рекомбинантная плазмидная днк pacyclans для переноса и экспрессии в клетках escherichia coli гена l-аспарагиназы erwinia carotovora (ecar-lans) и способ получения рекомбинантной ecar-lans из биомассы штамма e.coli- продуцента
| Классы МПК: | C12N15/55 гидролазы (3) C12N15/70 векторы или системы экспрессий, специально приспособленные для Ecoli C12N9/82 аспарагиназа C12P21/02 с известной последовательностью из двух или более аминокислотных остатков, например глутатиона |
| Автор(ы): | Эльдаров М.А., Жгун А.А., Гервазиев Ю.В., Александрова С.С., Богуш В.Г., Сидорук К.В., Свешникова Е.В., Борисова А.А., Омельянюк Н.М., Арчаков А.И., Скрябин К.Г., Соколов Н.Н. |
| Патентообладатель(и): | Эльдаров Михаил Анатольевич, Жгун Александр Александрович, Гервазиев Юрий Викторович, Александрова Светлана Серебеджановна, Омельянюк Наталья Михайловна, Богуш Владимир Георгиевич, Сидорук Константин Васильевич, Борисова Анна Аркадьевна, Свешникова Елена Васильевна, Арчаков Александр Иванович, Скрябин Константин Георгиевич, Соколов Николай Николаевич, ГУ НИИ биомедицинской химии им. В.Н.Ореховича РАМН |
| Приоритеты: |
подача заявки:
2002-04-04 публикация патента:
27.02.2004 |
Изобретение относится к генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Сконструирована рекомбинантная плазмида (pACYCLANS), содержащая природную последовательность гена L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ECAR-LANS), которая находится под контролем промотора и терминатора РНК-полимеразы фага Т7 и кодирует полноразмерный предшественник фермента с сигнальным пептидом для экспорта белка в периплазму с последующим процессингом. Путем трансформации указанной плазмидой штаммов Е.coli, способных синтезировать РНК-полимеразу фага Т7, получают штаммы-продуценты, в которых содержание рекомбинантной L-аспарагиназы составляет от 8 до 12%. Для выделения и очистки фермента из биомассы используют разрушение клеток с помощью ультразвуковой дезинтеграции, фракционирование сульфатом аммония и хроматографию на SP-сефарозе FF. Изобретение обеспечивает получение с высоким выходом очищенного препарата L-аспарагиназы. 2 с.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.
Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22
Формула изобретения
1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pACYCLANS для переноса и экспрессии в клетках Escherichia coli гена L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ECAR-LANS), имеющая размер 5,8 т.п.н. и состоящая из следующих элементов: фрагмента BamH I-Pst I размером 3 т.п.н. плазмиды рАСYC 177, фрагмента Nhе I-BamH I размером 1,3 т.п.н. плазмиды рBADLANS
, содержащего ген ECAR-LANS с нуклеотидной последовательностью SEQ ID №1, фрагмента Bgl II-Xba I размером 0,2 т.п.н. плазмиды рЕТ23(а), фрагмента BamHI-Рst I размером 1,3 т.п.н. плазмиды рЕТ23(а).2. Способ получения рекомбинантной L-аспарагиназы, включающий стадии культивирования штамма-продуцента в оптимальных для синтеза указанного фермента условиях и последующего выделения и очистки продукта, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют штамм Е.coli, трансформированный рекомбинантной плазмидной ДНК по п.1, а для выделения и очистки фермента применяют разрушение клеток с помощью ультразвуковой дезинтеграции, фракционирование сернокислым аммонием и хроматографию на SP-сефарозе FF.
Описание изобретения к патенту
Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)н
Класс C12N15/70 векторы или системы экспрессий, специально приспособленные для Ecoli
Класс C12P21/02 с известной последовательностью из двух или более аминокислотных остатков, например глутатиона
1
6 специфичный лектин - патент 2524425