по существу, кристаллическая форма мелагатрана

Формула изобретения

1. По существу, кристаллическая форма мелагатрана, которая находится в форме гидрата.

2. По существу, кристаллическая форма мелагатрана, которая содержит по меньшей мере 0,5 моль воды на моль мелагатрана

3. Соединение по п.1 или 2, характеризующееся кривой дифференциальной сканирующей калориметрии при скорости нагрева 10°C/мин в потоке азота в закрытой чашке с маленьким отверстием, демонстрирующей эндотермический эффект с экстраполированной начальной температурой приблизительно 83°C и ассоциированным тепловым эффектом -125 Дж/г; картиной дифракции рентгеновских лучей на порошке, характеризующейся кристаллическими пиками с d-значениями 21,1, 10,5, 7,6, 7,0, 6,7, 6,4, 6,2, 5,7, 5,4, 5,3, 5,22, 5,19, 5,07, 4,90, 4,75, 4,68, 4,35, 4,19, 4,00, 3,94, 3,85, 3,81, 3,73, 3,70, 3,63, 3,52, 3,39, 3,27, 3,23, 3,12, 3,09, 3,06, 2,75, 2,38 и 2,35 Е; и/или содержанием воды 4,3% (мас./мас.).

4. По существу, кристаллическая форма мелагатрана, которая находится в форме ангидрата, характеризующаяся кривой дифференциальной сканирующей калориметрии при скорости нагрева 10°C/мин в потоке азота в закрытой чашке с маленьким отверстием, демонстрирующей эндотермический эффект с экстраполированной начальной температурой приблизительно 210°C и ассоциированным тепловым эффектом -120 Дж/г; и/или картиной дифракции рентгеновских лучей на порошке, характеризующейся кристаллическими пиками с d-значениями 17,8, 8,9, 8,1, 7,5, 6,9, 6,3, 5,9, 5,6, 5,5, 5,4, 5,3, 5,2, 5,0, 4,71, 4,43, 4,38, 4,33, 4,14, 4,12, 4,05, 3,91, 3,73, 3,61, 3,58, 3,56, 3,47, 3,40, 3,36, 3,28, 3,24, 3,17, 3,09, 3,01, 2,96, 2,83, 2,54, 2,49, 2,41, 2,38 и 2,35 Е.

5. Способ получения соединения по любому из пп.1-4, при котором осуществляют кристаллизацию мелагатрана из растворителя, выбранного из группы С_1-6 алкилацетаты, С₁-₆алкиловые спирты, С _5-12алифатические углеводороды, С_6-10ароматические углеводороды, ди-С_1-6алкиловые эфиры, ди-С_1-6 алкилкетоны, ацетонитрил, вода или их смеси.

6. Способ по п.5, где растворитель выбран из группы этилацетат, этанол, изопропанол, изооктан, н-гептан, толуол, диизопропиловый эфир, метилизобутилкетон, ацетонитрил, вода или их смеси.

7. Способ по п.5 или 6, при котором по меньшей мере один низший алкиловый спирт и/или воду используют в качестве растворителя, а ацетонитрил и/или этилацетат используют в качестве антирастворителя.

8. Способ получения соединения по п.4, который включает в себя способ по п.6 или 7, где растворитель, по существу, не содержит воду.

9. Способ получения соединения по любому из пп.1-3, который включает в себя способ по п.6 или 7, где растворитель содержит воду.

10. Способ взаимопревращения соединения-ангидрата по п.4 и соединения-гидрата по любому из пп.1-3, при котором кристаллический ангидрат или гидрат (как подходит) подвергают воздействию атмосферы с подходящим уровнем относительной влажности.

11. Соединение по любому из пп.1-4 для применения в качестве фармацевтического средства, обладающего активностью ингибитора тромбина.

12. Фармацевтический препарат для применения в лечении состояния, при котором требуется или желательно ингибирование тромбина, содержащий соединение по любому из пп.1-4 в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

13. Соединение по любому из пп.1-4 для применения в изготовлении лекарства для лечения состояния, когда ингибирование тромбина является необходимым или желательным.

14. Способ лечения состояния, когда ингибирование тромбина является необходимым или желательным, при котором пациенту, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-4.

Описание изобретения к патенту

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение относится к новым формам твердого состояния лекарственного средства, к фармацевтическим композициям, содержащим их, и к способам их получения.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

При составлении лекарственных композиций важно, чтобы лекарственное вещество находилось в форме, в которой его можно легко обрабатывать и с ним обращаться. Это важно не только с точки зрения получения промышленно осуществимого технологического процесса, но также с точки зрения последующего изготовления фармацевтических препаратов, содержащих активное соединение.

Кроме того, при изготовлении лекарственных композиций важно, чтобы после введения пациенту обеспечивался надежный, воспроизводимый и постоянный профиль концентрации лекарственного средства в плазме. Это особенно важно при изготовлении композиций, содержащих антитромботические агенты.

Химическая стабильность, стабильность твердого состояния и срок хранения активных ингредиентов также являются очень важными факторами. Лекарственное вещество и композиции, содержащие его, должны быть способны эффективно храниться в течение значительных периодов времени без обнаруживаемого значительного изменения физико-химических характеристик активного компонента (например, его химического состава, плотности, гигроскопичности и растворимости).

Кроме того, также важна возможность получения лекарственного средства в форме, которая является настолько химически чистой, насколько возможно.

Аморфные вещества в связи с этим могут представлять собой значительные проблемы. Например, такие вещества обычно сложны для обработки и изготовления препаратов, не обеспечивают надежной растворимости и часто оказываются нестабильными и химически грязными.

Специалистам очевидно, что, если лекарственное средство можно легко получить в стабильной кристаллической форме, вышеперечисленные проблемы можно решить.

Таким образом, для изготовления промышленно осуществимых и фармацевтически приемлемых лекарственных композиций важно, там где возможно, предоставлять лекарственное средство в по существу кристаллической и стабильной форме.

Однако следует заметить, что эта цель не всегда достижима. Действительно, обычно невозможно предугадать, исходя из одной молекулярной структуры, каким будет поведение соединения при кристаллизации. Это обычно можно определить только эмпирически.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

В международной заявке на патент WO 94/29336 раскрыт ряд соединений, которые пригодны в качестве ингибиторов сериновых протеаз, таких как тромбин, включая соединение

HО₂C-CH₂-(R)Cgl-(S)Aze-Pab-H,

где Cgl представляет собой цикпогексилглицин, Aze представляет собой азетидин-2-карбоксилат и Pab-H представляет собой 4-аминометиламидинобензол. Это соединение также известно как мелагатран (глицин, N-[(1R)-2-[(2S)-2-[[[[4-(аминоиминометил)фенил]метил]амино]карбонил]-1-азетидинил]-1-циклогексил-2-оксоэтил]-).

Способ синтеза этого соединения описан в Примере 1 WO 94/29336, где его получают в виде неочищенного вещества путем выпаривания растворителя реакционной смеси с последующей стадией удаления защиты. Соединение выделяют таким образом в аморфной форме.

Возможно ли получить мелагатран в кристаллической форме в WO 94/29336 не раскрыто. Кроме того, не представлено никакой информации в отношении того, как это соединение можно получить в такой форме и, более конкретно, как его можно получить в химически стабильной форме и/или форме со стабильным твердым состоянием.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Согласно изобретению предложена по существу кристаллическая форма мелагатрана, которая находится в форме гидрата. Согласно дополнительному аспекту предложена по существу кристаллическая форма мелагатрана, которая содержит по меньшей мере 0,5 моль воды на моль мелагатрана.

В одном из воплощений указанная кристаллическая форма характеризуется кривой дифференциальной сканирующей калориметрии при скорости нагрева 10°С/мин в потоке азота в закрытой чашке с маленьким отверстием, демонстрирующей эндотермический эффект с экстраполированной начальной температурой приблизительно 83°С и ассоциированным тепловым эффектом -125 Дж/грамм; картиной дифракции рентгеновских лучей на порошке, характеризующейся кристаллическими пиками с d-значениями 21,1, 10,5, 7,6, 7,0, 6,7, 6,4, 6,2, 5,7, 5,4, 5,3, 5,22, 5,19, 5,07, 4,90, 4,75, 4,68, 4,35, 4,19, 4,00, 3,94, 3,85, 3,81, 3,73, 3,70, 3,63, 3,52, 3,39, 3,27, 3,23, 3,12, 3,09, 3,06, 2,75, 2,38 и 2,35 и/или содержанием воды 4,3% (масс./масс.).

Согласно другому аспекту изобретения предложена по существу кристаллическая форма мелагатрана, которая находится в форме ангидрата, характеризующаяся кривой дифференциальной сканирующей калориметрии при скорости нагрева 10°С/мин в потоке азота в закрытой чашке с маленьким отверстием, демонстрирующей эндотермический эффект с экстраполированной начальной температурой приблизительно 210°С и ассоциированным тепловым эффектом -120 Дж/грамм и/или картиной дифракции рентгеновских лучей на порошке, характеризующейся кристаллическими пиками с d-значениями 17,8, 8,9, 8,1, 7,5, 6,9, 6,3, 5,9, 5,6, 5,5, 5,4, 5,3, 5,2, 5,0, 4,71, 4,43, 4,38, 4,33, 4,14, 4,12, 4,05, 3,91, 3,73, 3,61, 3,58, 3,56, 3,47, 3,40, 3,36, 3,28, 3,24, 3,17, 3,09, 3,01, 2,96, 2,83, 2,54, 2,49, 2,41, 2,38 и 2,35 .

Также предложен способ получения соединения по любому из пп.1-4, при котором осуществляют кристаллизацию мелагатрана из растворителя, выбранного из группы: C_1-6алкилацетаты, С_1-6алкиловые спирты, C_5-12алифатические углеводороды, С_6-10ароматические углеводороды, ди-C _1-6алкиловые эфиры, ди-С_1-6алкилкетоны, ацетонитрил, вода или их смеси.

Предпочтительно в указанном способе растворитель выбран из группы этилацетат, этанол, изопропанол, изооктан, н-гептан, толуол, диизопропиловый эфир, метилизобутилкетон, ацетонитрил, вода или их смеси.

В одном из воплощений указанного способа по меньшей мере один низший алкиловый спирт и/или воду используют в качестве растворителя, а ацетонитрил и/или этилацетат используют в качестве антирастворителя.

В еще одном воплощении этого способа растворитель по существу не содержит воду.

В другом воплощении способа растворитель содержит воду.

Далее, согласно изобретению также предложен способ взаимопревращения соединения-ангидрата по п.4 и соединения-гидрата по любому из пп.1-3, при котором кристаллический ангидрат или гидрат (как подходит) подвергают воздействию атмосферы с подходящим уровнем относительной влажности.

Согласно еще одному аспекту изобретения предложено указанное выше соединение для применения в качестве фармацевтического средства, обладающего активностью ингибитора тромбина.

Также предложен фармацевтический препарат для применения в лечении состояния, при котором требуется или желательно ингибирование тромбина, содержащий вышеописанную кристаллическую форму в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

Также, согласно еще одному аспекту изобретения, предложено применение кристаллической формы, как она описана выше, в изготовлении лекарства для лечения состояния, когда ингибирование тромбина является необходимым или желательным.

Согласно еще одному аспекту изобретения предложен способ лечения состояния, когда ингибирование тромбина является необходимым или желательным, при котором пациенту, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество соединения, как оно описано выше.

Авторы обнаружили, что мелагатран можно легко получить в одной или более чем одной форме, которые являются как по существу кристаллическими, так и стабильными по природе.

Таким образом, согласно первому аспекту изобретения, предложен мелагатран в по существу кристаллической форме (ниже упоминаемый как "соединения по изобретению").

Хотя авторы обнаружили, что возможно получать мелагатран в формах, которые являются более чем на 80% кристаллическими, в "по существу кристаллические" авторы включают более чем на 20%, предпочтительно более чем на 30% и предпочтительнее более чем на 40% кристаллические. Степень (%) кристалличности могут определить специалисты, применяя дифракцию рентгеновских лучей на порошке (XRPD). Также можно применять другие методы, такие как ЯМР, FT-IR (ИК-Фурье спектроскопия), Рамановская спектроскопия, дифференциальная сканирующая калориметрия (DSC) и микрокалориметрия.

Соединения по изобретению могут находиться в форме сольвата, гидрата или смешанного сольвата/гидрата. Сольваты могут быть образованы одним или более чем одним органическим растворителем, такими как низшие алкиловые (например, С_1-4алкиловые) спирты (например, метанол, этанол или изопропанол) или их смеси.

Авторы обнаружили, что соединения по изобретению неожиданно имеют улучшенную стабильность по сравнению с мелагатраном, полученным как описано в WO 94/29336.

Термин "стабильность", как он определен здесь, включает в себя химическую стабильность и стабильность твердого состояния.

В "химическую стабильность" авторы включают то, что соединение можно хранить в изолированной твердой форме или в форме твердого препарата, в котором оно может быть представлено в смеси с фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или адъювантами при нормальных условиях хранения с незначительной степенью химического разрушения или разложения.

В "стабильность твердого состояния" авторы включают то, что соединение можно хранить в изолированной твердой форме или в форме твердого препарата, в котором оно может быть представлено в смеси с фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или адъювантами при нормальных условиях хранения, с незначительной степенью изменения твердого состояния (например, кристаллизации, перекристаллизации, фазового перехода твердого состояния, гидратации, дегидратации, сольватации или десольватации).

Примеры "нормальных условий хранения" включают в себя температуры между минус 80 и плюс 50°С (предпочтительно между 0 и 40°С и более предпочтительно температуру окружающей среды, такую как 15-30°С), давления между 0,1 и 2 бар (10-200 кПа) (предпочтительно атмосферное давление) и/или освещение до 460 люкс УФ (ультрафиолетового)/видимого света в течение длительных периодов (то есть шесть месяцев или больше). В этих условиях соединения по изобретению могут оказаться менее чем на 15%, более предпочтительно менее чем на 10% и особенно менее чем на 5% химически разрушенными/разложившимися или с изменением твердого состояния, как подходит. Специалистам очевидно, что вышеуказанные верхний и нижний пределы температуры и давления представляют собой предельные значения нормальных условий хранения и что некоторые комбинации этих крайних значений не будут испытаны во время нормального хранения (например, температура 50°С и давление 0,1 бар (10 кПа)).

Термин "нормальные условия хранения" также может включать значения относительной влажности между 5 и 95% (предпочтительно от 10 до 75%). Однако, в случае некоторых кристаллических форм по изобретению, изменения в конформации или кристаллической структуре при гидратации и/или дегидратации могут происходить в результате длительного воздействия некоторых крайних значений относительной влажности при нормальных температурах/давлениях. Например, авторы обнаружили, что кристаллические формы мелагатрана, которые находятся в форме гидрата (например, моногидрата), можно хранить при 10%-ной относительной влажности или выше, при температуре окружающей среды/атмосферном давлении с незначительной степенью дегидратации. Однако авторы также обнаружили, что кристаллические формы мелагатрана, которые находятся в форме ангидрата, следует хранить при менее чем 40%-ной (предпочтительно менее чем 30%-ной, более предпочтительно менее чем 20%-ной) относительной влажности при температуре окружающей среды/атмосферном давлении, чтобы поддерживать незначительную степень гидратации.

Таким образом, хотя соединения по изобретению обладают большей стабильностью твердого состояния, чем формы мелагатрана, известные из уровня техники, некоторые соединения по изобретению являются более стабильными в твердом состоянии, чем другие. В связи с этим специалистам очевидно, что условия хранения можно приспособить так, чтобы они подходили для кристаллической формы, которая хранится.

Согласно следующему аспекту изобретения предложен способ получения соединения по изобретению, при котором осуществляют кристаллизацию мелагатрана.

Хотя мелагатран можно кристаллизовать в присутствия системы растворителей или без нее (например, кристаллизация может происходить из расплава, в надкритических условиях или может быть достигнута при сублимации), авторы предпочитают, чтобы кристаллизация происходила из подходящей системы растворителей.

Авторы обнаружили, что возможно получить кристаллический мелагатран путем кристаллизации предпочтительно с последующим растворением и/или суспендированием соединения, или, более предпочтительно, из реакционных растворов, в которых это соединение образовалось.

Система растворителей может включать в себя один или более чем один органический растворитель, такие как алкилацетаты (например, линейные или разветвленные C_1-6алкилацетаты, такие как этилацетат, изопропилацетат и бутилацетат), низшие (например, линейные или разветвленные C_1-6, предпочтительно C _2-4) алкиловые спирты (например, этанол, изопропанол), алифатические и ароматические углеводороды (например, изооктан, н-гептан и толуол), диалкилкетоны (например, метилэтилкетон и метилизобутилкетон), диалкиловые эфиры (например, диизопропиловый эфир) и ацетонитрил. Можно использовать смеси любых вышеупомянутых растворителей. Органические растворители также можно смешивать с водой или водными растворами.

Различные кристаллические формы могут иметь разные растворимости в разных органических растворителях при любой приведенной температуре. В связи с этим вышеуказанные растворители могут применяться как "антирастворители" (то есть растворитель, в котором соединения по изобретению плохо растворимы) и могут таким образом способствовать процессу кристаллизации. Низшие алкиловые спирты являются предпочтительными растворителями. Когда низшие алкиловые спирты применяют в качестве растворителя, другие растворители, определенные выше, можно применять в качестве антирастворителей (особенно ацетонитрил и этилацетат).

Когда кристаллизация происходит из реакционного раствора, в котором мелагатран был образован, подходящие растворители включают в себя низшие алкиловые спирты (например, метанол, этанол или изопропанол), которые могут находиться в смеси с водой.

Кристаллизацию соединений по настоящему изобретению из подходящей системы растворителей можно выполнить, достигая перенасыщения в системе растворителей, которая содержит мелагатран (например, охлаждением, выпариванием растворителя и/или путем добавления подходящего антирастворителя). Кристаллизацию можно также осуществлять, снижая растворимость вещества путем добавления соли (такой как NaCl).

Специалистам очевидно, что концентрация в растворе соединения, которое надо кристаллизовать, и используемая система растворителей могут оказывать влияние на температуры кристаллизации и время кристаллизации.

Соединения по изобретению могут находиться в форме сольвата, гидрата или смешанного сольвата/гидрата.

Соединения по настоящему изобретению также могут находиться в форме ангидрата. (Термин "ангидрат" при использовании в данном контексте также включает в себя соединения, которые являются "ансольватами"). Чтобы гарантировать, что получен ангидрат, растворитель, из которого происходит кристаллизация, следует высушить либо перед, либо во время процесса кристаллизации для того, чтобы снизить содержание воды ниже критического уровня, который предпочтительно не превышать во время кристаллизации. Растворитель можно высушить во время процесса кристаллизации, например, путем уменьшения содержания воды в смеси соединения, которое надо кристаллизовать, и подходящего органического растворителя/водной системы растворителей (например, увеличивая количество органического растворителя, который присутствует, и/или удаляя воду образованием азеотропа с последующими дистилляциями). "Критический уровень" воды зависит от таких факторов, как температура, концентрация в растворе соединения, которое надо кристаллизовать, совокупность загрязнений и система растворителей, которая применяется, но может быть определен вне изобретения.

Таким образом, ангидрат можно получить путем кристаллизации из системы растворителей, включающей в себя один или более чем один органический растворитель (такой как низшие (например С _2-6) алкиловые спирты (например, этанол, изопропанол), ацетонитрил и/или этилацетат) и/или воду, причем система растворителей является по существу свободной от воды или ее приводят в такое состояние во время кристаллизации. В "по существу свободное от воды" авторы включают то, что содержание воды в системе растворителей ниже того, которое приведет к образованию, самое большее, 20% моногидрата для любой отдельной системы растворителей и совокупности условий кристаллизации.

Для того чтобы гарантировать, что получен моногидрат, в растворителе, из которого происходит кристаллизация, должна присутствовать вода. Содержание воды предпочтительно должно быть выше критического уровня во время кристаллизации (причем "критический уровень" зависит от факторов, упомянутых выше в отношении получения ангидрата). Таким образом, кристаллический моногидрат можно получать кристаллизацией мелагатрана из системы растворителей, содержащей воду и/или один или более чем один органический растворитель, включая этилацетат, этанол, изопропанол, метилизобутилкетон, метилэтилкетон, ацетонитрил и их смеси.

Для того чтобы гарантировать, что получен сольват, в качестве части системы растворителей, из которой происходит кристаллизация, должен присутствовать подходящий органический растворитель, способный образовывать сольват. Можно также получить сольваты, которые находятся в форме "смешанного" сольвата/гидрата. Например, авторы обнаружили, что смешанные низшие алкиловые (например, С_2-4 алкиловые) спиртовые (например, метанольный, этанольный и/или изопропанольный) сольваты/гидраты можно получить кристаллизацией соединения по изобретению из смеси низших алкиловых спиртов (например, метанола, этанола и/или изопропанола), воды и антирастворителя (например, ацетонитрила), например как описано ниже.

Как очевидно специалистам, получаемая кристаллическая форма зависит как от кинетики, так и термодинамики процесса кристаллизации. В определенных термодинамических условиях (система растворителей, температура, давление и концентрация соединения по изобретению) одна кристаллическая форма может быть более стабильной, чем другая (или даже любая другая). Однако другие кристаллические формы, которые могут иметь сравнительно относительно низкую термодинамическую стабильность, могут быть кинетически предпочтительными. Таким образом, помимо всего прочего, кинетические факторы, такие как время, совокупность загрязнений, перемешивание, присутствие затравок и так далее, также могут влиять на то, какие формы появятся. Таким образом, специалисты могут адаптировать методики, обсуждаемые здесь, как подходит, для того, чтобы получить разные кристаллические формы мелагатрана.

Для того чтобы гарантировать, что такие кристаллические формы, как описаны здесь, получают с отсутствием других кристаллических форм, описанных здесь, кристаллизации предпочтительно проводят путем затравливания зародышами и/или затравочными кристаллами желаемой кристаллической формы при полном отсутствии ядер и/или затравочных кристаллов других кристаллических форм, описанных здесь.

Соединения по настоящему изобретению, которые являются ангидратами, содержат не более 3%, предпочтительно 1% и более предпочтительно 0,5% (масс./масс.) воды, связана такая вода (кристаллическая вода или иная) или нет. Сольваты, гидраты и смешанные гидраты/сольваты содержат не менее 0,5 моль растворителя и/или воды (как подходит) на моль мелагатрана.

Предпочтительными соединениями по настоящему изобретению являются те, которые находятся в форме гидрата, такого как моногидрат. Согласно следующему аспекту изобретения предложено соединение по настоящему изобретению, которое содержит по меньшей мере 0,5, предпочтительно 0,85 и более предпочтительно 0,90 моль воды на моль мелагатрана, связана такая вода (кристаллическая вода или иная) или нет.

Авторы также обнаружили, что соединения по изобретению в одной кристаллической форме можно превращать в другие кристаллические формы.

Например, кристаллический моногидрат может быть также образован при декантировании других кристаллических форм (например, безводных и/или других сольватов) в воде или смеси достаточного количества воды и одного или нескольких органических растворителей (таких как этанол, изопропанол, этилацетат, ацетонитрил или метилизобутилкетон). Образовавшаяся взвесь может быть предпочтительно затравлена кристаллами кристаллического моногидрата для того, чтобы гарантировать, что будет происходить соответствующее превращение.

Более того, температура сушки и время сушки могут влиять на свойства твердого состояния и/или форму твердого состояния соединений по настоящему изобретению (например, сольваты, гидраты или их смеси). Например, в случае гидратов дегидратация может происходить при низких влажностях, и/или повышенных температурах и/или пониженном давлении. Например, после образования кристаллического моногидрата существует критический уровень влажности, высушивание ниже которого может привести к потере кристаллической воды и превращению твердого состояния в ангидрат. Наоборот, ангидраты можно превратить (полностью или частично) в моногидраты в тех случаях, когда они подвергаются воздействию атмосферы с относительной влажностью, которая достаточна высока.

Получение и идентификация inter alia ангидратов, моногидратов и сольватных/гидратных форм соединений по изобретению описаны ниже. Разные кристаллические формы соединений по изобретению (например, ангидрат и моногидрат) можно легко идентифицировать при помощи методов дифракции рентгеновских лучей на порошке (XRPD), например как описано здесь.

Соединения по настоящему изобретению можно отделить, применяя методики, хорошо известные специалистам в данной области техники, например декантацией, фильтрацией или центрифугированием.

Авторы обнаружили, что, применяя способы кристаллизации такие, как описаны здесь, возможно получить соединения по изобретению с химической чистотой, которая выше чем у мелагатрана, который отделяют в первом случае.

Дальнейшую очистку соединений по изобретению можно производить, применяя методики, хорошо известные специалистам в данной области техники. Например, загрязнения можно удалять путем перекристаллизации из подходящей системы растворителей (например, низшего алкилового спирта, такого как этанол или изопропанол), которая может включать в себя антирастворитель (например, изооктан, ацетонитрил, этилацетат, метилэтилкетон), воду или комбинацию этих растворителей. Подходящие температуры и время перекристаллизации зависят от концентрации в растворе соединения, которое надо кристаллизовать, и от используемой системы растворителей.

Когда соединение по настоящему изобретению кристаллизуют или перекристаллизовывают, как описано здесь, полученное в результате соединение находится в форме, которая имеет улучшенную химическую стабильность и стабильность твердого состояния, упомянутые выше.

Фармацевтические препараты и медицинское применение

Согласно изобретению соединения по настоящему изобретению можно вводить перорально, внутривенно, подкожно, трансбуккально, ректально, дермально, назально, трахеально, бронхиально или любым другим парентеральным путем, или путем ингаляции, в форме фармацевтического препарата, содержащего соединение по изобретению в фармацевтически приемлемой лекарственной форме. Однако авторы предпочитают, чтобы соединение по изобретению представляло собой форму, пригодную для перорального или парентерального, такого как подкожное, введения.

В зависимости от нарушения и пациента, которого лечат, а также пути введения соединения можно вводить в различных дозах.

Подходящие препараты включают в себя те, которые раскрыты в международных заявках на патент WO 94/29336, WO 96/14084, WO 96/16671, WO 97/39770, WO 97/45138, WO 98/16252 и WO 00/12043.

Соединения по настоящему изобретению могут быть дополнительно обработаны перед смешением с подходящим носителем, разбавителем или адъювантом. Например, кристаллическую форму можно раздробить или измельчить на более мелкие частицы.

Авторы предпочитают, чтобы препараты, содержащие соединения по изобретению, находились в форме, которая пригодна для парентеральной (например, подкожной) доставки. В связи с этим соединение по настоящему изобретению можно смешивать с системой водных растворителей (например, международная заявка на патент WO 00/12043) для того, чтобы получить фармацевтический препарат, который находится в форме жидкости и/или раствора.

Количество соединения по настоящему изобретению, которое используют в таком препарате, зависит от состояния и пациента, которого надо лечить, а также соединения(й), которое(ые) используют, и может быть определено обычным образом.

Соединения по настоящему изобретению полезны, так как они обладают фармакологической активностью. Следовательно, они показаны как фармацевтические препараты.

В частности, соединения по настоящему изобретению являются сильными ингибиторами тромбина, например, как продемонстрировано в испытаниях, описанных в WO 94/29336. Ожидается, что соединения по настоящему изобретению будут полезны при лечении состояний, когда ингибирование тромбина является необходимым или желательным, включая те, что описаны, например, в WO 94/29336 и WO 97/23499, описания которых включены в данное описание изобретения путем ссылки.

Подходящие дозы соединения по настоящему изобретению при терапевтическом и/или профилактическом лечении пациентов млекопитающих, особенно человека, находятся в пределах от 0,4 до 40 мг в сутки и/или от 0,0002 до 4 мг/кг (предпочтительно от 0,002 до 1 мг/кг) массы тела при парентеральном введении и от 2 до 1000 мг в сутки и/или от 0,001 до 100 мг/кг (предпочтительно от 0,01 до 25 мг/кг) массы тела при пероральном введении.

Для предложенного способа, чтобы предотвратить сомнения, в "лечение" авторы включают терапевтическое лечение, а также профилактику состояния.

Соединения по настоящему изобретению имеют преимущество в том, что они находятся в форме, которая обеспечивает улучшенную легкость обработки. Кроме того, соединения по изобретению имеют преимущество в том, что их можно получать в формах, которые имеют улучшенную химическую стабильность и стабильность твердого состояния. Таким образом, соединения могут быть стабильными при хранении в течение длительных периодов.

Соединения по настоящему изобретению также могут иметь преимущество в том, что их можно получать с хорошими выходами, с высокой чистотой, за меньшее время, более удобно и с более низкой стоимостью, чем формы мелагатрана, полученные ранее.

Изобретение проиллюстрировано, но ни в коей мере не ограничено, следующими примерами со ссылкой на прилагаемые фигуры, где:

на Фигуре 1 показана дифрактограмма рентгеновских лучей на порошке для кристаллической формы ангидрата мелагатрана, полученного способом Примера 2;

на Фигуре 2 показана дифрактограмма рентгеновских лучей на порошке для кристаллической формы моногидрата мелагатрана, полученного способом Примера 4;

на Фигуре 3 показана дифрактограмма рентгеновских лучей на порошке для кристаллической формы ангидрата мелагатрана, полученного способом Примера 6.

Общие методики

Анализ дифракции рентгеновских лучей на порошке (XRPD) выполняли на образцах, полученных согласно стандартным способам, например, описанным в Giacovazzo С. et al. (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins R. and Snyder R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; Bunn C. W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London или Klug H. P. & Alexander L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York. Рентгеновские анализы выполняли, используя Siemens D5000 дифрактометр и/или Philips X'Pert MPD.

Дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC) выполняли, используя прибор Mettler DSC820, согласно стандартным методам, например, описанным в Hohne G. W. H. et al. (1996), Differential Scanning Calorimetry, Springer, Berlin.

Термогравиметрический анализ (TGA) проводили, используя прибор Mettler Toledo TGA850.

Формы, полученные согласно Примерам ниже, демонстрировали "по существу" такие же картины XRPD дифракции и/или DSC термограммы, как другие Примеры, раскрытые ниже, когда было понятно из соответствующих картин/термограмм (допуская ошибку эксперимента), что образовалась та же самая кристаллическая форма. Таким образом, пределы ошибки эксперимента для начальных температур DSC могут быть в пределах ±5°С (например ±2°С) и для значений XRPD расстояний могут быть в пределах ±2 в последнем десятичном разряде.

Синтез моногидрата мелагатрана

Пример 1

a) Boc-(R)Cgl-(S)Aze-Pab-Z

DMAP (3,0 эквивалента) и Boc-(R)Cgl-(S)Aze-OH (1,0 эквивалент) растворяли в смеси этилацетат:ацетонитрил (80:20 об./об.) в объеме 18 л/кг Boc-(R)Cgl-(S)Aze-OH при 20°С. Pab-Z x HCl (1,15 эквивалента) загружали в полученный в результате раствор. Добавляли EDAC×HCl (1,4 эквивалента), и взвесь перемешивали при 25°С в течение приблизительно 3 часов. Отбирали образец для контроля по ходу процесса. Реакционный раствор обрабатывали, когда определяли, что произошло по меньшей мере 95%-ное превращение. Взвесь затем фильтровали, и остаток на фильтре промывали смесью этилацетат:ацетонитрил (80:20 об./об.). Добавляли водный раствор хлорида натрия (10% масс./масс.), и рН доводили до 4,0 раствором соляной кислоты (4 М). Раствор тщательно перемешивали в течение по меньшей мере 15 минут. Водную фазу отделяли, и органическую фазу экстрагировали водным раствором хлорида натрия (20% масс./масс.). Раствор тщательно перемешивали в течение по меньшей мере 15 минут. Водную фазу отделяли, и органическую фазу экстрагировали водным раствором хлорида натрия (10% масс./масс.). рН доводили до 8,0 водным раствором карбоната калия (25% масс./масс.). Раствор тщательно перемешивали в течение по меньшей мере 15 минут. Водную фазу отделяли. Этилацетат и ацетонитрил выпаривали под вакуумом (приблизительно 15 кПа) при температуре приблизительно 40°С до тех пор, пока объем в реакторе не составлял приблизительно 8 л/кг исходного вещества. Во время процесса выпаривания добавляли еще этилацетат (13 л/кг исходного вещества). Отбирали образец для анализа на содержание воды.

Затем добавляли этиловый спирт (10% об./об. общего объема). Этот раствор использовали непосредственно на следующей стадии.

б) H-(R)Cgl-(S)Aze-Pab-Z

1) Раствор со стадии (а) охлаждали до 10°С. Загружали метансульфоновую кислоту (7 эквивалентов на эквивалент Boc-(R)Cgl-(S)Aze-Pab-Z), поддерживая температуру ниже 20°С. Температуру доводили до 22°С, и реакционный раствор перемешивали (4 часа) до тех пор, пока не происходило по меньшей мере 95%-ное превращение (при определении ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографией)). Реакционный раствор охлаждали до 10°С и экстрагировали холодным (10°С) 25%-ным (масс./масс.) водным раствором карбоната калия (8 эквивалентов К₂СО₃) в течение по меньшей мере 15 минут. Температуру доводили до 20°С, и водную фазу отделяли. Органическую фазу промывали смесью водного раствора хлорида натрия (10% масс./масс.) и карбоната калия (1 эквивалент К₂СО₃) в течение по меньшей мере 15 минут. Водную фазу отделяли. Раствор указанного в подзаголовке соединения использовали непосредственно на следующей стадии.

2) Указанное в подзаголовке соединение получали по существу таким же способом, как описано на стадии (б)(1) выше, за исключением того, что температуру доводили до 25°С, и реакционную смесь перемешивали в течение 5 часов с последующим добавлением метансульфоновой кислоты.

b) Bzl-OC(O)-CH₂-(R)Cgl-(S)Aze-Pab-Z

1) В реакционный раствор со стадии (б)(1) загружали дополнительно этилацетат, воду и карбонат калия (3,0 эквивалента на эквивалент H-(R)Cgl-(S)Aze-Pab-Z), и реакционную смесь перемешивали до тех пор, пока карбонат калия не растворялся. Добавляли бензилбромацетат (1,2 эквивалента на эквивалент H-(R)Cgl-(S)Aze-Pab-Z), и температуру реактора повышали до 40°С. Температуру поддерживали в течение приблизительно 20 часов. Отбирали образец для анализа ВЭЖХ. Когда происходило 95%-ное превращение, температуру снижали до 20°С, и реакционную смесь оставляли отстаиваться в течение по меньшей мере 20 минут. Отделяли водную фазу, и раствор охлаждали до 10°С. Добавляли водный раствор хлорида натрия (4% масс./масс.), и доводили рН до 4,0 4 М раствором соляной кислоты.

Двухфазную систему тщательно перемешивали в течение по меньшей мере 15 минут и оставляли разделяться в течение по меньшей мере 20 минут. Водную фазу отделяли. Добавляли раствор хлорида натрия (4% масс./масс.), и рН доводили до 4,0 4 М раствором соляной кислоты. Раствор тщательно перемешивали в течение по меньшей мере 15 минут и оставляли разделяться в течение по меньшей мере 20 минут. Отделяли водную фазу. К полученному в результате раствору добавляли воду, охлажденную до 10°С. рН доводили до 2,5 4 М раствором соляной кислоты. Двухфазную систему тщательно перемешивали в течение по меньшей мере 15 минут и оставляли разделяться в течение по меньшей мере 20 минут. Водную фазу отделяли и медленно загружали в смесь карбоната калия в этилацетате. рН доводили до 7,0 25%-ным (масс./масс.) водным раствором карбоната калия, и реакционную смесь тщательно перемешивали в течение по меньшей мере 15 минут при 20°С и оставляли разделяться в течение по меньшей мере 20 минут. Отделяли водную фазу. Этилацетат выпаривали под вакуумом (приблизительно 10 кПа) при максимальной температуре 40°С до тех пор, пока объем в реакционном сосуде не составлял приблизительно 8,5 л/кг Boc-(R)Cgl-(S)Aze-OH. Добавляли еще этилацетат (5 л/кг Boc-(R)Cgl-(S)Aze-OH) и выпаривали снова при пониженном давлении до тех пор, пока объем в реакционном сосуде не составлял приблизительно 8,5 л/кг. Брали образец для анализа на содержание воды. Если содержание воды было менее чем 0,5% (масс./об.), добавляли воду до получения общего содержания воды 0,5-2,0% (масс./об.). Температуру доводили до 45°С, реакционный раствор затравливали 2% (масс./масс.) указанного в подзаголовке компонента, и взвесь тщательно перемешивали в течение 10 часов, затем охлаждали до 30°С за 3 часа и затем перемешивали в течение по меньшей мере 3 часов. Загружали толуол (5 л/кг указанного в подзаголовке соединения), и взвесь перемешивали в течение по меньшей мере 15 минут. Этилацетат и толуол выпаривали при пониженном давлении (приблизительно 10 кПа) до тех пор, пока объем не становился таким, как был перед добавлением толуола. Добавляли толуол (5 л/кг указанного в подзаголовке соединения), и взвесь перемешивали в течение по меньшей мере 30 минут. Этилацетат и толуол выпаривали снова при пониженном давлении до тех пор, пока объем не становился таким, каким был перед добавлением толуола. Затем добавляли толуол до общего объема приблизительно 11 л/кг указанного в подзаголовке соединения. Взвесь аккуратно перемешивали в течение по меньшей мере 3 часов при 20°С. Кристаллы отфильтровывали и промывали толуолом, и сушили под вакуумом (<150 мбар) (15 кПа) при приблизительно 40°С.

2) Указанное в подзаголовке соединение получали по существу таким же способом, как описанный на стадии (в)(1) выше, за исключением того, что:

(1) перед снижением температуры до 20°С с последующим добавлением бензилбромацетата, происходило 96%-ное превращение и

(2) проводили третью экстракцию при рН 4,0.

г) Моногидрат мелагатрана

1) Этанол загружали в реактор при 20°С. Добавляли Pd/C (10% масс./масс. Bzl-OC(O)-CH₂-(R)Cgl-(S)Aze-Pab-Z), декантированный в воде. (Общее количество воды составляло 6% об./об. всего растворителя). Загружали Bzl-OC(O)-CH₂ -(R)Cgl-(S)Aze-Pab-Z (со стадии (в)(1) выше; 8% масс./об. всего растворителя), и температуру поднимали до 25°С. Давление Н₂ 3,5 бар (350 кПа) прикладывали к реакционной смеси, которую интенсивно перемешивали в течение 5 часов. Когда реакция закончилась (определено ВЭЖХ), устанавливали температуру 20°С, и реакционную взвесь обрабатывали активированным углем (10% масс./масс. исходного вещества), декантированным в воде (0,5 л/кг исходного вещества) за 0,5 часа. Катализатор и уголь отфильтровывали, и остаток на фильтре промывали этанолом (5 л/кг ангидрата мелагатрана). Этанол затем выпаривали при пониженном давлении до объема 4 л/кг ангидрата мелагатрана. Загружали изопропанол (14 л/кг ангидрата мелагатрана), и раствор снова упаривали при пониженном давлении (при температуре между 20 и 30°С) до объема приблизительно 7 л/кг ангидрата мелагатрана. Раствор фильтровали и промывали изопропанолом (7 л/кг ангидрата мелагатрана). Этанол/изопропанол выпаривали при пониженном давлении (при температуре между 20 и 30°С) до объема приблизительно 4,4 л/кг ангидрата мелагатрана. Содержание воды анализировали и доводили до 0,6-0,7 л/кг ангидрата мелагатрана. Раствор подогревали до 45°С, и добавляли за 20 минут ацетонитрил (6,0 л/кг ангидрата мелагатрана), после чего начинали кристаллизацию затравкой указанным в заголовке соединением (полученным аналогично способу, описанному в Примере 4 ниже; 2% масс./масс. продукта). Смесь перемешивали в течение приблизительно 15 часов. Загружали в сосуд ацетонитрил (6,5 л/кг ангидрата мелагатрана). Взвесь перемешивали при 40°С в течение 3 часов, затем охлаждали до 20°С за 1 час и наконец перемешивали при 20°С в течение по меньшей мере 1 часа. Кристаллы отделяли фильтрацией и промывали смесью ацетонитрил:изопропанол (9:1 (об./об.), 3,5 л/кг указанного в заголовке соединения), ацетонитрилом (2 л/кг указанного в заголовке соединения) и наконец этилацетатом (3 л/кг указанного в заголовке соединения). Кристаллы сушили при 40°С и 150-200 мбар (15-20 кПа).

2) Указанное в заголовке соединение получали, используя по существу то же самое, что описано выше в способе как стадия (г)(1), за исключением того, что:

(1) количество катализатора, используемого вначале, составляло 12% масс./масс. исходного вещества;

(2) общее количество воды в реакционной смеси составляло 7% масс../об. всего растворителя;

(3) не проводили фильтрацию после второго выпаривания;

(4) не выполняли контроль по ходу процесса за содержанием воды после выпаривания (добавляли воду (0,6 л/кг) вместо выполнения доведений до 0,6-0,7 л/кг)

(5) количество промывающих растворителей было:

(I) система ацетонитрил:изопропанол - 3 л/кг ангидрата мелагатрана;

(II) ацетонитрил - 3 л/кг ангидрата мелагатрана и

(III) этилацетат - 5 л/кг ангидрата мелагатрана;

(6) температура сушки составляла 45°С и

(7) нижний предел давления во время сушки составлял 100 мбар (10 кПа).

Кристаллы анализировали XRPD, TGA, GC (газовой хроматографией), DSC и титрованием по Карлу Фишеру. Они показали по существу ту же XRPD картину и DSC термограмму, какие показала форма, полученная согласно Примеру 4.

Кристаллизация ангидрата мелагатрана

Пример 2

Реакционный раствор (этанол:вода), содержащий приблизительно 64,8 г мелагатрана, полученного аналогично способу, описанному в Примере 1 (за исключением последней стадии кристаллизации), в круглодонной колбе концентрировали выпариванием при пониженном давлении, пока не оставалось 149 г раствора. Затем в сосуд загружали 200 мл абсолютного этанола, и раствор концентрировали снова, пока не оставалось 89,5 г. Образовывался белый осадок. Затем еще 250 мл абсолютного этанола загружали в сосуд, и взвесь перемешивали при 30-35°С, пока все растворяемое вещество не растворялось. Раствор концентрировали снова, пока не оставалось 78,9 г раствора. Еще добавляли 550 мл абсолютного этанола, и суспензию перемешивали при 38°С, пока все не растворялось. Содержание воды составляло 0,5% (масс./масс.) при определении титрованием по Карлу Фишеру. Раствор фильтровали, и фильтр промывали 200 мл абсолютного этанола. Раствор нагревали до 30°С в атмосфере N₂, и загружали в сосуд ацетонитрил частями, пока раствор не становился мутным (всего загружали 1380 мл ацетонитрила). Раствор затравливали, используя кристаллы указанного в заголовке продукта. Суспензию перемешивали в течение ночи и охлаждали до температуры окружающей среды. Кристаллы промывали при пониженном давлении 350 мл смеси этанола и ацетонитрила (1:5 (об./об.)) и затем ацетонитрилом (300 мл). Кристаллы затем сушили при 40°С (0,1 мбар (0,01 кПа)). После 4 часов сушки частицы измельчали. Затем сушку продолжали при тех же условиях в течение еще 20 часов.

Кристаллы анализировали XRPD, GC и титрованием по Карлу Фишеру. Результат XRPD представлен в таблице и показан на Фигуре1. Титрование по Карлу Фишеру показало 1,1% (масс./масс.) воды.

Пример 3

85 мл реакционного раствора (этанольного), содержащего мелагатран, полученный аналогично способу, описанному в Примере 1 (за исключением последней стадии кристаллизации), загружали в круглодонную колбу на 500 мл. Раствор концентрировали дистилляцией (давление: 50 мбар (5 кПа); температура бани: 70°С), пока не оставалось 15,3 г раствора. Добавляли 63 мл изопропанола, и раствор концентрировали снова, как описано выше, пока не оставалось 14,8 г. Отбирали образец, и содержание воды составляло 0,93% (об./об.), как определено титрованием по Карлу Фишеру. Еще 1,16 мл очищенной воды добавляли к раствору для того, чтобы улучшить фильтрацию. Круглодонную колбу помещали в масляную баню, поддерживаемую при 40°С, и раствор перемешивали, используя мешалку. 30 мл ацетонитрила медленно загружали в перемешиваемый раствор. 80 мг затравочных кристаллов указанного в заголовке соединения добавляли к раствору, который начинал кристаллизоваться. Суспензию перемешивали в течение еще 14 часов при 40°С, и затем добавляли 23 мл ацетонитрила. Перемешивание продолжали при 40°С в течение 3 часов, затем масляную баню удаляли, и суспензию перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 часов. Кристаллы отфильтровывали под вакуумом, промывали смесью изопропанола и ацетонитрила, затем чистым ацетонитрилом, и затем сушили при 40°С при пониженном давлении. Выход (на основании количества, оставшегося в маточном растворе) составлял 84%.

Кристаллы анализировали XRPD, GC и титрованием по Карлу Фишеру. Они продемонстрировали по существу такую же картину XRPD, какую показала форма, полученная согласно Примеру 2.

Превращение кристаллического ангидрата мелагатрана в кристаллический моногидрат мелагатрана

Пример 4

Загружали 2 г ангидрата мелагатрана (полученного согласно способу, описанному в Примере 3) вместе с 1 мл водопроводной воды, 6 мл изопропанола и 13,2 мл ацетонитрила в колбу Эрленмейера на 50 мл. Колбу помещали на вибростол и поддерживали при температуре окружающей среды. Кристаллы отфильтровывали, применяя вакуум, через 9 дней перемешивания/встряхивания и затем сушили при температуре окружающей среды в вытяжном шкафу.

Кристаллы анализировали XRPD, DSC, TGA, GC и титрованием по Карлу Фишеру.

Результат XRPD представлен в таблице 2 и показан на Фигуре 2.

DSC показала одну эндотерму с начальной температурой приблизительно 83°С с ассоциированным тепловым эффектом -125 Дж/г (из-за дегидратации) и одну при приблизительно 210°С (из-за плавления).

TGA показал уменьшение массы приблизительно на 4,3% около 95°С, соответствующее моногидрату, и разложение, начиная от около 220°С. Титрование по Карлу Фишеру показало 4,3% (масс./масс.) воды.

Пример 5

139 кг этилацетата загружали в реактор вместе с 10,3 кг ангидрата мелагатрана (из Примера 9), затем 1,9 кг очищенной воды (4,5 эквивалента). Суспензию перемешивали в течение 16-20 часов при 40°С. После охлаждения до 25°С суспензию перемешивали в течение еще 2 суток. Взвесь затем фильтровали, применяя фильтрацию под давлением, и реактор и остаток на фильтре промывали 46 кг этилацетата. Кристаллы сушили при пониженном давлении (150±50 мбар (15±5 кПа)) и 40°С в течение нескольких дней.

Кристаллы анализировали XRPD, DSC, TGA, GC и титрованием по Карлу Фишеру. Они показали по существу ту же XRPD картину и DSC термограмму, какие показала форма, полученная согласно Примеру 4. Титрование по Карлу Фишеру показало содержание воды 4,0% (масс./масс.).

Превращение одной кристаллической формы ангидрата мелагатрана в другую кристаллическую форму ангидрата мелагатрана

Пример 6

2,5 г ангидрата мелагатрана (из Примера 2) загружали вместе с 6 мл изопропанола, 1,0 мл водопроводной воды и 13,2 мл ацетонитрила в колбу Эрленмейера на 50 мл. Колбу помещали на вибростол, где ее оставляли на 9 суток. Кристаллы отфильтровывали под вакуумом и затем сушили при 40°С и при давлении менее 20 мбар (2 кПа) в течение ночи.

Кристаллы анализировали XRPD, DSC, GC и титрованием по Карлу Фишеру.

Результат XRPD представлен в таблице 3 и показан на Фигуре 3.

DSC показала одну эндотерму при экстраполированной начальной температуре 210°С с ассоциированным тепловым эффектом -120 Дж/г.

Пример 7

3,0 г ангидрата мелагатрана (из Примере 2) загружали вместе с 0,5 мл водопроводной воды и 20 мл этилацетата в колбу Эрленмейера на 50 мл. Колбу помещали на вибростол, где ее оставляли на 9 суток. Кристаллы отфильтровывали под вакуумом, промывали этилацетатом и затем сушили при 40°С и давлении менее 20 мбар (2 кПа) в течение ночи.

Кристаллы анализировали XRPD, DSC, GC и титрованием по Карлу Фишеру. Они продемонстрировали по существу такую же картину XRPD и DSC термограмму, какие показала форма, полученная согласно Примеру 6.

Пример 8

3,0 г ангидрата мелагатрана (из Примера 2) загружали вместе с 0,5 мл водопроводной воды и 20 мл метилизобутилкетона в колбу Эрленмейера на 50 мл. Колбу помещали на вибростол, где ее оставляли на 9 суток. Кристаллы отфильтровывали под вакуумом, промывали метилизобутилкетоном и затем сушили при 40°С и давлении менее 20 мбар (2 кПа) в течение ночи.

Кристаллы анализировали XRPD, DSC, GC и титрованием по Карлу Фишеру. Они продемонстрировали по существу такую же картину XRPD и DSC термограмму, какие показала форма, полученная согласно Примеру 6.

Превращение кристаллического моногидрата мелагатрана в кристаллический ангидрат мелагатрана

Пример 9

Кристаллы моногидрата (из Примера 1) сушили при пониженном давлении (<15-20 мбар (1,5-2 кПа)) и 40°С, пока содержание воды не становилось менее 1,0% (масс./масс.).

Кристаллы анализировали XRPD, DSC, GC и титрованием по Карлу Фишеру. Они продемонстрировали по существу такую же картину XRPD и DSC термограмму, какие показала форма, полученная согласно Примеру 6.

Сокращения

(S)Aze - (S)-aзeтидин-2-кapбoкcилaт

Воc - трет-бутилоксикарбонил

Bzl - бензил

(R)Cgl - (R)-циклогексилглицин

DMAP - 4-диметиламинопиридин

EDAC - 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимид

Раb-Н - 4-аминометиламидинобензол

Z - бензилоксикарбонил

Сравнительное исследование стабильности кристаллического и аморфного материала

Сравнивали химическую стабильность, при разных температурах и влажности, кристаллического мелагатрана в форме гидрата (эта форма описана и охарактеризована, среди прочего, в Примерах 1 и 4) и стабильность аморфного вещества, описанного в WO 94/29336.

Указанные две формы мелагатрана хранили при 50°С и относительной влажности окружающей среды, а также при 45°С и относительной влажности 75%. Для анализа отбирали образцы через промежутки времени, указанные в таблицах ниже. Результаты представлены в виде общего количества (в процентах) мелагатрана при сравнении с общей площадью хроматограммы за время хранения шесть недель.

Анализ проводили в установке для жидкостной хроматографии, снабженной УФ-детектором. Сопутствующие вещества отделяли на колонке Symmetry C8 (150·4,6 мм, 5 мкм). Соединения элюировали изократически с использованием 20% СН₃СN, 80% натрий-фосфатного буфера с рН 2 и I=0,05 и 5 мМ октансульфонатом при скорости потока 1 мл/мин. Для получения хороших результатов хроматограммы разделения контролировали путем измерения образцов, разведенных в натрий-фосфатном буфере с рН 2 и I=0,05 до концентрации 0,2 мг/мл при 237 нм. Собранные данные объединяли и представляли в виде % от общей площади, причем в расчеты включали величины выше 0,01%.

Представленные результаты ясно показывают значительно более высокую химическую стабильность протестированной кристаллической формы мелагатрана по сравнению с аморфным веществом. Как можно видеть, в случае аморфного вещества через три недели количество присутствующих примесей увеличилось в 2-3 раза. У кристаллической гидратной формы наблюдалось незначительно малое увеличение примесей через 6 недель.