались в ряде предклинических испытаний на противораковую активность, которые являются показателями клинической полезности. Например, заявляемые в настоящее время соединения показывают поразительную эффективность ин виво против трех типов человеческих опухолей, ксенотрансплантированных лишенным волосяного покрова мышам, а именно, карциномы толстой кишки человека ДLД-2, карциномы молочной железы человека МХ-1 и рака легких человека LX-1.

В дополнение к сказанному характерные представители соединений настоящего изобретения являются активными против нескольких опухолей, включая аденокарциному молочной железы М16с и аденокарциному толстой кишки С51. Кроме того, соединения изобретения активны против опухолей молочной железы в опытах на трансгенных мышах, содержащих V-Ha-ras онкоген.

Методики, используемые при испытании соединений на моделях, которым ксенотрансплантирована опухоль человека, ин виво, описываются ниже.

Модели с ксенотрансплантированной опухолью человека ин виво. Опухоль толстой кишки человека ДLД-2, карцинома молочной железы человека МХ-1 и рак легких человека LX-1 первоначально получались от удаленной хирургическим путем карциномы первичной толстой кишки, грудной опухоли и карциномы легкого, соответственно. Линии человеческой опухоли поддерживались путем серийного пропускания у атимичных лишенных волосяного покрова мышей. Карцинома молочной железы МХ-1 и рак легкого LX-1 являются установленными опухолями, используемыми NC1. Модели опухоли DLD-2, MX-1 и LX-1 были полностью охарактеризованы.

Мыши, использованные в этих экспериментах, были непосредственно спаренными швейцарскими мышами или мышами BAIB/c, несущими обнаженный /пи/пи/ген. В день 0 самцы и самки мышей, весящие 22-30 г, инокулировались 0,2 мл 25% измельченной опухолевой ткани. Данная ткань приготавливалась путем измельчения свежей опухолевой ткани, выращенной подкожно у пассажных мышей, в стерильном физиологическом солевом растворе. Ощутимые опухоли весом приблизительно 50 мг появляются у мышей через 7-10 дней после инокуляции. Мышей подбирают попарно по весу опухоли и по полу в группы из десяти каждая, и вводят внутривенно /в. в. / испытываемые соединения и носитель в качестве контроля один раз в день в течение последовательных девяти дней. Уменьшение веса тела на более 20% на 5 день после введения соединения считается показателем токсичности. Измерения опухоли и веса тела регистрируются один раз в неделю. Через 15-18 дней после начальной инъекции мышей взвешивают, убивают и опухоли вырезают и взвешивают.

Эффективность испытываемых соединений определяется по степени ингибирования роста опухоли у обработанных мышей по сравнению с контрольными мышами, которым вводили носитель. Начальные веса опухоли /мг/ вычисляются по размерам опухоли м/м, измеренным с помощью циркуля с использованием формулы для вытянутого эллипсоида (мг веса опухоли (длина х ширина²)/2). Чистые веса опухолей вычисляются каждой из обработанной группы и контрольной группы, обработанной носителем, путем вычитания начального веса опухоли из конечного веса опухоли на 15 день. Результаты выражаются в виде процентного снижения относительно среднего веса опухоли контрольной группы, обработанной носителем.

Критерии активности

Использовались критерии активности, разработанные Национальным Институтом рака /ПС1/, на моделях рака in vivo. Ингибирование роста опухоли, составляющие 58-89% в анализе DLD-2 считается умеренной активностью, а ингибирование, большее или равное 90% считается хорошей и до отличной активностью. Фактические регрессии опухоли /IR неполная регрессия; FR полная регрессия/ указывают на отличную выдающуюся активность. Соединения, демонстрирующие ингибирование роста на менее чем 58% считаются неактивными.

Соединения примеров 1, 2, 3, 26, 27 и 30 проявляют от отличной до выдающейся активности против опухолей толстой кишки человека DLD-2, пример 29 показал активность от хорошей до отличной против рака толстой кишки DLD-2.

В дополнение к сказанному соединения примеров 2, 3, 27 и 29 и 30 проявили активность от отличной до выдающейся на моделях опухоли грудной железы МХ-1. Соединение примера 1 показало активность от хорошей до отличной против рака груди МХ-1.

Соединения примеров 2, 3, 27 и 29 проявили активность от хорошей до отличной против рака легких человека LX-1.

Активность против карцином молочной железы на трансгенных мышах, содержащих ras онкоген. Трансгенные мыши, несущие v-Ha-ras онкоген, связанный с ММТУ промотором первоначально были созданы в лаборатории профессора Фила Ледера в Гарвардском университете /Sinn et al./ 1987 /Cell 49:465-475/. У самок трансгенных животных развивались опухоли молочной железы, и, таким образом, они могли быть использованы для оценки агентов на активность против этих злокачественных опухолей. Экстенсивно характеризовались показатели роста этих опухолей /Diamond and Dexter /1991/ Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 32:299/ и имитируют клиническую ситуацию.

Самки трансгенных мышей, содержащие ras, с раком грудной железы обрабатывались в.в. контрольным физиологическим раствором или испытываемым соединением, вводимым ежедневно в течение 9 дней, и для каждого испытываемого соединения регистрировался средний показатель роста опухоли в группе.

Продемонстрированная эффективность соединений настоящего изобретения на ксенотрансплантированных моделях рака толстой кишки, грудной железы и легких человека показывает, что соединения настоящего изобретения могут быть полезны для лечения широкого спектра твердых опухолей у людей, в частности, злокачественных опухолей толстой кишки, грудной железы и легких. Этот вывод дополнительно подтверждается данными опубликованных анализов, коррелирующими результаты и предклинических испытаний с клинической эффективностью противораковых агентов. Например, см. работы Coldin and Venditting /1980/ Recent Results Cancer Research 76: 176-191.

Заявляемые в настоящее время соединения показывают поразительную эффективность in vivo против трех типов человеческих опухолей, ксенотрансплантированных лишенным волосяного покрова мышам, а именно, опухоли толстой кишки человека DLD-2, карциномы молочной железы человека МХ-1 и карциномы легких человека LX-1.

В дополнение к сказанному испытали in vivo характерный представитель соединения настоящего изобретения против нескольких опухолей. Соединение по примеру 3 показало активность против аденокарциномы молочной железы М16с и аденокарциномы толстой кишки С51. Кроме того, соединение по примеру 3 очень активно против опухолевой молочной железы в опытах на трансгенных мышах, содержащих ras онкоген.

Следующие соединения испытывались in vivo в опухолевых моделях, как описано ниже:

Пример 1, пункт 9 Стереохимия S,S

Пример 2, пункт 10 Стереохимия рацемически + мезо

Пример 3, пункт 11 Стереохимия R,R

Пример 26, пункт 12 Стереохимия мезо



Пример 27, пункт 13 Стереохимия S,S

Пример 29, пункт 15 Стереохимия R,R

Пример 30, пункт 14 Стереохимия рацемически + мезо



Способы, применяемые в опытах на соединениях in vivo в моделях с ксенотрансплантированной опухолью человека, описаны ниже.

Модели с ксенотрансплантированной опухолью человека in vivo

Опухоль толстой кишки человека DLD-2, карцинома молочной железы человека МХ-1 и рак легких человека LX-1 первоначально получались от удаленной хирургическим путем карциномы первичной толстой кишки, грудной опухоли и карциномы легкого, соответственно. Линии человеческой опухоли поддерживались путем серийного пропускания у атимичных, лишенных волосяного покрова мышей. Карцинома молочной железы МХ-1 и рак легкого LX-1 являются установленными опухолями, используемыми NC1. Модели опухоли DLD-2, MX-1 и LX-1 были полностью охарактеризованы.

Мыши, использованные в этих экспериментах, были непосредственно спаренными швейцарскими мышами или мышами BALB/c, несущими обнаженный (nu/nu) ген. В день 0 самцы и самки мышей, весящие 22-30 г, инокулиривались 0,2 мл 25% измельченной опухолевой тканью. Данная ткань приготавливалась путем измельчения свежей опухолевой ткани, выращенной подкожно у пассажных мышей, в стерильном физиологическом солевом растворе. Ощутимые опухоли весом приблизительно 50 мг появляются у мышей через 7-10 дней после инокуляции. Мышей подбирают попарно по весу опухоли и по полу в группы из десяти каждая, и вводят внутривенно (i. v. ) испытываемые соединения и носитель в качестве контроля один раз в день в течение последовательных девяти дней. Уменьшение веса на более 20% на 5 день после введения соединения считается показателем токсичности. Измерения опухоли и веса тела регистрируются один раз в неделю. Через 15-18 дней после начальной инъекции мышей взвешивают, убивают и опухоли вырезают и взвешивают.

Эффективность испытываемых соединений определяется по степени ингибирования роста опухоли у обработанных мышей по сравнению c контрольными мышами, которым вводили носитель. Начальные веса опухоли (мг) вычисляются по размерам опухоли (мм), измеренным с помощью циркуля с использованием формулы для вытянутого эллипсоида (мг веса опухоли (длина х ширина²)/2). Чистые веса опухолей вычисляются каждой из обработанной группы и контрольной группы, обработанной носителем, путем вычитания начального веса опухоли из конечного веса опухоли на 15 день. Результаты выражаются в виде процентного снижения относительно среднего веса опухоли контрольной группы, обработанной носителем.

Критерии активности. Использовались критерии активности, разработанные Национальным Институтом рака (NCI), на моделях рака in vivo. Ингибирование роста опухоли, составляющие 58-89% в анализе DLD-2 считается умеренной активностью, а ингибирование, большее или равное 90% считается хорошей и до отличной активностью. Фактические регрессии опухоли (IR неполная регрессия; FR полная регрессия) указывают на отличную выдающуюся активность. Соединения, демонстрирующие ингибирование роста не менее чем 58% считаются неактивными.

Получились следующие результаты для указанного соединения в модели опухоли толстой кишки человека DLD-2 (табл. 4-6).

Как показано выше, соединения настоящего изобретения обладают отличной до выдающей активности против опухоли толстой кишки человека DLD-2.

Результаты опытов в опухолевых моделях молочной железы человека следующие (табл.5).

Результаты опытов в модели карциномы легких человека следующие (табл.6).

Как показано выше, настоящие заявленные соединения проявляют активность от отличной до выдающей с многими животными, имеющими долгосрочное лечение в модели грудной опухоли человека, МХ-1, и проявили активность от хорошей до отличной против рака легких человека LX-1.

Активность против карцином молочной железы на трансгенных мышах, содержащих ras онкоген

Трансгенные мыши, несущие v-Ha-ras онкоген, связанный с MMTV промотором, первоначально были созданы в лаборатории профессора Фила Ледера в Гарвардском университете (Sinn et al. (1987) Cell 49:465-475). У самок трансгенных животных развивались опухоли молочной железы, и, таким образом, они могли быть использованы для оценки агентов на активность против этих злокачественных опухолей. Экстенсивно характеризовались показатели роста этих опухолей (Diamond and Dexter (1991) Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. 32:299) и имитируют клиническую ситуацию.

Самки трансгенных мышей, содержащие ras, с раком грудной железы обрабатывались в.в. контрольным солевым раствором или 12 мг/кг примером 3, вводимым ежедневно в течение 9 дней. Результаты свидетельствуют, что пример 3 показывает очень значительный эффект ингибирования на этих карциномах молочной железы (табл. 7).

Рост опухоли был совершенно подавлен в большинстве мышей, и перероста опухоли не было в течение 2 месяца после лечения нескольких мышей. Соединение по примеру 3 является до сих пор самым эффективным агентом в модели ras трансгенных мышей. Например, пример 3 является значительно более активным, чем сисплатен или доксорубицин в этой модели. Эти результаты показывают, что пример 3 может быть клинически активен против грудного рака человека.

Описанные результаты показывают, что соединения настоящего изобретения могут быть полезны для лечения рака человека. Сильная эффективность соединений настоящего изобретения на ксенотрансплантированных моделях рака толстой кишки, грудной железы и легких человека показывает, что соединения настоящего изобретения могут быть полезны для лечения твердых опухолей у людей, в частности карцином толстой кишки, грудной железы и легких.

Соединения настоящего изобретения проявляют замечательную активность на ксенотрансплантированных опухолевых моделях толстой кишки человека и опухоли грудной железы, включающие значительный уровень опухолевых упадков. Необычная и воспроизводимая активность настоящих заявленных соединений, в частности соединения по примеру 3 при лечении ксенотрансплантированных опухолей человека и карцином в мышах, т.е. опухоль уменьшается и люди свободны от опухоли и остаются в живых, указывает, что соединение по примеру 3 является одним из самых активных известных агентов против экспериментальных твердых опухолей. Эти результаты доказывают, что соединения настоящего изобретения многообещающие как клинически эффективные противоопухолевые агенты, которые могут иметь широкий спектр активности против твердых опухолей у человека.

Вышеуказанные выводы сильно подтверждаются данными опубликованных анализов, коррелирующими результаты и предклинических испытаний с клинической эффективностью противораковых агентов. Эти публикации включают следующие статьи: Goldin и Vendetti (1980) Recent Results Cancer Research 76: 176-191; Goldin et al. (1981) Eur. J.Cancer 17: 129-142; Mattern et al. (1988) Cancer and Metastasis Review 7: 263-284; Jackson et al. (1990) Cancer Investigations 8: 39-47.

На основании этих опубликованных данных анализа, широкий спектр и исключительно высокий уровень активности, проявляемой заявленными соединениями, дает веское свидетельство того, что соединения, заявленные в настоящем изобретении, могут иметь важную терапевтическую полезность при лечении рака у людей.

Дозировка и выпускные препаративные формы.

Противоопухолевые соединения /активные ингредиенты/ данного изобретения могут назначаться для ингибирования опухолей с использованием любых средств, которые обеспечивают контакт активного ингредиента с участков действия агента в организме млекопитающих. Они могут назначаться с помощью любого обычного средства, доступного для использования, в сочетании с фармацевтическими препаратами или в виде индивидуальных терапевтических активных ингредиентов, или в сочетаниях терапевтических активных ингредиентов. Они могут назначаться сами по себе по одному, но обычно назначаются с фармацевтическим носителем, выбранным на основании выбранного способа назначения и принятой фармацевтической практики.

Назначаемой дозой является ингибирующее опухоль количество активного ингредиента, и она, конечно, варьирует в зависимости от известных факторов, таких как фармакодинамические характеристики конкретного активного ингредиента, и его способа назначения: возраст, здоровье и вес реципиента; характер и степень симптомов; вид сопутствующего лечения, частота обработки и желаемый результат. Обычно суточная доза активного ингредиента может составлять примерно 5-400 мг на 1 кг веса тела. Обычно 10-200 и предпочтительно 10-50 мг на 1 кг в день, даваемые в виде различных доз 2-4 раза в день или в виде формы с замедленным действием, являются эффективными для получения желаемых результатов.

Дозированные формы /композиции/, подходящие для внутреннего назначения, содержат примерно от 1 до 500 мг активного ингредиента на единицу. В этих фармацевтических композициях активный ингредиент обычно присутствует в количестве примерно 0,5-95% по весу в расчете на общий вес композиции.

Активный ингредиент может назначаться орально в виде твердых дозированных форм, таких как капсулы, таблетки и порошки, или в виде жидких дозированных форм, таких как эликсиры, сиропы и суспензии. Он может назначаться парэнтерально, в виде стерильных жидких дозированных форм.

Желатиновые капсулы содержат активный ингредиент и порошкообразный носители, такие как лактоза, сахароза, маннит, крахмал, производные целлюлозы, стеарат магния, стеариновая кислота и аналогичные. Аналогичные разбавители могут использоваться для изготовления прессованных таблеток. Как таблетки, так и капсулы могут производиться в виде продуктов с замедленным высвобождением для обеспечения непрерывного выделения или высвобождения лекарственного препарата на протяжении периода нескольких часов. Прессованные таблетки могут иметь покрытие из сахара или могут быть покрыты пленкой для скрытия любого неприятного вкуса и для защиты таблетки от атмосферного воздействия, или иметь энергическое покрытие для селективной дезинтеграции в желудочно-кишечном тракте.

Жидкие дозированные формы для орального назначения могут содержать красящие или вкусовые агенты для увеличения принятия их пациентом.

Подходящими носителями для парэнтеральных растворов обычно являются вода, подходящие масла, физиологические растворы, водная декстроза /глюкоза/ и аналогичные сахарные растворы и гликоли, такие, как пропиленгликоль или полиэтиленгликоли. Растворы для парэнтерального назначения предпочтительно содержат водорастворимую соль активного ингредиента, подходящие стабилизирующие агенты и, если необходимо, буферные вещества. Подходящими стабилизирующими агентами являются антиокислительные агенты, такие, как бисульфит натрия, сульфит натрия или аскорбиновая кислота, взятые или по одному, или в сочетании. Используются также лимонная кислота и ее соли и натриевая соль ЕДТА /этилендиаминтетрауксусной кислоты/. В дополнение к изложенному парэнтеральные растворы могут содержать предохраняющие агенты, такие, как хлористый бензалконий, метил- или пропил-парабен и хлорбутанол.

Подходящие фармацевтические носители описываются в Pemington Pharmacentical Sciences, Mack Publishing Company, стандартном справочнике в данной области.

Полезные фармацевтические дозированные формы для назначения соединений данного изобретения могут быть проиллюстрированы следующим образом.

Капсулы: приготавливаются путем заполнения стандартных твердых желатиновых капсул, состоящих из двух частей, каждой со 100 мг порошкообразного активного ингредиента, 175 мг лактозы, 24 мг талька и 6 мг стеарата магния.

Мягкие желатиновые капсулы: смесь активного ингредиента в соевом масле приготавливается и инжектируется или впрыскивается с помощью позитивного поршневого насоса в желатин для образования мягкой желатиновой капсулы, содержащей 100 мг активного ингредиента. Капсулы промываются и сушатся.

Таблетки: приготавливаются с помощью общепринятых приемов так, чтобы дозированная единица содержала 100 мг активного ингредиента, 0,2 мг коллоидной двуокиси кремния, 5 мг стеарата магния, 275 мг микрокристаллической целлюлозы, 11 мг кукурузного крахмала и 98,8 мг лактозы. Могут применяться соответствующие покрытия для увеличения вкусовой восприимчивости или для пролонгирования абсорбции.

Инъецируемый препарат: парэнтеральная композиция, подходящая для назначения с помощью инъекций, приготавливается путем перемешивания 1,5% по весу активного ингредиента в 10% по объему пропиленгликоля и воды. Раствор делается изотоническим с помощью добавления хлористого натрия и стерилизуется.

Суспензия: водная суспензия приготавливается для орального назначения так, чтобы каждые 5 мл содержали 100 мг тонкоизмельченного активного ингредиента, 200 мг натриевой карбоксиметилцеллюлозы, 5 мг бензоата натрия, 1,0 г раствора сорбита /патент США/ и 0,025 мл ванилина.

Из настоящего описания следует понимать, что конкретно указанные материалы и условия важны для практической реализации изобретения, не названные конкретно материалы и условия не исключаются, если они не препятствуют пользе, реализуемой от изобретения.