комбинированная вакцина для иммунопрофилактики вирусного гепатита в, столбняка, дифтерии и коклюша

Формула изобретения

Комбинированная вакцина для иммунопрофилактики вирусного гепатита В, столбняка, дифтерии и коклюша, содержащая их антигены и адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигенов вакцина содержит антиген вируса гепатита В (HBsAg), полученный культивированием трансформированных клеток штамма S.cerevisiae ВКПМ У-2203, анатоксин дифтерийный очищенный концентрированный, анатоксин столбнячный очищенный концентрированный, убитые формалином коклюшные микробы следующего состава:

Антиген вируса гепатита В (HBsAg), полученный культивированием трансформированных клеток штамма S.cerevisiae ВКПМ У-2203 - 5 - 10 мкг HBsAg

Анатоксин дифтерийный очищенный концентрированный - 10 - 20 Lf

Анатоксин столбнячный очищенный концентрированный - 5 - 10 EC*

Убитые формалином коклюшные микробы - 10 - 15 OE

Мертиолят - 0,01 - 0,002%

Гель алюминия гидроксида - 0,5 - 1,2 мг в пересчете на алюминий

Фармацевтически приемлемый растворитель - До 1,0 мл

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно клинической иммунологии и касается разработки и использования новых комплексных вакцин, направленных на профилактику нескольких видов инфекций одновременно.

Значительные успехи в создании сочетанных вакцин достигнуты рядом зарубежных фирм. Так, фирмой "Пастер Мерье" (Франция) выпускаются в настоящее время такие многокомпонентные препараты, как: Тетракок 05 (профилактика гемофилюс инфлуенца типа B, дифтерии, столбняка и коклюша) и ряд других.

Известна комбинированная вакцина, содержащая антигены, обеспечивающие защиту против нескольких заболеваний - дифтерии, коклюша, столбняка, полиомиелита, гемофильного гриппа, опубликованная заявка RU 94042386, 20.08.96.

Известна также комбинированная вакцина, содержащая поверхностный антиген гепатита B (HBsAg) и несколько других антигенов - дифтерии, коклюша, столбняка, гепатита A в комбинации с адъювантом, включающим одну или более солей алюминия. При этом адъювант, используемый для адсорбции поверхностного антигена гепатита B, не является гидроокисью алюминия.

В данной известной публикации перечислены только антигены, входящие в комбинированную вакцину, но не указаны их дозы, обеспечивающие эффективность иммунизации.

RU опубл. заявка N 94046145, 1997, A 61 K 39/295.

В зависимости от поставленной перед разработчиками задачи конструируются самые разные по составу сложные вакцины, но при этом следует отметить трудности создания таких вакцин, связанные с решением проблем совместимости их компонентов, стабильности и сохранения достаточной иммуногенности входящих компонентов.

В России с 1996 года введена профилактическая вакцинация против гепатита B. А принимая во внимание, например, тот факт, что в течение первого года жизни новорожденному ребенку делают несколько различных вакцинаций, что сопряжено как с техническими трудностями, так и с излишней травмой, наносимой при проведении процедуры вакцинации, то очень четко встает вопрос о решении проблемы по устранению указанных недостатков.

Задачей изобретения является разработка нового комплексного препарата для одновременной эффективной профилактики дифтерии, столбняка, коклюша и гепатита B и D. При этом при разработке коммерческого ассоциированного препарата учитывалась возможность совмещения различных иных, чем в известных препаратах, компонентов с сохранением стабильности и высокой иммуногенности готового продукта.

Поставленная задача решена путем конструирования комбинированной вакцины для иммунопрофилактики вирусного гепатита B и D, столбняка, дифтерии и коклюша. Вакцина содержит антигены вируса гепатита B, столбняка, дифтерии и коклюша, а также адъювант.

Отличие вакцины состоит в том, что она содержит в прививочной дозе в качестве антигенов:

Поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg), полученный культивированием рекомбинантного штамма S. cerevisiae ВКПМ Y-2203 - 5-10 HBsAg

Анатоксин дифтерийный очищенный концентрированный - 10-20 Lf

Анатоксин столбнячный очищенный концентрированный - 5-10 EC

Убитые формалином коклюшные микробы - 10-15 OE^*

Мертиолят - 0,010,002%

Гель алюминия гидроксида - 0,5-1,2 мг в пересчете на алюминий

Фармацевтически приемлемый растворитель - До 1,0 мл

^*1 OE/мл - оптическая единица, условно принятая за 1 млрд коклюшных бактерий.

При экспериментальных исследованиях новой комбинированной вакцины неожиданно было обнаружено, что при введении вакцины, содержащей коклюшные микробы, анатоксин дифтерийно-столбнячный и поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg), полученный культивированием трансформированных клеток штамма S. cerevisiae ВКПМ Y-2203 (Патент RU N 2088664, 1997, A 61 K 39/29), образование специфических антител к вирусу гепатита B, а также столбняка и дифтерии, можно вызвать дозой антигенов значительно меньшей, чем известно.

В частности согласно Инструкции по применению "Вакцины гепатита B рекомбинантной дрожжевой жидкой", утвержденной Министерством здравоохранения Российской Федерации от 1996 г. разовая доза для взрослых составляет 20 мкг HBsAg, для детей - 10 мкг HBsAg.

Наши исследования показали, что тот же уровень антител достигался при введении комбинированного препарата с меньшей дозой антигена - 10 мкг HBsAg, для взрослых и 5 мкг HBsAg для детей.

Следует отметить, что иммунологическая активность столбнячного, дифтерийного и гепатитного компонентов в составе ассоциированного препарата была выше, чем каждого из них в отдельности, (потенциирующий эффект).

Отмечаем, что предлагаемый препарат является эффективным при иммунопрофилактике и вирусного гепатита D.

Основанием для такого заключения является тот факт, что установлена возможность предохранения от дельта-инфекции вакцинацией против вирусного гепатита B в результате образования антител к HBsAg (анти HBs).

("Вирусные гепатиты", Методическое пособие для врачей. Агар. 1996. с. 24).

Все активные компоненты комбинированной вакцины являются известными отечественными антигенами, входящими в различные препараты.

На коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину имеется Фармакопейная статья ФС 42-3362-97, регламентирующая различные показатели антигенов.

Используемый в составе поверхностный антиген вируса гепатита B (HBsAg), выделенный из штамма-продукцента S. cerevisiae является также известным и способ его получения описан в патенте РФ N 2088664. Антиген входит в состав используемой в настоящее время для иммунопрофилактики гепатита B вакцины гепатита B рекомбинантной дрожжевой жидкой (ФС 42-3438-97).

Способ получения комбинированной вакцины заключается в обычном смешении компонентов состава, при этом одинаково хорошие результаты могут быть получены при осуществлении способа в различных вариантах:

1. Сорбируют компоненты коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины (АКДС) на геле алюминия, взятом примерно в половинном его количестве, отдельно проводят сорбцию антигена вируса гепатита B (HVsAg) на другой части геля алюминия, после чего сорбированные антигены смешивают и добавляют консервант и фармацевтически приемлемый растворитель.

2. АКДС сорбируют на геле алюминия, беря все его количество, указанное в формуле, после чего к сорбированному АКДС добавляют антиген гепатита B и далее как в 1 варианте.

3. Смешивают АКДС с HBsAg и затем сорбируют их на геле алюминия, взятом в количестве 0.5-1.2 мг в пересчете на алюминий, далее как в 1 варианте.

4. HBsAg сорбируют на геле алюминия, затем добавляют АКДС и остальные компоненты как в первом варианте.

Проверку полноты сорбции дифтерийного анатоксина осуществляли по реакции флокуляции, столбнячного компонента - по реакции антитоксин-связывания. ИФА - для гепатитного компонента.

Далее в исследованиях по определению иммуногенной активности использовали следующий конкретный состав:

антиген вируса гепатита B (HBsAg), полученный культивированием трансформированных клеток штамма S. cerevisiae ВКПМ Y-2203;

анатоксин дифтерийный очищенный и концентрированный;

анатоксин столбнячный очищенный и концентрированный;

мертиолят;

гель алюминия гидроксид (в пересчете на алюминий);

фосфатно-солевой буфер (50 mM Na-фосфатный буфер, PH 6.8-0.13 M NaCl.

Содержание приведенного состава по примерам соответственно следующее.

Пример 1 - Пример 2

5 мкг HBsAg - 10 мкг HBsAg

10 Lf - 20 Lf

5 EC - 10 EC

0,01% - 0,01%

0,6 мг - 1,2 мг

До 1 мл - До 1 мл

Исследование иммуногенной активности комбинированной вакцины проверяли на беспородных белых мышах. Животных иммунизировали однократно, подкожно. Кровь забирали через 30 дней после иммунизации. Параллельно одной группе белых беспородных мышей вводили вакцину гепатита. В другой группе - ассоциированный препарат.

Результаты, полученные при исследовании иммуногенной активности препаратов, представлены в таблице 1 (см. в конце описания).

Как следует из представленных данных, показатель сероконверсии для комбинированного препарата в части гепатитного компонента значительно выше, чем в препарате, где присутствует только HBsAg, что свидетельствует о потенциирующем эффекте, наблюдаемом при совместном введении антигенов в одном препарате.

Результаты испытаний иммуногенных свойств дифтерийного анатоксина столбнячного и коклюшного компонентов в составе АКДС - вакцины и ассоциированного препарата представлены в табл. 2, 3 и 4 (см. в конце описания).

Проведенные испытания еще раз доказывают наличие потенцирующего эффекта у предлагаемого ассоциированного (комбинированного препарата).

Показатель сероконверсии для комбинированного препарата в части АКДС выше, чем в препарате без HBsAg при использовании в меньшей дозе.

Разработанная лекарственная форма с антигеном вируса гепатита B может быть использована для иммунопрофилактики по любой из известных схем иммунизации вакцинами против вируса гепатита B.