фармацевтическая композиция, содержащая фермент дезоксирибонуклеазу и/или рибонуклеазу и липосомы, для местного применения

Формула изобретения

Фармацевтическая композиция для местного применения в виде геля, содержащая в качестве активного ингредиента - 0,2-0,4 мас.% дезоксирибонуклеазы (ДНК-азы) и/или 0,2-0,4 мас.% рибонуклеазы (РНК-азы), в качестве носителей: 0,05-1,0 мас.% полимерный носитель, 2,0-4,0% липосомы; 0,2-0,5 мас.% эмульгатора, 0,05-1,0 мас.% регулятора pH, 92,1-97,0 мас.% воды деминерализованной.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической композиции для местного применения, содержащей фермент дезоксирибонуклеазу (ДНК-азу) и/или рибонуклеазу (РНК-азу) и липосомы, которая может быть использована в медицине для лечения и профилактики вирусных инфекций, вызываемых ДНК-содержащими вирусами, такими как грипп, герпес, опоясывающий лишай, папиллома человека, адененовирусы и другие.

Известны лекарственные средства для местного применения, используемое для лечения и профилактики герпесвирусных инфекций, содержащие противовирусные компоненты, не являющиеся ферментами, например крем Зови-ракс (ацикловир); спрей Эпиген-интим (глицирризиновая кислта); мази: алпи-зарин, хелепин, флакозид, содержащие экстракты растений.

Известны косметические средства для местного применения, используемые для профилактики герпеса, содержащие противовирусные компоненты, не являющиеся ферментами, например, экстракты лекарственных растений и герма-нийорганические соединения (Помада профилактическая противогерпетическая "Антигерпес" (Р16 9158 915854 71.100.70) 292472. ТУ 9124-001-00358210-96), глицирризиновая кислота мазь «Герпинат» мазь; бан. 20 мл; № 77.01.12.915.П.02970.02.00 от НИИ атеросклероза РАЕН (Россия), ИНАТ-ФАРМА (Россия) (http://www.biomedservice.ru/publish/pub16.htm)

Известна косметическая фермент-содержащая композиция, где фермент выбран из группы протеиназ, включающей в себя трипсин, химотрипсин, бромелаин, папаин и фицин, а также из лизоцима, эластазы, -липазы и -амилазы, которая применяется для лечения акне, ухода за кожей и очистки кожи (DE 4305460). Описанная композиция не содержит ферментов нуклеаз, обладающих прямой противовирусной активностью, и, следовательно, не может быть использована для профилактики вирусных инфекций.

Известен фармацевтический препарат «Дезоксирибонуклеаза», выпускаемый в виде лиофилизированного порошка в герметично укупоренных флаконах и ампулах по 0,005; 0,01; 0,025 и 0,05 г. Этот препарат назначают при герпетических кератитах, аденовирусных конъюктивитах, для уменьшения вязкости и улучшения эвакуации мокроты и гноя при бронхоэктатической болезни и используют местно в виде 0,2% раствора на изотоническом растворе натрия хлорида.

Известен фармацевтический препарат «Рибонуклеаза», выпускаемый в виде лиофилизированного порошка в герметично укупоренных флаконах по 0,01 г. Этот препарат назначают при заболеваниях дыхательных путей с трудно отделяемой мокротой, пародонтозе, гингивите, гнойных ранах, трофических язвах, клещевом энцефалите, тромбофлебите, при местном применении присыпают раневую поверхность в количестве 0,025-0,05 г.

Из RU 2410123 С2 известна композиция в виде медицинских салфеток, содержащая в качестве активного ингредиента дезоксирибонуклеазы (ДНК-азы) 0,2-0,4 масс.%, рибонуклеазы (РНК-азы) 0,2-0,4 масс.%, липосомы 2,0-4,0 масс.% и фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты.

Отличием заявленной композиции от RU 2410123 С2, является то, что она используется в виде геля.

Из RU 2411039 С2 известно средство для местного применения, содержащее поверхностно-активные вещества в количестве 0,5 масс.% (страница 13, формула).

Из US 2009/0035401 А1 известно использование регулятора pH в композиции для местного применения для лечения вирусных инфекций ([0077], [0088]).

Фармацевтические композиции, содержащие фермент ДНК-азу и/или РНК-азу и в качестве носителя: липосомы, для местного применения при профилактике вирусных инфекций в виде геля не описаны.

Таким образом, задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить фармацевтическую композицию для местного применения в виде геля, содержащую фермент ДНК-азу и/или РНК-азу и в качестве носителя: липосомы, которая может быть использована для профилактики вирусных инфекций, вызываемых ДНК-(РНК-) содержащими вирусами, такими как герпес, опоясывающий лишай, папиллома человека, аденовирусы и другие.

Согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция для местного применения в виде геля, содержащая в качестве активного ингредиента 0,2-0,4 мас.% дезоксирибонуклеазы (ДНК-азы) 0,2-0,4 мас.% и/или рибонуклеазы (РНК-азы), в качестве носителя: липосомы 2,0-4,0 мас.% и фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты.

В качестве предпочтительного воплощения заявленного изобретения предложена фармацевтическая композиция, указанная выше, дополнительно содержащая один или более чем один противовоспалительный ингредиент.

Наиболее предпочтительной является фармацевтическая композиция, содержащая ДНК-азу качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

ДНК-аза	0,2-0,4
липосомы	2,0-4,0
эмульгатор	0,2-0,5
консервант	0,5-1,0
полимерный носитель	0,05-1,0
регулятор pH	0,05-1,0
вода деминерализованная	92,1-97,0

Активным ингредиентом заявленной фармацевтической композиции является фермент: ДНК-аза. ДНК-аза обладает способностью задерживать развитие вирусов герпеса, аденовирусов и других ДНК-содержащих вирусов, не повреждая при этом ДНК клеток макроорганизма (Машковский М.Д. Лекарственные средства, Том 2, Москва, Новая Волна, 2000, стр.111-112).

Для приготовления композиции используют лекарственный ферментный препарат «Дезоксирибонуклеаза». Препарат получен из поджелудочной железы крупного рогатого скота путем экстракции из измельченного сырья с последующей очисткой и лиофильной сушкой. Лиофильно высушенный порошок «Дезоксирибонуклеаза» используется при герпетических кератитах и кератоувеитах, остром катаральном воспалении верхних дыхательных путей аденовирусной природы и пневмонии.

ДНК-азу в форме указанного препарата не применяют для лечения и профилактики вирусных инфекций вследствие его затрудненного всасывания через неповрежденную кожу и низкого уровня потребительских свойств, а также отсутствия стабильности при содержании влаги свыше 10% и в растворе, с потерей активности ферментов в течение суток.

Неожиданно обнаружено, ДНК-аза и липосомы могут быть включены в состав стабильной фармацевтической композиции для местного применения с сохранением активности указанного фермента в течение длительного времени, несмотря на то, что такая композиция содержит значительное количество воды (до 90%).

Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению обычно изготавливают общепринятыми способами, используя твердые или жидкие фармацевтически приемлемые носители или эксципиенты, выбранные из эмульгаторов, диспергирующих агентов, консервантов, ароматизаторов, регуляторов pH, полимерных носителей и других эксципиентов, которые целесообразны для приготовления композиций для местного применения. Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена в форме геля.

Дополнительными преимуществами указанной композиции являются способность быстро проникать через кожу и, соответственно, быстрая всасываемость, удобство применения, а также легкость дозирования.

Быстрое проникновение через кожу обусловлено связыванием ферментов с липосомами на основе высокоактивных гидрированных лецитинов в комбинации с холестерином, которые используют в фармации в составе препаратов для лечения варикозного расширения вен, например Эссавен гель.

Заявленная фармацевтическая композиция обладает стабильностью в отношении активности ферментов, входящих в ее состав, при длительном хранении, которая достигается путем иммобилизации ферментов на полимерных носителях, содержащихся в указанной композиции. В качестве указанных полимерных носителей могут быть использованы любые полимеры, способные связываться с ферментами с образованием комплексов фермент-носитель. Примерами таких полимерных носителей являются полиэтиленгликолевый эфир хитозана, натрий карбоксиметилцеллюлоза, полиакрилат.

Активность заявленной композиции обусловлена активностью входящего в ее состав фермента. Обнаружено, что фармацевтическая композиция для местного применения, содержащая ДНК-азу 0,2-0,4 мас.%, обладает стабильностью в отношении активности ферментов при ее длительном хранении, в то время как активность этих ферментов, приготовленных в виде раствора, быстро падает. Следовательно, заявленная композиция может быть использована для эффективной профилактики ДНК-содержащих вирусов, таких как вирус герпеса, опоясывающего лишая, папилломы человека, аденовирусов и других.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.

ПРИМЕР 1

Фармацевтическая композиция в виде геля на основе ДНК-азы и липосом имеет следующий состав:

ДНК-аза	0,4
липосомы	4,0
эмульгатор	0,5
консервант	1,0
полимерный носитель	1,0
регулятор pH	1,0
вода деминерализованная	92,1

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде растворяют ДНК-азу, липосомы, эмульгатор, консервант, полимерный носитель, регулятор pH. Полученный гель перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.

ПРИМЕР 2

ДНК-аза	0,2
липосомы	2,0
эмульгатор	0,2
консервант	0,5
полимерный носитель	0,05
регулятор pH	0,05
вода деминерализованная	97,0

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 1.

ПРИМЕР 3

ДНК-аза	0,2
РНК-аза	0,2
липосомы	2,0
эмульгатор	0,2
консервант	0,5
полимерный носитель	0,05
регулятор pH	0,05
вода деминерализованная	96,8

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 1, отличающийся тем, что в воде дополнительно растворяют РНК-азу

ПРИМЕР 4

РНК-аза	0,2
липосомы	2,0
эмульгатор	0,2
консервант	0,5
полимерный носитель	0,05
регулятор pH	0,05
вода деминерализованная	97,0

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 1 отличающийся тем, что в воде вместо ДНК-азы растворяют РНК-азу

ПРИМЕР 5

РНК-аза	0,4
липосомы	2,0
эмульгатор	0,2
консервант	0,5
полимерный носитель	0,05
регулятор pH	0,05
вода деминерализованная	97,0

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 4.

ПРИМЕР 6

ДНК-аза	0,4
РНК-аза	0,4
липосомы	2,0
эмульгатор	0,2
консервант	0,5
полимерный носитель	0,05
регулятор pH	0,05
вода деминерализованная	96,4

Указанную композицию готовят как в ПРИМЕРЕ 3.

ПРИМЕР 7

Оценка стабильности фермента в композициях для местного применения

Поскольку главным недостатком ферментов является их нестабильность при длительном хранении готовых лекарственных форм на их основе в течение срока годности, была проведена сравнительная оценка сохранения активности ферментов при хранении в виде раствора и в виде композиции для местного применения (на примере геля).

Активность ДНК-азы определяли по следующей методике.

Определение активности ДНК-азы проводили по методу Кунитца. За единицу активности ДНК-азы принимают наименьшее количество фермента, которое при воздействии его на субстрат в условиях опыта освобождает такое количество кислорастворимых продуктов, которое приводит к возрастанию оптической плотности при длине волны 260 нм на одну единицу. В контрольную и две опытные пробирки вносят по 0,5 мл субстрата (ДНК) и по 0,3 мл 0,2М трис-буфера (pH=7). В опытные, предварительно прогретые пробирки, вносят 0,2 мл раствора фермента. Пробы термостатируют в течение 30 минут при температуре 37,5°C. Затем к пробам прибавляют 1 мл охлажденного в ледяной бане 1н раствора хлорной кислоты (HClO₄), в контрольную - 0,2 мл раствора фермента. Пробирки встряхивают и выдерживают в ледяной бане 16-25 минут. Образовавшиеся осадки отделяют центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 минут. Из надосадочного слоя отбирают 0,5 мл раствора, добавляют 2,5 мл воды и измеряют оптическую плотность при =260 нм.

Результаты приведены в следующей таблице.

Таблица
Исследуемые образцы	Основные ингредиенты	Стабильность при хранении
1	2	3
Гель № 1	Согласно Примеру 1	Активность ДНК-азы 80% в течение 1 года наблю-
		дения
Гель № 2	Согласно Примеру 2	Активность ДНК-азы 82% в течение 1 года наблюдения
Раствор нативного фермента		Активность 10% для ДНК-азы в течение 1 суток

Как видно из представленной таблицы, введение ферментов в композиции для местного применения позволяет получить стабильные фармацевтические композиции для местного применения при профилактике вирусных инфекций. Несмотря на то, что при введении ферментов в состав таких композиций происходит незначительная потеря ферментативной активности, при дальнейшем хранении в течение 1 года ферменты не изменяют своей активности благодаря фиксации лабильной структуры фермента липосомами и полимером-носителем. Аналогичные данные получены при использовании РНК-азы вместо ДНК-азы и в смеси с ДНК-азой.