кахалалидные соединения

Формула изобретения

1. Производное кахалалида F, которое не является смесью изомеров, известных как кахалалид F, где производное имеет структуру с циклической частью и боковой цепью, полученное из формулы (I)

причем производное отличается от формулы (I) одним или более из следующих признаков:

1-2 аминокислотами, которые не являются теми же самыми, что и аминокислоты в структурной формуле (I);

отсутствием одной или двух аминокислот в боковой цепи структурной формулы (I);

1-10 дополнительными метиленовыми группами в ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I);

1-5 метиленовыми группами, которые отсутствуют в ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I);

1-3 заместителями, добавленными к ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I);

5-метил-заместителем, отсутствующим в ацильной группе боковой цепи; и отсутствующей ацильной группой боковой цепи.

2. Соединение по п.1, которое отличается от формулы (I) одним или более из следующих признаков:

1 аминокислотой, которая не является той же самой, что и аминокислота в структурной формуле (I);

1 дополнительной метиленовой группой в ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I);

1 метиленовой группой, отсутствующей в ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I);

1 заместителем, добавленным к ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I);

5-метил-заместителем, отсутствующим в ацильной группе боковой цепи.

3. Соединение по п.1 или 2, где 1 или 2 аминокислоты отсутствуют, и это - пропуск в боковой цепи структуры.

4. Соединение по п.1 или 2, где каждая аминокислота является такой же, как и в формуле (I).

5. Соединение по любому из пп.1-4, где боковая цепь родственна 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile.

6. Соединение по п.5, где 5-МеНех замещено концевым возможно замещенным алкилом, алкенилом или алициклической группой.

7. Соединение по п.6 с концевой алкильной группой.

8. Соединение по п.7, где концевая алкильная группа содержит от 4 до 10 атомов углерода.

9. Соединение по п.8, где концевая алкильная группа содержит 1 или более метальных или этильных групп, разветвленных вдали от точки присоединения к остальной части молекулы.

10. Соединение по пп.7, 8 или 9, где алкильная группа содержит единственную разветвленную метильную группу.

11. Соединение по любому из пп.7-9, где алкильная группа замещена галогеном, гидрокси, алкокси, амино, карбоксилом, алкокси, алкоксиалкильной или алициклической группами.

12. Соединение по п.1, которое имеет формулу

Циклическая часть производного кахалалида F	Боковая цепь**
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: TFA-Lit-
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: литохолоил (Lit).
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Vat-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: пальмитоил Palm
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: пальмитоил Palm

цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 4-{4-ацетоксибутаноилокси-бутирил (AcButBut-)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	IBut-D-allo-Ile-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-D-Phe-Val)-D-Phe: а,b-дидегидро-фенилаланин	5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Thr-Val)	5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 4-ацетоксибутирил (4-AcBut)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-L-Etg-Val)	5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-D-Etg-Val)	5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Vat-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: N,N-диметил-4-аминобутирил(4-DiMeABut)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	5-MeHex-D-Val-L-Thr-D-Val-L-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-
цикло(D-allo-Thr-D-alio-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	5-MeHex-D-Val-L-Thr-D-Val-L-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: гептаноил (Hep)
цикло(D-allo-Thr-D-alio-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: гептаноил (Нер)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-

цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 3,3-диметилбутирил (3,3-DiMeBut)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 3,3-диметилбутирил (3,3-DiMeBut)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 4-метилпентаноил (4-MePen)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 4-метилпентаноил (4-MePen)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: трифторацетил (TFA)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 2,4-гексадиеноил (Hedo)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 4-гидроксибутирил
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 3-метилбутирил (3-MetBut)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: 3-метилбутирил (3-MetBut)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: бутирил (But)
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: бутирил
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: ацетил
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: без жирной кислоты
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	концевая группа: без жирной кислоты

цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-D-allo-Ile-
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	H-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	H-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile
цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)	5-MeHex-D-Val-L-Thr-D-allo-Ile-

** концевая группа боковой цепи (далее боковая цепь 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile-без изменений), которая заменяет 5-МеНех.

13. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая соединение по любому из предшествующих пунктов и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

14. Способ получения соединения, имеющего структуру (I)

или структуру, отличающуюся от формулы (I) одним или более из следующих признаков:

1-2 аминокислотами, которые не являются теми же самыми, что и аминокислоты в структурной формуле (I);

отсутствием одной или двух аминокислот в боковой цепи структурной формулы (I);

1-10 дополнительными метиленовыми группами в ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I);

1-5 метиленовыми группами, которые отсутствуют в ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I);

1-3 заместителями, добавленными к ацильной группе боковой цепи структурной формулы (I); и

5-метил-заместителем, отсутствующим в ацильной группе боковой цепи; где указанный способ включает в себя реакцию замыкания кольца по следующей схеме:

где значения R', Аа¹, Аа ², Аа³, Аа⁴, Аа⁵, Аа ⁶ и X, согласно формуле (I), представляют собой следующее:

R' представляет собой группу R-CO-N, где R представляет собой 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-allo-Ile, или ее предшественник;

Аа¹ представляет собой D-allo-Thr;

Аа² представляет собой D-allo-Ile;

Аа³ представляет собой D-Val;

Аа⁴ представляет собой L-Phe;

Аа⁵ представляет собой Z-Dhb;

Аа⁶ представляет собой L-Val;

Х представляет собой О;

при условии что по меньшей мере один из R', Аа¹, Аа², Аа³ , Аа⁴, Аа⁵, Аа⁶ и Х может иметь одно из дозволенных отличий, при этом одна или более из аминокислот Аа¹, Аа², Аа³, Аа⁴ , Аа⁵, Аа⁶ необязательно может иметь защитные группы, а-СООН в Аа³ и/или -NH₂ в Аа ⁴ необязательно могут быть защищены, активированы, или могут быть получены их производные.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к кахалалидным соединениям, более конкретно - к кахалалиду F и родственным ему соединениям, а также к способу синтеза таких соединений.

Предпосылки изобретения

Кахалалид F является биоактивным циклическим депсипептидом, выделенным из моллюска Elysia rufescens (sarcoglossan) и его корма, зеленой водоросли Bryopsis sp. Кахалалид F был впервые выделен Hamann и Scheuer, см. Hamann, М.Т.; Scheuer, P.J. J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 5825-5826. В этой публикации не была определена абсолютная стереохимия индивидуальных валинов (3 D-Val и 2 L-Val) и треонинов (L-Thr и D-allo-Thr). В более поздней публикации Scheuer et al. (Goetz, G.; Yoshida, W.Y.; Scheuer, P.J. Tetrahedron 1999, 55, 7739-7746) определили положения в молекуле для 5 Val и 2 Thr.

Таким образом, структура Кахалалида F, no Scheuer et al., выглядела следующим образом:

Тем временем профессор Reinhart также определил индивидуальные положения для 5-Val и 2-Thr (K.L.Rinehart, персональное сообщение). Хотя для 2 Thr и 3 Val его отнесения совпадали с отнесениями проф. Scheuer, для последнего 2 Val наблюдается расхождение. Так, в соответствии с отнесением Rinehart, два последовательных Val в боковой цепи имеют отличный вид, и структура имеет вид формулы (I):

В настоящее время принято, и в данном тексте это вновь показано, что правильная формула кахалалида F соответствует формуле (I).

Его строение достаточно сложно, и состоит из шести аминокислот в циклической части, и экзоциклическая цепочка включает в себя семь аминокислот с концевой ацильной группой.

Кахалалид F (I) является чрезвычайно эффективным и редким противоопухолевым агентом морского происхождения, хотя отсутствие его в достаточном количестве задержало планы клинических испытаний.

Известны и другие соединения кахалалидов, описанные, например, Hamann, M.T., et al., J. Org. Chem., 1996, "Kahalalides: Bioactive Peptides from Marine Mollusk Elysia rufescens and its Algal Diet Bryopsis sp", vol.61, pp.6594-6660. Помимо кахалалида F в этой статье приведены структуры кахалалидов А-Е. Сообщение о Кахалалиде К встречается в J Nat. Prod. 1999, 62, 1169, а о Кахалалиде О встречается в J Nat Prod. 2000, 63, 152.

Структуры этих других соединений кахалалидов представлены следующими формулами:

Циклические кахалалиды содержат кольцевые аминокислоты и боковую цепь, которая оканчивается ацильной группой.

Кахалалиды обладают различными биологическими активностями, особенно противоопухолевой и противотуберкулезной активностями.

Краткое содержание изобретения

В настоящем изобретении предложены имитаторы природных кахалалидов. Соединения могут отличаться одной или более из аминокислот и одним или более из компонентов ацильной боковой цепи.

Желательно, чтобы имитаторы согласно настоящему изобретению отличались по меньшей мере одной из следующих характеристик исходного от природного кахалалида:

От 1 до 7, предпочтительно от 1 до 3, более предпочтительно 1 или 2 и наиболее предпочтительно 1 аминокислота отличается от исходного соединения;

От 1 до 10, предпочтительно от 1 до 6, более предпочтительно от 1 до 3, особенно 1 или 2 дополнительными метиленовыми группами в боковой ацильной цепи исходного соединения;

От 1 до 10, предпочтительно от 1 до 6, более предпочтительно от 1 до 3, особенно 1 или 2 метиленовые группы опущены в боковой ацильной цепи исходного соединения;

От 1 до 6, предпочтительно от 1 до 3, более предпочтительно 1 или 3 заместителя добавлены или пропущены в боковой цепи ацильной группы исходного соединения.

Для циклических кахалалидов добавление и удаление аминокислоты можно осуществить как в циклическом кольце, так и в боковой цепи.

Примерами согласно изобретению являются соединения, родственные кахалалиду F, имеющему следующую формулу:

где Aaa₁, Ааа₂, Ааа ₃, Ааа₄, Ааа₆ и Ааа₇ представляют собой независимо -аминокислоты L- или D-конфигурации (если это применимо); где R₁, R₂, R₃, R₄ , R₅, R_6, R₇ независимо представляют собой Н или органическую группу, выбранную из группы, состоящей из алкильной группы, арильной группы, аралкильной группы и их производных, замещенных гидрокси-группой, меркапто-группой, амино-группой, гуанидино-группой, галогеном; где X₁ независимо представляет собой О, S, или N; где R₂ независимо представляет собой (если присутствует) Н или органическую группу, выбранную из группы, состоящей из алкильной группы и аралкильной группы; где Aaa₅ независимо представляет собой аминокислоту L- или D-конфигурации (если это имеет место); где Х₂ независимо представляет собой органическую группу, выбранную из группы, состоящей из алкенила, алкильной группы, арильной группы, аралкильной группы и их производных, замещенных независимо гидрокси-группой, меркапто-группой, амино-группой, гуанидино-группой, галогеном; где R₈ независимо представляет собой соединение, выражаемое следующими формулами III, IV, или V:

где R₉, R₁₀ и R₁₁ независимо представляют собой Н или органическую группу, выбранную из группы, состоящей из алкильной группы, арильной группы, аралкильной группы и их производных, замещенных гидрокси-группой, меркапто-группой, амино-группой, гуанидино-группой, карбоксильной группой, карбоксамидо-группой, галогеном; R₉ и R₁₀ могут составлять часть того же самого цикла;

R₉ (если присутствует) может быть в S или R конфигурации по отношению к углероду, к которому он присоединен; и n принимает значения от 0 до 6. Определения аминокислот также могут варьироваться (имеется в виду пролин и аналогичные аминокислоты, включая гидроксипролин). Формулы (III), (IV) и (V) могут быть перемешаны, приводя к образованию боковой цепи, состоящей из повторяющихся звеньев более чем в одной из этих формул.

При модификации одна или более из кольцевых аминокислот Ааа-6 и Ааа-5 гексааминокислотного цикла отсутствует, или аминокислота Ааа-7 добавлена между Ааа-6 и Ааа-1, в результате чего образуются кольца, содержащие четыре, пять или семь аминокислот в кольце. Предпочтительны кольца, содержащие шесть аминокислот.

Далее настоящее изобретение относится к способу получения соединений кахалалида F и родственных структур.

Предпочтительный вариант осуществления изобретения

Предпочтительные соединения являются родственными кахалалиду F (I), у которых в формуле (II) Ааа-1 представляет собой D-allo-Thr (X₁ =0, R₁=СН₃), Ааа-2 представляет собой D-allo-Ile (R₃=1-метилпропил), Ааа-3 представляет собой D-Val (R₄=изопропил), Ааа-4 представляет собой Phe (R ₅=бензил), Ааа-5 представляет собой Z-Dhb (X₂ =С=СНСН₃ с Z конфигурацией), Ааа-6 представляет собой L-Val (R₆=изопропил), Ааа-7 представляет собой D-allo-Ile (R₇=1-метилпропил), и R₈ содержит гексапептидное производное следующей формулы (формула VI):

Другие предпочтительные соединения являются аналогичными родственными соединениями других кахалалидов и содержат аминокислоты и боковые цепи, общие с такими соединениями. Имеются ссылки на известные структуры кахалалидов. Предпочтительно, чтобы соединения согласно изобретению имитировали природный кахалалид с модификацией, вставкой или исключением в одной или более из точек в молекуле.

Особенно предпочтительны соединения, которые содержат те же самые аминокислоты, что и в природных циклических кахалалидных соединениях, но отличаются боковой цепью, особенно в ацильной части. Такие отличия могут включать в себя увеличение или уменьшение числа метиленовых групп, обычно самое большее изменение двух метиленовых групп, и увеличение или уменьшение числа заместителей, особенно добавление заместителя-галогена, такого как фтор.

В использованном здесь смысле термин "органическая группа" означает углеводородную группу, которая классифицируется как алифатическая группа, циклическая группа или комбинация алифатических и циклических групп (например, аралкильные группы).

В контексте согласно изобретению термин "алифатическая группа" означает насыщенный или ненасыщенный линейный или разветвленный углеводород. Этот термин охватывает, например, алкильные, алкенильные и алкинильные группы. Термин "алкильная группа" означает насыщенную линейную или разветвленную углеводородную группу, включая, например, метильную, этильную, изопропильную, изобутильную, трет-бутильную, гептильную, додецильную, октадецильную, амильную, 2-этилгексильную, 2-метилбутильную, 5-метилгексильную, 9-метил-3-децильную и т.п., особенно алкильные группы, которые содержат единственную разветвленную метиленовую группу. Подходящими алкильными группами являются группы с длинными цепями, содержащие от 1 до 20 атомов углерода, обычно от 1 до 15 или от 1 до 10 атомов углерода, или они могут быть короче, и могут содержать от 1 до 6 или от 1 до 3 атомов углерода. Удобно, чтобы группа R₁₁ была группой с длинной цепью, а остальные группы предпочтительно были бы короткими.

Термин "алкенильная группа" означает ненасыщенную линейную или разветвленную углеводородную группу с одной или более углерод-углеродных двойных связей, такой как винильная группа. Подходящие алкенильные группы содержат от 2 до 8 или от 2 до 4 атомов углерода.

Термин "алкинильная группа" означает ненасыщенную линейную или разветвленную углеводородную группу с одной или более углерод-углероданых тройных связей. Подходящие алкинильные группы содержат от 2 до 8 или от 2 до 4 атомов углерода. Термин "циклическая группа" означает замкнутую кольцевую углеводородную группу, которая классифицируется как алициклическая группа, ароматическая группа или гетероциклическая группа. Термин "алициклическая группа" означает циклическую углеводородную группу, сохраняющую свойства алифатических групп, и которая является моно- или бициклом, содержащим от 4 до 10 атомов углерода. Термин "ароматическая группа" или "арильная группа" означает моно- или полициклическую ароматическую углеводородную группу, представляющую моно- или бицикл, и содержащую от 5 до 10 атомов углерода. Термин "гетероциклическая группа" означает замкнутый кольцевой углеводород, в котором один или более из атомов кольца представляет собой элемент, отличающийся от углерода (например, от 1 до 3 из одного или более из азота, кислорода, серы т.д.), соответственно моно- или бицикл, содержащий от 4 до 10 атомов в кольце.

Как хорошо понятно специалистам в этой области, большая степень замещения не только допустима, но часто бывает желательна. Замещения предполагаются у соединений согласно изобретению. Чтобы упростить ссылки и указания на некоторые термины, используемые в рассматриваемом описании, термины "группа" и "фрагмент" используют для того, чтобы различить виды химических соединений, которые допускают наличие заместителей, и те, которые не допускают наличия заместителей или не замещены. Так, если термин "группа" используют для описания химического заместителя, описываемый химический материал включает в себя незамещенную группу и, например, группу с атомами О, N или S, в цепи, а также карбонильную группу, или другие обычные заместители. Если термин "фрагмент" используют для описания химического соединения или заместителя, предполагается только незамещенный химический материал. Например фраза "алкильная группа" должна включать в себя не только чистые с раскрытой цепью насыщенные алкильные углеводородные заместители, такие как метил, этил, пропил, изобутил и т.п., но также и алкильные заместители, содержащие другие заместители, известные специалистам, такие как гидрокси, алкокси, амино, карбоксил, карбоксамидо, атомы галогенов, циано, нитро, алкилсульфонил и т.д. Так, "алкильная группа" включает в себя эфирные группы, галогеналкилы, спирты, тиолы, карбоксил, амины, гидроксиалкилы, сульфоалкилы и т.д. Предпочтительны галогеналкильные группы. С другой стороны, фраза "алкильный фрагмент" ограничена включением только чистых насыщенных углеводородных заместителей с открытыми цепями, таких как метил, этил, пропил, изобутил и т.п.

В наиболее предпочтительном варианте согласно изобретению предложено соединение формулы (А):

где каждый из Аа¹-Аа⁶ с соседними -N- и -СО- соответственно представляет собой - или -аминокислоту, предпочтительно -аминокислоту, Х представляет собой группу, связывающую Аа¹, предпочтительно выбранную из амино, гидрокси или тиола, более предпочтительно - гидрокси, и R представляет собой группу, необязательно включающую в себя одну или более из - или -аминокислот, предпочтительно -аминокислоты. В качестве варианта могут отсутствовать -СО-Аа⁶-N-, возможно также одновременное отсутствие -СО-Аа⁵-N-, или в другом варианте между Аа⁶ и Аа¹ может быть вставлена группа -СО-Aa⁷ -N-.

Аминокислоты могут быть в L- или D-конфигурации. Предпочтительно, чтобы конфигурация была такой же, что и конфигурация соответствующих аминокислот в кахалалидном соединении, особенно в кахалалиде F. Один или более из Аа¹-Аа⁷ предпочтительно соответствует аминокислоте в том же положении, что и в природном кахалалиде или родственном ему соединении. В наиболее предпочтительном варианте каждая из аминокислот соответствует аминокислоте в природном кахалалиде F. Так, предпочтительно, чтобы Аа¹ представлял собой D-allo-Thr, Аа² представлял собой D-allo-Ile, Аа³ представлял собой D-Val, Аа⁴ представлял собой Phe, Аа⁵ представлял собой Z-Dhb, Аа⁶ представлял собой L-Val.

Если используют родственные соединения, подходящие родственные соединения содержат замещенные аминокислоты, у которых замещения соответствуют структуре соответствующих аминокислот в природном кахалалиде, таком как Кахалалид F. Заместители для треонина включают в себя серин и другие гомологи, а также цистеин и гомологи. Заместители изолейцина включают в себя другие аминокислоты с неполярными группами, включая аланин, валин, лейцин и пролин, а также аналоги и гомологи. В этом плане наличие атомов азота -N- в формуле (А) не исключает возможности образования кольца, такого, которое образуется с пролином. Заместители валина включают в себя изолейцин и другие аминокислоты с неполярными группами, включая аналоги и гомологи. Заместители фенилаланина включают в себя триптофан и тирозин. Заместители Dhb включают в себя другие аминокислоты с таким алкенилиденовым заместителем, включая аминокислоты с С₃ или с высшими боковыми цепями, а также аналоги и гомологи.

Предпочтительно, чтобы Аа¹ имел вид:

где RAa₁ представляет собой боковую цепь, содержащую связь X. Примеры боковых цепей включают в себя алкил, арил и аралкил, особенно алкил, более типично алкил, содержащий от 1 до 4, например 2 атома углерода. Предпочтителен разветвленный алкил. Связующая группа Х обычно представляет собой кислород, причем Aa₁ предпочтительно получен из треонина, но могут быть использованы сера, амино (незамещенный или замещенный алкилом, арилом или аралкилом) и другие связующие. Подходящей группой Х является единственная полярная группа в Аа¹ . Аа¹ может быть рацемическим, может иметь L- или D-конфигурацию, но предпочтительна D-конфигурация.

Предпочтительно, чтобы Аа² имел вид

где RAa₂ представляет собой боковую цепь, такую как алкил, арил или аралкил, особенно алкил, более конкретно алкил, содержащий от 1 до 5 атомов углерода, например 3 атома углерода. Предпочтителен разветвленный алкил, такой как изолейцин. Желательно, чтобы в Аа² не было полярных заместителей. Аа² может быть рацемическим, может иметь L- или D-конфигурацию, но D-конфигурация предпочтительна.

Предпочтительно, чтобы Аа³ имел вид:

где RAa₃ представляет собой боковую цепь, такую как алкил, арил или аралкил, особенно алкил, более конкретно алкил, содержащий от 1 до 5 атомов углерода, например, 3 атома углерода. Предпочтителен разветвленный алкил, такой как валин. Желательно, чтобы в Аа³ не было полярных заместителей. Аа³ может быть рацемическим, может иметь L- или D-конфигурацию, но предпочтительной является D-конфигурация.

Предпочтительно, чтобы Аа⁴ имел вид:

где RAa₄ представляет собой боковую цепь, такую как алкил, арил или аралкил, особенно аралкил, более конкретно аралкил, содержащий от 7 до 10 атомов углерода, например, 7 атома углерода. Предпочтителен бензил, такой как фенилаланин. Желательно, чтобы в Аа⁴ не было полярных заместителей. Аа⁴ может быть рацемическим, может иметь L- или D-конфигурацию, но предпочтительной является L-конфигурация. Предпочтительно, чтобы Аа⁵ имел вид:

где RAa_5a и RAa_5b каждый выбирают из водорода или боковой цепи, такой как алкил, арил или аралкил, особенно алкил, более конкретно алкил, содержащий от 1 до 4 атомов углерода, например, 1 атом углерода. Предпочтительно, чтобы RAa_5а представлял собой водород, обеспечивая Z-конфигурацию, как в предпочтительной а,b-дидегидро-a-аминомасляной кислоте. Желательно, чтобы в Аа⁵ не было полярных заместителей. Аа³ может быть рацемическим, может иметь L- или D-конфигурацию, но предпочтительной является L-конфигурация.

Предпочтительно, чтобы Аа⁶ имел вид:

где RAa₆ представляет собой боковую цепь, такую как алкил, арил или аралкил, особенно алкил, более конкретно алкил, содержащий от 1 до 5 атомов углерода, например, 3 атома углерода. Предпочтителен разветвленный алкил, такой как валин. Желательно, чтобы в Аа⁶ не было полярных заместителей. Аа⁶ может быть рацемическим, может иметь L- или D-конфигурацию, но предпочтительной является L-конфигурация.

Аминокислоты Аа¹ до Аа⁷ могут быть такими, которые определены для групп Ааа-1 до Ааа-7 формулы (II).

Предпочтительно, чтобы боковая цепь R включала в себя 5-MeHex-D-Val-L-Thr-L-Val-D-Val-D-Pro-L-Orn-D-aIlo-Ile или родственное ему соединение, включая аналоги и гомологи. Примеры родственных соединений включают в себя соединения общей формулы (R^t)_m-(аминокислота)_n-, причем m+n не равно нулю, где R^t представляет собой концевую группу, предпочтительно алкил, алкенил, алкинил, арил, аралкил, гетероарил, гетероалкил, алициклическую или другую концевую группу, и -(аминокислота)_n - представляет собой произвольную цепь аминокислот.

Концевая алкильная группа предпочтительно содержит от 1 до 12 атомов углерода, более конкретно от 4 до 10 атомов углерода, она может быть замещена и предпочтительно является разветвленной. Примеры включают в себя бутил, пентил, гексил, гептил, октил и другие алкильные группы, содержащие 1 или более из метильных или этильных групп, или более длинные боковые группы, предпочтительно содержащие от 1 до 6 атомов углерода, особенно 5-метилгексил и другие алкильные группы с разветвлениями вдали от точки присоединения к остальной части молекулы. Подходящие заместители включают в себя галогены, гидрокси, алкокси, амино, карбоксил, карбоксамидо, циано, нитро, алкилсульфонил, алкокси, алкоксиалкил, арилалкиларил, гетероциклические, алициклические, арильные, аралкильные и другие группы, упомянутые выше. Соответственно такие заместители могут содержать дополнительные заместители, как например, толильная группа. Наиболее предпочтительны галогеновые заместители, особенно 1 или более, например, от 1 до 3 атомов фтора. Другие концевые группы можно выбрать в соответствии с указаниями, приведенными в описании, и они включают в себя алициклические, аралкильные, арильные, гетероциклические или другие группы, которые могут содержать 1 или более, в частности от 1 до 3, заместителей.

Боковая цепь R-CO-N- может содержать водород или заместитель у азота, такой как алкильная, арильная или аралкильная группа.

В боковых цепях подходящих родственных соединений используют замещенные аминокислоты, выбранные в соответствии с изложенными выше принципами, альтернативные изолейцину, валину и треонину, причем их выбирают как для этих аминокислот в циклической части молекулы, так альтернативные орнитину, включая лизин, гистидин, аргинин; альтернативные пролину, включая аланин и другие неполярные аминокислоты, такие как глицин, изолейцин и другие, упоминавшиеся выше. Обычно цепь R содержит от 0 до 10, более предпочтительно от 4 до 8, например, 5, 6 или 7, особенно 7, аминокислотных остатков. Если присутствуют более семи аминокислот, тогда предпочтительно, чтобы эти дополнительные аминокислоты были такими, которые существуют в природе, особенно те, которые были указаны выше.

Могут быть использованы L- или D-аминокислоты или их рацемические смеси. Предпочтительно, если аминокислоты присутствуют в боковой цепи R, чтобы одна или более из них была бы в конфигурации, соответствующей конфигурации природной боковой цепи. Считая с циклического гексапептида, аминокислотные остатки находятся в конфигурации DLDDLLD. Удобно, чтобы концевая алкильная группа содержала от 1 до 12 атомов углерода, более предпочтительно - от 4 до 10 атомов углерода, и может быть замещенной, и предпочтительно разветвленной. Подходящие заместители включают в себя галоген, гидрокси, алкокси, амино, карбоксил, карбоксамидо, циано, нитро, алкилсульфонил и другие упомянутые здесь группы. Наиболее предпочтительны в качестве заместителей галогены.

В более общей форме боковую цепь R-CO-N- можно определить для боковой цепи R₈-NH-CHR₇-CO-NH- в соединениях формулы (II), включая соединения со смесями аминокислот, определяемыми формулами (III), (IV) и (V).

Хотя предпочтительные характеристики были сформулированы в отношении кахалалида F, другие предпочтительные соединения согласно настоящему изобретению получены с применением тех же принципов создания имитаторов других кахалалидов. Так, аминокислоты и боковые цепи могут быть изменены, предпочтительно при сохранении гидрофобно-гидрофильного равновесия между полярными и неполярными группировками.

Соединения согласно изобретению обладают полезной биологической активностью, включая противоопухолевую активность.

В настоящем изобретении предложен способ лечения любого млекопитающего, особенно человека, с раковым заболеванием, который включает в себя введение больному индивидууму терапевтически эффективного количества соединения согласно изобретению или содержащей его фармацевтической композиции.

Настоящее изобретение относится также к фармацевтическим препаратам, которые содержат в качестве активного ингредиента соединение или соединения согласно изобретению, а также к способам их получения.

Примеры фармацевтических композиций включают в себя любые твердые композиции (таблетки, пилюли, капсулы, гранулы и т.д.) или жидкие композиции (растворы, суспензии или эмульсии) подходящего состава для перорального, наружного или парентерального введения, и они могут содержать либо чистое соединение, либо его комбинацию с любым носителем или другими фармацевтически приемлемыми соединениями. Эти композиции, предназначенные для парэнтерального введения, может оказаться необходимым стерилизовать.

Введение соединений согласно изобретению можно осуществить любым удобным способом, таким как внутривенное вливание, в виде препаратов для перорального приема, внутрибрюшинных и внутривенных инъекций. Авторы рекомендуют использовать длительность вливаний вплоть до 24 часов, более предпочтительно - от 2 до 12 часов, и наиболее предпочтительно - 2-6 часов. Особенно желательны кратковременные вливания, которые позволяют проводить лечение без необходимости оставаться в больнице на ночь. Однако при необходимости вливания могут длиться от 12 до 24 часов и даже дольше. Вливания можно осуществлять с подходящими интервалами, например, от 2 до 4 недель. Фармацевтические композиции, содержащие соединения согласно изобретению, можно поставлять в инкапсулированном в липосомы виде или в виде наносфер, в композициях с замедленным выделением активного вещества, или с помощью других стандартных способов доставки.

Точная дозировка соединений будет меняться в зависимости от конкретной лекарственной формы, способа введения и конкретных участков введения, от пациента и опухоли, подлежащей лечению. Следует учитывать и другие факторы, такие как возраст, вес, пол, пищевой рацион, скорость выведения, состояние пациента, комбинацию лекарств, реакционную чувствительность и тяжесть заболевания, подлежащего лечению. Введение препарата можно осуществлять непрерывно или периодически в рамках максимальной переносимой дозы.

Соединения и композиции согласно изобретению можно использовать вместе с другими лекарствами для обеспечения комбинированной терапии. Другие лекарства могут составлять часть той же самой композиции или могут предоставляться в виде отдельной композиции для одновременного введения или для введения в другое время. Состав других лекарств конкретно не ограничен, и подходящие варианты включают в себя:

a) лекарственные средства, обладающие антимитотическим действием, особенно такие, мишенью которых являются цитоскелетные элементы, включая модуляторы микротрубочек, такие как таксановые лекарственные средства (такие как таксол, паклитаксел, таксотере, доцетаксел), подофилотоксины или алкалоиды барвинка (винкристин, винбластин);

b) антиметаболические агенты, такие как 5-фторурацил, цитарабин, гемцитабин, пурин и аналоги, такие как пентостатин, метотрексат);

c) алкилирующие агенты, такие как азотистый иприт (такие как циклофосфамид или ифосфамид);

d) лекарственные средства, которые действуют на ДНК, такие как лекарства антрациклинового ряда, адриамицин, доксорубицин, фарморубицин или эпирубицин;

e) лекарственные средства, действующие на топоизомеразы, такие как этопозид;

f) гормоны и агонисты гормонов или их антагонисты, такие как эстрогены, антиэстрогены (тамоксифен и родственные соединения) и андрогены, флутамид, леупрорелин, гозерелин, ципротрон или октреотид;

g) лекарственные средства, действующие на сигнальную трансдукцию в опухолевых клетках, включая производные антител, такие как герцептин;

h) алкилирующие агенты, такие как лекарственные препараты на основе платины (цис-платин, карбонплатин, оксалиплатин, параплатин) или нитрозоуреаза;

i) лекарственные средства, потенциально воздействующие на метастазы опухолей, такие как ингибиторы матричной металлопротемазы;

j) агенты генной терапии и антисмсловые агенты;

k) лекарственные средства на основе антител;

l) другие биоактивные соединения морского происхождения, особенно эктеинасцидины, такие как эктеинасцидин 743 или дидемнины, такие как аплидин;

m) аналоги стероидов, в частности дексаметазон;

n) противовоспалительные лекарственные средства, особенно дексаметазон; и

o) противорвотные лекарства, в частности, дексаметазон.

Настоящее изобретение охватывает также соединения согласно изобретению, используемые в способе лечения, и применение соединений для получения композиций для лечения рака.

Предполагается также, что соединения согласно изобретению обладают противотуберкулезной активностью.

В соответствии с настоящим изобретением, предложен способ получения соединений согласно изобретению, включая кахалалид F, который включает в себя замыкание кольца между Аа₃ и Аа ₄. Авторы обнаружили, что замыкание кольца в этом положении обеспечивает превосходный способ. Замыкание кольца может предшествовать другим модификациям в молекуле, или его можно осуществить после модификаций (модификации включают в себя создание или удлинение боковой цепи у Aa₁ и/или удаление защитных групп, и/или модификацию заместителей у аминокислот).

Так, способ можно проиллюстрировать следующей схемой:

где R' представляет собой группу R-CO- или ее предшественник, и где одна или более из аминокислот может иметь защитные группы, и где -СООН в Аа³ и/или -NH ₂ в Аа⁴ могут быть необязательно защищены, активированы, или могут быть получены их производные. Такие процедуры с использованием предшественников, путем активации или получения производных сами по себе являются совершенно обычными, и в их детализации нет необходимости при изложении способа согласно изобретению.

Способ согласно изобретению можно осуществить исходя из исходных материалов энантио- и стерео-контролируемым быстрым способом, используя преимущества способа твердофазного синтеза, при котором молекула в конструкции связана с нерастворимым носителем на протяжении всего процесса синтеза. Таким образом, избыток реагентов и растворимых побочных продуктов можно легко удалить путем промывки молекул-на-смоле подходящими растворителями. Поэтому можно использовать большой избыток растворимых реагентов для доведения реакции до завершения за короткий промежуток времени, при этом избегая рацемизации (если она возможна) и других вторичных реакций.

Предпочтительный вариант способа синтеза согласно изобретению лучше всего представлен на схеме 1, где представлено конструирование соединений формулы (II).

Как представлено выше на схеме 1, предпочтительный способ синтеза кахалалида F (I) и его производных и аналогов основан на твердофазном подходе, см., например, Lloyd-Williams, Р., et al., Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC Press, Boca Raton (FL), 1997.

Способ, представленный на схеме 1, включает в себя последовательные стадии:

(a) включения Fmoc-аминокислоты (Ааа₃) на твердую подложку (например, полистирол, полиэтилен, привитой на полистирол, и т.п.), содержащую супер-кислотный лабильный конец или линкер (например, хлортритил, полиалкоксибензил и т.п.), образующий сложноэфирную связь;

(b) удлинения пептидной цепи тремя аминокислотами (Ааа₂, Aaa₁, Aaa₇ ) с использованием подхода на основе Fmoc/tBu. Для I, X₁ =ОН и вводится без защитных групп. Если X₁=NH ₂, его вводят с защитной группой Alloc;

(c) включения (Ааа₆) с использованием подхода на основе Alloc/tBu;

(d) удлинения пептидной цепи остальными аминокислотами и R ₁₁-COOH через Ааа₇ с использованием подхода на основе Fmoc/tBu;

(е-1) удлинения пептидной цепи двумя аминокислотами [Ааа₅ (ОН, Н), Ааа₄] через Ааа₆ с использованием подхода на основе Alloc/tBu. Присоединенная к Ааа₅ ОН не защищена;

(е-2) дегидратации в твердой фазе до получения пептида с Aaa₅ ;

или

(е'-1) включения дипептида Alloc-Ааа ₄-Ааа₅-ОН, который объединяли и подвергали дегидратации в растворе;

(f) удаления Alloc группы Ааа₄, при этом пептид все еще прикреплен к твердому носителю;

(g) отщепления пептида с защищенной боковой цепью (если она защищена) от твердого носителя;

(h) циклизации пептида в растворе;

(i) удаления TFA лабильных защитных групп боковой цепи.

Следует учитывать, что конкретный выбор защитных групп не является критическим и имеются широкие возможности для выбора других вариантов. Например, группы типа Bzl можно заменить на tBu/Boc; Boc использовать вместо Fmoc; Fmoc - вместо Alloc; смолу Wang - вместо хлортритила.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВАРИАНТА СПОСОБА

Предпочтительный способ согласно изобретению проиллюстрирован на схеме 1. Как там представлено и как обсуждается более подробно в приведенных далее примерах, этот способ осуществляют следующим образом:

Fmoc-Ааа₃-ОН вводят предпочтительно в хлортритил-полистирольную смолу, см. Barlos, К.; Gatos, D.; Schafer, W. Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1991, 30, 590-593, в присутствии DIEA, сохраняя уровень замещения примерно 0,15-0,5 ммоль/г. Использование больших количеств приведет к образованию пептидов с концевыми группами в конечном продукте, см Chiva, С.; Vilaseca, M.; Giralt, E.; Albericio, F.J. Pept. Sci. 1999, 5, 131-140.

Удаление Fmoc группы осуществляют, используя пиперидин - ДМФ (2:8, об./об.) (1×1 мин, 3×5 мин, 1×10 мин). Реакцию сочетания Fmoc-, Alloc-Aaa-OH и R₁₁-СООН (5 эквив.) осуществляют, используя HATU-DIEA, см Carpino, L.A.; El-Faham, A.; Minor, С.A.; Albericio, F.J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1994, 201-203, (5:10) в ДМФ в течение 90 минут. После реакции сочетания проводят нингидриновый тест и, если он оказывается положительным, реакцию сочетания повторяют в тех же условиях, в противном случае процесс продолжают. Промывки между стадиями удаления защитных групп, реакции сочетания и снова удаления защитных групп осуществляют в ДМФ (5×0,5 мин) и СН₂Cl ₂ (5×0,5 мин), используя каждый раз по 10 мл растворителя на 1 г смолы.

Включение Alloc-Aaa₆-OH (7 экв.), если X₁=0, осуществляют, используя эквимолярное количество DIPCDI и 0,7 эквив. DMAP в течение 2 часов. Эту реакцию сочетания повторяют дважды.

Удаление Alloc группы осуществляют, используя Pd(PPh₃)₄ (0,1 эквив.) в присутствии PhSiH ₃ (10 эквив.) в атмосфере Ar, см. Gomez-Martinez, P.; Thieriet, N.; Albericio, F.; Guibe, F.J. Chem. Soc. Perkin I 1999, 2871-2874.

Дегидратацию осуществляют в твердой фазе, используя EDC (растворимый в воде карбодиимид, 100 эквив.) в присутствии CuCl (60 эквив.) в СН₂Cl₂-ДМФ (10:2) в течение 6 дней. EDC/CuCl был использован в дегидратации в растворе остатка Thr во фрагменте Nisin. Fukase, К.; Kitazawa, M.; Sano, A.; Shimbo, К.; Horimoto, S.; Fujita, H.; Kubo, A.; Wakamiya, Т.; Shibe, A. Bull. Chem. Soc. Jpn. 1992, 65, 2227-2240.

Осуществляют реакцию сочетания дипептида Alloc-Ааа₄-Ааа₅-ОН (5 эквив.), полученного в растворе из Alloc-Ааа₄-ОН и H-Aaa ₅(OH, H)-OtBu с EDC, с последующей дегидратацией и обработкой TFA, с HATU-DIEA (5:10) в течение 16 часов, и повторное сочетание в течение 3 часов. Использование других агентов в реакции сочетания на основе HOBt, таких как HBTU или DIPCDI-HOBt, приводит к неполному включению дипептида.

Отщепление защищенного дипептида от смолы осуществляют, используя TFA-CH₂Cl₂ (1:99) (5×30 сек). Стадию циклизации осуществляют, используя DIPCDI-HOBt (3:3 эквив) в СН₂Cl₂-ДМФ в течение 2 часов. Можно также использовать и другие способы, такие как с использованием PyBOP/DlEA (3:6 эквив.) в ДМФ.

Окончательное удаление защитных групп осуществляют, используя TFA-H₂ O (95:5) в течение 1 часа.

ПРИМЕРЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сокращения

Сокращения, использованные для аминокислот, и обозначения пептидов соответствуют правилам IUPAC-IUB Commission of Biochemical Nomenclature в J. Biol Chem. 1972, 247, 977-983. Использованы следующие сокращения: 4-AcBut-OH, 4-ацетоксимасляная кислота; AcButBut-OH, 4-(4-ацетоксибутаноилокси)-масляная кислота; АСН, а-циано-4-гидроксикоричная кислота; Alloc, аллилоксикарбонил; Boc, трет-бутоксикарбонил; t-Bu, трет-бутил; But-OH, масляная кислота; Cl-TrtCl-смола, 2-хлортритилхлорид-смола; Dap, 2,3-диаминопропионовая кислота; 4-DiMeABut-OH, N,N-диметил-4-аминомасляная кислота; 3,3-DiMeBut-OH, 3,3-диметилмасляная кислота; DHB, 2,5-дигидроксибензойная кислота; Z-Dhb, a,b-дидегидро-а-амино-масляная кислота; DIEA, N,N-диизопропилэтиламин; ДМФ, N,N-диметилформамид; EDC, 1-этил-3-(3'-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорид; Etg, этилглицин; ESMS, масс-спектрометрия с рассеянием электронов; FABMS, масс-спектрометрия с бомбардировкой быстрыми атомами; Fmoc, 9-флуоренилметоксикарбонил; HATU, N-[(диметиламино)-1Н-1,2,3-триазоло-[4,5-b]пиридин-1-ил-метилен]-N-метилметанаминий гексафторфосфат N-оксид; HBTU, N-[(1H-бензотриазол-1-ил)(диметиламино)метилен]-N-метилметанаминий гексафторфосфат N-оксид; 2-Hedo-OH, 2,4-гексадиеновая кислота; Нер-ОН, гептановая кислота; НОАс, уксусная кислота, HOAt, 1-гидрокси-7-азабензотриазол (3-гидрокси-3Н-1,2,3-триазоло-[4,5-b]пиридин); HOBt, 1-гидроксибензотриазол; IBut-ОН, изомасляная кислота; 3-MeBut-OH, 3-метилмасляная кислота; 5-МеНех-ОН, 5-метилгексановая кислота; МеОН, метанол; 4-MePen-ОН, 4-метилпентановая кислота; NMM, N-метилморфолин; 4-HOBut, 4-гидроксибутил; (b-OH)Phe-OH, b-гидроксифенилаланин; Lit-OH, литохолевая кислота; Pal, пальмитиновая кислота; D-Phe-OH, a,b-дидегидрофенилаланин; PyAOP, 7-азабензотриазол-1-ил-N-окси-трис(пирролидино)фосфоний гексафторфосфат; PyBOP, бензотриазол-l-ил-N-окси-трис(пирролидино)фосфоний гексафторфосфат; SPS, твердофазный синтез; TFA, трифторуксусная кислота; Tico-OH, тетраикозановая кислота. Символы аминокислот означают L-конфигурацию, если нет других указаний. Все отношения растворителей даны в единицах объем/объем, если нет других указаний.

Общие процедуры. Cl-TrtCl-смола, защищенные производные Fmoc-аминокислоты, HOBt, PyBOP, HATU получены от PerSeptive Biosystems (Framingham, MA), Bachem (Bubendorf, Switzerland), NovaBiochem (Laufelfingen, Switzerland). Alloc-аминокислоты получены практически по способу Dangles et al. см. Dangles, O.; Guibe, F.; Balavoine, G.; Lavielle, S.; Marquet A.J. Org. Chem. 1987, 52, 4984-4993, и 5-МеНех-ОН через синтез с помощью малонового эфира. DIEA, DIPCDI, EDC, пиперидин, TFA получены от Aldrich (Milwaukee, WI). ДМФ и СН₂ Cl₂ от SDS (Peypin, France). Ацетонитрил (ВЭЖХ очищенный) получен у Scharlau (Barcelona, Spain). Все коммерческие реагенты и растворители использовали в том виде, в каком они были получены, за исключением ДМФ и СН₂Cl₂, через которые пропускали азот для удаления летучих примесей (ДМФ), и хранили над активированными молекулярными ситами 4 å (Merck, Darmstadt, Germany) (ДМФ) или CaCl₂ (CH₂Cl₂ ). Реакции в растворах осуществляли в круглодонных колбах. Экстракты органических растворителей сушили над безводным MgSO₄ с последующим удалением растворителя при пониженном давлении и температуре <40°С. Твердофазный синтез осуществляли в полипропиленовых шприцах (20, 10 мл), снабженных полиэтиленовым пористым диском. Растворители и растворимые реагенты удаляли путем отсасывания. Удаление Fmoc групп осуществляли, используя смесь пиперидин-ДМФ (2:8, об./об.) (1×1 мин, 3×5 мин, 1×10 мин). Промывки между стадиями удаления защитных групп, реакций сочетания и снова удаления защитных групп осуществляли, используя ДМФ (5×0,5 мин) и CH₂Cl₂ (5×0,5 мин), используя каждый раз 10 мл растворителя на 1 г смолы. Превращения пептидного синтеза и промывки осуществляли при 25°С. Синтез, осуществляемый в твердой фазе, контролировали с помощью ВЭЖХ в аликвотах промежуточных соединений, полученных после отщепления с использованием TFA-H₂O (9:1) в течение 60 мин (примерно 10 мг) с ВЭЖХ-колонок с пептидил-смолой [Kromasil C₁₈ (Условия A-F) /C₄ (условия G, H)], колонки с обращенной фазой 4,6×250 мм, 10 мм) были от Akzo Nobel (Bohum, Sweden). Аналитическую ВЭЖХ осуществляли на приборе Shimadzu, содержащем два насоса для подачи растворителей (модель LC-6A), автоматический инжектор (модель SIL-6B), детектор с переменной длиной волны (модель SPD-6A), автоматический регулятор системы (модель SCL-6B) и самописец (модель C-R6A). УФ детектирование осуществляли при 220 нм, с линейными градиентами CH₃ CN (+0,036% TFA) в Н₂O (+0,045% TFA) при скорости потока 1,0 мл/мин, начиная с (условие А) 1:9 до 10:0 за 30 мин; (условие В) 3:7 до 10:0 за 30 мин; (условие С) 1:19 до 19:1 за 30 мин; (условие D) 45:55 до 90:10 за 30 мин; (условие Е) 45:55 до 6:4 за 30 мин; (условие F) изокартически 1:1; (условие G) 3:7 до 1:0 за 30 мин; (условие Н) 1:1 до 1:0 за 30 мин.

MALDI-TOF- и ES-MS анализы пептидных образцов проводили на PerSeptive Biosystems Voyager DE RP, используя СНСА или DHB матрицы, и с помощью Микромасс-спектрометра Micromass VG-quattro. Образцы пептид-смолы гидролизовали в 12 н. водной HCl-пропионовой кислоте (1:1) при 155°С в течение 1-3 часов, и пептид-свободные образцы гидролизовали в 6 н. водной HCl при 155°С в течение 1 часа. Последующий анализ аминокислот осуществляли с помощью автоанализатора Beckman System, 6300. Спектры ¹H ЯМР (500 МГц, 200 МГц) и ¹³C-NMR (50 МГц) получены на спектрометрах Bruker DMX-500 (11,7 Т) и Varian Gemini 200 (4,7 Т). Химические сдвиги (d) выражены в частях на миллион в слабое поле от сигнала TMS. Константы взаимодействия выражены в герцах.

Кахалалид F (I)

Пример 1

H-D-Val-O-TrtCl-смола

Cl-TrtCl-смолу (1 г, 1,35 ммоль/г) помещают в 20 мл полипропиленовый шприц, снабженный дисковым фильтром из полиэтилена. Затем смолу промывают СН₂Cl₂(5×0,5 мин), и добавляют раствор Fmoc-D-Val-OH (92 мг, 0,27 ммоль, 0,2 эквив.) и DIEA (471 мл, 2,7 ммоль, 2 эквив.) в СН₂Cl₂ (2,5 мл), и смесь перемешивают в течение 1 часа. Реакцию останавливают в результате добавления МеОН (800 мл) после перемешивания в течение 15 минут. Pmoc-D-Val-O-TrtCl-смолу подвергают последующей обработке промывками/обработками: CH₂Cl₂ (3×0,5 мин), ДМФ (3×0,5 мин), пиперидин-СН₂Cl₂ -ДМФ (1:9,5:9,5, 1×10 мин), пиперидин-ДМФ (1:4, 1×15 мин), ДМФ (5×0,5 мин), изопропанолом (2×1 мин), ДМФ (5×0,5 мин), МеОН (2×1 мин), и сушат в вакууме. Выход при расчете с помощью ААА составляет 0,15 ммоль/г.

Пример 2

Fmoc-D-allo-lle-D-allo-Thr(Val-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-смола

Fmoc-D-allo-Ile-OH (265 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), Fmoc-D-allo-Thr-OH (свободная гидроксильная группа) (256 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), и Fmoc-D-allo-Ile-OH (265 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.) добавляют последовательно к полученной выше H-D-Val-O-TrtCl-смоле, используя HATU (285 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.) и DIEA (261 мл, 1,5 ммоль, 10 эквив.) в ДМФ (2,5 мл). Во всех случаях после 90 мин реакции сочетания, нингидриновый тест был отрицательным. Удаление Fmoc-группы и промывки осуществляют по способу, изложенному в разделе "Общие процедуры". Осуществляют реакцию сочетания Alloc-Val-OH (211 мг, 1,05 ммоль, 7 эквив.) с DIPCDI (163 мг, 1,05 ммоль, 7 эквив.) в присутствии DMAP (12,8 мг, 0,105 ммоль, 0,7 эквив.). Эту реакцию сочетания повторяют в тех же условиях дважды. Аликвоту пептидил-смолы обрабатывают TFA-H₂O (9:1) в течение 60 мин, и по данным ВЭЖХ (Условие A, t_R 25,9 мин) для сырого продукта, полученного после выпаривания, степень чистоты составляет >98%. ESMS. Рассчитано для C₄₅H ₆₃N₅O₁₁, 849,5. Найдено: m/z 850,1 [М+Н]⁺.

Пример 3

5-MeHex-D-Val-Thr (tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn (Boc)-D-allo-Ile-D-allo-Thr(Val-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-смола

Fmoc-группу удаляют и к вышеуказанной пептидил-смоле (Пример 2) последовательно добавляют Fmoc-Orn(Boc)-ОН (341 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), Fmoc-D-Pro-OH (253 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), Fmoc-D-Val-OH (255 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), Fmoc-Val-OH (255 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), Fmoc-Thr(tBu)-ОН (298 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), Fmoc-D-Val-OH (255 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), и 5-МеНех-ОН (98 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.), используя HATU (285 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.) и DIEA (261 мл, 1,5 ммоль, 10 эквив.) в ДМФ (2,5 мл). Во всех случаях после 90 мин осуществления реакции сочетания нингидриновый или хлораниловый (после включения D-Val) тесты были отрицательными. Удаление Fmoc-групп и промывки осуществляют по способу, раскрытому в разделе "Общие процедуры". Аликвоту пептидил-смолы обрабатывают TFA-H₂O (9:1) в течение 60 мин, и по данным ВЭЖХ (Условие В, t_R 17,2 мин) для сырого продукта, полученного после выпаривания, степень чистоты составляет >82%. ESMS. Рассчитано для С₆₆Н₁₁₆N₁₂ O₁₇, 1348,9. Найдено: m/z 1350,0 [М+Н]⁺ .

Пример 4

5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-allo-Thr(Val-Thr-Phe-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-смола

Alloc группу удаляют с помощью Pd(PPh₃)₄ (17,3 мг, 0,015 ммоль, 0,1 эквив.) в присутствии PhSiH₃ (185 мкл, 1,5 ммоль, 10 эквив.) в атмосфере Ar. Fmoc-Thr-OH (свободная гидроксильная группа) (256 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.) и Alloc-Phe-OH (187 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.) последовательно добавляют к вышеуказанной пептидил-смоле (Пример 3), используя HATU (285 мг, 0,75 ммоль, 5 эквив.) и DIEA (261 мл, 1,5 ммоль, 10 эквив.) в ДМФ (2,5 мл). Во всех случаях после 90 минут осуществления реакции сочетания нингидриновый тест был отрицательным. Удаление Fmoc-группы и промывки осуществляют по способу, раскрытому в разделе "Общие процедуры". Аликвоту пептидил-смолы обрабатывают TFA-H₂O (9:1) в течение 60 мин, и по данным ВЭЖХ (Условие В, t_R 17,8 мин) для сырого продукта, полученного после выпаривания, степень чистоты составляет >70%. ESMS, рассчитано для С₇₉H₁₃₂N₁₄ O₂₀,1597,0. Найдено: m/z 1598,2 [М+Н]⁺.

Пример 5

5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-allo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-смола (в результате дегидратации в твердой фазе)

Полученную выше пептидил-смолу (Пример 4) обрабатывают EDC (2,88 г, 15 ммоль, 100 эквив.), CuCl (891 мг, 9 ммоль, 60 эквив.) в СН₂ Cl₂-ДМФ (10:2) (12 мл) в течение 6 дней. После интенсивных промывок ДМФ, СН₂Cl₂, и ДМФ, Alloc группу удаляют, используя Pd(PPh₃)4 (17,3 мг, 0,015 ммоль, 0,1 эквив.) в присутствии PhSiH₃ (185 мкл, 1,5 ммоль, 10 эквив.) в атмосфере Ar. Конечный выход, рассчитанный с помощью ААА, составляет 0,11 ммоль/г (92% полный выход). Аликвоту пептидил-смолы обрабатывают TFA-H₂O (9:1) в течение 60 мин, и по данным ВЭЖХ (Условие В, t_R 17,2 мин) для сырого продукта, полученного после выпаривания, степень чистоты составляет >70%. ESMS, рассчитано для С₇₅H₁₂₆N₁₄ O₁₇, 1495,0. Найдено: m/z 1496,0 [M+H]⁺ .

Пример 6

5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-allo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-allo-Ile-D-Val-OH

Защищенный пептид отщепляют от смолы (0,5 г, 55,9 мкмоль), используя TFA-CH₂Cl₂ (1:99) (5×30 сек). Объединенные фильтраты выпаривают досуха при пониженном давлении и лиофилизируют, получая 80,2 мг (48,5 мкмоль, 87% выход) указанного в заголовке соединения со степенью чистоты >70%, по данным ВЭЖХ (Условие В, t_R 25,7 мин). ESMS, рассчитано для C₈₄H₁₄₂N₁₄O₁₉ , 1651,1. Найдено: m/z 1652,3 [М+Н]⁺.

Пример 7

Кахалалид F (I).

Защищенный пептид (Пример 6) (40,0 мг, 24 мкмоль) растворяют в ДМФ (25 мл) и добавляют PyBOP (37,8 мг, 73 мкмоль, 3 эквив.) и DIEA (25 мл, 145 мкмоль, 6 эквив.). Смесь перемешивают в течение 1 часа, затем растворитель удаляют, выпаривая при пониженном давлении. Защищенный циклический пептид растворяют в TFA-H₂O (19:1, 5 мл) и смесь перемешивают в течение 1 часа. Растворитель удаляют, выпаривая при пониженном давлении, и затем добавляют H₂O (5 мл) и лиофилизируют. Сырой продукт очищают с помощью хроматографии среднего давления (Vydac C₁₈ 15-20 мкм, 300 å, 240×24 мм), линейный градиент от 20% до 60% ацетонитрил (+0,05% TFA) в воде (+0,05% TFA) в течение 5 часов (300 мл каждого растворителя), 120 мл/час, регистрация при 220 нм, в результате получают указанный в заголовке продукт (5,0 мг, 3,4 мкмоль, выход 14%). MALDI-TOF-MS, рассчитано для С₇₅H₁₂₄N₁₄O ₁₆, 1477,9. Найдено: m/z 1478,7 [М+Н]⁺, 1500,6 [M+Na]⁺, 1516,5 [М+К]⁺. Продукт со-элюируют, используя ВЭЖХ [Условие D (t_R 12,5 мин), Е (t _R 17,4 мин), и F (t_R 12,1 мин) с аутентичным образцом кахалалида F. Спектр ¹Н ЯМР (500 МГц, d ⁶-ДМСО) соединения был идентичен спектру природного продукта (результаты представлены в таблице I)

Таблица I
Остаток	N-H	Н	H	Другие характеристики
(2)-Dhb	9.69 (с)	-	6.34 (кв., J=7.0 Гц)	1.26 [д, J=7.5 Гц, -СН3)
D-allo-Ile 1	8.82 (д, J=10.0 Гц)	4.31	1.73	1.31, 1.02, 0.77 ( -СН2, -СН3, -СН3)
L-Phe	8.79 (д, J=5.5 Гц)	4.42	2.93 (м)	7.20(1 Н Ar,м) 7.28 (4Н Ar, м)
D-allo-Thr	8.56 (д, J=8.0 Гц)	4.53	4.96 (м)	1.07 ( , J=6.5 Гц, -CH3)
D-Val 3	8.10 (д, J=8.5 Гц)	4.26	1.94	0.86 (2 -CH3)
Lr-Orn	7.95 (д, J=8.5 Гц)	4.49	1.48 (2Н)	1.67 ( -СН2), 2.74 (bs, -CH2), 7.69 ( -NH3 +)
D-allo-Ile 2	7.90 (д)	4.37	1.69	1.30, 1.03, 0.77 ( -СН2, -СН3, -CH3)
D-Val 5	7.88 (д)	4.23	1.96	0.84 (2 -СН3)
L-Thr	7.82 (д, J=8.0 Гц)	4.26	3.97 (м)	4.88(д, J=5.0 Гц, ОН), 0.98 (д, J=6.5Гц, -СН3)
D-Val 2	7.62 (д, J=8.5 Гц)	4.46	2.17	0.77 ( -СН3), 0.62 (д, J=7,0 Гц, -СН3)
L-Val 4	7.57 (д, J=8.5 Гц)	4.28	1.98	0.80 (2 -CH3)
L-Val l	6.76 (д, J=9.0 Гц)	3.86	1.39	0.62 (д, J=7.0 Гц, -CH3), 0.58 (д, J=6.0 Гц, -СН3)
D-Pro	-	4.36	2.03, 1.87, 1.79 ( -CH2, -CH2), 3.76 (1Н, м, -СН2), 3.53 (1Н, м, -СН 2)
5-MeHex	-	2.13 (2Н)	1.47 ( -СН2, -СН), 1.11 ( -CH2), 0,82 (2 -СН3)

Пример 7 бис

5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-aIlo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val).

Получают как побочный продукт во время получения (в процессе рацемизации на стадии циклизации) примера 7. Продукт охарактеризован с помощью ВЭЖХ (t_R 17,4 мин. Условие В) и ESMS, рассчитано для С₇₅H₁₂₄N₁₄O₁₆ , 1477,9. Найдено: m/z 1501,3 [M+Na]⁺, 1517,3 [М+К] ⁺.

Кахалалид F (I)

Пример 8

Alloc-Phe-Thr-OtBu

H-Thr-OtBu-HCl (3,1 г, 15 ммоль, 1,3 эквив.) растворяют в СН₂Cl₂ (30 мл) и добавляют DIEA (2,9 мл, 17 ммоль, 1,5 эквив.), и смесь перемешивают в течение 30 мин. Затем добавляют Alloc-Phe-ОН (2,8 г, 11 ммоль, 1 эквив.) и EDC (2,8 г, 15 ммоль, 1,3 эквив.) в CH₂Cl₂ (35 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 18 часов. Органическую реакционную смесь промывают H₂O (3×25 мл), сушат (MgSO₄) и концентрируют в вакууме. Полученное масло (4,12 г) очищают с помощью флэш-хроматографии [CHCl ₃-МеОН-НОАс (9:1:0,2)], получая указанное в заголовке соединение (3,25 г, 8 ммоль, 71% выход), который характеризуют с помощью аналитической ВЭЖХ (t_R 20,9 мин, степень чистоты >98%; Условие С); ESMS, рассчитано для C₂₁Н₃₀ N₂О₆ 406,2. Найдено: m/z 408,0 [М+Н] ⁺; ¹H ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 7,1-7,3 (5Н, м, Ar); 6,89 (1Н, д, J=8,8 Гц, NH); 5,7-5,9 (1Н, м, СН аллил); 5,56 (1Н, д, J=8,0 Гц, ОН); 5,2-5,3 (2Н, м, СН₂ g-аллил); 4,52 (2Н, д, J=5,4 Гц, СН₂ а-аллил); 4,45 (1Н, дд, J=8,4 Гц, 2,8 Гц, а-СН Thr); 4,22 (1Н, дкв., J=6,2 Гц, J=3,0 Гц, b-CH Thr); 3,0-3,2 (2Н, м, b-CH₂ Phe); 1,47 (9Н, s, tBu); 1,15 (3Н, д, J=6,6 Гц, g-СН₃ Thr); ¹³ С ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 172,2 (СО), 169,5 (СО); 156,0 (СО); 136,1 (Cq, Ar); 132,5 (СН, аллил); 129,3 (СН, Ar); 128,5 (СН, Ar); 126,9 (СН, Ar); 117,7 (СН₂, аллил); 82,7 (Cq, tBu); 68,5 (b-CH Thr); 65,9 (CH₂, аллил); 58,0 (a-CH Thr); 56,2 (а-СН Phe); 38,3 (b-CH₂ Phe); 28,0 (СН₃, tBu); 20,8 (g-СН₃ Thr).

Пример 9

Alloc-Phe-Z-Dhb-OtBu

Alloc-Phe-Thr-OtBu (3,25 г, 8,0 ммоль), EDC (9,90 г, 52 ммоль, 6,5 эквив.) и CuCl (2,14 г, 22 ммоль, 2,7 эквив.) растворяют в смеси СН₂Cl ₂-безводный ДМФ (65 мл, 12:1) в атмосфере N₂ и смесь перемешивают в течение 2 дней в атмосфере N₂ . Органический растворитель удаляют в вакууме и остаток помещают в насыщенный раствор EDTA (100 мл), который экстрагируют EtOAc (3×50 мл). Объединенные органические растворы промывают рассолом (3 × 60 мл), сушат (MgSO₄) и концентрируют в вакууме, получая твердое вещество бледно-желтого цвета (2,8 г), которое очищают с помощью флэш-хроматографии [CHCl₃ -МеОН-НОАс (9:1:0,1)], получая указанное в заголовке соединение (2,6 г, 6,7 ммоль, 84% выход), которое характеризуют с помощью аналитической ВЭЖХ (t_R 23,1 мин, степень чистоты >95%; Условие С); ESMS, рассчитано для C₂₁Н₂₈ N₂O₅ 388,2. Найдено: m/z 389,6 [М+Н] ⁺; ¹H ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 7,2-7,4 (5Н, м, Ar) ; 6,69 (1Н, кв., J=7,4 Гц, СН Dhb); 5,8-6,0 (1Н, м, СН аллил); 5,2-5,3 (2Н, м, СН₂ g-аллил); 4,5-4,6 (2Н, м, а-СН₂ аллил); 3,1-3,3 (2Н, м, b-CH₂ Phe) ; 1,67 (3Н, д, J=7,2 Гц, СН₃ Dhb); 1,47 (9Н, s, tBu); ¹³С ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 168,9 (СО); 163,1 (СО); 156,0 (СО); 136,0 (Cq, Ar); 132,6, 132,3 (СН, аллил; b-CH Dhb); 129,3 (СН, Ar); 128,7 (СН, Ar); 127,0 (СН, Ar); 117,9 (СН₂, аллил); 81,7 (Cq, tBu); 66,0 (СН ₂, аллил); 56,3 (а-СН Phe); 38,2 (b-CH₂ Phe); 28,0 (СН₃, tBu); 14,7 (СН₃ Dhb).

Пример 10

Alloc-Phe-Z-Dhb-OH

Alloc-Phe-Z-Dhb-OtBu (2,6 г, 6,7 ммоль) растворяют в смеси TFA-CH₂Cl ₂-H₂O (90:8:2, 5,5 мл) и эту смесь перемешивают в течение 3 часов. Органическую реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая указанное в заголовке соединение (2,2 г, 6,6 ммоль, 99% выход), которое характеризуют с помощью аналитической ВЭЖХ (t_R 17,0 мин, степень чистоты >95%; Условие С); ESMS, рассчитано для С₁₇Н₂₀N₂ O₅ 332,1. Найдено: m/z 333,7 [М+Н]⁴⁺; ¹H ЯМР (200 МГц, CD₃OD): 7,2-7,3 (5Н, м, Ar); 6,84 (1Н, кв., J=7,2 Гц, СН Dhb); 5,8-6,0 (1Н, м, СН аллил); 5,1-5,3 (2Н, м, СН₂ g-аллил); 4,4-4,5 (2Н, м, а-СН ₂ аллил); 3,2-3,3 (1Н, м, b-CH₂ Phe); 2,8-3,0 (1Н, м, b-CH₂ Phe); 1,66 (3Н, д, J=7,4 Гц, СН ₃ Dhb); ¹³С ЯМР (50 МГц, CD₃OD): 173,1 (СО); 138,5 (Cq, Ar); 136,7, 134,1 (СН, аллил; b-CH Dhb); 130,3 (СН, Ar); 129,4 (СН, Ar); 127,7 (СН, Ar); 117,4 (CH ₂, аллил); 66,6 (СН₂, аллил); 57,8 (а-СН Phe); 39,1 (b-CH₂ Phe); 14,1 (СН₃ Dhb),

Пример 11

5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-allo-Thr(Val-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-смола

Cl-TrtCl-смолу (0,45 г, 1,35 ммоль/г) помещают в 10 мл полипропиленовый шприц, снабженный полиэтиленовым дисковым фильтром. Пептидил-смолу получают тем же способом, что и в примерах 1-3, кроме того, что в реакции сочетания первой аминокислоты (Fmoc-D-Val-OH) со смолой используют 0,3 эквивалента вместо 0,2 эквивалентов. Начальный выход при расчете с помощью ААА составляет 0,29 ммоль/g. После осуществления реакций сочетания аминокислот, аликвоту пептидил-смолы обрабатывают TFA-H₂O (9:1) в течение 60 мин, и по данным ВЭЖХ (Условие В, t_R 17,3 мин) для сырого продукта, полученного после выпаривания, степень чистоты составляет >80%. ESMS, рассчитано для С₆₆H₁₁₆N₁₂ O₁₇, 1348,9. Найдено: m/z 1350,1 [М+Н]⁺ .

Пример 12

5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-allo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-Alloc)-D-allo-Ile-D-Val-O-TrtCl-смола [в результате включения дипептида)

Пептидил-смолу обрабатывают Pd(PPh₃)4 (15,1 мг, 0,013 ммоль, 0,1 эквив.) в присутствии PhSiH₃ (161 мкл, 1,3 ммоль, 10 эквив.) в атмосфере Ar, для удаления Alloc группы.

Alloc-Phe-Z-Dhb-OH (217 мг, 0,65 ммоль, 5 эквив.) и HATU (249 мг, 0,65 ммоль, 5 эквив.) растворяют в ДМФ (1,25 мл) и добавляют к пептидил-смоле, затем добавляют DIEA (228 мкл, 1,3 ммоль, 10 эквив.) и смесь перемешивают в течение ночи. После промывок повторяют реакцию сочетания с тем же количеством реагентов в течение 3 часов, когда нингидриновый тест становится отрицательным. После промывок ДМФ и СН₂ Cl₂ аликвоту пептидил-смолы обрабатывают TFA-H ₂O (9:1) в течение 60 мин, и по данным ВЭЖХ (Условие В, t_R 18,3 мин) для сырого продукта, полученного после выпаривания, степень чистоты составляет >80%. MALDI-TOF-MS, рассчитано для С₇₉H₁₃₀N₁₄O ₁₉, 1597,0. Найдено: m/z 1580,3 [М+Н]⁺, 1602,2 [М+Na]⁺, 1618,2 [М+К]⁺.

Пример 13

5-MeHex-D-Val-Thr(tBu)-Val-D-Val-D-Pro-Orn(Boc)-D-allo-Ile-D-allo-Thr(Val-Z-Dhb-Phe-H)-D-allo-Ile-D-Val-OH

Alloc группу из пептидил-смолы (Пример 12) удаляют, используя Pd (PPh₃)₄ (15,1 мг, 0,013 ммоль, 0,1 эквив.) в присутствии PhSiH₃ (161 мкл, 1,3 ммоль, 10 эквив.) в атмосфере Ar. Конечный выход, рассчитанный с помощью ААА, составляет 0,16 ммоль/г (79% полный выход). Защищенный пептид отщепляют от смолы (235 мг, 37,5 ммоль) с помощью TFA-CH₂Cl ₂ (1:99) (5×30 сек). Объединенные фильтраты выпаривают досуха при пониженном давлении и лиофилизируют, получая 40,5 мг (24,5 ммоль, 65%) указанного в заголовке соединения со степенью чистоты >80% по данным ВЭЖХ (Условие В, t_R 24,3 мин). MALDI-TOF-MS, рассчитано для C₈₄H₁₄₂ N₁₄O₁₉, 1651,1 Найдено: m/z 1674,8 [M+Na] ⁺, 1690,8 [М+К]⁺.

Пример 14

Кахалалид F (I)

Защищенный пептид (Пример 13) (38,5 мг, 23 пмоль) растворяют в ДМФ (25 мл), и добавляют PyBOP (36,4 мг, 70 мкмоль, 3 эквив.) и DIEA (24 мл, 140 мкмоль, 6 эквив.). Смесь оставляют при перемешивании на 1 час, а затем растворитель удаляют, выпаривая его при пониженном давлении. Защищенный циклический пептид растворяют в TFA-H₂O (19:1, 5 мл) и смесь перемешивают в течение 1 часа. Растворитель удаляют, выпаривая его при пониженном давлении, и затем добавляют Н₂O (5 мл) и лиофилизируют. Сырой продукт очищают по способу примера 7, получая указанное в заголовке соединение (3,6 мг, 2,4 мкмоль, 10% выход), которое было идентично соединению, полученному в примере 7.

5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) (структура приписана Кахалалиду F Goetz, G., et al. Tetrahedron, 1999, vol.55, pp.7739-7746)

Пример 15

5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) (в результате дегидратации в твердой фазе)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7 за единственным исключением в том, что в примере 3 Fmoc-Val-OH включают в D-Pro-пептидил-смолу, а затем после удаления Fmoc группы включают Fmoc-D-Val-OH. Конечный выход, рассчитанный с помощью ААА, составляет 0,106 ммоль/г (87% полный выход), выход отщепления составляет 83%, и получают 4,7 мг указанного в заголовке соединения, которые представляет собой 13% полный выход стадий циклизации, удаления защитных групп и очистки. При обработке с помощью ВЭЖХ этот продукт элюируется на 0,8-1,9 мин позже, чем аутентичный образец кахалалида F (Условие D (t_R 13,3 по сравнению с 12,5 мин), Е (t_R 18,8 по сравнению с 17,4 мин), и F(t_R 14,0 по сравнению с 12,1 мин)]. MALDI-TOF-MS, Рассчитано для C₇₅H₁₂₄N ₁₄O₁₆ 1477,9. Найдено: m/z 1478,7 [М+Н] ⁺, 1500,7 [M+Na]⁺, 1516,6 [М+К]⁺.

Спектр ¹H ЯМР (500 МГц, d⁶-ДМСО) соединения (таблицы II и III) отличен от спектра, полученного для аутентичного образца кахалалида F. Наибольшее различие состоит в том, что полученное синтетическим путем соединение имеет две конформации, обусловленные цис-транс равновесием между L-Val-D-Pro остатками, не наблюдается ни в природном продукте, ни в изомере, полученном в примере 7.

Таблица II (Основной, транс-изомер)
Остаток	N-H	Н	H	Другие характеристики
(2)-Dhb	9.67 (с)	-	6.33 (кв.)	1.27 (д, J=7.0 Гц, -СН3)
D-allo-Ile 1	8.80 (д)	4.31	1.73	1.32, 0.77 (н-CH2, -CH2, -СН3)
L-Phe	8.78 (д, J=5.5 Гц)	4.43	2.93 (м)	7.20 (1Н Ar, м ) 7.28 (4Н Ar, м)
D-al·lo-Thr	8.58 (д, J=9.0 Гц)	4.53	4.95 (м)	1.07 (д, J=6.5 Гц, -СН3)
L-Val 3	7.97 (д, J=8.0 Гц)	4.34	1.94	0.84 (2 -СН3)
L-Orn	7.77 (д, J=8.5 Гц)	4.47	1.46 (2Н)	1.66 ( -СН2), 2.72 (bs, -CH2), 7.66 ( -NH3 +)
D-allo-Ile 2	7.87 (д, J=8.5 Гц)	4.37	1.68	0.75 ( -СН3 или d-СН3 и -СН3)
D-Val 5	7.90	4.22	1.95	0.85 (2 -СН3)
L-Thr	7.90 (д)	4.24	4.02	4.98 (ОН), 1.02 ( -СН3)
D-Val 2	7.63 (д, J=8.5 Гц)	4.45	2.18	0.77 ( -СН3), 0.62 ( -СН3)
D-Val 4	7.56 (д, J=9.0 Гц)	4.34	2.02	0.84 ( -СН3), 0.79 ( -СН3),
L-Val 1	6.75 (д)	3.86	1.39	0.62 (2 -СН3)
D-Pro	-	4.30	2.03, 1.81, 1.73 ( -СН2, -СН2), 3.73 (1Н, м, -СН2), 3,52 (1Н, м, -СН2)
5-MeHex	-	2.08 (1Н) 2.15 (1Н)	1.48 (b-СН 2, -СН), 1.11 ( -СН2), 0.82(2 -СН3)

Таблица III (меньший, цис-изомер)
Остаток	N-H	Н	H	Другие характеристики
(Z)-Dhb	9.63 (с)	-	6.33 (кв.)	1.28 (д, J=6.5 Гц, -СН3)
D-allo-Ile 1	8.76 (д)	4.30	1.71	1.33, 0.76 ( -СН2, -СН3, -СН3)
L-Phe	8.78 (д, J=5.5 Гц)	4.43	2.93 (м)	7.20(1Н Ar, м) 7.28(4Н Ar, м)
D-allo-Thr	8.58 (д, J=9.0 Гц)	4.53	4.95 (м)	1.00 ( -СН3)
L-Val 3	8.06 (д, J=8.5 Гц)	4.11	1.81	0.71 ( -СН3), 0.60 ( -CH3)
L-Orn	8.37 (д, J=9.0 Гц)	4.62	1.52 (2Н)	1.64 ( -CH2), 2.78 (bs, -CH2), 7.66 ( -NH3 +)
D-allo-Ile 2	8.09 (д, J=9.0 Гц)	4.42	1.64	0.77 ( -СН3 или d-СН3 и -СН3)
D-Val 5	7.90	4.22	1.95	0.85 (2 -СН3)
L-Thr	7.88 (d)	4.23	3.99	4.93 (ОН), 1.02 ( -CH3)
D-Val2	7.63 (д, J=8.5 Гц)	4.45	2.18	0.77 ( -СН3), 0.62 ( -СН3)
D-Val 4	7.49 (д, J=9.0 Гц)	4.34	1.94	0.79 ( -СН3), 0.73 ( -СН3),
L-Val 1	6.72 (d)	3.84	1.38	0.62 (2 -СН3)
D-Pro	-	4.93	2.06, 1.89, 1.75 ( -СН2, -СН2), 3.3 (м, -СН2)
5-MeHex	-	2.08 (1Н) 2.15 (1Н)	1.48 ( -СН2, -СН), 1.11 ( -СН2), 0.82 (2 -СН3)

Пример 15 бис

5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (в процессе рацемизации на стадии циклизации) примера 15. Продукт охарактеризован с помощью ВЭЖХ (t_R 17,6 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS, Рассчитано для С₇₅H₁₂₄N₁₄О ₁₆, 1477,9. Найдено: m/z 1479,3 [М+Н]⁺, 1501,2 [M+Na]⁺, 1517,2 [М+К]⁺.

Пример 16

5-MeHex-D-Val-Thr-D-Val-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val) (в результате включения дипептида)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 8-14, за единственным исключением в том, что в примере 14 Fmoc-Val-OH включают в D-Pro-пептидил-смолу, а затем после удаления Fmoc группы включают Fmoc-D-Val-OH. Конечный выход, рассчитанный с помощью ААА, составляет 0,106 ммоль/г (79% полный выход), выход отщепления составляет 78%, и получают 3,4 мг указанного в заголовке соединения, которые представляет собой 10% полный выход со стадий циклизации, удаления защитных групп и очистки. Очищенный продукт идентичен продукту, полученному в примере 15.

Hamann et al. Кахалалид В [5-МеНех-Tyr-цикло(D-Ser-Phe-D-Leu-Pro-Thr-Gly)]

Пример 17

H-Thr(tBu)-O-TrtCl-смола

Cl-TrtCl-смолу (0,5 г, 1,35 ммоль/г) помещают в 10 мл полипропиленовый шприц, снабженный полиэтиленовым фильтром-диском. Затем смолу промывают CH₂Cl₂ (5×0,5 мин), и добавляют раствор Fmoc-Thr(tBu)-ОН (54 мг, 0,135 ммоль, 0,2 эквив.) и DIEA (235 мл, 1,35 ммоль, 2 эквив.) в CH₂Cl₂ (1,25 мл), и полученную смесь перемешивают в течение 1 часа. Реакцию останавливают, добавляя МеОН (400 мл), после перемешивания в течение 15 мин. Fmoc-Thr(tBu)-O-TrtCl-смолу подвергают следующим промывкам/обработкам: СН₂Cl₂ (3×0,5 мин), ДМФ (3×0,5 мин), пиперидин-СН₂Cl₂ -ДФМ (1:9,5:9,5, 1×10 мин), пиперидин-ДМФ (1:4, 1×15 мин), ДМФ (5×0,5 мин), изопропанол (2×1 мин), ДМФ (5×0,5 мин), МеОН (2×1 мин) и сушат в вакууме. Выход, рассчитанный с помощью ААА, составляет 0,15 ммоль/г.

Пример 18

5-MeHex-Tyr-D-Ser(Gly-H)-Phe-D-Leu-Pro-Thr-OH

Fmoc-Pro-OH (178 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.), Fmoc-D-Leu-ОН (187 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.), Fmoc-Phe-OH (204 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.), Fmoc-D-Ser-ОН (свободная гидроксильная группа) (173 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.), Fmoc-Tyr(tBu)-ОН (243 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.), и 5-МеНех-ОН (69 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.) добавляют последовательно к полученной выше Н-Thr(tBu)-O-TrtCl-смоле, используя DIPCDI (82 мкл, 0,53 ммоль, 7 эквив.) и HOBt (81 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.) в ДМФ (1,25 мл). Во всех случаях кроме D-Ser после 90 минут осуществления реакции сочетания, нингидриновый тест был отрицательным. Fmoc-D-Ser-OH (173 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.) снова сочетают с HATU (201 мг, 0,53 ммоль, 7 эквив.) в присутствии DIEA (184 мкл, 1,06 ммоль, 14 эквив.) в ДМФ в течение 90 мин. Удаление Fmoc группы и промывки осуществляют по способу, раскрытому в разделе общие процедуры. Осуществляют реакцию сочетания Boc-Gly-OH (119 мг, 0,68 ммоль, 9 эквив.) с DIPCDI (105 мкл, 0,68 ммоль, 9 эквив.) в присутствии DMAP (8,3 мг, 68 мкмоль, 0,9 эквив.) в течение 2,5 часа. Реакцию сочетания повторяют со свежими реагентами в течение 1,5 часа. Конечный выход составляет 0,10 ммоль/г и соответствует 77% выходу синтеза. Незащищенный пептид отщепляют от смолы (525 мг, 54 нмоль), используя TFA-H₂O (92:8) в течение 2 часов. Объединенные фильтраты выпаривают досуха при пониженном давлении, добавляют Н₂О (5 мл) и раствор лиофилизируют, получая 43,0 мг (48,0 мкмоль, 89% выход) указанного в заголовке соединения со степенью чистоты >85% по данным ВЭЖХ (Условие A, t_R 18,5 мин). ESMS, рассчитано для С₄₅Н₆₅ N₇O₁₂ 895,5. Найдено: m/z 896,6 [М+Н] ⁺.

Пример 19

Кахалалид В [5-МеНех-Tyr-цикло(D-Ser-Phe-D-Leu-Pro-Thr-Gly]

Незащищенный пептид (пример 18) (40,5 мг, 45 мкмоль) растворяют в ДМФ (48 мл) и добавляют PyBOP (70 мг, 0,135 ммоль, 3 эквив.) и DIEA (47 мл, 0,271 ммоль, 6 эквив.). Смесь перемешивают в течение 2 часов и затем растворитель удаляют, выпаривая при пониженном давлении, добавляют H₂O (5 мл), и раствор лиофилизируют. Сырой продукт очищают с помощью хроматографии среднего давления (Vydac C₁₈ 15-20 мкм, 300 å, 240×24 мм), линейный градиент от 20% до 60% ацетонитрила (+0,05% TFA) в воде (+0,05% TFA) в течение 5 часов (300 мл каждого растворителя), 120 мл/час, детектирование на 220 нм, получая указанное в заголовке соединение (8,7 мг, 9,9 мкмоль, 22% выход). Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (Условие А, t_R 21,6 мин) и MALDI-TOF-MS, рассчитано для С₄₅Н₆₃N₇О ₁₁, 877,5. Найдено: m/z 878,7 [М+Н]⁺, 900,6 [M+Na]⁺, 916,5 [М+К]⁺. AAA: Gly 1,02 (1), Thr 0,95 (1), Phe 0,99 (1), Ser 1,00 (1), Pro 1,20 (1), Leu 1,00 (1), Tyr 0,87 (1).

Пример 20

5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Etg-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-4 и 6-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 4, Fmoc-Thr-OH заменяют на Fmoc-Etg-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (t_R 16,8 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для C₇₅H₁₂₆ N₁₄O₁₆, 1479,0. Найдено: m/z 1480,2 [М+Н] ⁺, 1502,2 [M+Na]⁺, 1518,0 [М+К]⁺.

Пример 20b

5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-D-Etg-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-4 и 6-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 4, Fmoc-Thr-OH заменяют на Fmoc-D-Etg-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (t_R 17,0 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₅H₁₂₆ N₁₄O₁₆, 1479,0. Найдено: m/z 1501,0 [M+Na] ⁺, 1517,9 [М+К]⁺.

Пример 20с

5-МеНех-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-P-Thr-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-4 и 6-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 4, Fmoc-Thr(tBu)-ОН заменяют на Fmoc-D-Thr(tBu)-ОН. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (t_R 19,9 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₅H ₁₂₆N₁₄O₁₇, 1494,9. Найдено: 1517,4 [M+Na]⁺, 1533,4 [М+К]⁺.

Пример 20d

5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-The-D-allo-Ile-D-Val-Phe-D-allo-The-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-4 и 6-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 4, Fmoc-Thr(tBu)-ОН заменяют на Fmoc-D-allo-Thr-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (t_R 18,0 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₅H ₁₂₆N₁₄O₁₇, 1494,9. Найдено: 1496.6 [М+Н]⁺, 1518,6 [M+Na]⁺, 1534,6 [М+К] ⁺.

Пример 20e

5-MeHex-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло-(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-D-Dhe-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 4, Fmoc-Thr-OH заменяют на Fmoc-D/L-(b-OH)Phe-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (t_R 22,2 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для C₈₀H₁₂₆ N₁₄O₁₆, 1538,95. Найдено: 1540,3 [М+Н] ⁺, 1562,4 [M+Na]⁺, 1578,3 [М+К]⁺.

Пример 21

5-МеНех-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло-(D-Dpa-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 2, Fmoc-allo-Thr-OH заменяют на Fmoc-P-Dpa(Alloc)-OH и перед включением Alloc-Val-OH, который включают как остальные защищенные аминокислоты, Alloc группу из Dpa удаляют, как указано выше. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ и ESMS. Рассчитано для С₇₄H₁₂₃N₁₅O₁₅ , 1461,9. Найдено: m/z 1463,3 [М+Н]⁺.

Пример 22

But-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3, 5-МеНех, заменяют на But-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 14,7 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS,

Рассчитано для С₇₂Н₁₁₈N₁₄ O₁₆, 1435,9. Найдено: 1459,6 [М+Na]⁺, 1475,6 [М+К]⁺.

Пример 22 бис

But-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (во время рацемизации на стадии циклизации) продукта примера 22. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 16,0 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для C₇₂H₁₁₈ N₁₄O₁₆, 1435,9. Найдено: 1459,5 [M+Na] ⁺, 1475,5 [М+К]⁺.

Пример 23

3-MeBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3, 5-МеНех, заменяют на 3-MeBut-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 15,9 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₃Н₁₂₀N₁₄O ₁₆, 1449,9. Найдено: 1473,2 [M+Na]⁺, 1489,2 [М+К]⁺.

Пример 23 бис

3-MeBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (во время рацемизации на стадии циклизации) продукта примера 23. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 17,0 мин. Условие В) и ESMS и рассчитано для С₇₃H₁₂₀N ₁₄O₁₆, 1449,9. Найдено: 1473,3 [M+Na]⁺ , 1489,4 [М+К]⁺.

Пример 24

3,3-DiMeBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3, 5-МеНех заменяют на 3,3-DiMeBut-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 16,3 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₄H₁₂₂N₁₄O ₁₆, 1463,9. Найдено: m/z 1487,4 [M+Na]⁺, 1503,6 [М+К]⁺.

Пример 24 бис

3,3-DiMeBut-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (во время рацемизации на стадии циклизации) продукта примера 24. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 17,6 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₄H₁₂₂ N₁₄O₁₆, 1463,9. Найдено: m/z 1487,3 [M+Na] ⁺, 1503,3 [М+К]⁺.

Пример 25

4-MePen-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-The-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на 4-MePen-ОН. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (t_R 16,5 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₄H₁₂₂N₁₄O ₁₆, 1463,9. Найдено: m/z 1487,7 [M+Na]⁺, 1503,6 [М+К]⁺.

Пример 25 бис

4-MePen-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (во время рацемизации на стадии циклизации) продукта примера 25. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 17,8 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₄H₁₂₂ N₁₄O₁₆, 1463,9. Найдено: m/z 1487,8 [M+Na] ⁺, 1503,6 [М+К]⁺.

Пример 26

Hep-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на Нер-ОН. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 17,5 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₅H₁₂₄N₁₄O ₁₆, 1477,9. Найдено: m/z 1501,4 [M+Na]⁺, 1517,5 [М+К]⁺.

Пример 26 бис

Нер-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val). Получают как побочный продукт во время получения (во время рацемизации на стадии циклизации) продукта примера 26. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 18,9 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₅H₁₂₄N₁₄O ₁₆, 1477,9.

Найдено: m/z 1501,6 [M+Na]⁺ , 1517,7 [М+К]⁺.

Пример 27

Pal-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на Pal-ОН. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 22,1 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₈₄H₁₄₂N₁₄O ₁₆, 1603,1. Найдено: m/z 1626,9 [M+Na]⁺, 1642,9 [М+К]⁺.

Пример 27 бис

Pal-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (во время рацемизации на стадии циклизации) продукта примера 27. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 23,2 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₈₄H₁₄₂ N₁₄O₁₆, 1603,1. Найдено: m/z 1626,8 [M+Na] ⁺, 1642,8 [М+К]⁺.

Пример 27а

4-DiMeABut-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на 4-PiMeABut-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 12,0 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₄H ₁₂₃N₁₅O₁₆, 1477,9. Найдено: m/z 1478,6 [М+Н]⁺, 1500,6 [M+Na]⁺, 1516,6 [М+К] ⁺.

Пример 27b

2-Hedo-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на 2-Hedo-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 15,8 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₄Н₁₁₈N₁₄O ₁₆, 1458,9. Найдено: m/z 1460,0 [M+H]⁺, 1482,0 [M+Na]⁺, 1497,9 [M+K]⁺.

Пример 27с

4-AcBut-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на 4-AcBut-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 18,2 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₄H₁₂₀N₁₄O ₁₈, 1492,9. Найдено: m/z 1493,7 [М+Н]⁺, 1515,8 [M+Na]⁺, 1531,7 [М+К]⁺.

Пример 27d

4-HOBut-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на 4-HOBut-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 16,6 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₂H₁₁₈N₁₄O ₁₇, 1450,9. Найдено: m/z 1451,6 [М+Н]⁺, 1473,6 [M+Na]⁺, 1489,6 [M+K]⁺.

Пример 27е

Ас-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на НОАс. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 17,0 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₀Н₁₁₄N₁₄O ₁₆, 1406,9. Найдено: m/z 1407,8 [М+Н]⁺, 1429,8 [M+Na]⁺.

Пример 27f

TFA-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (во время трифторацетилирования на стадии циклизации) продукта примера 27е. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 14,7 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₀ Н₁₁₁F₃N₁₄O₁₆, 1460,8. Найдено: m/z 1462,0 [М+Н]⁺, 1484,1 [M+Na]⁺ , 1500,0 [М+К]⁺.

Пример 27g

AcButBut-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на AcButBut-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 14,1 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₈H₁₂₆N₁₄О ₂₀, 1578,9. Найдено: m/z 1581,2 [М+Н]⁺, 1602,2 [M+Na]⁺, 1618,2 [М+К]⁺.

Пример 27h

IBut-D-allo-Ile-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на Fmoc-D-allo-Ile-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 15,3 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₈H₁₂₉N₁₅O ₁₇, 1548,0. Найдено: m/z 1548,8 [M+H]⁺, 1570,8 [M+Na]⁺, 1586,8 [М+К]⁺.

Пример 27i

Lit-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на Lit-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 13,1 мин. Условие Н) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₉₂H₁₅₀N₁₄O ₁₇, 1,7231. Найдено: m/z 1724,6 [М+Н]⁺,1746,6 [M+Na]⁺, 1761,5 [М+К]⁺.

Пример 27j

TFA-Lit-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (во время трифторацетилирования на стадии циклизации) продукта примера 27i. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ [t_R 17,1 мин. Условие Н) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₉₄ H₁₅₉F₃N₁₄O₁₈, 1819,1. Найдено: m/z 1820,6 [М+Н]⁺, 1842,6 [M+Na]⁺ , 1858,6 [М+К]⁺.

Пример 27k

TIco-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех заменяют на TIco-ОН. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 16,8 мин. Условие Н) и ES-MS. Рассчитано для С₉₂H₁₅₈N₁₄O ₁₆, 1715,2. Найдено: m/z 858,2 [М+Н]⁺/2, 1171,8 [М+Н]⁺.

Пример 28

Н-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, исходя из 200 мг смолы за исключением того, что в примере 3 5-МеНех не включен. Fmoc-D-Val-OH заменяют на Fmoc-P-Val-OH. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 11,6 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₆₈Н ₁₁₂N₁₄O₁₅, 1364,8. Найдено: m/z 1388,3 [M+Na]⁺, 1404,3 [М+К]⁺.

Пример 28 бис

Н-Р-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (в процессе рацемизации на стадии циклизации) продукта примера 28. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (t_R 12,9 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₆₈Н₁₁₂ N₁₄O₁₅, 1364,8. Найдено: m/z 1388,4 [M+Na] ⁺, 1404,4 [М+К]⁺.

Пример 29

5-МеНех-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры практически в соответствии с примерами 1-7, но в соответствии со схемой 2.

Схема 2

Синтез начинают, исходя из 200 мг смолы, и Fmoc-Orn(Boc)-OH не включают. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ (t_R 23,9 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₇₀ Н₁₁₄N₁₂O₁₅, 1362,9. Найдено: m/z 1386,4 [М+Na]⁺, 1402,4 [М+К]⁺.

Пример 29 бис

5-МеНех-D-Val-Thr-Val-D-Val-D-Pro-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Получают как побочный продукт во время получения (в процессе рацемизации на стадии циклизации) продукта примера 29. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ и MALDI-TOF-MS.

Пример 30

5-МеНех-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, но в соответствии со схемой 2. Синтез начинают исходя из 200 мг смолы и Fmoc-Orn(Boc)-ОН и Fmoc-D-Pro-OH не включают. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 20,3 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₆₅ Н₁₀₇N₁₁O₁₄, 1265,8. Найдено: m/z 1288,5 [M+Na]⁺, 1304,5 [М+К]⁺.

Пример 31

5-МеНех-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют практически по способу, описанному в примерах 1-7, но в соответствии со схемой 2. Синтез начинают исходя из 200 мг смолы и Fmoc-Orn(Boc)-ОН и Fmoc-P-Pro-OH и Fmoc-P-Val-OH не включают. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 20,0 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₆₀H₉₈N₁₀O₁₃, 1166,7. Найдено: m/z 1190,9 [M+Na]⁺, 1206,9 [М+К] ⁺.

Пример 32

5-МеНех-D-Val-The-Val-D-Val-D-Pro-Orn-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, но в соответствии со схемой 2. Синтез начинают исходя из 200 мг смолы и Fmoc-Orn(Boc)-ОН, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH, и Fmoc-Val-OH не включают. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 24,6 мин. Условие А) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для C₅₅H₈₉N₉O₁₂, 1067,7. Найдено: m/z 1068,7 [М+Н]⁺, 1090,6 [M+Na] ⁺, 1106,5 [М+К]⁺.

Пример 33

5-МеНех-D-Val-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, но в соответствии со схемой 2. Синтез начинают исходя из 200 мг смолы и Fmoc-Orn(Boc)-ОН, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH Fmoc-Val-OH и Fmoc-Thr(tBu)-ОН не включают. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 19,8 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для C₅₁H₈₂N₈O ₁₀, 966,6. Найдено: m/z 990,7 [M+Na]⁺, 1007,2 [М+К]⁺.

Пример 34

5-МеНех-D-allo-Ile-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, но в соответствии со схемой 2. Синтез начинают исходя из 200 мг смолы и Fmoc-Orn(Boc)-ОН, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Thr(tBu)-ОН, и Fmoc-D-Val-OH не включают. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 22,0 мин. Условие В) и MALDI-TOF-MS. Рассчитано для С₄₆Н₇₃ N₇O₉, 867,6. Найдено: m/z 890,6 [M+Na] ⁺, 906,6 [М+К]⁺.

Пример 35

5-MeHex-цикло(D-allo-Thr-D-allo-Ile-D-Val-Phe-Z-Dhb-Val)

Экспериментальные процедуры осуществляют по способу, описанному в примерах 1-7, но в соответствии со схемой 2. Синтез начинают исходя из 200 мг смолы и Fmoc-D-allo-Ile-ОН, Fmoc-Orn(Boc)-ОН, Fmoc-D-Pro-OH, Fmoc-D-Val-OH, Fmoc-Val-ОН, Fmoc-Thr(tBu)-ОН, и Fmoc-D-Val-OH не включают. Продукт характеризуют с помощью ВЭЖХ, (t_R 17,1 мин Условие В) и ESMS. Рассчитано для С₄₀Н₆₂N₆O₈, 754,5. Найдено: m/z 755,7 [М+Н]⁺, 777,7[M+Na]⁺ , 793,7[M+K]⁺.

БИОАКТИВНОСТЬ

Биоактивность соединений согласно изобретению продемонстрирована на результатах следующих таблиц, причем результаты эти получены по способу Berjeron et al., Biochem and Bioph Res. Comm., 1984, 121, 3, 848-854. Клеточные линии: Р388, мышиная лимфома; А549, карцинома легких человека; НТ-29, карцинома ободочной кишки человека; MEL-28, меланома человека; DU-145, карцинома простаты человека.

**Соединения, для которых в графе "Цепь" указан Терминал, имеют такую же цепь, что и соединение 7, но с указанным замещением для 5-МеНех.

Таблица Цитотоксичность соединений, родственных Кахалалиду F. Значения ИК 50 (моль) для производных
Compound	A549M	DU145M	HT29M	MEL28M	P388M
27j	5,49E-08	5,49Е-08	5,49Е-08	5,49E-08	2,75Е-06
27l	5,80E-07	5,80Е-07	2,90Е-08	1,45Е-07	1,45Е-06
27	1,56E07	3,12E-08	6,23Е-08	6,23Е-08	3,12Е-06
27bis	>3,12E-06	1,56Е-06	6,23Е-07	6,23Е-07	>3,12Е-06
27g	>6,33E-07	>6,33Е-07	1,58Е-06	3,17Е-06	>3,17Е-06
27h	NA	NA	NA	NA	NA
20e	3,25E-06	6,50Е-07	NA	NA	NA
20c	NA	NA	NA	NA	NA
27c	NA	NA	6,70E-07	3,35E-06	NA
20	>3,38Е-06	3,38Е-06	>3,38Е-06	>3,38Е-06	>3,38Е-06
20b	>3,38E-06	3,38Е-06	3,38Е-06	>3,38Е-06	>3,38Е-06
27a	NA	NA	NA	NA	NA
(as Scheuer) 15	>3,39E-06	3,39Е-06	3,39Е-06	>3,39Е-06	>3,39Е-06
15 bis	>3,39Е-06	>3,39Е-06	>3,39Е-06	>3,39Е-06	>3,39Е-06
26	3,39Е-07	3,39Е-08	6,77Е-07	1,69Е-06	3,39Е-06
26 bis	>3,39Е-06	>3,39Е-06	3,39Е-07	1,69Е-06	>3,39Е-06
(Rinehart) 7	3,39Е-07	1,69Е-07	3,39Е-08	3,39Е-07	>3,39Е-06
7 bis	>3,39Е-06	>3,39Е-06	>3,39Е-06	>3,39Е-06	>3,39Е-06
24	1,71Е-06	3,42Е-07	3,42Е-07	3,42Е-06	>3,42Е-06
24 bis	>3,42Е-06	>3,42Е-06	3,42Е-07	>3,42Е-06	>3,42Е-06
25	3,42Е-07	3,42Е-07	>3,42Е-06	>3,42Е-06	>3,42Е-06
25 bis	>3,42Е-06	>3,42Е-06	>3,42Е-06	>3,42Е-06	>3,42Е-06
27f	NA	3,42Е-06	>3,42Е-06	3,42Е-06	Z,A2E-06
27b	3,43Е-06	6,85Е-07	3,43Е-06	NA	NA
27d	NA	NA	NA	NA	NA
23	>3,45Е-06	>3,45Е-07	>3,45Е-08	>3,45Е-07	>3,45Е-06
23b	>3,45Е-06	>3,45Е-06	>3,45Е-06	>3,45Е-06	>3,45Е-06
22	>3,48Е-06	1,74Е-06	NA	NA	NA
22b	>3,48Е-06	>3,48Е-06	1,74Е-06	>3,48Е-06	>3,48Е-06
27с	NA	>3,55Е-06	>3,55Е-06	>3,55Е-06	>3,55Е-06
28	>3,66Е-06	>3,66Е-06	>3,66Е-06	>3,66Е-06	>3,66Е-06
28 bis	>3,66Е-06	>3,66Е-06	NA	NA	NA
29	>3,67Е-06	>3,67Е-06	>3,67Е-06	>3,67Е-06	>3,67Е-06
29 bis	>3,67Е-06	>3,67Е-06	>3,67Е-06	>3,67Е-06	>3,67Е-06
31	>4,28Е-07	>4,28Е-08	>4,28Е-06	>4,28Е-06	>4,28Е-06
32	NA	NA	4,68Е-08	4,68Е-08	>4,68Е-06
19	>5,69Е-06	>5,69Е-06	NA	NA	NA
34	NA	NA	>5,76Е-06	>5,76Е-06	>5,76Е-06
35	>6,76Е-06	>5,76Е-06	>5,76Е-06	>5,76Е-06	>5,76Е-06

ССЫЛКИ

Hamann, M.T.; Scheuer, P.J. J. Am. Chem. Soc., 1993. "Kahalalidc F: a Bioactivc Depsipeptide from the Sacoglossan Mollusk Elysia refesoens and the Green Alga Bryopsis sp.", vol.115, pp.5825-5826.

Hamann, M.T., et al. J. Org. Chem., 1996. "Kahalalides: Bioactive Peptides from Marine Mollusk Elysia rufescens and its Algal Diet Bryopsis sp.", vol.61, pp.6594-6660.

Garcia-Rocha, M., et al. Cancer Lett., 1996. "The Antitumoral Compound Kahalalide F Acts on Cell Lysosomes", vol.99, pp.43-50.

Hamann, M.T., et al. J. Org. Chem., 1998. "Kahalalides: Bioactivc Peptides from Marine Mollusk Etysia rufescens and its Algal Diet Bryopsis sp.", vol.63, p.485 (Correction of J. Org. Chem., 1996, vol.61, pp.6594-6660).

Lloyd-Williams, P., et al. Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins. CRC Press, Boca Raton (FL), 1997.

Goetz, G., et al. J. Nat. Prod., 1997. "Two Acyclic Kahalalides from the Sacoglossan Mollusk Elysia rufescens", vol.60, pp.562-567.

Goetz, G., et al. Tetrahedron, 1999. The Absolute Stereochemistry of Kahalalide F", vol.55, pp.7739-7746.

Kan, Y., et al J. Nat Prod., 1999. vol.62, pp.1169-1172.

Horgen, F.D. et al. J. Nat Prod., 2000, vol.63, pp.152-154.