изопропиламид 2-(бета-2,4-динитрофенилгидразино)цинхониновой кислоты, проявляющий противомикробную активность

Формула изобретения

Изопропиламид 2-( -2,4-динитрофенилгидразино)цинхониновой кислоты формулы



обладающий противомикробной активностью.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области органической химии, к производным цинхониновой кислоты, а именно к новым биологически активным соединениям - изопропиламиду 2-( -2,4-динитрофенилгидразино)цинхониновой кислоты формулы:

обладающему противомикробной активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве лекарственного противомикробного препарата.

Ближайшим структурным аналогом заявляемому соединению является бутиламид 2-( -фенилгидразино)цинхониновой кислоты формулы

описанный ранее и обладающий противомикробной активностью [Янборисова О.А., Семенова З.Н., Плаксина А.Н., Коньшин М.Е. Амиды 2-( -фенилгидразино)цинхониновой кислоты и их антимикробная активность. Деп. в ВИНИТИ, 14.06.89, № 3970-В 89].

В качестве эталонов сравнения взяты противомикробные препараты: этакридина лактат и гидроксиметилхиноксилиндиоксид (диоксидин) [Машковский М.Д. Лекарственные средства, 14-е изд., М., Новая волна, 2002, Т.2, С.389, 298], широко применяемые в медицинской практике.

Целью данного изобретения является синтез не описанного ранее изопропиламида 2-( -2,4-динитрофенилгидразино)цинхониновой кислоты, обладающего выраженным противомикробным действием и низкой токсичностью.

Поставленная цель достигается получением изопропиламида 2-( -2,4-динитрофенилгидразино)цинхониновой кислоты реакцией изопропиламида 2-хлорцинхониновой кислоты с 2,4-динитрофенилгидразином по схеме:

Пример получения заявляемого соединения.

Смесь 2,49 г (0,01 моль) изопропиламида 2-хлорцинхониновой кислоты [Павлова М.В., Михалев А.И., Коньшин М.Е., Закс А.С., Василюк М.В., Вахрин М.И. Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность 2-замещенных амидов цинхониновой кислоты // Хим. фарм. журн., 1999, Т.33, № 8, С.18-19] и 1,98 г (0,01 моль) 2,4-динитрофенилгидразина в 10 мл диметилформамида кипятят 4 часа, охлаждают, выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и перекристаллизовывают из ДМФА. Получают 3,20 г (78%) кристаллического продукта.

Т.пл., 239-240°С. C₁₉H₁₈ N₆O₅.

Найдено, %: C 55,55; H 4,38; N 20,40.

Вычислено, %: C 55, 60; H 4,42; N 20,48.

ИК-спектр, ИК-спектрометр SPECORD М-80 (Германия), вазелиновое масло, , см-¹: 1656 (CO), 3350 (CONH, NHNH).

ПМР-спектр (спектрометр ЯМР MERKURY-300 фирмы Varian, 300 МГц) в ДМСО-d₆, внутренний стандарт ГМДС, , м.д.: 1,22 с (6H, 2 CH₃); 3,65 уш. с (1H, HetNHNH); 4,17 м (1H, CH(CH₃)₂; 7,19-8,94 м (8H, HetH, АrН); 8,82 д (1H, NH-амид), 10,60 с (1H, HetNHNH).

Полученное соединение представляет собой бесцветное кристаллическое вещество растворимое в ДМФА, ДМСО, уксусной кислоте, трудно растворимое в спирте и нерастворимое в воде. При хранении на воздухе соединение устойчиво. Заявляемое соединение изучено на наличие противомикробной активности и острой токсичности.

Определение бактериостатической активности соединения проводили методом двукратных серийных разведении в жидкой питательной среде [Методические указания по изучению противомикробной активности фармакологических веществ // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. «Ремедиум» - С.264-273].

Определены значения минимальной подавляющей концентрации (МПК) в отношении фармакопейных штаммов: золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus ATCC - 6538) и кишечной палочки (Escherichia coli АТСС 25922).

Изучаемое соединение в количестве 0,05 г растворяли в 5 мл диметилформамида (ДМФА). Далее готовили ряд серийных разведений вещества в мясопептонном бульоне (pH 7,0) с двукратно уменьшающейся концентрацией. Исходная опытная концентрация составила 1000 мкг/мл. Для определения противомикробной активности использовалась 18-20 часовая культура микроорганизмов. Микробная нагрузка составила 250000 м.т./мл.

Учет результатов производили через 18-20 часов выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 37°С. МПК устанавливали по отсутствию признаков роста микробов на питательной среде. Бактериостатический эффект исследуемого соединения сравнивали с действием антибактериальных препаратов - эталонов: этакридина лактата [Гейн В.Л., Михалев В.А., Касимова Н.Н. Синтез и противомикробная активность 1-алкоксиалкил-5-арил-4-ацил-3-гидрокси-3-пирролин-2-онов // Хим.-фармац. журн., 2007, Т.41, № 4, С.30-32] и гидроксиметилхиноксилиндиоксида (диоксидина) [Падейская Е.Н. Антибактериальный препарат диоксидин: особенности биологического действия и значение в терапии различных форм гнойной инфекции // Инфекции и антимикроб. терапия, 2001, Т.3, № 5, С.105-155].

Острую токсичность (ЛД ₅₀, мг/кг) заявляемого соединения определяли по методу Г.Н.Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С.100, 109-117 (1971)]. Исследуемое соединение вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи. Установлено, что ЛД₅₀ данного соединения равна 282 (230-340) мг/кг по классификации Сидорова, оно относится к IV классу токсичности, т.е. малотоксично.

Известно, что ЛД₅₀ этакридина лактата при п/к пути введения составляет 70 мг/кг [Колла В.Э., Сыропятов Б.Я. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. М., Медицина, 1998, 263 с.]. Диоксидин - антибактериальный отечественный препарат широкого спектра действия, имеет определенные противопоказания и назначается только взрослым [Машковский М.Д. Лекарственные средства, 14-е изд., М., Новая Волна, 2002, Т.2, С.298].

Сравнивали острую токсичность ЛД₅₀ противомикробную активность против золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus ATCC - 6538), кишечной палочки (Escherichia coli ATCC 25922) и величину отношения ЛД₅₀ исследуемого соединения к его МПК в сравнении с широко применяемым в медицине противомикробным препаратом - этакридина лактатом. Результаты испытаний представлены в таблице.

Таблица
Острая токсичность, бактериостатическая активность изопропиламида 2-( -2,4-динитрофенилгидразино)цинхониновой кислоты и препаратов - эталонов сравнения
№ п/п	Исследуемое соединение	ЛД50, мг/кг	S. aureus	Е. coli
развед.	МПК Мкг/мл	Развед.	МПК мкг/мл
1.	Заявляемое соединение	282	1:128000	7,8	1:128000	7,8	36,1
2.	Аналог по структуре		1:2000	500	1:2000	500
3.	Этакридина лактат	70,0	1:500	2000	1:2000	500	0,035 0,14
4.	Диоксидин			62,5-1000		3,9-62,5

Из данных таблицы следует, что изопропиламид 2-( -2,4-динитро-фенилгидразино)цинхониновой кислоты по противомикробному действию (МПК=7,8 мкг/мл) в отношении S. aureus и E. coli является более эффективным, чем этакридина лактат соответственно (МПК=2000 и 500 мкг/мл). Заявляемое соединение также проявляет более сильную противомикробную активность в отношении золотистого стафилококка по сравнению с аналогичным действием диоксидина (МПК=62,5-1000 мкг/мл) и примерно равную с ним активность (МПК=3,9-62,5 мкг/мл) - к кишечной палочке.

Положительным отличием заявляемого соединения от применяемого в медицинской практике антибактериального средства - этакридина лактата является большая величина терапевтического индекса ЛД₅₀/МПК, который соответственно равен: 36,1; 0,035 и 0,14, т.е. терапевтический индекс заявляемого соединения соответственно в 1031,4 и 257,9 раза больше, чем у этакридина лактата в отношении данных культур микроорганизмов.

Таким образом, изопропиламид 2-( -2,4-динитрофенилгидразино)цинхониновой кислоты проявляет выраженную противомикробную активность и является практически нетоксичным. Следовательно, заявляемое соединение может найти применение в медицине в качестве противомикробного лекарственного средства.