противовоспалительное средство

Формула изобретения

Применение иммобилизированной с помощью электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы в качестве противовоспалительного средства.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, конкретно к фармакологии.

Воспаление представляет собой типический патологический процесс, сопровождающий практически все заболевания.

Известно большое количество противовоспалительных средств. При этом наиболее часто используют нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) [1, 2]. Недостатками данных способов является токсичность препаратов группы НПВС: их повреждающее действие на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта (гастротоксичность), нарушение функций почек, кроветворения, бронхозпазм, аритмии и пр. [1, 3].

Одним из наиболее часто используемых и наиболее близким по техническому результату к предлагаемому средству является индометацин (Indomehacinum), который выбран в качестве прототипа.

Существует иммобилизированная с помощью ионизирующего излучения (нанотехнологии электронно-лучевого синтеза) гиалуронидаза, введение которой приводит к увеличению содержания прогениторных клеток в организме [4].

Нами впервые выявлена выраженная противовоспалительная активность иммобилизированной с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы.

Задачей, решаемой настоящим изобретением, является расширение показаний к применению иммобилизированной с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы.

Поставленная задача достигается применением иммобилизированной с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы в качестве противовоспалительного средства.

Новым в предлагаемом изобретении является использование иммобилизированной с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы в качестве противовоспалительного средства.

Используемое нами оригинальное средство иммобилизированной с помощью ионизирующего излучения гиалуронидазы (имГД) [4] было разработано и получено НИИ фармакологии СО РАМН (г.Томск) совместно с ООО «Саентифик Фьючер Менеджмент» (г.Новосибирск).

На сегодняшний день показано, что иммобилизизация гиалуронидазы с помощью ионизирующего излучения на низкомолекулярном носителе сопровождается появлением новых физико-химических свойств у данного фермента, позволяющим получать в том числе и при его пероральном использовании выраженные резорбтивные (системные) эффекты [4]. При этом известна низкая токсичность и безопасность пегилированных (иммобилизированных на полиэтиленгликоле) препаратов, определяемая в том числе «перекрыванием» молекулами носителя антигенных детерминант - эпитопов белков [5].

Фермент - гиалуронидаза является одним из ключевых факторов метаболизма гиалуроновой кислоты, представляющей собой наиболее распространенный гликозаминогликан в организме (входящий в состав межклеточного матрикса тканей, а также гликокаликса клеток и их рецепторов к различным биологически активным веществам) [6, 7]. При этом известно, что в процессе реализации воспалительной реакции важное значение играют факторы межклеточного вещества, в том числе гликозаминогликаны [8]. Однако возможность коррекции воспалительной реакции путем модификации свойств гиалуроновой кислоты межклеточного матрикса с помощью гиалуронидазы тканей до сих пор не известна и является неочевидной. Эксперимент показал непредсказуемые результаты.

Заявляемые существенные признаки проявили в совокупности новые свойства, не вытекающие явным образом из уровня техники в данной области. Предлагаемое изобретение может быть использовано в медицине. Идентичной совокупности признаков не обнаружено при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе.

Исходя из вышеизложенного, следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».

Эксперименты были выполнены на 57 аутбредных мышах (возраст 2-3 мес, масса 20 г), первой категории, полученных из питомника отдела экспериментального биомедицинского моделирования НИИ фармакологии СО РАМН.

Исследования проводили в соответствии с правилами лабораторной практики (GLP), Приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении правил лабораторной практики», Федеральным законом «О лекарственных средствах» (статья 36), «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005) [9].

Пример 1

Исследование противовоспалительной активности проводили на модели острого экссудативного воспаления - агарового отека лапки мышей [9].

Для этого субплантарно, под апоневроз в подушечку задней лапы мышей, вводили 1%-ный раствор агара в количестве 50 мкл на одно животное. На пике воспаления через 5 ч животных умерщвляли, обе задние лапки отрезали сразу же после забоя по выступу кости ниже сочленения мало- и большеберцовой кости и выше пяточного сустава, определяли их массу (мг) на весах лабораторных электронных Adventurer фирмы «OHAUS Europe» (Швейцария).

Противовоспалительный эффект, оцениваемый по изменению массы отека, которое выражали в процентах к контролю и подсчитывали по формулам:

Масса отека (мг) = Масса лапы с отеком - масса здоровой лапы

Препарат иммобилизированной гиалуронидазы (ООО «Саентифик фьючер менеджмент») вводили в дозе 50 ЕД/кг в объеме 0,3 мл перорально 1 раз в сутки в течение 2 дней. Данная доза и режим введения в предварительных экспериментах были определены как оптимальные. При этом последнее введение осуществляли за 1 ч до инъекции агара. Контрольной группе по способу-прототипу в аналогичном режиме перорально вводили индометацин («Berlin Chemie») в дозе 10 мг/кг, которая была выбрана на основании литературных данных и соответствует суточной дозе для человека [9].

Статистическая обработка результатов производилась путем расчета средней (X) и стандартной ошибки (m) с использованием непараметрических методов Вилкоксона-Манна-Уитни (U) и углового преобразования Фишера ( ). Различие считали достоверным при Р<0,05 [10].

В ходе исследований при введении под апоневроз агара отмечалось развитие выраженного экссудативного отека лапки. В частности, наблюдалось значительное увеличение массы лапки, прирост данного показателя составлял 148,8% от исходного уровня (табл.).

Вместе с тем коррекция воспалительной реакции по способу-прототипу с помощью индометацина способствовало достоверному снижению прироста отека в 3,2 раза по сравнению с контрольным значением, и угнетению отека - на 68,4% на пике воспаления.

Применение с целью коррекции воспалительной реакции препарата иммобилизированной гиалуронидазы в дозе 50 ЕД/кг (двукратно) привело к сопоставимым с таковыми изменениями исследуемых показателей. Так, прирост отека лапки был в 2,6 раза (Р<0,01) меньше, чем у мышей, получавших физиологический раствор, и статистически не отличался от аналогичного параметра при проведении терапии по способу-прототипу. При этом значение интеграционного показателя противовоспалительного действия препарата - угнетение отека - составляло 61.7%.

Таким образом, препарат иммобилизированной с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза гиалуронидазы обладает выраженной противовоспалительной активностью.

Таблица
Влияние иммобилизированной гиалуронидазы на развитие агарового отека лапки у аутбредных мышей
Группа наблюдения, доза(количество животных)	Масса здоровой лапки (Х±m), мг	Масса лапки с отеком, (Х±m), мг	Масса отека (Х±m), мг	Угнетение (-) или стимуляция отека на пике воспаления (+), %
Контроль, 0,3 мл физ. р-ра	176,91±3,89	263,27±7,55	86,36±5,48	-
Индометацин, 10 мг/кг	180,82±3,92	208,09±7,95 К-И Р<0,01	27,27±3,21 К-И Р<0,01	-68,4
имГД, 50ЕД/кг	179,30±4,01	212,40±8,87 K-g P<0,01	33,10±2,64 K-g P<0,01	-61,7
Примечание. Перед уровнем значимости Р указаны названия сравниваемых групп: К - контроль, И - индометацин, g - препарат имГД.

Литература

1. Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. - М.: ОО «Издательство Новая Волна», 2008. - 1206 с.

2. Cachik С., Dawson W., Ritchen E. Nonsteroid anti-inflammatory agents // J. Pharm. Pharmakol. - 1977. - № 28. - P.330-336.

3. Сюбаев Р.Д., Машковский М.Д., Шварц Г.Я., Покрышкин В.И. Сравнительная фармакологическая активность современных нестероидных противовоспалительных препаратов // Хим.-фарм. журнал, - № 1. - 1985. - С.33-39.

4. Дыгай A.M., Зюзьков Г.Н., Жданов В.В. и др. Регуляция функций прогениторных клеток с помощью гиалуронидазы // Вестник РАМН. - 2009. - № 11. - С.6-9.

5. Сейфулла Р.Д., Тимофеев А.Б., Орджоникидзе З.Г. и др. Проблемы использования нанотехнологии в фармакологии // Экспер. и клин. фарм. 2008. - Том 71. - № 1. - С.61-69.

6. Stern R. Devising a pathway for hyaluronan catabolism: are we there yet? // Glycobiology. - 2003. - Vol.13. - № 12. - P.105-115.

7. Henry C.B., Duling, B.R. Permeation of the luminal capillary glycocalyx is determined by hyaluronan // Am. J. Physiol. - 1999. - № 277. - P.508-514.

8. Патофизиология: Учебник для медицинских ВУЗов / Под ред. В.В.Новицкого, Е.Д.Гольдберга. - Томск: Изд-во Томского ун-та, 2001. - 207-233.

9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей ред. член-корр. РАМН, проф. Р.У.Хабриева. - 2-изд., перераб. и доп. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 с.

10. Лакин Г.Ф. Биометрия. - М.: Высшая школа, 1980. - 293 с.