деринат-суппозитории для использования в медицинской практике

Формула изобретения

1. Лечебно-профилактическое средство в форме суппозитория, характеризующееся тем, что оно включает натриевую соль нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты (натрия дезоксирибонуклеат), основу, представляющую собой смесь полиэтиленоксидов ПЭО 1500 и ПЭО 400 при соотношении 9:1 и натрия хлорид в качестве стабилизатора при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Натрия дезоксирибонуклеат	2,0-3,0
Натрия хлорид	0,48-1,0
Смесь полиэтиленоксидов ПЭО 1500 и ПЭО 400 9:1	остальное

2. Средство по п.1, характеризующееся тем, что его используют в комплексном лечении урогенительного хламидиоза, цитомегаловирусной и герпетической инфекций, инфекции Helicobacter pylori.

3. Способ получения лечебно-профилактического средства в форме суппозитория по п.1, характеризующийся тем, что полиэтиленоксиды ПЭО 1500 и ПЭО 400 в соотношении 9:1 расплавляют при 40°С и при перемешивании вводят расчетное количество измельченного натрия хлорида, далее, не прекращая подогрев и перемешивание, в смесь вводят расчетное количество натриевой соли нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты, продолжают процесс смешивания в течение 30 мин и затем формуют суппозиторий весом 1,3-2,5 г методом выливания или прессования.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относиться к медицине, а именно к вирусологии, иммунологии, гинекологии и фармакологии, касается разработки и создания средства для профилактики и лечения заболеваний в форме суппозитория. Изобретение может быть использовано для предупреждения инфицирования вирусами или другими внутриклеточными агентами (вирусы простого герпеса 1 и 2 типа (ВПГ-1, ВПГ-2), цитомегаловирус (ЦМВ), вирусы Эпштей-Бара, папиловирусы, хламидии, микоплазмозы и различные их сочетания).

Не исключена возможность предупреждения с помощью предлагаемого средства полового пути передачи гепатитов В-, С- и ВИЧ-инфекций.

Известны суппозитории (патент RU № 2185817, A61K 9/02, A61K 35/76, 2002 г.) с повышенной биологической активностью. Однако эти суппозитории применяются только при лечении и профилактики заболеваний стафилококковой этиологии и дисбактериоза.

Близким к предлагаемому изобретению по эффективному повышению неспецифической резистентности слизистой и подлежащих тканей являются суппозитории, содержащие ИИНФ-полудана и интерферона (патент RU № 2147873 1999 г.). Однако предлагаемые суппозитории проявляют только локальное противовирусное действие.

Прототипом предлагаемого изобретения может являться системное (в/м, пероральное, интерназальное) применение препарата Деринат (патент RU № 2309759, A61K 35/60, 2006 г.) в лечении генитального герпеса, ЦМВ-инфекции, хламидиоза, микоплазмоза, кандидоза, хеликобактериоза.

Задачей данного изобретения является разработка состава и промышленного способа производства суппозиториев IIIA категории быстрого эффективного неспецифического противовирусного действия с высокой терапевтической эффективностью при лечении урогенитального хламидиоза, цитомегалии человека, простого герпеса человека, инфекции Helicobacter pylori.

Задача решается составом лечебно-профилактического средства в форме суппозитория (Деринат-суппозитория), включающего натриевую соль нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты (натрия дезоксирибонуклеат), основу, представляющую собой смесь полиэтиленоксидов ПЭО 1500 и ПЭО 400 при соотношении 9:1 и натрия хлорид в качестве стабилизатора при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Натрия дезоксирибонуклеат	2,0-3,0
Натрия хлорид	0,48-1,0
Смесь полиэтиленоксидов ПЭО 1500 и ПЭО 400 (9:1)	остальное

Терапевтическая эффективность обеспечивается тем, что суппозитории содержат биологически-активное средство с многофункциональной активностью - натриевую соль нативной дезоксирибонуклеиновой кислоты (дезоксирибонуклеат натрия или Деринат), которая стимулирует регенераторные и репаративные процессы, повышает резистентность организма к инфекциям и др.. Препарат активизирует процессы клеточного и гуморального иммунитета. Иммуномодулирующий эффект обусловлен главным образом стимуляцией В-лимфоцитов, активизации Т-хелперов (http://www.rlsnet.ru/tn_derinatl.html).

В составе суппозитория, кроме активного компонента, содержится водорастворимая основа, состоящая из комбинации ПЭО (ПЭО - 1500 и ПЭО - 400 в соотношении 9:1), характеризующаяся полной физиологической индифферентностью, хорошей растворимостью в воде и секретах слизистых оболочек, способная полностью отдавать действующее вещество. ПЭО характеризуется неблагоприятной средой для развития микроорганизмов, достаточно долго сохраняется без изменений, характеризуется способностью к различным методам производства. Хотя полиэтиленоксидные основы широко используются в фармацевтической практике, известно, что при сочетании с лекарственными веществами, содержащими окси- и карбоксильные группы возможна потеря их терапевтической активности. Дезоксирибонуклеат натрия является производным нуклеиновой кислоты, не содержащей окси- и карбоксильные группы, поэтому не только сохраняется высокая терапевтическая активность, но и обеспечивается высокая биодоступность при использовании заявленной смеси в соотношении 9:1.

В предлагаемом изобретении третий компонент в суппозитории - стабилизатор-консервант, не обладающий раздражающим действием на слизистую, которым является натрия хлорид. Натрия хлорид в суппозитории способствует длительному сохранению нативности структуры дезоксирибонуклеата натрия (препятствует денатурации ДНК), в прямой зависимости от состояния которой находится биологическая активность суппозитория.

Присутствие натрия хлорида в суппозитории обеспечивает оптимальную величину pH массы, который находится в пределах 5,8-7,2.

Суппозитории по предлагаемому изобретению как ректальное (вагинальное) лечебное средство получают следующим образом: стерильный наполнитель разогревают до расплавления, добавляют расчетное количество измельченного натрия хлорида и смешивают в асептических условиях. В полученную однородную смесь вводят расчетное количество субстанции натрия дезоксирибонуклеата и продолжают смешивание при 40°C до получения полностью однородной смеси. Из полученной смеси формуют суппозитории. Например, полученную смесь разливают в специальные предварительно охлажденные стерильные формы или прессуют на автоматической установке, в асептических условиях.

Суппозитории выполняются торпедообразной формы с гладкой поверхностью весом 1,3-2,5 г белого или бледно-желтого цвета.

Готовые суппозитории проверяют согласно требованиям Госфармакопеи и упаковывают по 5 суппозиториев в контурную ячейковую упаковку из поливинилхлоридной пленки. Получают суппозитории IIIА категории.

Пример 1. В асептических условиях расплавляют при 40°C 100 кг ПЭО 400 и ПЭО 1500 (соотношение 1:9). При постоянном перемешивании в расплав добавляют измельченный (до состояния пудры) 0,9 кг натрия хлорида. Перемешивание с подогревом продолжают 30 минут до получения полностью однородной массы. Далее в расплав - добавляют 2,5 кг натрия дезоксирибонуклеата, перемешивают 30 минут. Полученную массу распределяют в специальные охлажденные до +15 - +18 градусов C° стерильные формы. Предварительно формы моют моющим средством, ополаскивают водой, сушат, стерилизуют ультрафиолетовым светом 30 минут. Заполненные формы охлаждают, разбирают в асептических условиях. Готовые суппозитории весом 2 г контролируют и упаковывают.

Пример 2. В асептических условиях расплавляют при 40°C 80 кг ПЭО 400 и ПЭО 1500 (соотношение 1:9). При перемешивании с подогревом добавляют измельченный (до состояния пудры) 0,72 кг натрия хлорид. Выдерживают 20 минут при температуре 40°C. К полученной смеси при подогреве и перемешивании добавляют 2,0 кг натрия дезоксирибонуклеата. Охлаждают массу до 38°C и прессуют в асептических условиях на автомате. Получают Деринат-суппозитории торпедообразной формы бледно-желтого цвета весом до 1,3 г. Готовые суппозитории контролируют и упаковывают по 5 суппозиториев в контурную ячейковую упаковку из поливинилхлоридной пленки.

Биодоступность натрия дезоксирибонуклеата при ректальном введении находится на уровне биодоступности при внутримышечном введении. Через 5 часов концентрация натрия дезоксирибонуклеата в крови мышей составляет при ректальном введении 30 нг/мл, а при внутримышечном - 40 нг/мл, через 24 часа содержание натрия дезоксирибонуклеата - 20 нг/мл и 27 нг/мл соответственно. Использование других основ, таких как витепсол, известных своим высоким сродством к тканям не обеспечивало такого уровня биодоступности.

Ниже изобретения поясняется на конкретных примерах его применения.

Лечение хламидиоза с ураплазмозом, микоплазмозом, трихомонозом.

Комплексный подход в лечении урогенитального хламидиоза с применением Деринат-суппозиториев в длительных курсах антибактериального лечения позволяет полностью нейтрализовать токсические свойства применяемых препаратов.

Применение Деринат-суппозиториев с многофункциональным действием позволяет в 84,2% добиться клинического и этиологического излечения у больных с хроническим урогенитальным хламидиозом.

В табл.1 представлен удельный вес отрицательных контрольных анализов на хламидиоз до и после лечения пациентов.

Таблица 1
Количество пациентов	1 контроль (отрицательный)	2 контроль (отрицательный)
68/100%	9/12,8%	59/84,2%

Иммуномодулирующий эффект Деринат-суппозиториев обусловлен способностью натрия дезоксирибонуклеата проникать в кровь и опосредованно восстанавливать и активизировать иммунный ответ, усиливать антиинфекционную активность NK-клеток и антигенспецифических Т-киллеров, стабилизировать В-звено через активацию Т-хелперов.

Изучение противовирусной активности Деринат-суппозиториев в отношении цитомегалии человека проводили на модели человеческих диплоидных клеток М-19, инфицированных цитомегаловирусом в дозе вируса 2 lg ТЦИД50 и 4 lg ТЦИД50. Результаты представлены в табл.2.

Таблица 2
Влияние Деринат-суппозиториев на репликацию цитомегаловируса в клетках М-19 при инфицирующей дозе вируса 2 lg ТЦНД50 и дозе 4 lg ТЦНД50
ЦМВ	Деринат мкг/мл	% защиты после заражения через
0 час	24 час	48 час	96 час
21g	1000	100	75	65	0
1200	100	100	75	30
4 lg	1000	100	50	50	0
1200	100	100	70	0

Как следует из таблицы Деринат-суппозитории проявляют 100% ингибирующее действие на ЦМВ вирус при одновременном применении препарата и заражением клеточных культур, что указывает на важность его применения в качестве профилактического средства и средства сохранения латентного состояния вируса в организме.

При клиническом исследовании Деринат-суппозиториев на ЦМВ выделяют три формы инфекции: латентную, при которой определяются только антитела класса lg G анти-ЦМВ; реактивированную, при которой определяют специфические антитела класса lg М совместно с антителами lg G анти-ЦМВ; и персистирующую, характеризующаяся вирусовыделением и наличием lg G анти-ЦМВ.

При лечении пациентов методом ПЦР определяли наличие ДНК возбудителя в слюне, моче и секрете цервиканального канала (табл.3).

Таблица 3
Клиническая форма	Маркеры ЦМВИ, метод выявления
«совиный глаз» (цитоскопия)	lg Mанти-ЦМВ (ИФА)	lg G анти-ЦМВ (ИФА)	ДНК ЦМВ (ПЦР)
Реактивированная	+	+	+	+
Персистирующая	+	-	+	+

В исследование были включены 60 пациенток, возраст которых составлял от 22 до 34 лет, 20 пациенток - реактивированная форма ЦМВИ и 40 пациенток - персистирующая форма ЦМВИ.

Пациентки с реактивированной формой в комплексном лечении получали Деринат-суппозитории по примеру 11 раз в 24 часа. Пациентки с персистирущей формой ЦМВ получали Деринат-суппозитории 2 раза в 24 часа.

Контроль проведенного лечения проводили методом ПЦР через 1 месяц после последнего введения Деринат-суппозитория. Полученные результаты показали, что у 96,4% пациенток в слюне, моче и секрете цервиканального канала ДНК вируса не обнаружено. Посредством лечения Деринат-суппозиториями реактивную и персистирующую ЦМВИ трансформировали в латентную форму.

Противовирусную активность Деринат-суппозитория в отношении вируса простого герпеса человека изучали на модели герпетического энцефалита мышей, вызванного этим вирусом. Результаты учитывали по выживаемости (в процентах) животных к 15-му дню и по степени защиты (в процентах), которую определяли по отношению к выжившим животным в контрольной группе. В результате в группе мышей, получавших Деринат-суппозитории погибло к 15-му дню 70%, тогда, как в контрольной группе погибло 96,7%. При очень жестких условиях эксперимента - внутримозговое заражение, высокая инфицирующая доза, однократное периферическое введение Деринат-суппозиториев обнаруживает защитный эффект от смертельной герпетической инфекции. В таблице 4 представлен терапевтический эффект Деринат-суппозитория при герпетической инфекции (герпетический энцефалит мышей штамм Л12)

Таблица 4
Препарат	Доза мг/кг	Схема ректального введения	Выживаемость, %	Степень защиты, %
Деринат-суппозиторий	100	За 24 часа до заражения	33,3	30,0
200	За 24 часа до заражения	52,0	47,0
200	Через 24 часа после заражения	29,0	26,3

Клиническая картина генитального герпеса отличается широкой вариабельностью. В группу клинического исследования были включены 30 человек. Результаты верификации вируса простого герпеса (ВПГ) представлены в табл.5.

Таблица 5
Определение типа ВПГ	Число пациенток
Абсолютное количество	%
ВПГ-1	6	20
ВПГ-2	16	53,3
ВПГ-1 + ВПГ-2	8	26,7

Комплексное лечение генитального герпеса проводили Деринат-суппозиторием в комбинации с Циклофероном. У пациенток, получавших комплексное лечение, клиническая эффективность составляет 73,3%. Результаты ПЦР показали отсутствие ДНК ВПГ у 66,7%. Оценка иммунной системы больных генитальным герпесом после лечения установила положительную динамику большинства показателей, что выразилось в восстановлении числа зрелых Т-лимфоцитов, Т-лимфоцитов-хелперов, процента фагоцитирующих клеток, их поглотительной способности и концентрации сывороточных иммуноглобулинов (табл.6).

Таблица 6
Показатель	Лечение Деринат-суппозиторий + Циклоферон
Jg М, г/л	5,47+0,10	2,92+0,15
Jg G, г/л	8,5+0,13	10,6+0,08
Jg А, г/л	1,19+0,12	2,0+0,09
ФИ	7,3+0,07	9,8+0,22
ФА, %	53,3+0,11	70,9+0,13
CD4+/CD8+, %	1,49+0,11	1,78+0,04
CD4+, %	30,5+0,11	36,9+0,04
CD3+, %	53,4+0,09	61,8+0,22

Через 3 месяца после лечения средний коэффициент частоты рецидивов снизился до 0,3, тогда как до лечения он составлял 1,33.

В комплексном лечении язвенной болезни 12-перстной кишки Деринат-суппозитории значительно повышают эффективность базисной терапии, увеличивая ее антихеликобактерное действие. Восстановление иммунного статуса у больных с исчезновением инфекции Helicobacter pylori в известной мере объясняет антихеликобактерную активность Деринат-суппозиториев. Конкретные механизмы антихеликобактерного действия связаны со стимуляцией факторов местной защиты, с увеличением продукции секреторных иммуноглобулинов A, которые нейтрализуют бактерии и вирусы, а также ингибируют адгезию бактерий к эпитальным клеткам. В таблице 7 представлена динамика показателей иммунной системы при включении в комплексное лечение язвенной болезни 12-перстной кишки Деринат-суппозиториев.

Таблица 7
Показатель	Норма	До лечения	После лечения
Т-лимфоциты (в 1 мкл)	830,1±25,1	820,2±17,8	826,3±25,6
В-лимфоциты	467,3±33,8	317,2±18,3	296±26,4
Т-супрессоры (в 1 мкл)	155,1±12,9	195,3±16,8	149,2±9,6
Т-хелперы (в 1 мкл)	284,1±21,4	202,3±22,3	197,2±16,2
Тх/Тс	1,96±0,1	0,97÷0,06	1,35±0,7
JgA (г/л)	1,6±0,1	1,56±0,08	1,62±0,07
JgG (г/л)	10,6±0,4	11,7±1,7	11,6±1,6
JgM (г/л)	1,3±0,1	1,3±0,2	1,36±0,2

Данные таблицы показывают достоверное увеличение иммунорегуляторного индекса и секреторных иммунноглобулинов A. Эти результаты указывают на то, что эффективность антихеликобактерного действия Деринат-суппозитория обусловлена его иммуномодулируюющим эффектом.