офтальмические эмульсии масло-в-воде, содержащие простагландины

Формула изобретения

1. Эмульсия масло-в-воде для офтальмического применения, имеющая бета-потенциал между -10 мВ и +10 мВ, содержащая:

(i) дисперсную масляную фазу, 3-25% (мас./мас.) в пересчете на общую эмульсию,

(ii) по меньшей мере, один простагландин в качестве активного агента, который растворяется в компоненте масляной фазы,

(iii) поверхностно-активный компонент, включающий комбинацию, по меньшей мере, двух неионных поверхностно-активных веществ, и

(iv) смежную водную фазу, при необходимости содержащую агенты композиции.

2. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой масляная фаза (i) присутствует в количестве, по меньшей мере, 5-25% (мас./мас.) в пересчете на общую массу эмульсии.

3. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой компонент масляной фазы (i) выбирается из фармацевтически приемлемых масел, таких как животные или растительные масла, синтетические масла и их смеси.

4. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой компонент масляной фазы (i) выбирается из группы, состоящей из этилолеата, смеси триглицеридов C₈-C₁₀-жирных кислот, касторового масла, кукурузного масла или их смесей.

5. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой масляная фаза (i) имеет степень солюбилизации, по меньшей мере, 0,1 мг/мл по отношению к простагландиновому компоненту (ii).

6. Эмульсия масло-в-воде по п.5, в которой масляная фаза (i) имеет степень солюбилизации, по меньшей мере, 10 мг/мл по отношению к простагландиновому компоненту (ii).

7. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой коэффициент распределения простагландинового компонента (ii) между маслом/водой составляет, по меньшей мере, log Р=0,5 в пользу масляной фазы (i).

8. Эмульсия масло-в-воде по п.7, в которой коэффициент распределения простагландинового компонента (ii) между маслом/водой составляет, по меньшей мере, log P=2 в пользу масляной фазы (i).

9. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой простагландиновый компонент (ii) является F2a-аналогом простагландина.

10. Эмульсия масло-в-воде по п.9, в которой простагландиновый компонент (ii) выбирается из группы, состоящей из латанопроста, травопроста, биматопроста, унопростона и смесей из двух или более перечисленных соединений.

11. Эмульсия масло-в-воде по п.10, в которой простагландиновый компонент (ii) является латанопростом.

12. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой, по меньшей мере, два неионных поверхностно-активных веществ поверхностно-активного компонента (iii) выбираются из липофильных неионных поверхностно-активных веществ, гидрофильных неионных поверхностно-активных веществ или их комбинаций.

13. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой неионные поверхностно-активные вещества поверхностно-активного компонента (iii) имеют суммарное общее значение HLB (гидрофильно-липофильный баланс), по меньшей мере, 10, предпочтительно, по меньшей мере, 13 и предпочтительно - до 18.

14. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой, по меньшей мере, два поверхностно-активных вещества поверхностно-активного компонента (iii) присутствуют в количестве, благоприятствующем самоэмульгированию.

15. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой неионные поверхностно-активные вещества поверхностно-активного компонента (iii) выбираются из группы, состоящей из полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолсата (Tween 80®), полиоксиэтилен (20)-сорбитан-монолаурата (Tween 20®), цетилового эфира полиоксиэтилена (2) (Brij 52®), цетилового эфира полиоксиэтилена (10) (Brij 56®), цетилового эфира полиоксиэтилена (20) (Brij 58®).

16. Эмульсия масло-в-воде по п.15, в которой комбинация неионных поверхностно-активных веществ поверхностно-активного компонента (iii) выбирается из комбинаций полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолсат (Tween 80®)/полиоксиэтилен (20)-сорбитан-монолаурат (Tween 20®); полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеат (Tween 80®)/цетиловый эфир полиоксила (2) (Brij 52®); цетиловый эфир полиоксила (2) (Brij 52®)/цетиловый эфир полиоксила (20) (Brij 58®) и цетиловый эфир полиоксила (20) (Brij 58®)/цетиловый эфир полиоксила (10) (Brij 56®).

17. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой компонент водной фазы (iv) является фармацевтически приемлемой водной фазой, предпочтительно выбранной из группы, состоящей из стерилизованной воды, очищенной воды или любого другого вида воды, пригодного для офтальмического применения.

18. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой компонент водной фазы (iv) необязательно содержит другие добавки, такие как буферные агенты; изотонические агенты; соединения, повышающие вязкость; противомикробные консерванты; антиоксиданты; стабилизаторы.

19. Эмульсия масло-в-воде по п.18, в которой противомикробным консервантом является хлорбутанол.

20. Эмульсия масло-в-воде по п.1, которая имеет зета-потенциал от -10 мВ до +10 мВ, предпочтительно - от -4 мВ до +4 мВ.

21. Эмульсия масло-в-воде по п.1, которая является микроэмульсией, в которой средний размер капель масла составляет менее 1 мкм.

22. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой средний размер капель масла эмульсии составляет 700 нм или менее.

23. Эмульсия масло-в-воде по п.1, которая имеет стабильность, по меньшей мере, 6 месяцев; предпочтительно, по меньшей мере, 9 месяцев; более предпочтительно, по меньшей мере, 12 месяцев при 25°C.

24. Эмульсия масло-в-воде по п.1, в которой компоненты с (i) по (iv) присутствуют в следующих количествах:

(i) от 5,0 до 20,0% (мас./мас.) масляной фазы,

(ii) от 0,001 до 5,0% (мас./мас.) простагландинового активного агента,

(iii) от 0,1 до 10,0% (мас./мас.) первого неионного поверхностно-активного вещества и от 0,1 до 10,0% (мас./мас.) второго неионного поверхностно-активного вещества и

(iv) от 50,0 до 95,0% (мас./мас.) водной фазы

в пересчете на общую массу эмульсии.

25. Эмульсия масло-в-воде по п.1, характеризующаяся тем, что она не содержит совместно используемых поверхностно-активных компонентов, в частности, выбранных из короткоцепочечных спиртов, монокарбоновых кислот, катионных и/или анионных поверхностно-активных веществ, лецитинов и/или фосфолипидов.

26. Эмульсия масло-в-воде по любому из пп.1-25, предназначенных для предупреждения, облегчения и/или лечения глаукомы и/или окулярной гипертензии (повышенного внутриглазного давления).

27. Способ приготовления эмульсии масло-в-воде по любому из предшествующих пунктов, включающий стадии:

(а) при необходимости солюбилизации агентов композиции в водной фазе,

(б) солюбилизации первого неионного поверхностно-активного вещества либо в водной фазе, либо в масляной фазе,

(в) солюбилизации второго неионного поверхностно-активного вещества либо в водной фазе, либо в масляной фазе,

(г) солюбилизации простагландинового активного агента в масляной фазе и

(д) смешивания масляной фазы с водной фазой.

28. Способ по п.27, в котором стадия смешивания (д) выполняется без применения высокоэнергоемких процессов с усилием среза, таких как гомогенизация высокого давления или обработка ультразвуком.

29. Способ по п.27 или 28, в котором эмульсия масло-в-воде самопроизвольно формируется в процессе стадии смешивания (д).

30. Способ по п.27, в котором стадия смешивания (д) выполняется с применением высокоэнергоемких процессов с усилием среза, таких как гомогенизация высокого давления или обработка ультразвуком.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к эмульсии масло-в-воде, содержащей, по меньшей мере, один простагландин в качестве активного агента и поверхностно-активный компонент, включающий комбинацию, по меньшей мере, двух неионогенных поверхностно-активных веществ. Эмульсия предназначена для офтальмического применения, в частности для лечения глаукомы и/или окулярной гипертензии (повышенного внутриглазного давления), и характеризуется повышенной химической стабильностью простагландинового активного агента, что обеспечивает возможность ее длительного хранения, например, при комнатной температуре.

Простагландины - это группа химических веществ, обнаруженных в тканях или органах человека, с широким спектром физиологической активности. Некоторые синтетические F2 -аналоги простагландинов известны как эффективные офтальмические фармацевтические агенты, в частности, как окулярные гипотензивные противоглаукомные агенты. Например, латанопрост, травопрост, биматопрост и унопростон были введены на рынок под торговыми марками соответственно Ксалатан, Траватан, Лумиган и Рескула как офтальмические глазные капли для лечения окулярной гипертензии и глаукомы.

К проблемам, связанным с указанными аналогами простагландинов, относятся их довольно плохая растворимость в воде и химическая нестабильность, особенно в водных растворах. Вследствие этого было предложено множество различных офтальмических композиций, позволяющих устранить вышеуказанные проблемы.

ЕР-А-0435682 описывает применение комплексов-включений простагландинов с циклодекстринами, представляющих собой водорастворимые комплексообразующие агенты с гидрофобной полостью, в которых гидрофобные лекарственные средства, такие как простагландины, выступающие в роли "хозяина", удерживаются внутри указанной полости, способствуя улучшению растворимости в воде и повышению стабильности в воде.

Стабильность и клиническая эффективность офтальмической композиции латанопроста, содержащей циклодекстрин, были показаны в The Journal of Clinical Pharmacology, 47, 121-126, 2007.

Применение модифицированных циклодекстринов (т.е. этерифицированных циклодекстринов) для связывания в комплекс и стабилизации простагландинов предложено в ЕР-А-0330511.

Стабилизация водного офтальмического раствора латанопроста путем доведения pH раствора до значения в диапазоне pH от 5 до 6,25 либо путем добавления -аминокапроновой кислоты описана в ЕР-А-1532981.

Растворимость и стабильность простагландинов можно улучшить также добавлением полиэтоксилированного касторового масла в водный раствор (US 5 849 792).

Офтальмическая композиция простагландинов предложена в US 2004/076678: акрилат, целлюлоза или другие полимеры добавляются в водный раствор простагландинов с целью пролонгирования его эффективности при введении в глаза.

В US 3608073 дается пример офтальмической эмульсии, раскрывающий композицию, содержащую пилокарпин, масло, водную фазу и агент, обеспечивающий связывание на границе раздела фаз.

ЕР-А-0521799 описывает приготовление субмикронных офтальмических эмульсий из масла, амфотерного поверхностно-активного вещества и фосфолипида.

Масло, водная фаза, фосфолипид - эти компоненты подвергаются гомогенизации высокого давления для получения субмикронных эмульсий для офтальмического применения, содержащих флурбипрофен (US 5171566).

Добавление гидрофобных суспендирующихся частиц для стабилизации субмикронных эмульсий предложено в US 2003/215471.

Микроэмульсия латанопроста, полученная гомогенизацией высокого давления, описана в Int. J. Pharm., 305, 176-179, 2005: стабилизация достигается за счет применения поливинилового спирта в качестве эмульгатора.

Хлорид бензалкония является одним из наиболее часто применяемых противомикробных консервантов для офтальмических композиций, но он широко использовался также для приготовления офтальмических микроэмульсий (US 5698219), что обусловлено его положительным зарядом, который стабилизирует капли; этот положительный заряд может обеспечиваться также другими катионными агентами (WO 2006/050838).

Применение положительно заряженных микроэмульсий для введения простагландинов описано в WO 2006/050836 или WO 2007/042262: образование пленки на границе раздела фаз достигается за счет применения комбинации неионогенного поверхностно-активного вещества с катионным агентом, таким как четвертичные соединения аммония (включающие хлорид бензалкония), аминоспирты, бигуанидные соли. Готовые эмульсии имеют зета-потенциал, по меньшей мере, 16 мВ.

Однако применение катионных агентов для офтальмического применения следует строго контролировать с тем, чтобы гарантировать окулярную переносимость (Eur. J. Pharm. Biopharm., 53,263-280,2002).

Комбинация из хлорида бензалкония с определенным числом углеродных атомов, поверхностно-активного вещества, агента, поддерживающего тоничность, описана в ЕР-А-1547599, раскрывающей стабильный офтальмический раствор латанопроста.

ЕР-А-0458588 описывает окулярно-гипотензивно-синергистическую комбинацию 13,14-дигидро-15-кето-20-С_1-6-алкилпростагландина со сложным моноэфиром полиоксиэтилен-сорбитана и ненасыщенных С₁₀-С₂₄-алифатических кислот для производства лекарственного препарата, предназначенного для лечения окулярной гипертензии.

ЕР-А-1655021 раскрывает эмульсию масло-в-воде, которая может использоваться в качестве носителя/переносчика гидрофобных ингредиентов, таких как фармацевтические лекарственные средства. Частицы эмульсии несут суммарный положительный заряд и содержат катионный агент.

ЕР-А-1681059 описывает фармацевтическую композицию, включающую эмульсию типа масло-в-воде, содержащую F2 -производное простагландина, масло, водорастворимый полимер и воду. Водорастворимый полимер может быть соединением поливинила, водорастворимым соединением целлюлозы или полисахаридом. Масло может быть, например, животным или растительным маслом и/или триглицеридом среднецепочечной жирной кислоты.

US 2006/0182781 описывает офтальмическую композицию микрочастиц, в которой микрочастицы содержат полимерную матрицу и активный ингредиент, например простагландин.

WO 2004/082625 и US 2007/0036829 описывают самоэмульгирующиеся офтальмические композиции, содержащие жировые шарики, диспергированные в водной фазе, в которых шарики содержат поверхностно-активный компонент и полярный жировой компонент. Жировой компонент присутствует в количестве до 1,25% (мас./мас.) общей эмульсии.

US 5827835 описывает нетоксичную эмульсионную композицию, содержащую неионогенный простой эфир целлюлозы с молекулярной массой, по меньшей мере, 30 кДа, масло, воду и необязательно эмульгирующий агент. Эмульсия может содержать также фармацевтические лекарственные средства, такие как простагландины.

WO 02/064166 описывает композицию, включающую, по меньшей мере, один моноглицерид, по меньшей мере, один эмульгатор, водный раствор и, по меньшей мере, один органический растворитель.

KR 2003/0046553 раскрывает чувствительную к температуре эмульсионную композицию для наружного применения, содержащую простагландин Е1 в качестве активного ингредиента. Композиция наносится на кожу и образует гель при температуре тела. Однако образование геля нежелательно для глазных композиций.

Авторам изобретения совершенно неожиданно удалось установить, что комбинация, состоящая из масляной фазы, содержащей простагландиновый активный агент, водной фазы и поверхностно-активного компонента, включающего комбинацию, по меньшей мере, двух неионных поверхностно-активных веществ, способна самопроизвольно генерировать стабильные субмикронные эмульсии для офтальмического применения. Эти эмульсии предпочтительно несут нейтральный, в основном электрохимический заряд (зета-потенциал) и показывают отличные характеристики стабильности как в рамках физических свойств микроэмульсии, так и в плане химической стабильности простагландинового активного агента. Эмульсии могут приготовляться простым смешиванием компонентов, в процессе которого происходит самопроизвольное микроэмульгирование. Отпадает необходимость в применении высокоэнергоемких процессов, таких как гомогенизация высокого давления и/или обработка ультразвуком. Это обусловливает также стабильность системы.

Таким образом, предметом настоящего изобретения является эмульсия масло-в-воде для офтальмического применения, имеющая, в основном, нейтральный зета-потенциал и содержащая в качестве компонентов:

(i) дисперсную масляную фазу,

(ii) по меньшей мере, один простагландин в качестве активного агента, который растворяется в компоненте масляной фазы (i),

(iii) поверхностно-активный компонент, включающий комбинацию, по меньшей мере, двух неионных поверхностно-активных веществ, и

(iv) смежную водную фазу, необязательно содержащую агенты композиции.

Эмульсия настоящего изобретения пригодна для применения в качестве фармацевтической композиции, в частности офтальмической композиции. Предпочтительно эмульсия масло-в-воде предназначена для предупреждения, облегчения и/или лечения глазных болезней, таких как глаукома и/или окулярная гипертензия (повышенное внутриглазное давление). Эмульсия пригодна для одноразового или многоразового применения.

Эмульсии настоящего изобретения характеризуются высокой химической стабильностью, измеряемой путем определения извлечения активного ингредиента после длительного периода хранения, например, с помощью HPLC (жидкостная хроматография высокого давления). Извлечение активного ингредиента спустя 6 месяцев хранения при 25°C, более предпочтительно - спустя 9 месяцев и наиболее предпочтительно - спустя 12 месяцев хранения составляет, по меньшей мере, 80%, более предпочтительно, по меньшей мере, 90% и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 95%. Извлечение активного ингредиента после хранения при 45°C в течение 14 дней, предпочтительно - в течение 30 дней и более предпочтительно - в течение 45 дней составляет, по меньшей мере, 80%, предпочтительно, по меньшей мере, 90% и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 95%. Кроме того, композиции настоящего изобретения характеризуются высокой физической стабильностью, измеряемой путем определения размера капель. Предпочтительно эмульсии являются стабильными при 25°C в течение, по меньшей мере, 6 месяцев и при 45°C в течение, по меньшей мере, 45 дней.

В особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения было установлено, что эмульсии обладают химической и физической стабильностью в течение, по меньшей мере, 6 месяцев, предпочтительно - в течение, по меньшей мере, 9 месяцев и более предпочтительно - в течение, по меньшей мере, 12 месяцев хранения при 25°C. Удивительным образом было установлено, что химическая и физическая стабильность не снижается при открывании бутылок.

Эмульсия настоящего изобретения предпочтительно является микроэмульсией, в которой средний размер капель масла составляет менее 1 мкм. Более предпочтительно средний размер капель масла составляет 700 нм или менее. Предпочтительно также, чтобы эмульсия настоящего изобретения не изменяла своего физического состояния в диапазоне температур от 4°C до 45°C и, в частности, не образовывала гель.

Предпочтительно эмульсия характеризуется тем, что она имеет нейтральный, в основном зета-потенциал, т.е. зета-потенциал от -10 мВ до +10 мВ, предпочтительно - от -4 мВ до +4 мВ и более предпочтительно - от -2 мВ до +2 мВ.

Масляная фаза (i) предпочтительно присутствует в количестве, по меньшей мере, 3% (мас./мас.), более предпочтительно, по меньшей мере, 5% (мас./мас.) в пересчете на общую массу эмульсии. Верхний предел количества масляной фазы предпочтительно составляет 25% (мас./мас.) и более предпочтительно - 20% (мас./мас.) в пересчете на общую массу эмульсии. Компонент масляной фазы (i) предпочтительно выбирается из фармацевтически приемлемых масел, например животных масел, растительных масел, синтетических масел или их смесей. Предпочтительно масляная фаза содержит фармацевтически приемлемые сложные эфиры жирных кислот, например триглицериды жирных кислот или сложные моноэфиры жирных кислот.

Более предпочтительно компоненты масляной фазы выбираются с учетом следующих четырех факторов:

(1) пригодность для офтальмического применения;

(2) высокая степень солюбилизации - порядка, по меньшей мере, 0,1 мг/мл, предпочтительно, по меньшей мере, 2 мг/мл и более предпочтительно, по меньшей мере, 10 мг/мл - по отношению к простагландиновому компоненту (ii);

(3) химическая стабилизация простагландинового компонента (ii), как описано выше;

(4) сильно выраженное действие на распределение между маслом-водой в пользу масла, предпочтительно, по меньшей мере, log Р=0,5 и более предпочтительно, по меньшей мере, log P=2.

Конкретными примерами подходящих компонентов масляной фазы являются этилолеат, Miglyol^® 812 (Миглиол 812), т.е. смесь триглицеридов С_8-10-жирных кислот, касторовое масло, кукурузное масло или смеси перечисленного.

Эмульсия масло-в-воде настоящего изобретения включает, по меньшей мере, один простагландин в качестве активного агента. Предпочтительно простагландин является липофильным простагландином, например, F2 -аналогом простагландинов, таким как латанопрост, травопрост, биматопрост, унопростон либо смеси из двух или более перечисленных аналогов. Более предпочтительно простагландиновый компонент является латанопростом. Простагландин предпочтительно присутствует в количестве от 0,001% до 5% (мас./мас.), более предпочтительно - от 0,002% до 0,1% (мас./мас.) в пересчете на общую массу эмульсии.

Указанный поверхностно-активный компонент (iii) включает комбинацию, по меньшей мере, двух неионных поверхностно-активных веществ. Выбор комбинации двух поверхностно-активных веществ предпочтительно осуществляется с учетом следующих аспектов:

(1) используются только неионные поверхностно-активные вещества, одобренные к применению в средствах для глаз (окулярная переносимость);

(2) комбинация и количества поверхностно-активных веществ подбираются так, что первое неионное поверхностно-активное вещество добавляется либо в масляную фазу, либо в водную фазу; масляная и водная фазы смешиваются; в полученную смесь добавляется второе поверхностно-активное вещество в количестве, достаточном для образования гомогенных эмульсий масло-в-воде без разделения на фазы или образования крупных видимых капель, в которых средний размер капель при определении методом лазерного светорассеяния предпочтительно составляет менее 1 мкм, более предпочтительно - 700 мкм или менее.

Неионные поверхностно-активные вещества поверхностно-активного компонента (iii) могут выбираться из липофильных неионных поверхностно-активных веществ, гидрофильных неионных поверхностно-активных веществ или их комбинаций. Предпочтительно неионные поверхностно-активные вещества поверхностно-активного компонента (iii) имеют суммарное общее значение HLB (гидрофильно-липофильный баланс), по меньшей мере, 10, более предпочтительно, по меньшей мере, 13 и предпочтительно - до 20, более предпочтительно - до 18. Поверхностно-активные вещества присутствуют в количестве, которое благоприятствует самопроизвольному эмульгированию. Предпочтительно поверхностно-активный компонент включает первое и второе неионные поверхностно-активные вещества, каждое из которых присутствует в количествах от 0,1% до 10% (мас./мас.) в пересчете на общую массу эмульсии. Суммарное количество неионных поверхностно-активных веществ предпочтительно составляет от 1% до 20% (мас./мас.), более предпочтительно - от 2% до 12% (мас./мас.) в пересчете на общую массу эмульсии.

Неионные поверхностно-активные вещества предпочтительно выбираются из сложных эфиров полиоксиэтилена и жирных кислот, например из полиоксиэтилен-сорбитана, сложных моно- и полиэфиров и/или простых эфиров полиоксиэтилена и жирных спиртов. Предпочтительно неионные поверхностно-активные вещества поверхностно-активного компонента (iii) выбираются из группы, состоящей из полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеата (Tween 80 ^®), полиоксиэтилен (20)-сорбитан-монолаурата (Tween 20^®), цетилового эфира полиоксиэтилена (2) (Brij 52^®), цетилового эфира полиоксиэтилена (10) (Brij 56^®), цетилового эфира полиоксиэтилена (20) (Brij 58^®). Более предпочтительно комбинация неионных поверхностно-активных веществ поверхностно-активного компонента (iii) выбирается из комбинаций полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеат (Tween 80^®)/полиоксиэтилен (20)-сорбитан-монолаурат (Tween 20^®); полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеат (Tween 80^®)/цетиловый эфир полиоксила (2) (Brij 52^®); цетиловый эфир полиоксила (2) (Brij 52 ^®)/цетиловый эфир полиоксила (20) (Brij 58^® ) и цетиловый эфир полиоксила (20) (Brij 58^®)/цетиловый эфир полиоксила (10) (Brij 56^®).

Эмульсия масло-в-воде изобретения предпочтительно не содержит катионных поверхностно-активных веществ, анионных поверхностно-активных веществ, короткоцепочечных, например, C_1-4-, моногидроспиртов и жирных кислот, например C_4-8-жирных кислот или соединений из класса лецитинов и/или фосфолипидов. Такие соединения могут создавать проблемы, связанные с их совместимостью с лечением глаз или их физической/химической нестабильностью.

Однако эмульсия может содержать и другие агенты, традиционно используемые в офтальмических композициях, например буферные агенты, такие как соли - фосфаты, цитраты и др.; изотонические агенты, такие как глицерин, сорбит, глюкоза, хлорид натрия и др.; соединения, повышающие вязкость, такие как оксипропилцеллюлоза или другие водорастворимые производные целлюлозы, полиметилметакрилаты или другие водорастворимые производные полиакриловой кислоты, хитозан, гиалуроновая кислота, поливинилпирролидон и др.; противомикробные консерванты, в частности хлорбутанол; антиоксиданты или стабилизаторы. Эмульсия может содержать простагландин в качестве единственного активного агента. В различных вариантах воплощения эмульсия может содержать один или более других активных агентов, в частности гидрофильные активные агенты, которые предпочтительно присутствуют в водной фазе.

Предпочтительными примерами других активных агентов являются

- бета-блокаторы, например тимолол (Timolol), левобунолол (Levobunolol), бетаксолол (Betaxolol) и др.;

- противовоспалительные агенты, например кеторолак (Ketorolac), бета- или дексаметазон (Beta- или Dexamethasone) и др.;

- противовирусные агенты, например ацикловир (aciclovir) и др.;

- анестетики местного действия для глаз, например оксибупрокаин (Oxybuprocaine) и др.;

- противоаллергические агенты, например олопатадин (Olopatadine), азеластин (Azelastine), эпинастин (Epinastine), лодоксамид (Lodoxamide) и др.;

- средства против сухости глаз, например гиалуроновая кислота, ацетилцистеин, поливиниловый спирт и др.;

- IOP (внутриглазное давление) понижающие лекарственные средства, например бримонидин (Brimonidine), бринзоламид (Brinzolamide), дорзоламид (Dorzolamide) и др.;

- средства для лечения острых приступов глаукомы, например пилокарпин.

Водная фаза (iv) эмульсии предпочтительно является фармацевтически приемлемой водной фазой, которая предпочтительно выбирается из группы, состоящей из стерилизованной воды, очищенной воды или любого другого вида воды, пригодного для офтальмического применения. Водная фаза предпочтительно присутствует в количестве от 30% до 95% (мас./мас.), более предпочтительно - от 50% до 95% (мас./мас.) в пересчете на общую массу эмульсии. Количество водной фазы включает также массу необязательно добавляемых стандартных офтальмических агентов, буферов, консервантов, изотонических агентов и др.

В особенно предпочтительном варианте воплощения изобретения компоненты с (i) по (iv) присутствуют в следующих количествах:

(i) от 5,0% до 20,0% (мас./мас.) масляной фазы,

(ii) от 0,001% до 5,0% (мас./мас.) простагландинового активного агента,

(iii) от 0,1% до 10,0% (мас./мас.) первого неионного поверхностно-активного вещества и от 0,1% до 10,0% (мас./мас.) второго неионного поверхностно-активного вещества и

(iv) от 50,0% до 95,0% (мас./мас.) водной фазы

в пересчете на общую массу эмульсии.

Вышеописанные компоненты при смешивании самопроизвольно генерируют стабильные субмикронные эмульсии без необходимости проведения высокоэнергоемких операций с усилием среза. Например, эмульсии могут приготовляться способом, включающим стадии:

(а) необязательно солюбилизации компонентов композиции в водной фазе,

(б) солюбилизации первого неионного поверхностно-активного вещества либо в водной, либо в масляной фазе,

(в) солюбилизации второго неионного поверхностно-активного вещества либо в водной, либо в масляной фазе,

(г) солюбилизации простагландинового активного агента в масляной фазе и

(д) смешивания масляной фазы с водной фазой.

Стадия смешивания предпочтительно осуществляется стандартными способами смешивания, например, с применением лопастных смесителей, магнитных мешалок, гомогенизаторов и др. Это позволяет отказаться от проведения высокоэнергоемких способов смешивания, таких как гомогенизация высокого давления или обработка ультразвуком.

Для фармацевтических целей эмульсия предпочтительно приготовляется с применением стерильных компонентов и устройств. Все стадии производственного процесса предпочтительно осуществляются в асептических условиях, а готовые композиции тестируются согласно официальным требованиям фармакопеи. Если эмульсия предназначена для многоразового применения, то в нее добавляется противомикробный консервант, такой как хлорбутанол.

Далее изобретение описывается в нижеследующих примерах, которые ни в коей мере не следует рассматривать как ограничивающие его масштаб.

Пример 1

Субмикронная эмульсия масло-в-воде (o/w) приготовлялась путем смешивания в лопастном смесителе раствора масла/поверхностно-активных веществ (этилолеат: Tween 80^®: Tween 20^® = 1:1:0,5 (мас.:мас.:мас.)), содержащего латанопрост, растворенный в концентрации 0,44 мг/мл, с физиологической водной фазой (0,9% NaCl, pH 7,4). Отношение масляной фазы к водной фазе составляло примерно 1:20 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

латанопрост	0,005 г
этилолеат	4,51 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеат (Tween 80® )	4,51 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-монолаурат (Tween 20®)	2,30 г
физиологический раствор (0,9% NaCl, pH 7,4)	88,7 г

Пример 2

Субмикронная o/w-эмульсия приготовлялась путем смешивания в смесителе с магнитной мешалкой раствора масла/поверхностно-активных веществ (Miglyol 812: Tween 80^®: Tween 20 ^® = 1:1,5:1), содержащего латанопрост, растворенный в концентрации 0,33 мг/мл, с фосфатным буферным водным раствором (дигидрофосфат/моногидрофосфат натрия), содержащим изотонический агент (сорбит). Соотношение между масляной фазой и водной фазой составляло примерно 1:20 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

латанопрост	0,005 г
Miglyol 812	4,28 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеат (Tween 80®)	6,42 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-монолаурат (Tween 20®)	4,28 г
фосфатный буферный водный раствор (дигидрофосфат натрия/моногидрофосфат натрия, сорбит)	85,02 г

Пример 3

Жидкая субмикронная o/w-эмульсия приготовлялась путем смешивания в лопастном смесителе раствора поверхностно-активного вещества/масла (касторовое Масло: Brij 56^® = 1:0,036), содержащего латанопрост, растворенный в концентрации 0,39 мг/мл, с физиологической водной фазой (0,9% NaCl, pH 7,4), содержащей Brij 58^® в процентном количестве 4% (мас./мас.). Соотношение между масляной фазой и водной фазой составляло примерно 1:10 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

латанопрост	0,001 г
касторовое масло	17,9 г
цетиловый эфир полиоксила (20) (Brij 58®)	6,98 г
цетиловый эфир полиоксила (10) (Brij 56®)	0,64 г
физиологическая водная фаза (0,9% NaCl, pH 7,4)	174,5 г

Пример 4

Субмикронная o/w-эмульсия приготовлялась путем смешивания в лопастном смесителе раствора масла/поверхностно-активных веществ (этилолеат: Tween 80^®: Tween 20^® = 1:1:0,5), содержащего латанопрост, растворенный в концентрации 0,45 мг/мл, с физиологической водной фазой (0,9% NaCl, pH 7,4), содержащей противомикробный агент (хлорбутанол, 0,5%). Соотношение между масляной фазой и водной фазой составляло примерно 1:20 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

латанопрост	0,0075 г
этилолеат	6,62 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеат (Tween 80®)	6,62 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-монолаурат (Tween 20®)	3,31 г
хлорбутанол	0,80 г
физиологическая водная фаза (0,9% NaCl, pH 7,4)	132,6 г

Пример 5

Субмикронная o/w-эмульсия приготовлялась путем смешивания в смесителе, работающем с усилием среза, раствора масла/поверхностно-активного вещества (этилолеат: Brij 52 ^® = 1:0,045), содержащего латанопрост, растворенный в концентрации 0,59 мг/мл, с цитратным буферным раствором (лимонная кислота, цитрат натрия), содержащим Brij 58^® в процентном количестве 4% (мас./мас.). Цитратный буферный раствор содержал растворенный сорбит в качестве изотонического агента. Соотношение между масляной фазой и водной фазой составляло примерно 1:20 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

латанопрост	0,0050 г
этилолеат	4,65 г
цетиловый эфир полиоксила (20) (Brij 58®)	3,66 г
цетиловый эфир полиоксила (2) (Brij 52®)	0,21 г
нитратный буфер (лимонная кислота, цитрат натрия, сорбит)	91,5 г

Пример 6

Жидкая субмикронная o/w-эмульсия приготовлялась путем смешивания в лопастном смесителе раствора поверхностно-активного вещества/масла (касторовое масло: Brij 52^® = 1:0,05), содержащего латанопрост, растворенный в концентрации 0,40 мг/мл, с цитратным буфером (лимонная кислота, цитрат натрия), содержащим Brij 58^® в процентном количестве 4% (мас./мас.). Раствор цитратного буфера содержал растворенный глицерин в качестве изотонического агента. Соотношение между масляной фазой и водной фазой составляло примерно 1:10 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

латанопрост	0,01 г
касторовое масло	17,3 г
цетиловый эфир полиоксила (20) (Brij 58®)	7,0 г
цетиловый эфир полиоксила (2) (Brij 52®)	0,84 г
цитратный буфер (лимонная кислота, цитрат натрия, глицерин)	174,8 г

Пример 7

Субмикронная o/w-эмульсия приготовлялась путем смешивания в смесителе, работающем с усилием среза, раствора масла/поверхностно-активных веществ (этилолеат: Tween 80 ^®: Brij 52^®=1:1:0,04), содержащего травопрост, растворенный в концентрации 0,41 мг/мл, с физиологическим раствором (pH 7,4; 0,9% NaCl). Отношение масляная фаза: водная фаза составляло примерно 1:20 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

травопрост	0,0040 г
этилолеат	4,51 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеат (Tween 80®)	4,48 г
цетиловый эфир полиоксила (2) (Brij 52®)	0,18 г
физиологический раствор (0,9% NaCl, pH 7,4)	90,3 г

Пример 8

Жидкая субмикронная o/w-эмульсия приготовлялась путем смешивания в лопастном смесителе масляной фазы, включающей поверхностно-активные вещества (Miglyol 812: Tween 80^® : Tween 20^® = 1:1,5:0,5), содержащей биматопрост, растворенный в концентрации 2,3 мг/мл, с физиологической водной фазой (0,9% NaCl, pH 7,4), содержащей противомикробный агент (хлорбутанол, 0,5%). Отношение масло/вода составляло примерно 1:20 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

биматопрост	0,06 г
Miglyol 812®	8,46 г
полиоксиэтилен (20)-сор6итан-моноолеат (Tween 80®)	12,89 г
полиоксиэтилен (20)-сор6итан-монолаурат (Tween 20®)	4,40 г
хлорбутанол	1,0 г
физиологическая водная фаза (0,9% NaCl, pH 7,4)	173,1 г

Нижеследующий пример с низким отношением масло/вода дается в сравнительных целях, чтобы показать влияние определенного диапазона отношений масло/вода на стабильность простагландина.

Сравнительный пример А

Субмикронная o/w-эмульсия приготовлялась путем смешивания в лопастном смесителе раствора масла/поверхностно-активных веществ (этилолеат: Tween 80^®: Tween 20^® = 1:1:0,5), содержащего латанопрост, растворенный в концентрации 0,79 мг/мл, с физиологической водной фазой (0,9% NaCl, pH 7,4). Отношение масляной фазы к водной фазе составляло примерно 1:40 (мас./мас.).

Состав полученной субмикронной эмульсии был следующим:

латанопрост	0,0125 г
этилолеат	6,37 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-моноолеат (Tween 80®)	6,37 г
полиоксиэтилен (20)-сорбитан-монолаурат (Tween 20®)	3,15 г
физиологический раствор (0,9% NaCl, pH 7,4)	234,1 г

Пример 9

Тесты на определение характеристик эмульсий

Субмикронные o/w-эмульсии, приготовленные, как описано в вышеприведенных примерах, были охарактеризованы с физико-химической точки зрения (размер и электрохимический заряд субмикронных эмульсий, химическая стабильность простагландина при различных условиях хранения, противомикробная эффективность). Полученные данные приводятся в нижеследующих параграфах и таблицах.

9.1. Определение размера и электрохимического заряда капель субмикронных эмульсий изобретения

Размер и электрохимический заряд (зета-потенциал) капель субмикронных эмульсий, приготовленных, как описано в Примерах 1-8 и Сравнительном примере А, определялись динамическим лазерным светорассеянием (Malvern Instruments, Zetasizer Nano ZS).

Измерения зета-потенциала проводились с помощью прибора Zetasizer Nano ZS от Malvern Instruments Ltd. (Великобритания). Отобранный для анализа образец (0,75 мл) переносился с помощью шприца во избежание образования пузырьков в складчатую капиллярную ячейку, подсоединенную к электродам. Ячейка помещалась в прибор, и автоматически начиналась последовательность измерений; результаты всех отдельных измерений накапливались, а затем суммировались для получения окончательного значения зета-потенциала. Не было необходимости в разбавлении образцов для анализа и, следовательно, исключался риск искусственного изменения характеристик образца. Данные приводятся в таблице 1.

Таблица 1
Размер капель и зета-потенциал субмикронных эмульсий изобретения
Образец	Размер капель (нм)	Зета-потенциал (мВ)
Пример 1	700 нм	2,0
Пример 2	700 нм	0,5
Пример 3	700 нм	-1,2
Пример 4	700 нм	0,7
Пример 5	700 нм	0,3
Пример 6	700 нм	1,0
Пример 7	700 нм	0,7
Пример 8	700 нм	-1,9
Сравнительный пример А	700 нм	0,6

Все приготовленные композиции представляли собой гомогенные жидкие дисперсии без разделения на фазы или образования видимых крупных капель. Фактически данные, приведенные в табл.1, подтверждают образование субмикронных эмульсий с размером капель, по меньшей мере, менее 700 нм; значения электрохимического заряда (зета-потенциала) практически все равнялись примерно 0, что указывает на почти нейтральный заряд, что является результатом применения неионных поверхностно-активных веществ в качестве агентов, действующих на границе раздела фаз.

9.2. Изучение химической стабильности латанопроста

Изучение стабильности при режимах хранения 45°C, 25°C и 4°C проводилось на примере субмикронной эмульсии латанопроста Примера 1.

Образец хранился в стеклянном контейнере; в качестве контрольного продукта использовался реализуемый на рынке офтальмический водный раствор латанопроста (Xalatan ^®). При 45°C субмикронная эмульсия Примера 1 хранилась не только в стеклянном контейнере, но и в двух видах пластиковых бутылок.

Композиция Xalatan^® представляет собой обычный буферный изотонический водный раствор, приготовленный из следующих компонентов:

латанопрост (0,005 г в 100 мл)

хлорид натрия

фосфат натрия, моноосновной

фосфат натрия, диосновной

хлорид бензалкония

вода для инъецируемых компонентов.

Указанная композиция полностью отличается от микроэмульсии настоящего изобретения: она не содержит масляного компонента, такого как этилолеат, и сильного катионного консерванта, такого как хлорид бензалкония, в то время как композиции настоящего изобретения содержат только неионные поверхностно-активные вещества, такие как Tween 80 и Tween 20.

Содержание латанопроста определялось с помощью HPLC-системы (Agilent series 1100), оборудованной УФ детектором, с использованием смеси двух подвижных фаз.

Данные, приведенные в нижеследующих таблицах 2а, 2b и 2c, выражены как концентрация латанопроста/мл жидкой композиции.

Таблица 2а
Изучение стабильности при 4°С
Пример 1			Xalatan ®
4°С	мкг/мл	4°С	мкг/мл
t=0	50,0	t=0	50,0
t=7 дней	49,2	t=7 дней	49,7
t=21 день	48,2	t=21 день	49,0
t=120 дней	49,8	t=120 дней	47,5

Таблица 2b
Изучение стабильности при 25°C
Пример 1			Xalatan ®
25°С	мкг/мл	25°C	мкг/мл
t=0	50,0	t=0	50,0
t=7 дней	47,6	t=7 дней	48,5
t=30 дней	50,5	t=30 дней	45,5
t=120 дней	48,5	t=90 дней	29,5
t=180 дней	48,1
t=240 дней	48,3
t=360 дней	47,8

Таблица 2 с
Изучение стабильности при 45°C
Пример 1				Xalatan ®
45°C	Стеклянная бутылка	Бутылка 1	Бутылка 2	Первоначальный контейнер
t=0	59,2	59,2	59,2	52,3
t=14 дней	58,3	60,4	60,7	48,9
t=30 дней	57,8	61,0	62,7	41,9
t=45 дней	57,5	62,2	61,9	37,6

Примечания:

а. Все показатели концентрации латанопроста выражены в мкг/мл.

b. Бутылка 1 изготовлена из полиэтилена.

c. Бутылка 2 изготовлена из полиэтилена низкой плотности.

Приведенные данные подтверждают заметно повышенную стабильность субмикронной эмульсии изобретения по сравнению с реализуемым на рынке водным раствором Xalatan^® . Особый интерес представляет особенно высокая стабильность при 25°С, которая указывает на возможность хранения при комнатной температуре и позволяет отказаться от низкотемпературных условий хранения. Кроме того, данные табл.2с при 45°C показывают, что микроэмульсия изобретения является намного более стабильной, чем Xalatan^®, как в стеклянной бутылке, так и в пластиковых контейнерах.

Таким образом, установлено, что композиция Примера 1 оставалась жидкой и гомогенной без разделения на фазы при всех изучаемых режимах.

Потенциальное влияние отношения масло/вода в субмикронной эмульсии на химическую стабильность простагландина изучалось путем сравнения стабильности субмикронной эмульсии изобретения (Пример 1) с субмикронной эмульсией Контрольного примера а, которая отличается только более разбавленным отношением масло/вода.

Концентрации латанопроста определялись методом HPLC, описанным выше.

Таблица 3
Изучение стабильности субмикронной эмульсии с различными o/w отношениями при 25°С
Пример 1	Сравнительный пример А
25°С	мкг/мл	25°С	мкг/мл
t=0	50,0	t=0	49,8
t=7 дней	47,6	t=7 дней	45,1
t=30 дней	50,5	t=30 дней	48,1
t=120 дней	48,5	t=45 дней	43,1
t=180 дней	48,1	t=90 дней	36,4

Данные, приведенные в табл.3, четко показывают, что субмикронная эмульсия с более высоким отношением масло/вода (Пример 1, o/w отношение = 1/20) является более стабильной, чем субмикронная эмульсия с более низким отношением масло/вода (Сравнительный пример А, o/w отношение = 1/40).

9.3. Физико-химическая стабильность субмикронных эмульсий

С применением лазерного светорассеяния (Malvern Zetasizer Nano ZS) определялась также такая характеристика композиций изобретения, хранившихся при различных температурах, как размер капель. Данные приводятся в табл.4.

Таблица 4
Физико-химическая стабильность композиции субмикронной эмульсии
Пример 1	Пример 2	Пример 1	Пример 2
25°С	Размер (нм)	25°С	Размер (нм)	45°С	Размер (нм)	45°С	Размер (нм)
t=0	700 нм	t=0	700 нм	t=0	700 нм	t=0	700 нм
t=7 дней	700 нм	t=7 дней	700 нм	t=7 дней	700 нм	t=7 дней	700 нм
t=21 день	700 нм	t=21 день	700 нм	t=14 дней	700 нм	t=14 дней	700 нм
t=120 дней	700 нм	t=120 дней	700 нм	t=30 дней	700 нм	t=30дней	700 нм
t=180 дней	700 нм	t=180 дней	700 нм	t=45 дней	700 нм	t=45 дней	700 нм

Из данных табл.4 очевидно, что простагландиновые офтальмические композиции изобретения сохраняли субмикронный размер капель и при длительном хранении при высокой температуре.

9.4. Противомикробная эффективность субмикронной эмульсии

В случае офтальмических композиций обязательным является подтверждение противомикробной эффективности препарата, показывающее, что в процессе хранения и применения композиции ее микробное заражение исключается.

В силу этого авторами изобретения вводился в водную фазу субмикронной микроэмульсии умеренный, не вызывающий раздражения консервант - хлорбутанол (Пример 4). Такая композиция тестировалась в соответствии с требованиями Italian Pharmacopeia (Итальянской Фармакопеи) (11-e издание, с.533-534, 2002), согласованной с European Pharmacopeia (Европейской Фармакопеей). Этот официальный тест основан на инокуляции композиции в условиях непрерывного контроля концентраций двумя видами бактерий (Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus) и одним видом грибков (Candida albicans). В заданные промежутки времени вплоть до одного месяца отбирался адекватный образец инокулированных композиций, который подвергался анализу на присутствие жизнеспособных микроорганизмов. Данные приводятся в табл.5.

Таблица 5
Логарифмическое уменьшение количества микроорганизмов в инокулированной композиции Примера 4
Микроорганизм
Время (час)	Pseudomonas aeruginosa	Straphylococcus aureus	Candida albicans
6 часов	3	3	0
24 часа	3	3	0
7 дней	4	4	1
14 дней	>5	>5	2
28 дней	Не обнаружены	Не обнаружены	3

Данные табл.5 указывают на очень высокую противомикробную эффективность тестируемой субмикронной микроэмульсии. Фактически она удовлетворяет официально признанным критериям приемлемости А.

Кроме того, было установлено, что композиция изобретения (Пример 4), содержащая хлорбутанол в качестве консерванта, оставалась стабильной даже спустя длительное время хранения при высоких температурах.

Таблица 6
Изучение стабильности микроэмульсии латанопроста Примера 4, хранившейся в стеклянной бутылке
	4°С мкг/мл	25°С мкг/мл	45°С мкг/мл
t=0	51,1	51,1	51,1
t=3 месяца	52,2	51,5	50,5
t=5 месяцев	51,9	53,0	50,5

Стабильность тестировалась, как описано в разделе 9.2, методом HPLC.

Пример 10

Определение потенциальной способности вызывать раздражение глаз

O/w-микроэмульсия изобретения (без латанопроста) тестировалась на потенциальную способность вызывать раздражение глаз с помощью Skin Ethic-модели восстановленного эпителия роговицы глаза человека (RHCE) (Nguyen D.H., Beuerman R.W., de Wever В. and Rosdy M. - Three-dimensional construct of the human comeal epithelium for in vitro toxicology. B: H. Salem and S.A. Katz, Editors, Alternative Toxicological Methods, CRC Press (2003), pp.147-159). Принцип тестирования основан на измерении цитотоксичности в культурах восстановленного эпителия роговицы глаза человека после локального воздействия на тестируемый материал МТТ (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенил-тетразолиумбромида) с последующей оценкой МТТ-восстановления колориметрическим методом.

Тестируемый материал классифицировался по результатам МТТ-анализа жизнеспособности ткани согласно следующей прогностической модели после 60-минутного периода воздействия и 16-часового инкубационного периода после указанного воздействия:

1) тестируемый материал классифицировался как не вызывающий раздражения глаз, если жизнеспособность ткани составляла >50%,

2) тестируемый материал классифицировался как вызывающий раздражение глаз, если жизнеспособность ткани составляла 50%.

По сравнению с тканями негативного контроля относительная жизнеспособность МТТ-обработанных тканей тестируемого материала после 60-минутного периода воздействия и 16-часового инкубационного периода после указанного воздействия составила 104,3%.

Сделано заключение, что в условиях проведения теста тестируемый материал можно классифицировать как не вызывающий раздражения глаз.

Пример 11

Тест in vivo

O/w-микроэмульсия изобретения (без латанопроста) тестировалась на потенциальную способность вызывать раздражение глаз с помощью in vivo тест-модели. Тест проводился на 3 кроликах породы Новозеландская белая. При одноразовом применении вводилась 0,1 мл микроэмульсии, и считывались показания спустя 1, 2 и 3 суток после введения. Метод тестирования соответствовал ISO 10993-1: 2003; ISO 10993-10: 2002 и ISO 10993-12: 2007. Средние значения оценки раздражающей глаза способности показаны в табл.7.

Таблица 7
Число животных	Пол	Помутнение роговицы	Радужная оболочка	Конъюнктива
Покраснение	Хемоз (слезоотделение)	Слезотечение
1	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
2	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00
3	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00	0,00

Можно утверждать, что микроэмульсия оказывала слабо раздражающий эффект после закапывания, который в течение 24 часов после закапывания стал полностью обратимым. На основании этих результатов микроэмульсия классифицируется как не вызывающая раздражения глаз.