замещенные n-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-n-(аминоалкил)амиды нитробензойных кислот

Формула изобретения

1. Замещенные N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-(аминоалкил)амиды нитробензойных кислот общей формулы I



где нитрогруппа может находиться в различных положениях фенильного кольца, R¹ может быть водородом или (C ₁-C₂)-алкилом, R² может быть (C ₁-C₂)-алкилом или вместе с атомом азота (NR ² ₂) может быть насыщенным гетероциклом, таким как морфолин или пиперидин, «n» может быть 2-3, и их физиологически приемлемые соли присоединения кислот предпочтительно гидрохлориды (I·HCl).

2. Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диметиламино)пропил]-4-нитробензол карбоксамида, обладающий антиаритмическим и, в частности, антифибрилляторным действием.

3. Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диэтиламино)этил]-4-нитробензол карбоксамида, обладающий антиаритмическим, в частности, антифибрилляторным действием.

4. Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил]-4-нитробензол карбоксамида, обладающий антиаритмическим, в частности, антифибрилляторным действием.

5. Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(морфолино)пропил]-4-нитробензол карбоксамида, обладающий антиаритмическим, в частности, антифибрилляторным действием.

6. Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-1-метил-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил]-4-нитробензол карбоксамида, обладающий антиаритмическим, в частности, антифибрилляторным действием.

7. Способ получения замещенных N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-(аминоалкил)амидов нитробензойных кислот общей формулы I, где R¹, R ² и «n» имеют вышеуказанные значения, отличающийся тем, что 2-галоген-N-(1-адамантил)ацетамиды общей формулы III



где R¹ означает водород или (C ₁-C₂)-алкил, X означает хлор или бром, вводят во взаимодействие с диаминами общей формулы IV



где R² могут быть (C₁-C ₂)-алкилами или вместе с атомом азота (NR² ₂) может быть насыщенным гетероциклом, таким как морфолин или пиперидин, «n» может быть 2-3, в инертных растворителях в присутствии акцепторов кислоты или с избытками диаминов IV с получением амидов общей формулы V



где R¹, R², NR² ₂ и «n» имеют вышеуказанные значения, и переводят амиды V при действии хлорангидридов нитробензойных кислот в инертных органических растворителях или двухфазных смесях растворителей в присутствии акцепторов кислот в соединения общей формулы I, из которых при действии соляной кислоты получают их гидрохлориды общей формулы (I·HCl).

8. Применение соединений по пп.1-6 в качестве антиаритмических, в частности, антифибрилляторных средств.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области биологически активных соединений, конкретно к новой группе замещенных N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-(аминоалкил)амидов нитробензойных кислот общей формулы I

где нитрогруппа может находиться в различных положениях фенильного кольца, R¹ может быть водородом или (C₁-C₂)-алкилом, R² может быть (C₁-C₂)-алкилом или вместе с атомом азота (NR² ₂) может быть насыщенным гетероциклом, таким как морфолин или пиперидин, «n» может быть 2-3 и к их физиологически приемлемым солям присоединения кислот, предпочтительно к гидрохлоридам общей формулы II (I·HCl).

Заявляемые соединения обладают высокой антиаритмической, в частности антифибрилляторной, активностью.

Профилактика и лечение злокачественных нарушений сердечного ритма и, как следствие этого, снижение риска возникновения внезапной сердечной смерти, являются одними из наиболее актуальных задач современной кардиофармакологии. Полагают, что для достижения этой цели наиболее перспективным является использование лекарственных средств, увеличивающих рефрактерный период кардиомиоцитов путем блокады трансмембранных потенциалзависимых K⁺ каналов, встроенных в клеточную мембрану кардиомиоцитов предсердий и желудочков - антиаритмических лекарственных средств III класса по классификации Vaughan Williams (Malhotra S., Das M.K., Future Cardiol. - 2011. - v.7. - № 2. - P.203-17; Savelieva I., Camm J., J Interv Card Electrophysiol. - 2008. - v.23. - № 1. - P.7-14). Однако классические представители антиаритмиков III класса - препараты амиодарон и соталол - обладают широким спектром побочных эффектов, в том числе и аритмогенностью (Pollard C.E. el al., Br J Pharmacol. - 2010. - v.159. - № 1. - P.12-21; Reingardiene D., Vilcinskaite J., Medicina (Kaunas). - 2007. - v.43. - № 4. - Р.347-53 и др.). В настоящее время интенсивно проводятся исследования, посвященные внедрению в клиническую практику азимилида (Watanabe Y., Kimura J., J Pharmacol Sci. - 2010. - v.114. - № 1. - P.111-4), тедисамила (Krishnamoorthy S., Lip G.Y., Expert Opin Investig Drugs. - 2009. - v.18. - № 8. - P.1191-6), дронедарона (Mélon P., Rev Med Liege. - 2011. - v.66. - № 3. - P.159-63), ниферидила (Р.Г. Глушков, С.Д. Южаков и др. Хим. фарм. журнал. - 2011. - т.48. - № 2. - С.3-12) целиварона (Mason P.K., DiMarco J.P., Circ Arrhythm Electrophysiol. - 2009. - v.2. - P.588-597), PM-101 (Souney P.F. et al., Expert Opin Drug Saf. - 2010. - v.9. - № 2. - P.319-33) и поиску новых антиаритмиков III класса, проявляющих способность блокировать быстрый компонент калиевого тока задержанного выпрямления, протекающий через соответствующие калиевые каналы, встроенные в мембрану кардиомиоцитов.

Возможным подходом к решению задачи нахождения препарата для лечения аритмий и профилактики внезапной сердечной смерти является поиск высокоэффективных антиаритмических лекарственных средств в ряду замещенных N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-(аминоалкил)амидов нитробензойных кислот.

В основу настоящего изобретения легло получение новых соединений с высокой антиаритмической и антифибрилляторной эффективностью и большей широтой терапевтического действия.

Наиболее близким прототипом по химическом строению является гидрохлорид N-[2-(дициклогексиламино)-2-оксоэтил]-N-[(диэтиламино)пропил]-4-нитробензол каброксамида (далее прототип). [«Амиды аминокарбоновых кислот, способ их получения и фармацевтическая композиция», авторы В. Зауер (DE), Р. Шиндлер (DE), К. Рюгер (DE), X. Попе (DE), Д. Маркс (DE), Р. Барч (DE), Н.В. Каверина (RU), С.Б. Середенин (RU), В.В. Лысковцев (RU), A.M. Лихошерстов (RU), С.А. Борисенко (RU), C.A. Крыжановский (RU), Патент РФ № 2134683; New Aminocarboxamides with Class III Anti-Arrhythmic Activity, H. Poppe, R. Schindler, W. Saner, D. Marx, R. Bartsch, N.V. Kaverina, A.M. Lichoscherslow, S.F. Sokolov, V.V. Lyskovtsev, S.B. Seredenin, S.A. Borisenko, Arch. Pharm. Pharm. Med. Chem. - 1999. - V.332. - P.233-242].

В основе механизма действия прототипа лежит его способность угнетать как быстроактивируемый компонент выходящего калиевого тока (I_Kr) задержанного выпрямления, так и его медленноактивируемый компонент (I _s), т.е. блокировать два из трех компонентов выходящего калиевого тока задержанного выпрямления (Poppe H. et al., Arch. Pharm. Med. Chem. - 1999. - v.332. - P.233-42), что позволяет отнести прототип к антиаритмикам III класса по классификации Vaughan Williamse. Согласно экспериментальным данным прототип обладает выраженной антиаритмической и антифибрилляторной активностью, по которой превосходит такие эталонные антиаритмики III класса как амиодарон, сематилид и др.

Однако прототип не нашел практического применения вследствие наличия у него нежелательных побочных эффектов.

Решением поставленной задачи стало получение N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-(аминоалкил)амиды нитробензойных кислот.

Соединения общей формулы I в специальной и патентной литературе не описаны. В качестве примеров соединений формулы I настоящего изобретения следует назвать:

N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диметиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамид,

N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диметиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамид,

N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диэтиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамид,

N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамид,

N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-3-нитробензол карбоксамид,

N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(морфолино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамид,

N-2-(1-адамантиламино)-1-метил-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамид.

Соединения общей формулы I получали по следующей схеме:

2-Галоген-N(1-адамантил)ацетамиды общей формулы III вводят во взаимодействие с диаминами общей формулы IV, где R² и «n» имеют вышеуказанные значения, в инертных растворителях в присутствии акцепторов кислот, таких как, например, карбонат калия, карбонат натрия или третичные амины, или предпочтительно в избытке диаминов общей формулы IV. В качестве инертных растворителей пригодны спирты, простые эфиры, как диоксан, ароматические углеводороды, как бензол, толуол или ксилол или диполярные апротонные растворители, такие как диметилформамид, диметилсульфоксид.

Особый вариант осуществления настоящего изобретения состоит в том, что в качестве растворителя применяют избыток соединений формул IV.

При получении соединений формулы V температуру можно изменять в широких пределах: от комнатной до 150°C.

Соединения общей формулы V вводят далее во взаимодействие с галогенидами нитробензойных кислот общей формулы VI, где нитрогруппа может находиться в различных положениях фенильного кольца, в инертных растворителях в присутствии акцепторов кислоты с получением целевых соединений I.

В качестве акцепторов кислот пригодны, например, карбонаты щелочных металлов, гидрокарбонаты щелочных металлов или третичные амины, такие как триэтиламин. В качестве инертных растворителей можно применять ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол, ксилол, или в двухфазных смесях, таких как вода/бензол, вода/толуол, водные растворы карбонатов щелочных металлов/ацетон. При получении соединений формулы I температуру можно изменять в широких пределах: от комнатной до температуры кипения выбранных растворителей.

Для получения физиологически приемлемых солей присоединения кислот II амиды нитробензойных кислот общей формулы I вводят во взаимодействие с неорганическими или органическими кислотами, предпочтительно с соляной кислотой.

Соединения I представляют собой твердые кристаллические вещества, нерастворимые в воде, растворимые в органических растворителях. Гидрохлориды II представляют собой высокоплавкие белые кристаллические вещества растворимые в воде и нерастворимые в эфирах, например диэтиловом эфире, и ароматических растворителях, например бензоле, толуоле.

Строение веществ общих формул I и II подтверждены данными спектров ЯМР ¹H, а их чистота - данными элементного анализа.

Пример 1: Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-(2-(диметиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамнда (IIa)

Смесь 3.4 г (15 ммоль) 2-хлор-N-(1-адамантил)ацетамида и 7.93 г (90 ммоль) 2-диметиламиноэтиламина нагревают с обратным холодильником при температуре 140-150°C в течение одного часа. Избыток амина отгоняют в вакууме. К остатку приливают 20 мл воды и 20 мл концентрированного водного раствора аммиака, продукт экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 3.6 г (86% от теории) неочищенного 2-диметиламиноэтил-N-(1-адамантил)ацетамида.

К смеси 3.6 г (12.9 ммоль) 2-диметиламиноэтил-N-(1-адамантил)ацетамида в 30 мл бензола, 4.14 г (30 ммоль) карбоната калия и 15 мл воды при комнатной температуре и перемешивании прибавляют порциями 3.4 г (18 ммоль) п-нитробензоилхлорида и реакционную смесь перемешивают 1 час. Прибавляют 15 мл воды и перемешивают 1 час при температуре 50°C. Слои разделяют, бензольный раствор промывают водой и продукт экстрагируют разбавленной (1:10) соляной кислотой. Солянокислый экстракт подщелачивают концентрированным водным раствором аммиака, экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 4,8 г (87% от теории) неочищенного N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диметиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамида.

К раствору 4.8 г (11.2 ммоль) N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диметиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамида в 25 мл ацетона прибавляют эфирный раствор хлористого водорода и смесь оставляют кристаллизоваться. Осадок отфильтровывают, высушивают и перекристаллизовывают из спирта. Выход гидрохлорида N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диметиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамида - 3.4 г (65% от теории). Т.пл. 242-244°C.

Найдено (%): С, 59.59; Н, 7.13; N, 12.15; Cl, 7.28. C₂₃H₃₃ClN₄O₄. Вычислено (%): C, 59.41; H, 7.15; N, 12.05; Cl, 7.63.

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, , м.д., J/Гц): 1.53-2.02 (м, 15 Н, адамантан); 2.86 (с, 6 Н, N(CH₃)₂); 3.34 (м, 2Н, CH₂ CH₂N); 3.79 (т, 2Н, CONCH₂ CH₂, ³J=6.5); 3.84 (с, 2Н, COCH₂ N); 7.54 (с, 1Н, NH); 7.65 (д, 2Н, H_Ar(2), H_Ar (6), ³J=8.6); 8.27 (д, 2Н, H_Ar(3), H _Ar(5), ³J=8.6).

Пример 2: Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диметиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида (IIб)

Смесь 3.4 г (15 ммоль) 2-хлор-N-(1-адамантил)ацетамида и 9.2 г (90 ммоль) 3-диметиламинопропиламина нагревают с обратным холодильником при температуре 140-150°C в течение одного часа. Избыток амина отгоняют в вакууме. К остатку приливают 20 мл воды и 20 мл концентрированного водного раствора аммиака, продукт экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 4.0 г (90% от теории) неочищенного 3-диметиламинопропил-N-(1-адамантил)ацетамида.

К смеси 4.0 г (13.6 ммоль) 3-диметиламинопропил-N-(1-адамантил)ацетамида в 30 мл бензола, 4.14 г (30 ммоль) карбоната калия и 15 мл воды при комнатной температуре и перемешивании прибавляют порциями 3.7 г (20 ммоль) п-нитробензоилхлорида и реакционную смесь перемешивают 1 час. Прибавляют 15 мл воды и перемешивают 1 час при температуре 50°C. Слои разделяют, бензольный раствор промывают водой и продукт экстрагируют разбавленной (1:10) соляной кислотой. Солянокислый экстракт подщелачивают концентрированным водным раствором аммиака, экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 5.6 г (93% от теории) неочищенного N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диметиламино)пропил)]-4-нитробензолкарбоксамида.

К раствору 5.6 г (12.6 ммоль) N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диметиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида в 25 мл ацетона прибавляют эфирный раствор хлористого водорода и смесь оставляют кристаллизоваться. Осадок отфильтровывают, высушивают и перекристаллизовывают из спирта. Выход гидрохлорида N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диметиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида - 4.7 г (78% от теории). Т.пл. 195-197°C.

Найдено (%): C, 59.85; H, 7.57; N, 12.01; Cl, 7.03. C₂₄H₃₅ClN₄O₄. Вычислено (%): C, 60.18; H, 7.36; N,11.70; Cl, 7.40.

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, , м.д., J/Гц): 1.52-2.05 (м, 17 Н, адамантан, CH ₂CH₂N); 2.77 (с, 6 Н, N(CH₃) ₂); 3.13 (м, 2Н, CH₂CH₂N); 3.46 (т, 2Н, CONCH₂CH₂, ³ J=6.5); 3.76 (с, 2Н, COCH₂N); 7.48 (с, 1Н, NH); 7.63 (д, 2Н, H_Ar(2), H_Ar(6), ³J=8.7); 8.26 (д, 2Н, H_Ar(3), H_Ar(5), ³ J=8.7).

Пример 3: N-(2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диэтиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамид (Iв).

Смесь 6.8 г (30 ммоль) 2-хлор-N-(1-адамантил)ацетамида и 20.9 г (180 ммоль) 2-диэтиламиноэтиламина нагревают с обратным холодильником при температуре 140-150°C в течение одного часа. Избыток амина отгоняют в вакууме. К остатку приливают 20 мл воды и 20 мл концентрированного водного раствора аммиака, продукт экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 8.2 г (89% от теории) неочищенного 2-диэтидаминоэтил-N-(1-адамантил)ацетамида.

К смеси 8.2 г (27 ммоль) 2-диэтиламиноэтил-N-(1-адамантил)ацетамида в 60 мл бензола, 7.5 г (54 ммоль) карбоната калия и 30 мл воды при комнатной температуре и перемешивании прибавляют порциями 6.2 г (33 ммоль) п-нитробензоилхлорида и реакционную смесь перемешивают 1 час. Прибавляют 30 мл воды и перемешивают 1 час при температуре 50°C. Слои разделяют» бензольный раствор промывают водой и продукт экстрагируют разбавленной (1:10) соляной кислотой. Солянокислый экстракт подщелачивают концентрированным водным раствором аммиака, экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 10 г остатка, который перекристаллизовывают из ацетона. Выход N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диэтиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамида 8.5 г (74% от теории). Т.пл. 143-145°C.

Найдено (%): C, 65.57; Н, 8.07; N, 12.47. C₂₅ H₃₆N₄O₄. Вычислено (%): C, 65.77; Н, 7.95; N, 12.27.

Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диэтиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамида (IIв)

К раствору 4.3 г (10 ммоль) N-[2-(-1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[2-(диэтиламино)этил)]-4-нитробензол карбоксамида в 60 мл ацетона прибавляют концентрированную соляную кислоту до кислой реакции и смесь оставляют кристаллизоваться. Осадок отфильтровывают, высушивают и перекристаллизовывают из смеси этанола с изопропанолом (1:1). Выход - 3.6 г (73% от теории). Т.пл. 234-236°C.

Найдено (%): C, 60.68; Н, 7.28; N, 11.10; Cl, 6.99. C₂₅H₃₇ClN ₄O₄. Вычислено (%): C, 60.90; H, 7.56; N, 11.36; Cl, 7.19.

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, , м.д., J/Гц): 1.25 (т, 6Н, N(CH₂CH₃ )₂, ³J=7.2); 1.51-2.02 (м, 15 Н, адамантан); 3.20 (м, 4 Н, N(CH₂CH₃)₂ ); 3.36 (м, 2Н, CH₂CH₂N); 3.79 (т, 2Н, CONCH₂CH₂, ³J=6.5); 3.88 (с, 2Н, COCH₂N); 7.61 (с, 1 Н, NH); 7.63 (д, 2 Н, H_Ar(2), H_Ar(6), ³J=8.6); 8.27 (д, 2Н, H_Ar(3), H_Ar(5), ³ J=8.6).

Пример 4: N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-3-диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамид (Iг)

Смесь 5.69 г (25 ммоль) 2-хлор-N-(1-адамантил)ацетамида и 19.5 г (150 ммоль) 3-диэтиламинопропиламина нагревают с обратным холодильником при температуре 140-150°C в течение одного часа. Избыток амина отгоняют в вакууме. К остатку приливают 20 мл воды и 20 мл концентрированного водного раствора аммиака, продукт экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 7.1 г (88% от теории) неочищенного 3-диэтиламинопропил-N-(1-адамантил)ацетамида.

К смеси 7.1 г (22.1 ммоль) 3-диэтиламинопропил-N-(1-адамантил)ацетамида в 60 мл бензола, 6.9 г (50 ммоль) карбоната калия и 30 мл воды при комнатной температуре и перемешивании прибавляют порциями 5.7 г (31 ммоль) п-нитробензоилхлорида и реакционную смесь перемешивают 1 час. Прибавляют 30 мл воды и перемешивают 1 час при температуре 50°C. Слои разделяют, бензольный раствор промывают водой и продукт экстрагируют разбавленной (1:10) соляной кислотой. Солянокислый экстракт подщелачивают концентрированным водным раствором аммиака, экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 9.5 г остатка, который перекристаллизовывают из ацетона. Выход N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида 8.3 г (80% от теории). Т.пл. 113-115°C.

Найдено (%): С, 66.19; Н, 8.17; N, 12:11. C₂₆ H₃₈N₄O₄. Вычислено (%): C, 66.36; H, 8.14; N, 11.90.

Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида (IIг)

К раствору 4.7 г (10 ммоль) N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида в 60 мл ацетона прибавляют концентрированную соляную кислоту до кислой реакции и смесь оставляют кристаллизоваться. Осадок отфильтровывают, высушивают и перекристаллизовывают из изопропанола. Выход - 4.4 г (87% от теории). Т.пл. 190-191°C.

Найдено (%): С, 61.64; Н, 7.81; N, 11.19; Cl, 7.13. C₂₆H₃₉ClN₄O₄. Вычислено (%): С, 61.58; Н, 7.75; N, 11.05; Cl, 6.99.

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, , м.д., J/Гц): 1.24 (т, 6Н, N(CH₂CH ₃)₂, ³J=7.2); 1.54-2.07 (м, 17Н, адамантан, CH₂CH₂N); 3.11 (м, 6Н, N(CH₂CH₃)₂, CH₂ CH₂N); 3.49 (т, 2Н, CONCH₂ CH₂, ³J=6.5); 3.79 (с, 2Н, COCH₂ N); 7.54 (с, 1Н, NH); 7.63 (д, 2Н, H_Ar(2), H_Ar (6), ³J=8.6); 8.26 (д, 2Н, H_Ar(3), H _Ar(5), ³J=8.6).

Пример 5: Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-3-интробензол карбоксамида (IIд)

Смесь 5.69 г (25 ммоль) 2-хлор-N-(1-адамантил)ацетамида и 19.5 г (150 ммоль) 3-диэтиламинопропиламина нагревают с обратным холодильником при температуре 140-150°C в течение одного часа. Избыток амина отгоняют в вакууме. К остатку приливают 20 мл воды и 20 мл концентрированного водного раствора аммиака, продукт экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 7.1 г (88% от теории) неочищенного 3-диэтиламинопропил-N-(1-адамантил)ацетамида.

К смеси 7.1 г (22.1 ммоль) 3-диэтиламинопропил-N-(1-адамантил)ацетамида в 60 мл бензола, 6.9 г (50 ммоль) карбоната калия и 30 мл воды при комнатной температуре и перемешивании прибавляют порциями 5.7 г (31 ммоль) м-нитробензоилхлорида и реакционную смесь перемешивают 1 час. Прибавляют 30 мл воды и перемешивают 1 час при температуре 50°C. Слои разделяют, бензольный раствор промывают водой и продукт экстрагируют разбавленной (1:10) соляной кислотой. Солянокислый экстракт подщелачивают концентрированным водным раствором аммиака, экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 9.1 г (93% от теории) неочищенного N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-3-нитробензол карбоксамида.

К раствору 9.1 г (19 ммоль) N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-3-нитробензол карбоксамида в 100 мл ацетона прибавляют конентрированную соляную кислоту и смесь оставляют кристаллизоваться. Осадок отфильтровывают, высушивают и перекристаллизовывают из этанола. Выход гидрохлорида N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-3-нитробензол карбоксамида - 6.9 г (72% от теории). Т.пл. 211-213°C.

Найдено (%): С, 61.79; H, 7.93; N, 10.91; Cl, 7.05. C₂₆H₃₉ClN₄O₄. Вычислено (%): С, 61.58; H, 7.75; N, 11.05; Cl, 6.99.

Спектр ЯМР ¹H (DMSO, , м.д., J/Гц): 1.23 (т, 6H, N(CH₂CH ₃)₂, ³J=7.2); 1.52-2.05 (м, 17H, адамантан, CH₂CH₂N); 3.11 (м, 6H, N(CH₂CH₃)₂, CH₂ CH₂N); 3.50 (т, 2H, CONCH₂ CH₂, ³J=6.4); 3.81 (с, 2H, COCH₂ N); 7.48 (с, 1H, NH); 7.72 (д.д, 1H, H_Ar(5), ³J₁=³J₂=7.9); 7.83 (д, 1H, H_Ar(6), ³J=7.9); 8.17 (с, 1H, H _Ar(2)); 8.29 (д, 1H, H_Ar(4), ³J=7.9).

Пример 6: Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(морфолино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида (IIе)

Смесь 5.69 г (25 ммоль) 2-хлор-N-(1-адамантил)ацетамида и 21.6 г (150 ммоль) 3-морфолинопропиламина нагревают с обратным холодильником при температуре 140-150°C в течение одного часа. Избыток амина отгоняют в вакууме. К остатку приливают 20 мл воды и 20 мл концентрированного водного раствора аммиака, продукт экстрагируют толуолом и толуольный раствор промывают водой. После отгонки толуола получают 8.0 г (96% от теории) неочищенного 3-морфолинопропил-N-(1-адамантил)ацетамида.

К смеси 8.0 г (23.8 ммоль) 3-морфолинопропил-N-(1-адамантил)ацетамида в 60 мл толуола, 6.9 г (50 ммоль) карбоната калия и 30 мл воды при комнатной температуре и перемешивании прибавляют порциями 6.2 г (33 ммоль) п-нитробензоилхлорида и реакционную смесь перемешивают 1 час. Прибавляют 30 мл воды и перемешивают 1 час при температуре 50°C. Слои разделяют, толуольный раствор промывают водой и продукт экстрагируют разбавленной (1:10) соляной кислотой. Солянокислый экстракт подщелачивают концентрированным водным раствором аммиака, экстрагируют толуолом и толуольный раствор промывают водой. После отгонки толуола получают 11.1 г (96% от теории) неочищенного N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(морфолино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида.

К раствору 11.1 г (22.9 ммоль) N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(морфолино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида в 100 мл ацетона прибавляют концентрированную соляную кислоту и смесь оставляют кристаллизоваться. Осадок отфильтровывают, высушивают и перекристаллизовывают из этанола. Выход гидрохлорида N-[2-(1-адамантиламино)-2-оксоэтил]-N-[3-(морфолино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида - 7.5 г (63% от теории). Т.пл. 207-208°C.

Найдено (%): С, 59.80; Н, 7.29; N, 10.80; Cl, 6.84. C₂₆H₃₃ClN₄O₅. Вычислено (%): С, 59.93; Н, 7.16; N, 10.75; Cl, 6.80.

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO, , м.д., J/Гц): 1.48-2.10 (м, 17Н, адамантан, CH₂ CH₂CH₂N); 2.82-3.53 (м, 8Н, N(C H₂CH₂)₂O, CONCH ₂CH₂CH₂N); 3.76 (с, 2Н, COCH ₂N); 3.93 (м, 4Н, N(CH₂CH₂ )₂O); 7.54 (с, 1Н, NH); 7.64 (д, 2Н, H_Ar (2), H_Ar(6), ³J=8.7); 8.26 (д, 2Н, H _Ar(3), H_Ar(5), ³J=8.7).

Пример 7: N-[2-(1-адамантиламино)-1-метил-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамид (Iж)

Смесь 5.72 г (20 ммоль) 2-бром-N-(1-адамантил)пропиоамида и 15.6 г (120 ммоль) 3-диэтиламинопропиламина нагревают с обратным холодильником при температуре 140-150°C в течение одного часа. Избыток амина отгоняют в вакууме. К остатку приливают 40 мл воды и 20 мл концентрированного водного раствора аммиака, продукт экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 5.0 г (81% от теории) неочищенного 2-(3-диэтиламинопропил)-N-(1-адамантил)пропиоамида.

К смеси 5.0 г (16.7 ммоль) 2-(3-диэтиламинопропил)-N-(1-адамантил)пропиоамида в 60 мл бензола, 5.52 г (40 ммоль) карбоната калия и 30 мл воды при комнатной температуре и перемешивании прибавляют порциями 4.27 г (23 ммоль) п-нитробензоилхлорида и реакционную смесь перемешивают 1 час. Прибавляют 30 мл воды и перемешивают 1 час при температуре 50°C. Слои разделяют, бензольный, раствор промывают водой и продукт экстрагируют разбавленной (1:10) соляной кислотой. Солянокислый экстракт подщелачивают концентрированным водным раствором аммиака, экстрагируют бензолом и бензольный раствор промывают водой. После отгонки бензола получают 6.3 г остатка, который перекристаллизовывают из ацетона. Выход N-[2-(1-адамантиламино)-1-метил-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида 5.2 г (64% от теории). Т.пл. 113-114°C.

Найдено (%): C, 67.15; Н, 8.39; N, 11.52. C₂₇ H₄₀N₄O₄. Вычислено (%): C, 66.91; Н, 8.32; N, 11.56.

Гидрохлорид N-[2-(1-адамантиламино)-1-метил-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида (IIж)

К раствору 4.84 г (10 ммоль) N-[2-(1-адамантиламино)-1-метил-2-оксоэтил]-N-[3-(диэтиламино)пропил)]-4-нитробензол карбоксамида в 60 мл ацетона прибавляют концентрированную соляную кислоту до кислой реакции и смесь оставляют кристаллизоваться. Осадок отфильтровывают, высушивают и перекристаллизовывают из изопропанола. Выход - 4.2 г (81% от теории). Т.пл. 207-208°C.

Найдено (%): С, 62.05; Н, 8.07; N, 10.78; Cl, 6.92. C₂₇H₄₁ClN₄O₄. Вычислено (%): С, 62.23; Н, 7.93; N, 10.75; Cl, 6.80.

Спектр ЯМР ¹H (DMSO, , м.д., J/Гц): 1.22 (т, 6Н, N(CH₂CH ₃)₂, ³J=6.9); 1.36 (д, 3Н, COCHC H₃, ³J=6.8); 1.54-2.08 (м, 17Н, адамантан, CH₂CH₂N; 3.11 (м, 6Н, N(CH ₂CH₃)₂, CH₂CH ₂N); 3.58 (м, 2Н, CONCH₂CH₂ ); 4.00 (кв, 1Н, CHCH₃, ³J=6.8); 7.06 (с, 1Н, NH); 7.52 (д, 2Н, H_Ar(2), H_Ar (6), ³J=8.3); 8.30 (д, 2 Н, H_Ar(3), H _Ar(5), ³J=8.3).

Фармакологическое изучение заявляемых соединений

Пример 1. Изучение острой токсичности (LD₅₀) заявляемых соединений

Острую токсичность заявляемых соединений изучали в опытах на беспородных мышах-самцах массой тела 21-24 г. Заявляемые соединения вводили внутрибрюшинно (далее в/б). В качестве растворителя использовали апирогенную воду для инъекций. Острую токсичность каждого соединения определяли, как минимум, в пяти различных дозах, количество животных в каждой серии 6. Летальность животных оценивали через 24 часа после введения заявляемых соединений. По методу Литчфилда-Уилкоксона рассчитывали LD₁₆, LD₅₀ и LD₈₄ с их доверительными 95% границами. Результаты экспериментов указаны в таблице 1. В качестве прототипа использовали соединение гидрохлорид N-[2-(дициклогексиламино)-2-оксоэтил]-N-[(диэтиламино)пропил]-4-нитробензол каброксамида.

Таблица 1
Острая токсичность заявляемых соединений
	LD16 мг/кг, в/б	LD50 мг/кг, в/б	LD84 мг/кг, в/б
прототип	64,6 (61,1÷68,4)	91,7 (73,0÷115,3)	130,2 (123,1-137,7)
IIб	98,2 (94,2÷101,5)	132,2 (104,2÷167,8)	178,1 (172,3÷184,1)
IIв	105,2 (101,1÷109,6)	142,1 (111,7÷180,7)	191,9 (184,3÷200,0)
IIг	80,1 (76,3÷84,1)	119,4 (95,2÷149,6)	177,9 (169,5÷186,8)
IIе	284,7 (245,8÷251,5)	305,0 (266,9÷348,4)	374,0 (369,8÷378,3)
IIж	146,1 (106,1÷201,2)	174,1 (83,7÷362,0)	207,5 (150,6÷285,7)

Как следует из полученных данных, заявляемые соединения менее токсичны, чем прототип. Наименьшей токсичностью обладает соединение IIе.

Пример 2. Оценка противофибрилляторной активности заявляемых соединений на модели электрической фибрилляции желудочков сердца у крыс

Опыты проводили на анестезированных (уретан, 1300 мг/кг, в/б) беспородных крысах-самцах массой тела 380-420 г. После интубации животных переводили на искусственное дыхание кислородно-воздушной смесью; производили стернэктомию и перикардотомию. В миокард левого желудочка сердца на расстоянии 3-5 мм друг от друга имплантировали два позолоченных электрода. Порог электрической фибрилляции сердца определяли сканированием уязвимого периода серией из 20 прямоугольных импульсов постоянного тока увеличивающейся интенсивности (длительность импульса 4 мс, частота 50 имп/с) до возникновения фибрилляции. За порог фибрилляции принимали минимальную силу тока, стабильно вызывающую фибрилляцию желудочков при повторной стимуляции. В опыт отбирали только тех животных, у которых фибрилляция желудочков наступала при силе тока не более 6 мА.

В работе использовали электростимулятор HSE Stimulator II (Hugo Sach Electronik, Германия). В течение всего эксперимента регистрировали ЭКГ (II стандартное отведение) В качестве регистратора использовали электрокардиограф ЭК 4Т-02 (Россия). Визуальный контроль регистрируемых параметров в течение всего эксперимента производили при помощи 4-канального осциллоскопа фирмы Elema-Simiens (Швеция). Прототип и заявляемые соединения вводили внутривенно в эквимолярных дозах (4 мкМоль/кг) с постоянной скоростью и в постоянном объеме. В качестве растворителя использовали 0,9% раствор хлорида натрия. Для введения использовали инъектор Syringe pump (Sage Instruments, Италия). В качестве препарата сравнения использовали прототип.

Статистическую обработку полученных данных осуществляли с использованием критерия Уилкоксона. Результаты экспериментов представлены в таблице 2.

Таблица 2
Влияние прототипа и заявляемых соединений на -порог электрической фибрилляции сердца у крыс в дозе 4 мкМоль/кг
	прототип		IIб		IIв		IIг		IIe		IIж
№ животного	Iо мА	Iп мА	Iо мА	Iп мА	Iо мА	Iп мА	Iо мА	Iп мА	Iо мА	Iп мА	Iо мА	Iп мА
1	2	>10 1	0,5	0,5	4	>10	2	>10	1	>10	1	>10
2	1	10	1	1	1	>10	4	>10	3	>10	1	>10
3	3	>10	1	2	2	2	1	>10	2	10	2	>10
4	1	>10	1	>10	1	>10	3	>10	4	>10	2	5
5	1	>10	3	10	1	>10	1	>10	2	>10	2	>10
6	0,5	>10	1	1	2	2	1	>10	1-	2	4	10
7											2	3
medians 25 и 75%	1	10	1	1,5	1,5	10	1,5	10	2	10	2	10
	1-2	10-10	1-1	1-10	1-2	2-10	1-3	10-10	1-3	10-10	1-2	5-10
P		0,028		0,108		0,068		0,028		0,028		0,018
Обозначения:
Iо - исходный порог фибрилляции;
Iп - порог фибрилляции на фоне введения заявляемых соединений.
1(>10 означает: порог фибрилляции более 10 мА).

Как следует из полученных данных, все исследованные соединения в той или иной мере проявляют противофибрилляторную активность. Наиболее выраженную противофибрилляторную активность проявляют соединения IIг, IIе и IIж.

Пример 3. Оценка антиаритмической активности заявляемых соединений на модели хлоридбариевой аритмии у крыс

Опыты проводили на беспородных наркотизированных (уретан 1300 мг/кг, в/б) крысах-самцах массой тела 250-300 г. Животных интубировали и переводили на искусственное дыхание кислородно-воздушной смесью. Регистрировали ЭКГ во II стандартном отведении. В качестве регистратора использовали Mingograf-82 фирмы Elema-Siemens (Швеция). Визуальный контроль регистрируемых параметров в течение всего эксперимента производили при помощи 8-канального осциллоскопа фирмы Nihon Konden (Япония). В контрольной серии экспериментов (n=10) определяли минимальную дозу бария хлорида, вызывающую фатальные нарушения ритма сердца в первые 5 минут от момента его внутривенного введения. Животным опытных групп (n=6 в каждой группе) за 2 минуты до инъекции бария хлорида вводили эквимолярные дозы прототипа и заявляемых соединений (4 мкМоль/кг, в/в). В каждой опытной группе оценивали количество погибших животных в первые 5 минут после введения бария хлорида. Статистическую обработку проводили по методу точной вероятности Фишера.

Как следует из полученных данных, в контрольной серии экспериментов минимальная летальная доза бария хлорида составила 20 мг/кг. При введении бария хлорида в этой дозе контрольным животным (n=10) у них развивались злокачественные нарушения сердечного ритма, которые в течение первых 5 минут приводили к 100% гибели животных. Заявляемые соединения статистически значимо (Р=0,006) препятствовали гибели животных. Полученные результаты приведены в таблице 3.

Таблица 3
Влияние прототипа и заявляемых соединений в дозе 4 мкМоль/кг, в/в на выживаемость животных на модели нарушений ритма сердца вызванных бария хлоридом у крыс
контроль		прототип		IIв		IIг		IIж
выжили	погибли	выжили	погибли	выжили	погибли	выжили	погибли	выжили	погибли
0	10	6	0	5	1	5	1	5	1
		P=0,0004		P=0,006		P=0,006		P=0,006

Таким образом, на модели хлоридбариевой аритмии у крыс, патогномичной для антиаритмиков III класса по классификации Vaughan Williams, заявляемые соединения проявляют выраженную антиаритмическую активность, препятствуя генерации фатальных нарушений сердечного ритма.

Пример 4. Влияние заявляемых соединений на аритмогенез на модели хлоридбариевой аритмии у крыс

Опыты проводили на беспородных наркотизированных (уретан 1300 мг/кг, в/б) крысах-самцах массой тела 250-300 г. Животных интубировали и переводили на искусственное дыхание кислородно-воздушной смесью. Регистрировали ЭКГ во II стандартном отведении. В качестве регистратора использовали Mingograf-82 фирмы Elema-Siemens (Швеция). Визуальный контроль регистрируемых параметров в течение всего эксперимента производили при помощи 8-канального осциллоскопа фирмы Nihon Konden (Япония). В контрольной серии экспериментов (n=10) определяли минимальную дозу бария хлорида, вызывающую фатальные нарушения ритма сердца в первые 5 минут от момента его внутривенного (в/в) введения. Животным опытных групп (n=6 в каждой группе) за 2 минуты до инъекции бария хлорида вводили эквимолярные дозы прототипа и заявляемых соединений (4 мкМоль/кг, в/в). По окончании экспериментов в каждой группе крыс оценивали количество (в %) злокачественных нарушений сердечного ритма: фибрилляций желудочков сердца, политропной желудочковой экстрасистолии, желудочковой тахикардии, тахикардии «пируэт» (torsaide de pointes) - а также их продолжительность.

Как следует из полученных данных, в контрольной серии экспериментов такие злокачественные нарушения сердечного ритма, как желудочковая тахикардия и тахикардия torsaide de pointes, наблюдались у животных в 90% и 70% случаях соответственно. У крыс, получавших заявляемые соединения, частота возникновения вышеперечисленных злокачественных нарушений ритма существенно ниже (см. чертеж). Так, например, на фоне соединения IIг желудочковая тахикардия возникает в 17% случаев, а тахикардия «пируэт» не развивается. Не менее важно, что у животных, получавших заявляемые соединения, злокачественные нарушения ритма сердца возникали преимущественно в момент введения бария хлорида и продолжались не более 10-15 секунд, тогда как в контрольном опыте их продолжительность составляла 30-60 секунд и более. У животных контрольной группы указанные нарушения сердечного ритма в 100% случаев переходили в необратимую фибриляцию желудочков сердца; у животных, получавших заявляемые соединения, необратимая фибрилляция развивалась в 17% случаев.

Таким образом, заявляемые соединения на данной модели препятствуют генерации злокачественных нарушений сердечного ритма, т.е. проявляют выраженную противофибрилляторную активность.

Пример 5. Изучение местнораздражающего действия заявляемых соединений

Поскольку прототип обладает местнораздражающим (флеботоксическим действием) в опытах на крысах было изучено местнораздражающее действие одного из заявляемых соединений - IIе, отобранного слепым методом.

Эксперименты по изучению возможного местного раздражающего действия соединения IIе были проведены на белых беспородных крысах самцах. Крысы были получены из питомника «Филиал Столбовая» НЦ биомедицинских технологий РАМН. Экспериментальная работа с животными проводилась в соответствии с действующими «Правилами лабораторной практики» (Приказ Министерства Здравоохранения и Социального развития РФ от 23 августа 2010 г. № 708н). Исследования проводились в соответствии с требованиями Фармакологического Государственного комитета МЗ РФ "Методические указания по изучению общетоксического действия фармакологических веществ" ("Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ", М., 2005, стр.41-54).

Крысы содержались в виварии НИИ фармакологии РАМН в условиях, соответствующих действующим Санитарным правилам, со свободным доступом к воде и сбалансированному по питательности брикетированному гранулированному комбикорму фирмы «МЭСТ».

Соединение IIе растворяли ex tempore в стерильном 0,9% растворе натрия хлорида и вводили крысам внутривенно в боковую хвостовую вену 1 раз в сутки, в течение пяти суток подряд. Соединение Не вводили внутривенно в эквимолярной дозе - 2 мг/кг, в концентрации 1 мг в 1 мл. Контрольные животные в аналогичных условиях эксперимента получали стерильный 0,9% раствор натрия хлорида. Через 24 часа после заключительного внутривенного введения раствора IIе или физиологического раствора крыс выводили из эксперимента методом декапитации.

В ходе проведения эксперимента крыс ежедневно осматривали, тщательно изучали места инъекций и прилежащих к ним тканей. Местное раздражающее действие соединения IIе оценивали клинически, затем макроскопически при проведении патологоанатомического вскрытия. В момент патологоанатомического вскрытия крыс брали участки хвостов вместе с боковыми хвостовыми венами, куда осуществляли инъекции. Кусочки хвостов экспериментальных и контрольных крыс фиксировали в 10% забуференном растворе формалина, готовили гистологические срезы толщиной 10-20 микрон с помощью замораживающего микротома. Срезы окрашивали галлоцианин-хромовыми квасцами с последующей докраской эозином. Микроскопировали в проходящем свете.

В результате проведенных исследований установлено следующее. В момент внутривенного введения раствора соединения IIе и физиологического раствора у крыс не наблюдали выраженной болевой реакции на манипуляцию. Все инъекции удавалось осуществлять без затруднений, по первому предъявлению.

При ежедневных осмотрах крыс, которым внутривенно вводили соединение IIе в дозе 2 мг/кг, и крыс, которым в аналогичных условиях эксперимента вводили стерильный изотонический раствор хлорида натрия, клинических признаков местной реакции не обнаружено.

При патологоанатомическом вскрытии и осмотре тканей хвостов крыс, которым внутривенно вводили соединение IIе, и тканей хвостов крыс, которым в аналогичных условиях эксперимента вводили стерильный изотонический раствор хлорида натрия, макроскопических проявлений местной реакции не выявлено.

При последующем гистологическом исследовании тканей хвоста крыс, прилежащих к местам инъекций, и непосредственно мест инъекций соединения IIе или изотонического раствора хлорида натрия, установлено, что микроскопическая картина этих участков является идентичной у животных контрольной и экспериментальных групп. Эта картина характеризуется неизбежной реакцией на механическое повреждение вен и окружающих тканей в виде полнокровия, небольших кровоизлияний, околососудистого отека и умеренной инфильтрации подкожной клетчатки макрофагами и лимфоцитами с примесью единичных полиморфноядерных лейкоцитов.

Таким образом, установлено, что ежедневное внутривенное введение соединения IIе, приготовленного на стерильном изотоническом растворе хлорида натрия, в течение пяти дней в дозе 2 мг/кг, в концентрации 1 мг в 1 мл не вызывает выраженных морфологических изменений тканей в местах инъекций и прилежащих к ним участках, т.е. не оказывает местнораздражающего (флеботоксического) действия.

Показано, что заявляемые соединения проявляют выраженную антиаритмическую и, в частности, антифибрилляторную активность. При этом эффект наиболее активного соединения IIг в эквимолярной дозе превышает активность прототипа - гидрохлорида N-[2-(дициклогексиламино)-2-оксоэтил]-N-[(диэтиламино)пропил]-4-нитробензол каброксамида, также IIг по сравнению с прототипом обладает меньшей токсичностью.