производные таксола с противоопухолевой активностью

Формула изобретения

1. Соединение формулы (I) или его соли:



где R₁ или R₂ независимо представляет собой группу, состоящую из R₁, R ₂, N и/или О, выбранную из групп:







Z₁ представляет собой водород или гидроксил;

Z₂ представляет собой водород или гидроксил;

Z₃ представляет собой С₆-С₁₀ арил;

Z₄ представляет собой C₁-С ₆алкокси.

2. Соединение или его соли по п.1, где Z₁ представляет собой гидроксил, Z₂ представляет собой водород.

3. Соединение или его соли по п.1, где Z ₄ представляет собой трет-бутокси.

4. Соединение или его соли по п.1, где Z₃ представляет собой фенил.

5. Способ получения соединения по любому из пп.1-4, включающий стадии:

восстановление соединения А



с помощью Bu₄NBH₄ с получением соединения В



взаимодействие соединения В с ацеталями с получением соединения С



взаимодействие соединения С с триэтилсилил трифторметансульфонатом с получением соединения D



взаимодействие соединения D с (3R,4R)-1-(трет-бутилкарбоксилик)-3-(триэтилметилсилоокси)-4-фенилнитрогетеробутил-2-оном с получением соединения Е



взаимодействие соединения Е с тетрабутиламмонийфторидом тригидратом с получением соединения F



соединение F окисляют тетраоксидом осмия в присутствии N-метил-морфолин N-оксида с получением соединения G



соединение G окисляют периодатом натрия с получением соединения Н



взаимодействие соединения Н с NHR¹ R² с получением соединения I-R



из R₁, R₂, N и/или О, выбранную из групп:







Z₁ представляет собой водород или гидроксил;

Z₂ представляет собой водород или гидроксил;

Z₃ представляет собой С₆-С₁₀ арил;

Z₄ представляет собой C₁-С ₆алкокси.

6. Способ по п.5, включающий взаимодействие соединения формулы (I) с получением соединения формулы (II) на стадии 2:



где Z представляет собой водород или группу следующей формулы (III):



где определения Z₁, Z₂, Z₃ и Z₄ в формуле (III) являются такими же, как определено в п.5;

где кислотные катализаторы выбраны из группы, состоящей из хлорида дициклопентадиенилтитана; хлорид меди; ацетат меди; нитрат висмута и трифторацетат меди;

где температура реакции равна от -78°С до 200°С; и

где растворители выбирают из ацетонитрила, тетрагидрофурана, дихлорметана, толуола, этилацетата, простого эфира, петролейного эфира и простого изопропилового эфира.

7. Способ по п.6, где кислотный катализатор представляет собой хлорид дициклопентадиенилтитана.

8. Способ по п.6, где растворитель представляет собой ацетонитрил и дихлорметан.

9. Способ по п.6, где температура реакции составляет 0-50°С.

10. Способ по п.6, где температура реакции составляет 25°С.

11. Применение соединений или его солей по любому из пп.1-4 для получения лекарственного средства для лечения опухоли.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым производным таксола с противоопухолевой активностью.

Уровень техники

Таксол представляет собой природное соединение, имеющее следующую химическую формулу, которое может быть получено из ствола Taxus brevifolia в малом количестве.

В данной области известно, что таксол имеет противоопухолевую активность и его механизм действия основывается на действии ингибирования деполимеризации микротрубочек во время деления клетки, и поэтому он рассматривается как противоопухолевый агент, который отличается от общих противоопухолевых агентов при клиническом применении.

Хотя таксол может быть получен только в исключительно малых количествах из природного источника, в последнее время описывается синтез производных таксола посредством использования исходного материала 10-O-деацетилбаккатина III, имеющего следующую структуру:

Соединения, имеющие формулу III, в качестве предшественников таксола могут быть получены из листьев, и тому подобное, тисовых растений в относительно больших количествах. Среди соединений, соединение (Taxotere ), имеющее нижеследующую структуру, привлекает внимание как соединение с противоопухолевой активностью, сходной или более высокой, чем у таксола, и находится в настоящее время в разработке в качестве противоопухолевого агента:

Таксол и Taxotere также являются желаемыми противоопухолевыми соединениями. Однако, в соответствии с клиническими испытаниями, известно, что указанные соединения имеют низкую эффективность при раковых заболеваниях органов пищеварения, в частности при раковых заболеваниях толстой кишки, поэтому большие усилия направляются на разработку производных, которые имеют более сильное противоопухолевое воздействие.

В основном в положении-9 производные таксола содержат кетоновую группу, но известны также некоторые производные, у которых положение-9 является восстановленным. Соединение, имеющее гидроксильную группу в -конфигурации в положении-9, получают из природного источника, и сообщается о различных типах производных с -гидроксильной группой в положении-9, полученных посредством химической модификации указанного соединения. Также в данной области известно, что соединение, имеющее гидроксильную группу в -конфигурации в положении-9, может быть синтезировано путем химического восстановления 10-O-деацетилбаккатина III восстанавливающим агентом, и сообщается о различных типах производных с -гидроксильной группой в положении-9, полученных посредством химической модификации указанного соединения (например, см. заявку на Международный патент WO 94/20088).

В результате широких исследований авторы настоящего изобретения обнаружили, что противоопухолевая активность указанных выше производных таксола, у которых -гидроксильная группа находится в положении-9, резко возрастает, если гидроксильная группа в положении-9 и гидроксильная группа в положении-10 преобразуются в циклический ацеталь. Таким образом, настоящее изобретение осуществляется в соответствии с изложенным выше.

Сущность изобретения

Соответственно, настоящее изобретение относится к соединениям, имеющим следующую общую формулу, или их солям:

где

R₁ или R₂, каждый, независимо представляет собой водород, алкил, галоген-замещенный алкил, или образуют группу, состоящую из R₁, R₂, N и/или O, выбранную из групп:

Z₁ представляет собой водород, гидроксил, галоген или алкил;

Z₂ представляет собой водород, гидроксил, галоген или алкил;

Z ₃ представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил или гетероциклил, где каждый из указанных алкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, арила или гетероциклила является необязательно замещенным одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, карбоксила, алкила, алкоксила, арила, амино, алкиламино, аминоалкила, алкиламиноалкила, алкоксилкарбонила, арилоксикарбонила, ацила, амидо и ацилокси;

Z ₄ представляет собой алкил, арил или алкокси, где каждый из указанного алкила, арила или алкокси является необязательно замещенным одной или несколькими группами, выбранными из группы, состоящей из галогена, гидроксила, группы карбоновой кислоты, алкила, алкоксила, фенила, амино, алкиламино, аминоалкила, алкиламиноалкила, алкоксилкарбонила, арилоксикарбонила, ацила, амидо и ацилокси.

Конфигурация положения-3', с которым связан заместитель Z₃, может представлять собой одну из двух конфигураций, но предпочтительно такую же конфигурацию, как у природного таксола. Также конфигурация в положении-7 представляет либо -, либо -конфигурацию.

Производные таксола по настоящему изобретению могут находиться в свободной форме как таковые и в форме кислотно-аддитивной соли или соли карбоновой кислоты. Примеры кислотно-аддитивной соли включают соли неорганических кислот, которые включают, но не ограничиваясь этим, сульфат, нитрат, гидробромат, гидройодат и фосфат, и соли органических кислот, которые включают в себя, но не ограничиваясь этим, ацетат, метансульфонат, бензолсульфонат, толуолсульфонат, цитрат, малеат, фумарат и лактат.

Примеры солей карбоксильной группы могут представлять собой либо неорганические соли, либо органические соли, которые включают соли щелочных металлов, такие как соль лития, соль натрия, соль калия, соли щелочноземельных металлов, такие как соль магния, соль кальция, и тому подобное, а также соль аммония, соль триэтиламина, соль N-метилглюкамина, соль трис-(гидроксиметил)аминометана, и тому подобное.

Способ получения соединений по настоящему изобретению описывается следующим образом. Во время реакции заместители могут быть защищены защитными группами, если это желательно, и последовательность преобразования каждой группы заместителя не ограничивается.

Способы синтеза:

В приведенной выше схеме реакции

R₁ или R₂, каждый, независимо представляет собой водород, алкил, галоген-замещенный алкил, или образуют группу, состоящую из R₁, R₂ , N и/или O, выбранную из групп:

Соединения по настоящему изобретению могут использоваться при лечении различных раковых заболеваний, таких как раковые заболевания легких, раковые заболевания органов пищеварения, раковые заболевания яичников, раковые заболевания матки, раковые заболевания груди, раковые заболевания печени, раковые заболевания головы и шеи, раковые заболевания крови, раковые заболевания почек, тестикулярные опухоли и тому подобное.

Соответствующие способы введения соединений по настоящему изобретению могут включать в себя, но не ограничиваясь этим, различные инъекции, такие как внутривенная, внутримышечная, подкожная и тому подобное, или другие различные способы введения, такие как пероральное введение, трансдермальное поглощение и тому подобное. Предпочтительные способы введения представляют собой внутривенную инъекцию с помощью растворов и пероральное введение. Растворы могут быть приготовлены посредством образования солей щелочного металла, такого как натрий, и тому подобное, фармакологически приемлемой кислоты. В случае перорального введения соединения могут находиться в свободной форме или в форме соли.

Соответствующие фармацевтические составы по настоящему изобретению выбираются в зависимости от различных способов введения и приготавливаются обычным способом. Примерами лекарственных форм противоопухолевого агента по настоящему изобретению, предназначенных для перорального введения, являются таблетки, порошки, гранулы, капсулы, растворы, сиропы, эликсиры, масляные или водные суспензии и тому подобное. Составы, предназначенные для введения путем инъекций, могут содержать стабилизирующие агенты, антисептики, солюбилизирующие агенты и тому подобное. Составы для инъекций, содержащие вспомогательные агенты, могут быть помещены в контейнеры и быть приготовлены из твердых составов, полученных посредством сушки вымораживанием, и тому подобное, которые могут быть вновь растворены перед использованием.

Жидкие составы включают растворы, суспензии, эмульсии и тому подобное. Суспендирующие агенты, эмульгаторы и тому подобное могут быть использованы в качестве добавок при приготовлении указанные составов.

Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения раковых заболеваний у млекопитающих, в частности у людей. В случае если они предназначены для людей, их предпочтительно вводить один раз в день, многократно, при соответствующих интервалах.

Дозировка при введении составляет примерно от 0,5 примерно до 50 мг/м² поверхности тела, предпочтительно примерно от 1 примерно до 20 мг/м² поверхности тела.

Краткое описание чертежей

Фиг.1 показывает действие соединений SHR-110008 и Taxotere на вес опухолей у голых мышей.

Фиг.2 показывает действие соединения Shr1021-47 на вес опухолей у голых мышей, где *P<0,01.

Подробное описание изобретения

Следующие далее примеры и примеры исследований предусматриваются для специалистов в данной области, для более четкого понимания и осуществления настоящего изобретения, они не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения, но только как иллюстративные и репрезентативные.

Стадия 1

9 -10-деацетил-9-дигидробаккатин III

10-Деацетилбаккатин III A (1,4 г, 2,57 ммоль, 1,0 экв.), 40 мл безводного дихлорметана и 40 мл безводного 1,4-диоксана добавляют в 250 мл сухую трехгорлую колбу с получением раствора, в то же время, поддерживая температуру 25~30°C в атмосфере аргона. И затем при перемешивании в раствор добавляют боргидрид трет-бутиламмония (2,65 г, 0,3 ммоль, 4,0 экв.), с образованием смеси. По завершении добавления, смесь перемешивают при 25~30°C в течение 19 часов. Показано, что исходные материалы полностью прореагировали во время реакции в соответствии с тонкослойной хроматографией (этилацетат:метанол = 40:1). Смесь охлаждают на бане лед/соль и доводят до pH 6 с помощью 1 н. раствора хлористоводородной кислоты. И затем в смесь быстро добавляют воду, и ледяную баню удаляют. Смесь перемешивают в течение 0,5-1 часа. Смесь экстрагируют этилацетатом (100 мл × 4), с получением органических экстрактов. Объединенные органические экстракты промывают водой (25 мл × 1) и насыщенным раствором соли (25 мл × 1), сушат над безводным сульфатом натрия в течение ночи, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, с получением остатка. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с помощью гексана:этилацетата:метанола=15:25:1) в качестве элюента, с получением 9 -10-деацетил-9-дигидробаккатина III B (1,2 г беловатого твердого продукта) с выходом 85%.

Rf=0,42 (этилацетат:метанол=40:1 (об./об.)).

MW=546, ESI-MS: [M+H]⁺=547.

¹H-ЯМР (CD₃OD, 400 МГц): 8,11-7,4 (м, 5H, Ar-H), 6,1 (д, J=5,3 Гц, 1H, C₂ -H), 5,1 (д, J=5,7 Гц, 1H, C₁₀-H), 5,0 (д, J=8,9 Гц, 1H, C₅-H), 4,8 (ушир., 1H, C₁₃-H), 4,6-4,5 (д, J=5,7 Гц, 1H, C₉-H), 4,3-4,2 (д, J=7,7 Гц, 1H, C₂₀-H ), 4,2-4,1 (д, J=7,7 Гц, 1H, C₂₀-H ), 3,9 (дд, J=7,3 Гц, J'=9,7 Гц, 1H, C₇ -H), 3,3-3,2 (д, J=4,9 Гц, 1H, C₃-H), 2,6-2,4 (м, 1H, C₆-H ), 2,4-2,3 (м, 1H, C₁₄-H ), 2,3-2,2 (м, 1H, C₁₄-H ), 2,2 (с, 3H, Ac-CH₃), 1,9 (с, 3H, C ₁₈-H), 1,9-1,8 (м, 1H, C₆-H ), 1,7 (с, 3H, C₁₆-H), 1,6 (с, 3H, C ₁₉-H), 1,2 (с, 3H, C₁₇-H).

Стадия 2

9 -10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)баккатин III

Полученные соединения со стадии 1, 9 -10-деацетил-9-дигидробаккатин III B (1,2 г, 2,20 ммоль, 1,0 экв.) суспендируют в 60 мл безводного дихлорметана с образованием раствора. И затем в раствор добавляют акролеиндиэтилацеталь (1,68 мл, 11,0 ммоль, 5,0 экв.) и дихлорид бис(циклопентадиенил)титана (IV) (0,05 г, 0,22 ммоль, 0,2 экв.) с перемешиванием в атмосфере аргона с образованием смеси. По завершении добавления, смесь перемешивают в течение 18 часов, в то же время поддерживая температуру при 24~28°C. Показано, что исходные материалы полностью прореагировали во время реакции в соответствии с тонкослойной хроматографией (этилацетат:метанол = 40:1). Реакцию гасят с помощью триэтиламина (доводят до pH 7), и удаляют раствор с помощью роторного испарителя при пониженном давлении, с получением остатка. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с гексаном:этилацетатом = 1:1 в качестве элюента, с получением 9 -10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)баккатин III C (0,979 г беловатого твердого продукта) с выходом 75,9%.

Rf=0,44 (элюенты: гексан:этилацетат=1:1 (об./об.)).

MW=584, ESI-MS: [M+H]⁺=585.

¹H-ЯМР (CD₃Cl₃, 400 МГц): 8,2-7,4 (м, 5H, Ar-H), 6,2-5,9 (м, 1H, CH₂=CH-H), 6,1-6,0 (д, J=5,7 Гц, 1H, C₂-H), 5,6-5,5 (д, J=17,4 Гц, 1H, транс-CH₂=CH-), 5,5-5,4 (д, J=10,9 Гц, 1H, цис-CH₂=CH-), 5,3 (д, J=7,3 Гц, 1H, C₁₀ -H), 5,2 (д, J=6,1 Гц, 1H, C₅-H), 5,1 (с, 1H, OH), 4,8 (ушир., 1H, C₁₃-H), 4,6 (д, J=8,1 Гц, 1H, CH ₂=CH-), 4,4 (д, J=8,5 Гц, 1H, C₂₀-H ), 4,3 (д, J=8,5 Гц, 1H, C₂₀-H ), 4,1 (м, 1H, C₇-H), 3,9 (д, J=6,9 Гц, 1H, C₉-H), 3,1-3,0 (д, J=5,3 Гц, C₃-H), 2,4-2,3 (м, 1H, C₆-H ), 2,4-2,3 (с, 3H, Ac-CH₃), 2,3-2,1 (м, 2H, C₁₄-H), 2,0-1,9 (м, 1H, C₆-H ), 1,9 (с, 3H, C₁₈-H), 1,8 (с, OH), 1,7-1,6 (с, 3H, C₁₆-H), 1,6 (с, 3H, C₁₉-H), 1,3-1,2 (с, OH), 1,2 (с, 3H, C₁₇-H).

Стадия 3

9 -10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)-7-O-триэтилсилилбаккатин III

Полученное соединение со стадии 2, 9 -10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)баккатин III C (2,298 г, 3,93 ммоль, 1,0 экв.) растворяют в безводном дихлорметане (378 мл) в 500-мл сухой трехгорлой колбе в атмосфере аргона с получением раствора. После охлаждения на бане сухой лед/ацетон в раствор добавляют 2,6-ди-трет-бутилпиридин (1,27 г, 5,62 ммоль, 1,56 экв.), поддерживая температуру при -78°C, затем к раствору по каплям медленно добавляют триэтилсилилтрифторметансульфонат (1,38 мл, 6,13 ммоль, 1,56 экв.) с получением смеси. По завершении добавления смесь перемешивают при -78°C в течение 40 минут. Показано, что исходные материалы полностью прореагировали во время реакции в соответствии с тонкослойной хроматографией (гексан:этилацетат = 2:1). Реакцию гасят добавлением насыщенного водного раствора бикарбоната натрия (50 мл). Баню сухой лед/ацетон удаляют, и температуру смеси поднимают до комнатной температуры. Смесь разделяют на органическую фазу и водную фазу. Водную фазу экстрагируют этилацетатом (100 мл × 4), с получением органических экстрактов. Объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (25 мл × 1), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, с получением остатка. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с помощью гексана:этилацетата = 3:1 в качестве элюента, с получением 9 -10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)-7-O-триэтилсилилбаккатина III D (2,208 г пены или воскообразного твердого продукта) с выходом 80,8%.

Rf=0,49 (элюенты: гексан:этилацетат=1:1 (об./об.)).

MW=698, ESI-MS: [M+H]⁺=699.

¹H-ЯМР (CD₃Cl₃, 400 МГц): 8,2-7,4 (м, 5H, Ar-H), 6,3-6,1 (м, 1H, CH₂=CH-H), 5,9 (д, J=5,3 Гц, 1H, C₂-H), 5,6-5,5 (д, J=17,8 Гц, 1H, транс-CH₂=CH-), 5,5-5,4 (д, J=10,7 Гц, 1H, цис-CH₂=CH-), 5,4-5,3 (д, J=8,5 Гц, 1H, C₁₀-H), 5,1 (д, J=6,1 Гц, 1H, C₅-H), 4,9-4,7 (м, 1H, C₉-H), 4,8-4,7 (ушир., 1H, C₁₃-H), 4,6 (ушир., 1H, OH), 4,4-4,3 (д, AB-тип, J=8,5 Гц, 2H, C ₂₀-H), 4,0-3,9 (м, 1H, C₇-H), 3,2 (д, J=5,3 Гц, 1H, C₃-H), 2,3 (с, 3H, Ac-CH₃), 2,5-2,0 (м, 4H, C₆-H, C₁₄-H), 2,0-1,9 (с, 1H, C ₁₈-H), 1,8-1,7 (с, 1H, OH), 1,6 (с, 3H, C₁₆-H), 1,6-1,5 (с, 3H, C₁₉-H), 1,1 (с, 3H, C₁₇ -H), 1,1-0,9 (т, J=7,7 Гц, 9H, SiCH₂CH ₃), 0,7-0,6 (кв, J=7,7 Гц, 6H, SiCH₂CH ₃).

Стадия 4

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-(триэтилметилсилокси)-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)-7-O-триэтилсилилбаккатин III

Полученные соединения со стадии 3, 9 -10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)-7-O-триэтилсилилбаккатин III D (1,85 г, 2,65 ммоль, 1,0 экв.) растворяют в 68,5 мл безводного тетрагидрофурана в атмосфере аргона и охлаждают до -55°C с получением первого раствора. При медленном перемешивании к первому раствору добавляют по каплям раствор литий гексаметилдисилазида в безводном тетрагидрофуране (4 мл, 1M/л, 1,5 экв.) с получением второго раствора, перемешивая его при температуре -55°C в течение 0,5 часа. Ко второму раствору добавляют по каплям раствор (3R,4R)-1-(трет-бутилкарбоксил)-3-(триэтилметилсилокси)-4-фенилнитрогетеробутил-2-она (3,02 г, 8,0 ммоль, 3,0 экв.) в безводном тетрагидрофуране (21,5 мл) с образованием смеси. По завершении добавления баню сухой лед/ацетон удаляют. Смесь перемешивают в течение 0,5-1 часа на бане лед/вода и добавляют 180 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия. По завершении добавления смесь экстрагируют этилацетатом (180 мл × 4) с образованием органических экстрактов. Объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (50 мл × 1), сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с помощью гексана:этилацетата = 8:1 в качестве элюента, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-(триэтилметилсилокси)-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)-7-O-триэтилсилилбаккатина III E (2,432 г беловатого твердого продукта) с выходом 85,6%.

Rf=0,34 (гексан:этилацетат = 8:1 (об./об.)).

MW-1075, ESI-MS: [M+H]⁺=1076.

¹H-ЯМР (CD₃Cl₃, 400 МГц): 8,2-7,2 (м, 10H, Ar-H), 6,3-6,0 (м, 2H), 5,9 (д, J=5,3 Гц, 1H, C₂-H), 5,6-5,5 (д, J=17,5 Гц, 1H, транс- CH₂=CH-), 5,5-5,4 (д, J=10,4 Гц, 1H, цис-CH ₂=CH-), 5,6-5,4 (м, 1H, C₉-H), 5,3-5,2 (д, J=9,1 Гц, 1H, С₁₀-H), 5,1-5,0 (д, J=5,9 Гц, 1H, C₅-H), 4,9-4,8 (м, 1H), 4,6 (д, J=8,8 Гц, 1H), 4,6-4,5 (ушир., 1H, OH), 4,5-4,3 (д, AB-тип, J=8,5 Гц, 2H, C₂₀ -H), 4,0-3,9 (дд, 1H, J=5,1 Гц, J'=10,5 Гц), 3,2 (д, J=5,6 Гц, 1H), 2,5 (с, 3H, Ac-CH₃), 2,5-2,0 (м, 5H), 1,8 (с, 3H), 1,6-1,5 (с, 12H, трет-Bu, CH₃), 1,4-1,3 (с, 3H), 1,3-1,2 (с, 3H), 1,1-0,9 (т, J=7,8 Гц, 9H), 0,8-0,7 (т, J=8,0 Гц, 9H), 0,7-0,6 (м, 6H), 0,5-0,3 (м, 6H).

Стадия 5

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)баккатин III

Полученное соединение со стадии 4, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-(триэтилметилсилокси)-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)-7-O-триэтилсилилбаккатин III E (0,819 г, 0,761 ммоль, 1,0 экв.) добавляют в 10 мл безводного тетрагидрофурана в 100-мл сухой трехгорлой колбе с образованием раствора в атмосфере аргона. Раствор тетрабутиламмоний фторида тригидрата (0,96 г, 3,04 ммоль, 4,0 экв.) в 10 мл безводного тетрагидрофурана по каплям добавляют к раствору на бане лед/соль в течение 30 минут. В реакционную смесь добавляют 40 мл насыщенного раствора соли и 40 мл этилацетата, экстрагируют этилацетатом (100 мл × 4) с образованием органических экстрактов. Объединенные органические экстракты сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с образованием остатка. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с помощью гексана:этилацетата:метанола=25:15:1 в качестве элюента, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)баккатина III F (0,596 г беловатого твердого продукта) с выходом 92,4%.

Rf=0,38 (гексан:этилацетат:метанол=25:15:1(об./об.)).

MW=847, ES1-MS: [M+H]⁺=848,

¹H-ЯМР (CD₃Cl₃, 400 МГц): 8,2-7,2 (м, 10H, Ar-H), 6,2-5,9 (м, 3H), 5,7-5,6 (д, J=9,9 Гц, 1H), 5,6-5,5 (д, J=16,9 Гц, 1H, транс-CH₂ =CH-), 5,5-5,4 (д, J=10,5 Гц, 1H, цис-CH₂=CH-), 5,4-5,2 (м, 1H), 5,3 (д, J=7,2 Гц, 1H), 5,2 (д, J=6,4 Гц, 1H, CH₂=CH-), 5,1 (ушир., 1H, OH), 4,7-4,6 (ушир., 1H), 4,6-4,5 (д, J=7,8 Гц, 1H), 4,4-4,2 (дд, AB-тип, J=8,6 Гц, 2H, C₂₀-H), 4,2 (ушир., 1H), 4,1 (м, 1H), 3,9-3,8 (д, J=7,0 Гц, 1H), 2,9 (д, J=4,8 Гц, 1H), 2,4-2,3 (дд, J=9,8 Гц, J'=15,2 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H, Ac-CH₃), 2,3-2,0 (м, 3H), 1,9 (с, 1H), 1,7 (с, 3H, CH₃), 1,6 (с, 3H, CH₃), 1,6-1,5 (с, 3H, CH₃), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,3 (с, 3H, CH₃).

Стадия 6

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2,3-дигидроксилпропилиден)баккатин III

Полученное соединение со стадии 5, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-аллилиден)баккатин III F (0,596 г, 0,703 ммоль, 1,0 экв.) далее добавляют в N-оксид N-метилморфолина (0,412 г, 3,51 ммоль, 5,0 экв.) в 100-мл трехгорлую колбу в атмосфере аргона, получая первый раствор, а затем первый раствор растворяют в смешанном растворе 15 мл тетрагидрофурана, 15 мл ацетона и 15 мл воды с образованием второго раствора. При перемешивании раствор тетроксида осмия (0,725 мл, 35,7 мг, 0,2 экв.) в трет-бутиловом спирте добавляют во второй раствор с образованием смеси, поддерживая температуру при 28°C в течение ночи. По завершении добавления смесь гасят с помощью 90 мл 10% водного раствора тиосульфата натрия, перемешивают 10 минут и экстрагируют этилацетатом (100 мл × 3) с получением органических экстрактов. Объединенные органические экстракты промывают 25 мл насыщенного водного бикарбоната натрия и 25 мл насыщенного раствора соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с образованием остатка. Остаток очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с помощью дихлорметана:метанола = 20:1 в качестве элюента, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2,3-дигидроксилпропилиден)баккатина III G (0,61 г беловатого твердого продукта) с выходом 98%.

Rf-0,24 (дихлорметан:метанол = 20:1 (об./об.)).

MW=881, ESI-MS: [M+H]⁺=882.

¹H-ЯМР (CD₃Cl₃, 400 МГц): 8,2-7,2 (м, 10H, Ar-H), 6,2-6,1 (м, H), 6,1-6,0 (д, J=5,4 Гц, 1H), 5,7-5,6 (м, 1H), 5,4-5,2 (м, 2H), 5,1 (с, 1H), 4,9 (д, J=6,5 Гц, 1H), 4,9-4,7 (м, 1H), 4,6 (с, 1H), 4,5-4,2 (дд, AB-тип, J=8,5 Гц, 2H), 4,2-4,0 (м, 2H), 4,0-3,7 (м, 5H), 2,9 (д, J=6,8 Гц, 1H), 2,5-2,3 (дд, J=9,8 Гц, J'=15,2 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H), 2,3-2,2 (м, 2H), 2,2-2,0 (м, 2H), 1,9 (ушир., 1H), 1,7 (с, 3H, CH₃), 1,65 (с, 3H, CH₃), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,4-1,3 (с, 3H, CH₃, два изомера).

Стадия 7

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатин III

Полученное соединение со стадии 6, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2,3-дигидроксилпропилиден)баккатин III G (0,556 г, 0,63 ммоль, 1,0 экв.) растворяют в смешанном растворе 7 мл тетрагидрофурана, 7 мл метанола и 7 мл воды с образованием раствора при комнатной температуре. И затем, при перемешивании, добавляют в раствор периодата натрия (0,887 г, 4,16 ммоль, 6,6 экв.) с образованием смеси. По завершении добавления, смесь перемешивают в течение 2 часов при комнатной температуре. Показано, что исходные материалы полностью прореагировали во время реакции в соответствии с тонкослойной хроматографией (дихлорметан:метанол = 20:1). В полученную смесь добавляют 50 мл воды и 50 мл насыщенного раствора соли, экстрагируют этилацетатом (80 мл × 3). Объединенные органические экстракты промывают 25 мл воды и 25 мл насыщенного раствора соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H (0,582 г беловатого твердого продукта), который используется следующим образом.

Пример 1

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(2S,4S)-2-окса-5-аза-бицикло[2,2,1]гепт-5-илметил]баккатин III

Полученное соединение со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатин III H (0,545 г, 0,63 ммоль, 1,0 экв.) растворяют в 30 мл безводного метанола в 100-мл трехгорлой колбе с образованием раствора, в атмосфере аргона. И затем малое количество молекулярного сита для сушки (4Е) и гидрохлорида (S,S)-2-окса-5-аза-бицикло[2,2,1]гептана (0,568 г, 4,16 ммоль, 6,6 экв.) добавляют в раствор во время перемешивания при комнатной температуре с образованием смеси. По завершении добавления смесь перемешивают в течение 30 минут при комнатной температуре. В смесь добавляют цианоборгидрид натрия (0,261 г, 4,16 ммоль, 6,6 экв.). По завершении добавления смесь перемешивают в течение 1,5 часов при комнатной температуре. Показано, что исходные материалы полностью прореагировали во время реакции в соответствии с тонкослойной хроматографией (дихлорметан:этилацетат:метанол = 10:10:1). Полученную смесь гасят 70 мл раствора насыщенного бикарбоната натрия, экстрагируют этилацетатом (100 мл × 4) с образованием органических экстрактов. Объединенные органические экстракты промывают 25 мл воды и 25 мл насыщенного раствора соли, сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении с образованием остатка. Остаток сначала очищают с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с помощью гексана:дихлорметана:этилацетата:метанола=20:10:10:2 в качестве элюента, затем с помощью дихлорметана:этилацетата:метанола=30:10:2, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(2S,4S)-2-окса-5-аза-бицикло[2,2,1]гепт-5-илметил]баккатина III I (0,412 г беловатого твердого продукта) с выходом 70%.

Rf=0,29 (дихлорметан:этилацетат:метанол=10:10:1 (об./об.))

MW=933, ESI-MS: [M+H]⁺=933,9.

¹H-ЯМР (CD₃Cl₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,5 Гц, 2H, Ar-H), 7,7-7,5 (т, J=7,0 Гц, 1H, Ar-H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,1-6,0 (м, 2H), 5,7-5,6 (д, J=9,4 Гц, 1H), 5,3 (д, J=9,4 Гц, 1H), 5,2 (д, J=7,0 Гц, 1H), 5,1 (с, 1H), 5,0-4,9 (ушир., 1H), 4,7-4,6 (д, J=8,2 Гц, 1H), 4,6 (ушир., 1H), 4,4 (ушир., 1H), 4,4-4,2 (дд, AB-тип, J=8,4 Гц, 2H), 4,2-4,0 (м, 2H), 4,0 (д, J=7,9 Гц, 1H), 3,8 (д, J=7,1 Гц, 1H), 3,7-3,6 (д, J=7,8 Гц, 1H), 3,6 (ушир., 1H), 3,1-3,0 (м, 2H), 3,0-2,9 (м, 1H), 2,9 (д, J=4,7 Гц, 1H), 2,7 (м, J=10,2 Гц, 1H), 2,4 (дд, J=9,7 Гц, J'=14,6 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H, CH₃), 2,3-2,2 (м, 1H), 2,2-2,0 (м, 2H), 1,9 (ушир., 1H), 1,9-1,8 (м, 1H), 1,8-1,7 (м, 1H), 1,65 (с, 3H, CH₃), 1,60 (с, 3H, CH₃ ), 1,55 (с, 3H, CH₃), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,3 (с, 3H, CH₃).

Пример 2

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(2R,4R)-2-окса-5-аза-бицикло[2,2,1]гепт-5-илметил]баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с гидрохлоридом (R,R)-2-окса-5-аза-бицикло[2,2,1]гептана, в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(2R,4R)-2-окса-5-аза-бицикло[2,2,1]гепт-5-илметил]баккатина III J (0,4 г беловатого твердого продукта) с выходом 68%.

Rf=0,32 (дихлорметан:этилацетат:метанол=10:10:1 (об./об.)).

MW=933, ESI-MS: [M+H]⁺ =933,9.

¹H-ЯМР (CD₃Cl ₃, 400 МГц): 8,11 (д, J=7,3 Гц, 2H, Ar-H), 7,59 (т, J=7,3 Гц, 1H, Ar-H), 7,19-7,53 (м, 7H), 6,1-6,0 (м, 2H), 5,6 (д, J=9,0 Гц, 1H), 5,3 (д, J=7,1 Гц, 1H), 5,2 (д, J=7,0 Гц, 1H), 5,1 (с, 1H), 5,0 (ушир., 1H), 4,7-4,6 (д, J=7,8 Гц, 1H), 4,6 (с, 1H), 4,5-4,4 (с, 1H), 4,4-4,3 (дд, AB-тип, J=8,2 Гц, 2H), 4,2-4,0 (м, 3H), 3,8 (д, J=7,0 Гц, 1H), 3,7 (д, J=8,5 Гц, 1H), 3,6 (ушир., 1H), 3,1 (м, 1H), 3,1-2,9 (м, 2H), 2,9 (д, J=4,7 Гц, 1H), 2,7 (м, 1H), 2,4 (дд, J=9,8 Гц, J'=14,9 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H, CH₃ ), 2,3-2,2 (м, 1H), 2,2-2,0 (м, 2H), 1,9 (ушир., 1H), 1,8 (м, 1H), 1,7-1,6 (м, 1H), 1,7 (с, 3H, CH₃), 1,65 (с, 3H, CH₃), 1,6 (с, 3H, CH₃), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,3 (с, 3H, CH₃).

Пример 3

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-метоксилметиламиноэтилиден)баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с гидрохлоридом O,N-диметилгидроксиламина в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-метоксиметиламиноэтилиден)баккатина III K (0,48 г беловатого твердого продукта) с выходом 85%.

Rf=0,39 (гексан:этилацетат:метанол=20:20:1 (об./об.)).

MW=895, ESI-MS: [M+H]⁺=895,7, [M+Na] ⁺=917,6.

¹H-ЯМР (CD₃ Cl₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,4 Гц, 2H, Ar-H), 7,6 (т, J=7,1 Гц, 1H, Ar-H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,2-6,0 (м, 2H), 5,7-5,6 (м, 1H), 5,3 (д, J=6,6 Гц, 1H), 5,2 (д, J=6,3 Гц, 1H), 5,1 (ушир., 1H), 5,1-5,0 (ушир., 1H), 4,7-4,4 (м, 1H), 4,6 (ушир., 1H), 4,4-4,2 (дд, AB-тип, J=8,6 Гц, 2H), 4,2 (м, 1H), 4,1 (м, 1H), 3,8 (д, J=6,6 Гц, 1H), 3,6-3,5 (с, 3H, OCH₃), 3,1-3,0 (м, 2H), 2,95 (ушир., 1H), 2,9 (м, 1H), 2,85 (ушир., 1H), 2,7-2,6 (с, 3H, NCH₃ ), 2,4-2,3 (дд, J=10,8 Гц, J'=14,1 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H, CH ₃), 2,3-2,0 (м, 1Н), 1,9 (ушир., 1Н), 1,7 (с, 3H, CH ₃), 1,60 (с, 3H, CH₃), 1,55 (с, 3Н, CH₃ ), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,3 (с, 3H, CH₃).

Пример 4

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(4-пирролидин)пиперидинэтилиден]баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с 4-пирролидин-1-ил-пиперидином в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(4-пирролидин)пиперидинэтилиден]баккатина III L (0,402 г беловатого твердого продукта) с выходом 64,5%.

Rf=0,29 (дихлорметан:метанол:триэтиламин=40:4:0,25 (об./об.)).

MW=988, ESI-MS: [M+H]⁺ =988,9.

¹H-ЯМР (CD₃Cl ₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,6 Гц, 2H, Ar-H), 7,6 (т, J=7,4 Гц, 1H, Ar-H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,1 (ушир., 2H), 6,0 (д, J=4,7 Гц, 1H), 5,7 (д, J=9,8 Гц, 1H), 5,2 (д, J=7,4 Гц, 1H), 5,1 (ушир., 1H), 5,0 (т, J=4,4 Гц, 1H), 4,7 (д, J=8,2 Гц, 1H), 4,6 (ушир., 1H), 4,4-4,2 (дд, AB-тип, J=8,6 Гц, 2H), 4,1-4,0 (м, 1H), 3,8 (д, J=7,4 Гц, 1H), 3,2-3,0 (м, 6H), 2,9 (ушир., 1H), 2,8-2,7 (м, 2H), 2,3 (с, 3H, CH₃), 2,3-1,9 (м, 12H), 1,9 (с, 1H), 1,9-1,8 (м, 1H), 1,65 (с, 3H), 1,55 (с, 3H), 1,5 (с, 3H), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,3 (с, 3H), 1,4-1,3 (м, 2H), 1,3-1,2 (м,2H).

Пример 5

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(S)-(2-пирролидин-1-метил)пиперидинэтилиден]баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с (S)-(+)-1-(2-пирролидинметил)пирролидином в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(S)-(2-пирролидин-1-метил)пиперидинэтилиден]баккатина III M (0,457 г беловатого твердого продукта) с выходом 73,3%.

Rf=0,2 (дихлорметан:метанол:триэтиламин=40:2:0,25 (об./об.)).

MW=988, ESI-MS: [M+H]⁺ =988,8.

¹H-ЯМР (CD₃Cl ₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,6 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,1 (ушир., 1H), 6,0 (д, J=5,1 Гц, 1H), 5,7-5,6 (д, J=9,8 Гц, 1H), 5,2 (д, J=7,5 Гц, 1H), 5,1 (ушир., 1H), 5,0 (т, J=4,5 Гц, 1H), 4,6 (ушир., 1H), 4,4-4,2 (дд, AB-тип, J=8,6 Гц, 2H), 4,1-4,0 (ушир., 1H), 3,8 (д, J=7,0 Гц, 1H), 3,3-3,2 (м, 2H), 3,0-2,8 (м, 6H), 2,8-2,6 (м, 2H), 2,6-2,4 (м, 1H), 2,4-2,3 (дд, J=9,8 Гц, J'=15,3 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H, CH₃ ), 2,3-2,0 (м, 4H), 1,9 (ушир., 5H), 1,9-1,7 (м, 4H), 1,7 (с, 3H, CH₃), 1,6 (м, 5H), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,4-1,3 (т, 2H), 1,3 (с, 3H, CH₃).

Пример 6

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-(2- фторэтил)метиламиноэтилиден]баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с (2-фторэтил)метиламинацетатом в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-(2-фторэтил)метиламиноэтилиден]баккатина III N (0,322 г беловатого твердого продукта) с выходом 56%.

Rf=0,17 (дихлорметан:метанол:триэтиламин=10:10:1 (об./об.)).

MW=911, ESI-MS: [M+H]⁺ =911,8.

¹H-ЯМР (CD₃Cl ₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,0 Гц, 2H), 7,6 (т, J=7,0 Гц, 1H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,1-6,0 (м, 2H), 5,7 (д, J=9 Гц, 1H), 5,3 (д, J=8 Гц, 1H), 5,1 (ушир., 1H), 5,0 (ушир., 1H), 4,6 (ушир., 2H), 4,5 (т, J=5 Гц, 1H), 4,4-4,2 (дд, AB-тип, J=8 Гц, 1H), 4,1 (ушир., 1H), 3,8 (д, J=7 Гц, 1H), 3,0-2,8 (м, 6H), 2,5 (с, 3H, CH₃ ), 2,4 (дд, J=9 Гц, J'=15 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H, CH₃ ), 2,3-2,0 (м, 4H), 1,9 (ушир., 1H), 1,7 (с, 3H, CH₃ ), 1,6 (с, 3H, CH₃), 1,55 (с, 3H, CH₃), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,3 (с, 3H, CH₃).

Пример 7

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(R)-(2-пирролидин-1-метил)пиперидинэтилиден]баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с (R)-(+)-1-(2-пирролидинметил)пирролидином в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(R)-(2-пирролидин-1-метил)пиперидинэтилиден]баккатина III O (0,362 г беловатого твердого продукта) с выходом 58%.

Rf=0,28 (гексан:этилацетат:метанол:триэтиламин=20:20:1:1 (об./об.)).

MW=988, ES1-MS: [M+H]⁺ =988,9.

¹H-ЯМР (CD₃Cl ₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,6 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,1-6,0 (м, 2H), 5,7-5,6 (д, J=9,4 Гц, 1H), 5,3 (д, J=10,3 Гц, 1H), 5,2 (д, J=7,3 Гц, 1H), 5,1 (с, 1H), 5,0 (дд, AB-тип, J=3,4 Гц, J'=6,4 Гц, 1H), 4,7 (ушир., 1H), 4,6 (с, 1H), 4,4-4,3 (дд, AB-тип, J=8,6 Гц, 1H), 4,2 (ушир., 1H), 4,1 (м, 1H), 3,8 (д, J=7,3 Гц, 1H), 3,3-3,2 (м, 2H), 2,9 (м, 1H), 2,8-2,4 (м, 1H), 2,4-2,3 (м, 1H), 2,3 (с, 3H, CH₃), 2,3-1,9 (м, 4H), 1,9 (с, 1H), 1,9-1,7 (м, 1H), 1,7 (с, 3H, CH ₃), 1,6 (м, 5H), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,3 (с, 3H, CH ₃).

Пример 8

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(4-морфолин)пиперидинэтилиден]баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с 4-пиперидин-4-ил-морфолином в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(4-морфолин)пиперидинэтилиден]баккатина III P (0,47 г беловатого твердого продукта) с выходом 74,4%.

Rf=0,18 (гексан:этилацетат:метанол:триэтиламин=30:10:3:2 (об./об.)).

MW=1004, ESI-MS: [M+H]⁺ =1004,9.

¹H-ЯМР (CD₃Cl ₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,6 (т, J=7,4 Гц, 1H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,1-6,0 (м, 2H), 5,6 (д, J=9,8 Гц, 1H), 5,3 (д, J=6,6 Гц, 1H), 5,2 (д, J=6,3 Гц, 1H), 5,1 (ушир., 2H), 5,0 (ушир., 1H), 4,7 (д, J=8,2 Гц, 1H), 4,6 (ушир., 1H), 4,4-4,3 (дд, AB-тип, J=8,5 Гц, 2H), 4,0 (м, 1H), 3,8 (д, J=7,2 Гц, 1H), 3,8-3,7 (м, 4H), 3,2-3,0 (м, 2H), 2,9-2,8 (м, 1H), 2,8-2,7 (м, 2H), 2,6-2,5 (м, 4H), 2,4-2,3 (дд, J=9,8 Гц, J'=15,3 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H, CH₃), 2,3-2,0 (м, 6H), 1,9 (ушир., 1H), 1,9-1,7 (м, 2H), 1,7 (с, 3H, CH₃), 1,65 (с, 3H, CH₃ ), 1,55 (с, 3H, CH₃), 1,4 (с, 3H), 1,3 (с, 9H, трет-Bu).

Пример 9

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(циклопропиламино)пиперидинэтилиден]баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с циклопропилпиперидин-4-ил-амином в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-[2-N-(циклопропиламино)пиперидинэтилиден]баккатина III Q (0,29 г беловатого твердого продукта) с выходом 47%.

Rf=0,20 (гексан:дихлорметан:этилацетат:метанол=30:10:2:3 (об./об.)).

MW=974, ESI-MS: [M+H]⁺ =974,9.

¹H-ЯМР (CD₃Cl ₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,6 (т, J=7,3 Гц, 1H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,1-6,0 (м, 2H), 5,6 (д, J=9,8 Гц, 1H), 5,3 (д, J=7,5 Гц, 1H), 5,2 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,1 (ушир., 1H), 5,0 (т, J=3,9 Гц, 1H), 4,7 (д, J=8,3 Гц, 1H), 4,6 (ушир., 1H), 4,4-4,2 (дд, AB-тип, J=18,5 Гц, J'=9,8 Гц, 2H), 4,2-4,1 (м, 1H), 4,1-4,0 (м, 1H), 3,8 (д, J=7,2 Гц, 1H), 3,1-2,7 (м, 5H), 2,6-2,5 (м, 3H), 2,4-2,3 (дд, J=9,8 Гц, J'=15,3 Гц, 1H), 2,3 (с, 3H, CH₃), 2,3-1,9 (м, 9H), 1,9-1,8 (м, 3H), 1,6 (с, 3H, CH₃), 1,55 (с, 3H, CH₃), 1,5 (с, 3H, CH ₃), 1,4 (с, 9H, трет-Bu), 1,3 (с, 3H, CH₃).

Пример 10

9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2- морфолинэтилиден)баккатин III

Указанное в заголовке соединение получают таким же способом, как описывается в Примере 1, посредством взаимодействия полученного соединения H со стадии 7, 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-ацетальдегидбаккатина III H, с морфолином в качестве исходных материалов, с получением 9 -13-O-[(2R,3S)-3-(трет-бутилоксикарбониламино)-2-гидроксил-3-фенилпропионил]-10-деацетил-9-дигидро-9,10-O-(2-морфолинэтилиден)баккатина III R (0,517 г беловатого твердого продукта) с выходом 89%.

Rf=0,22 (гексан:этилацетат:метил:триэтиламин=20:20:1:1 (об./об.)).

MW=921, ESI-MS: [M+H]⁺ =921,7.

¹H-ЯМР (CD₃Cl ₃, 400 МГц): 8,1 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,59 (т, J=7,3 Гц, 1H), 7,5-7,2 (м, 7H), 6,1-6,0 (м, 2H), 5,6 (д, J=10,0 Гц, 1H), 5,3 (д, J=10,0 Гц, 1H), 5,2 (д, J=6,9 Гц, 1H), 5,1 (с, 1H), 5,0 (т, J=3,9 Гц, 1H), 4,7 (д, J=8,3 Гц, 1H), 4,6 (с, 1H), 4,4 (д, J=8,3 Гц, 1H), 4,3 (д, J=8,3 Гц, 1H), 4,2-4,0 (м, 2H), 3,9-3,6 (м, 5H), 2,9 (д, J=4,9, 1H), 2,8-2,7 (дд, AB-тип, J=18,4 Гц, J'=4,4 Гц, 2H), 2,7-2,5 (м, 4H), 2,3 (с, 3H), 2,5-1,9 (м, 4H), 1,9 (с, 1H), 1,65 (с, 3H), 1,6 (с, 3H), 1,4 (с, 9H), 1,3 (с, 6H).

ПРИМЕР ИССЛЕДОВАНИЯ 1

Терапевтические воздействия SHR-110008 и Taxotere в отношении привитых опухолей немелкоклеточного рака легких (NSCLC) A549 человека у голых мышей

Исследуемые животные:

Виды животных: голые мыши BALB/cA.

Количество животных: 9 мышей в контрольной группе, 5 мышей в группе, которой вводят лекарственное средство.

Окружающая среда: уровень SPF.

Протокол исследований.

Животных адаптируют в домиках для животных в течение 1 недели, и инокулируют им гиподермически опухоли NSCLC A549 человека. После того как опухоли вырастут до 100-300 мм ³, мышей случайным образом разделяют на группы с введением SHR-110008 и Taxotere(d0). Дозы SHR-110008 составляют 10 и 16 мг/кг, а дозы Taxotere составляют 12 и 19 мг/кг, раздельно. Способ введения представляет собой внутривенную инъекцию. SHR-110008 (10 мг/кг) и Taxotere (12 мг/кг) вводят в d0, d4, d8, в целом три раза. SHR-110008 (16 мг/кг) и Taxotere (19 мг/кг) вводят в d0, d7, в целом два раза. Объем опухоли и массу мышей измеряют 2-3 раза в неделю. Формула вычисления объема опухоли (V) представляет собой: V = 1/2 × a × b², a: длина опухоли, b: ширина опухоли.

Результат:

Таблица 1 Внутривенная инъекция (i.v.); терапевтическое воздействие SHR110008, Taxotere в отношении привитых опухолей NSCLC A549 человека у голых мышей
Группа	Доза	Введение	Количество животных	Масса тела (г)	TV (X±SD, мм3)	RTV	T/C
	(мг/кг)		d0/dn	d0	dn	d0	dn	X±SD	(%)
Контроль			9/9	17,5	16,2	140±15	3056±11161	22,13±9,5
SHR-110008	10	d0,4,8	5/5	18,4	16,9	129±20	1383±243	10,81±1,79	48,8*
SHR-110008	16	d0,7	5/5	18,0	16,6	143±38	612±340	4,41±2,43	19,9*
Taxotere	12	d0,4,8	5/5	17,6	14,1	140±24	1149±627	8,65±5,83	39,1*
Taxotere	19	d0,7	5/5	17,7	13,0	134±19	902±736	7,13±6,00	32,2*
d0: время первого дозирования; dn: 14-й день после первого дозирования; *P<0,01 по сравнению с контролем.

Таблица 2 Внутривенная инъекция (i.v.); терапевтическое воздействие SHR110008, Taxotere в отношении привитых опухолей NSCLC A549 человека у голых мышей (способ взвешивания)
Группа	Доза	Количество животных d0/dn	Масса тела (г)	Масса опухоли (г)	(T/C)
	(мг/кг)	d0	dn	d0	dn	x±SD	(%)
Контроль		9	9	17,5	16,2	2,59+1,01
SHR-110008	10	5	5	18,4	16,9	1,59 + 0,57	38,6*
SHR-110008	16	5	5	18,0	16,6	0,67 + 0,23	74,1*
Taxotere	12	5	5	17,6	14,1	1,25 + 0,71	51,7*
Taxotere	19	5	5	17,7	13,0	1,09 + 0,73	57,9*
d0: время первого дозирования; dn: 14-й день после первого дозирования; *P<0,01 по сравнению с контролем.

Вывод:

Согласно таблице 1, таблице 2 и фиг.1, при соответствующем временном графике дозирования, терапевтическое воздействие и токсичность SHR110008 лучше, чем для Taxotere.

ПРИМЕР ИССЛЕДОВАНИЯ 2

Терапевтические воздействия Shr1021-47 против ксенотрансплантатов немелкоклеточного рака легких (NSCLC) A549 человека у голых мышей

Исследуемые животные:

Виды животных: голые мыши BALB/cA.

Количество животных: 12 мышей в контрольной группе, 6 мышей в группе, которой вводят лекарственное средство.

Протокол исследования.

Культура клеток: клетки опухоли NSCLC A549 человека культивируют in vitro, оставаясь в фазе логарифмического роста.

Трансплантация: Отбирают полученные клетки для подкожной инокуляции голых мышей.

Инокуляция: Берут кусочек опухоли для инокуляции на внутренней стороне передней лапы в асептических условиях.

Группировка и конструирование дозы: Измерение диаметра трансплантируемой опухоли посредством штангенциркуля. После того как опухоли вырастут до 100-250 мм³, мышей случайным образом делят на группы Shr1021-47 (8 мг/кг, 12 мг/кг, 16 мг/кг) и Taxotere (12 мг/кг).

Способ и время введения: i.v введение. Shr1021-47 и Taxotere вводят в d0, d7, всего 2 раза. Измеряют объем опухоли и взвешивают мышей 2-3 раза в неделю.

Критерий оценки:

Вычисление формулы объема опухоли (V) представляет собой: V=1/2 × a × b², a: длина опухоли, b: ширина опухоли. Вычисляют относительный объем опухоли (RTV) в соответствии с измерениями. Формула представляет собой: RTV=V_t/V₀. V₀ относится к объему опухоли в d0; V_t относится к объему опухоли при каждом измерении. Индекс противоопухолевой активности представляет собой T/C (%). Формула представляет собой: T/C(%) = T_RTV /C_RTV × 100, T_RTV: RTV для леченной группы, C_RTV: RTV контрольной группы.

Результат:

Таблица 3 Внутривенная инъекция (i.v); терапевтическое воздействие Shr1021-47 против ксенотрансплантатов NSCLC A549 опухолей человека у голых мышей
Группа	Доза	Количество животных	Масса тела (г)	TV (X±SD, мм3)	RTV	T/C
	(мг/кг)	d0	dn	d0	dn	d0	dn	X±SD	(%)
Контроль		12	12	18,7	16,9	181±29	2513±855	14,3±5,2
Shr1021-47	8	6	6	18,7	16,6	168±21	2047±279	12,3±1,6	86,0
Shr1021-47	12	6	6	18,5	16,3	198±47	1293±458	6,6±2,6	46,2*
Shr1021-47	16	6	6	20,7	17,1	178±45	705±360	4,3±2,8	30,1*
Taxotere	12	6	6	20,7	15,6	156±20	1679±749	11,2±6,0	78,3
d0: время первого дозирования; dn: день, в который терапевтическое воздействие проявляется наиболее полно. В этом исследовании dn относится к 14 дню после первого дозирования.

Выводы.

Согласно фиг.2 и таблице 3, показано, что Shr1021-47 ингибирует рост опухолей NSCLC A549 человека у голых мышей. Хотя токсичность Shr1021-47 несколько выше, но она может хорошо переноситься мышами. Эффективность Shr1021-47 лучше, чем у Taxotere.