кристаллические формы соединения 3-карбоксипропил-аминотетралина

Формула изобретения

1. Кристаллическая твердая форма (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты или кристаллический гидрохлорид (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты.

2. Кристаллическая твердая форма по п.1, где кристаллическая твердая форма представляет собой (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляную кислоту.

3. Кристаллическая твердая форма по п.2, где кристаллическая твердая форма охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, имеющей дифракционные максимумы пиков при значениях 2 , составляющих 6,92±0,20 и 15,34±0,20, и имеющей два или более дифракционных максимума при значениях 2 , выбранных из 10,24±0,20, 11,48±0,20, 12,32±0,20, 13,46±0,20, 14,04±0,20, 17,30±0,20, 18,06±0,20, 20,30±0,20, 21,42±0,20, 23,48±0,20, 25,54±0,20, 26,96±0,20, 29,30±0,20 и 30,72±0,20.

4. Кристаллическая твердая форма по п.3, где порошковая рентгенограмма включает три или более дифракционных максимума при значениях 2 , выбранных из 6,92±0,20, 10,24±0,20, 13,46±0,20, 15,34±0,20, 18,06±0,20 и 21,42±0,20.

5. Кристаллическая твердая форма по п.2, где кристаллическая твердая форма охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, в которой положения максимумов в значительной мере соответствуют положениям максимумов порошковой рентгенограммы, показанной на Фигуре 1.

6. Кристаллическая твердая форма по п.2, где кристаллическая твердая форма охарактеризована посредством кривой, полученной методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и записанной при скорости нагревания 10°C в минуту, которая показывает максимум в эндотермическом тепловом потоке при температуре от приблизительно 162°C до приблизительно 170°C.

7. Кристаллическая твердая форма по п.2, где кристаллическая твердая форма охарактеризована посредством кривой, полученной методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), в значительной мере согласующейся с кривой DSC, показанной на Фигуре 2.

8. Кристаллическая твердая форма по п.2, где кристаллическая твердая форма охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, имеющей дифракционные максимумы пиков при значениях 2 , составляющих 9,05±0,20 и 16,52±0,20, и имеющей два или более дифракционных максимума при значениях 2 , выбранных из 9,80±0,20, 12,44±0,20, 12,92±0,20, 14,21±0,20, 15,62±0,20, 17,27±0,20, 19,04±0,20, 19,85±0,20, 21,29±0,20, 22,43±0,20, 23,48±0,20, 23,99±0,20 и 26,09±0,20.

9. Кристаллическая твердая форма по п.8, где порошковая рентгенограмма включает два или более дифракционных максимума при значениях 2 , выбранных из 9,05±0,20, 9,80±0,20, 12,44±0,20, 12,92±0,20, 16,52±0,20, 23,99±0,20 и 26,09±0,20.

10. Кристаллическая твердая форма по п.1, где кристаллическая твердая форма представляет собой кристаллический гидрохлорид (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты.

11. Кристаллическая твердая форма по п.10, где кристаллическая твердая форма охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, имеющей два или более дифракционных максимума при значениях 2 , выбранных из 6,80±0,20, 9,80±0,20, 12,71±0,20, 13,31±0,20, 15,14±0,20, 19,97±0,20, 21,44±0,20, 22,64±0,20, 23,27±0,20, 24,44±0,20 и 25,37±0,20.

12. Фармацевтическая композиция, обладающая антагонистической активностью в отношении мю-опиоидного рецептора, содержащая терапевтически эффективное количество кристаллической твердой формы по любому из пп.1-11 и фармацевтически приемлемый носитель.

13. Способ получения кристаллической (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (соединение 1), включающий снятие защитных групп с бензилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты с помощью каталитического гидрогенолиза с использованием катализатора на основе переходного металла, такого как палладий или платина, в присутствии полярного разбавителя, выбранного из метанола, изопропанола, 1-пропанола, ацетонитрила и диметилформамида, содержащего от приблизительно 10% до приблизительно 20% воды, с получением кристаллического соединения 1.

14. Способ получения кристаллической (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (соединение 1), включающий:

(а) взаимодействие бензилового сложного эфира (S)-2-циклогексилметил-4-оксо-масляной кислоты (4)



с амидом (6S,7S)-7-амино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-карбоновой кислоты (3)



и с между приблизительно 1 и приблизительно 3 эквивалентами восстанавливающего вещества, представляющего собой триацетоксиборгидрид натрия, с получением бензилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (2)



и

(b) снятие защитных групп соединения формулы 2 посредством каталитического гидрогенолиза с использованием катализатора на основе переходного металла, такого как палладий или платина, в присутствии полярного разбавителя, выбранного из метанола, изопропанола, 1-пропанола, ацетонитрила и диметилформамида, содержащего от приблизительно 10% до приблизительно 20% воды, с получением кристаллического соединения 1.

15. Способ получения кристаллической (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты, включающий:

(a) диспергирование (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты в полярном разбавителе, выбранном из метанола, изопропанола, 1-пропанола, ацетонитрила и диметилформамида, содержащем от приблизительно 3% до приблизительно 20% воды, с получением смеси;

(b) выдерживание смеси в течение, по меньшей мере, приблизительно 12 часов при температуре окружающей среды; и

(c) выделение кристаллической (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты из смеси.

16. Соединение формулы 4



имеющее химическое название бензиловый сложный эфир (S)-2-циклогексилметил-4-оксо-масляной кислоты.

17. Соединение формулы 2



имеющее химическое название: бензиловый сложный эфир (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты, или его солянокислая соль.

18. Способ получения (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты, включающий:

(a) взаимодействие бензилового сложного эфира (S)-2-циклогексилметил-4-оксо-масляной кислоты (4) с амидом (6S,7S)-7-амино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-карбоновой кислоты (3) с получением бензилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (2); и

(b) снятие защитных групп с соединения 2 посредством каталитического гидрогенолиза с получением (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты.

19. Кристаллическая твердая форма по любому из пп.1-11 для применения для лечения заболевания или медицинского состояния у млекопитающего, интенсивность симптомов которого уменьшают посредством лечения антагонистом мю-опиоидных рецепторов.

20. Кристаллическая твердая форма по п.19, где заболевание или состояние представляет собой опиоид-индуцированную дисфункцию кишечника или послеоперационную кишечную непроходимость.

21. Кристаллическая твердая форма по п.19, где заболевание или состояние представляет собой расстройство, обусловленное сниженной моторикой желудочно-кишечного тракта.

22. Кристаллическая твердая форма по любому из пп.1-11 для применения для снижения или предотвращения побочного эффекта, связанного с применением опиоидного средства млекопитающим.

23. Способ лечения млекопитающего, имеющего медицинское состояние, интенсивность симптомов которого уменьшают посредством лечения антагонистом мю-опиоидного рецептора, включающий введение млекопитающему фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и кристаллическую твердую форму по любому из пп.1-11.

24. Способ по п.23, где медицинское состояние представляет собой опиоид-индуцированную дисфункцию кишечника или послеоперационную кишечную непроходимость.

25. Способ снижения или предотвращения побочного эффекта, связанного с применением опиоидного средства млекопитающим, включающий введение млекопитающему опиоидного средства и терапевтически эффективного количества кристаллической твердой формы по любому из пп.1-11.

26. Способ усиления моторики желудочно-кишечного тракта у млекопитающего, включающий введение млекопитающему фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество кристаллической твердой формы по любому из пп.1-11.

27. Способ антагонизации мю-опиоидного рецептора у млекопитающего, включающий введение млекопитающему фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество кристаллической твердой формы по любому из пп.1-11.

Описание изобретения к патенту

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к кристаллическим формам соединения 3-карбоксипропил-аминотетралина, которое является полезным в качестве антагонистов мю-опиоидных рецепторов. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим такие кристаллические соединения, к способам применения таких соединений для лечения или улучшения медицинских состояний, обусловленных активностью мю-опиоидных рецепторов, и к способам, полезным в приготовлении таких соединений.

Существующий уровень техники

Антагонисты мю-опиоидных рецепторов, как ожидают, являются полезными для лечения или улучшения медицинских состояний, обусловленных активностью мю-опиоидных рецепторов. В частности, периферически действующие селективные антагонисты мю-опиоидных рецепторов, как полагают, являются полезными для лечения таких состояний, как вызванная опиоидами дисфункция кишечника и послеоперационная кишечная непроходимость. Принадлежащие одному и тому же правообладателю предварительные заявки США: одна - U.S. Provisional Application Nos. 61/007220, поданная 11 декабря 2007 г., и другая - 61/049219, поданная 30 апреля 2008 г., и заявка США: U.S. Application No. 12/331659, поданная 10 декабря 2008 г., раскрывают соединения 3-карбоксипропил-аминотетралина. В частности, соединение (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота (соединение 1):

конкретно раскрыто в этих заявках в качестве демонстрации антагонистической активности в отношении мю-опиоидных рецепторов.

Для эффективного применения этого соединения в качестве терапевтического средства было бы желательно иметь лекарственную форму в твердом состоянии, которая может быть легко изготовлена и которая имеет приемлемые химическую и физическую стабильность. Например, было бы весьма желательно иметь физическую форму, которая является термически стабильной, например, при температурах, превышающих приблизительно 160°С, или при температуре приблизительно 180°С и не расплывается за счет поглощения влаги, в связи с чем облегчается переработка и хранение вещества. Кристаллические твердые вещества, как правило, являются предпочтительными в сравнении с аморфными формами, поскольку усиливают степень чистоты и стабильность изготовленного продукта.

О кристаллических формах соединения 1 прежде сообщений не было. В соответствии с вышеизложенным существует необходимость в стабильной кристаллической форме соединения 1, которая не расплывается за счет поглощения влаги и проявляет благоприятную термическую стабильность.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение обеспечивает две различающиеся кристаллические твердые формы (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (1) и кристаллический гидрохлорид соединения 1.

Неожиданно, одна форма кристаллического соединения 1, как было обнаружено, не проявляет значительных термических явлений при температуре ниже приблизительно 162°С и проявляет изменение массы менее чем приблизительно на 2,5% при подвергании воздействию относительной влажности в диапазоне от приблизительно 2% до приблизительно 90% при комнатной температуре. Кроме того, ни кристаллическое соединение 1, ни кристаллический гидрохлорид соединения 1 не расплывается за счет поглощения влаги при подвергании воздействию относительной влажности вплоть до приблизительно 90% при комнатной температуре.

Среди прочих применений кристаллические твердые формы изобретения, как полагают, являются полезными в изготовлении фармацевтических композиций для лечения или улучшения медицинских состояний, обусловленных активностью мю-опиоидного рецептора. В связи с этим в еще одном из его аспектов, касающихся композиции, изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель и кристаллическую (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляную кислоту или кристаллический гидрохлорид соединения 1 настоящего изобретения.

Настоящее изобретение также обеспечивает способ лечения или уменьшения симптомов заболевания или состояния, улучшаемого лечением посредством антагониста мю-опиоидного рецептора, например расстройства, связанного со сниженной моторикой желудочно-кишечного тракта, где способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества кристаллической (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (1) или кристаллического гидрохлорида соединения 1.

Изобретение дополнительно обеспечивает способ лечения вызванной опиоидами дисфункции кишечника или послеоперационной кишечной непроходимости, включающий введение млекопитающему, терапевтически эффективного количества кристаллической (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (1) или кристаллического гидрохлорида соединения 1.

В другом аспекте способа изобретение обеспечивает способ получения кристаллического соединения 1 в Форме I, где способ включает диспергирование (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (1) в полярном разбавителе, содержащем от приблизительно 3% до приблизительно 20% воды, с получением смеси для кристаллизационного процесса; выдерживание технологической смеси в течение, по меньшей мере, 12 часов; и выделение получающихся в результате кристаллов из технологической смеси.

В еще одном аспекте способа изобретение обеспечивает способ получения кристаллического соединения 1 в Форме I, включающий снятие защитных групп с промежуточного соединения, имеющего защитные группы, бензилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты, с помощью каталитического гидрогенолиза в присутствии полярного разбавителя, содержащего от приблизительно 10% до приблизительно 20% воды с получением кристаллического соединения 1.

В родственных аспектах, касающихся композиции, изобретение обеспечивает бензиловый сложный эфир (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты и бисульфитный аддукт, (S)-3-бензилоксикарбонил-4-циклогексил-1-гидрокси-бутан-1-сульфонат натрия, который является полезным в получении вышеупомянутого имеющего защитные группы вещества-предшественника соединения 1.

Изобретение также обеспечивает кристаллические твердые формы изобретения, которые описаны в этом документе, для применения в терапии или в качестве лекарственного препарата, а также применение кристаллической твердой формы изобретения в изготовлении лекарственного препарата, в особенности в изготовлении лекарственного препарата для лечения расстройства, связанного с активностью мю-опиоидных рецепторов, у млекопитающего.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Различные аспекты настоящего изобретения проиллюстрированы со ссылкой на прилагаемые чертежи.

Фигура 1 показывает порошковую (XRPD) рентгенограмму кристаллической Формы I (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

Фигура 2 показывает кривую, полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) (вертикальная ось с правой стороны), и кривую, полученную методом термогравиметрического анализа (TGA) (вертикальная ось с левой стороны), для кристаллической Формы I (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

Фигура 3 показывает кривую динамической сорбции влаги (DMS) для кристаллической Формы I (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

Фигура 4 показывает порошковую ((XRPD)) рентгенограмму кристаллической Формы II (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

Фигура 5 показывает кривую, полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), для кристаллической Формы II (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

Фигура 6 показывает порошковую (XRPD) рентгенограмму кристаллического гидрохлорида (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

Фигура 7 показывает кривую, полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) (вертикальная ось с правой стороны), и кривую, полученную методом термогравиметрического анализа (TGA) (вертикальная ось с левой стороны), для кристаллического гидрохлорида (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

Фигура 8 показывает порошковую (XRPD) рентгенограмму кристаллического гидрохлорида бензилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

Фигура 9 показывает кривую, полученную методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), для кристаллического гидрохлорида бензилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты изобретения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение обеспечивает кристаллические твердые формы (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (1).

Определения

В том случае, когда описывают соединения, композиции и способы изобретения, следующие термины имеют следующие значения, если не указано иное.

Термин «терапевтически эффективное количество» означает количество, достаточное для того, чтобы оказывать влияние на лечение при введении пациенту, нуждающемуся в лечении.

Термин «лечение», который используют в этом документе, означает лечение заболевания, расстройства или медицинского состояния у пациента, такого как млекопитающее (в особенности, человек), которое включает один или более из следующих видов деятельности:

(а) предупреждение возникновения заболевания, расстройства, или медицинского состояния, то есть профилактическое лечение пациента;

(b) уменьшение интенсивности симптомов заболевания, расстройства, или медицинского состояния, то есть исключение или вызывание ремиссии (ослабление симптома) заболевания, расстройства, или медицинского состояния, у пациента, включая противодействующие/нейтрализующие эффекты других терапевтических средств;

(с) подавление развития заболевания, расстройства, или медицинского состояния, то есть замедление или прекращение развития заболевания, расстройства, или медицинского состояния у пациента; или

(d) частичное снятие симптомов заболевания, расстройства, или медицинского состояния у пациента.

Следует отметить, что использованные в описании изобретения и в прилагаемых пунктах формулы, формы единственного числа могут включать ссылки на формы множественного числа, если контекст не предписывает ясно иное.

Способ наименования

Соединение 1 названо (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота в соответствии с соглашениями IUPAC, которые выполнены в программном обеспечении AutoNom, (MDL Information Systems, GmbH, Frankfurt, Germany). Бициклическая 1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламиногруппа альтернативно известна под общим названием, «аминотетралин».

Кристаллические формы изобретения

В одном аспекте изобретение обеспечивает кристаллическую (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляную кислоту (1) в двух различающихся формах.

В одном аспекте кристаллическое соединение 1 в Форме I охарактеризовано посредством порошковой (XRPD) рентгенограммы, имеющей дифракционные максимумы пиков при значениях 2 , составляющих 6,92±0,20 и 15,34±0,20, и два или более дифракционных максимума, включая три или более и четыре или более дифракционных максимума, при значениях 2 , выбранных из 10,24±0,20, 11,48±0,20, 12,32±0,20, 13,46±0,20, 14,04±0,20, 17,30±0,20, 18,06±0,20, 20,30±0,20, 21,42±0,20, 23,48±0,20, 25,54±0,20, 26,96±0,20, 29,30±0,20 и 30,72±0,20. В частности, в этом аспекте Форма I охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, имеющей три или более дифракционных максимума, включая четыре или более дифракционных максимума, при значениях 2 , выбранных из 6,92±0,20, 10,24±0,20, 13,46±0,20, 15,34±0,20, 18,06±0,20 и 21,42±0,20. Кристаллическая Форма I дополнительно охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, имеющей дифракционные максимумы пиков при значениях 2 , составляющих 6,92±0,20, 10,24±0,20, 13,46±0,20, 15,34±0,20, 18,06±0,20 и 21,42±0,20.

Как хорошо известно в области рентгеновской порошковой дифрактометрии, положения максимумов пиков на порошковых рентгенограммах являются относительно менее чувствительными к нюансам эксперимента, таким как детали приготовления образца и геометрия измерительного прибора, чем относительные высоты максимумов. Таким образом, в одном аспекте Форма I кристаллического соединения 1 охарактеризована порошковой рентгенограммой, в которой положения максимумов в значительной мере соответствуют положениям максимумов, показанным на Фигуре 1.

Структура кристаллической Формы I дополнительно охарактеризована посредством рентгеноструктурного анализа с обеспечением следующих параметров решетки: элементарная ячейка является орторомбической с размерностями: а=7,546 Å, b=17,003 Å, с=20,628 Å, объем ячейки (V) составляет 2646,7 ų; вычисленная плотность составляет 1,151 г/см³; группа симметрии кристаллической решетки представляет собой Р2₁2₁2₁. Получающаяся в результате молекулярная структура подтверждает, что асимметричная элементарная ячейка не содержит молекул воды или молекул других растворителей и согласуется со стереохимией, которая обрисована выше. Расстояния связей С-О карбоксильной группы, а также длины связей и углы связей вокруг азота аминогруппы совпадают с соединением 1 в кристаллической Форме I, являющейся цвиттер-ионной молекулой, в которой протон перенесен от карбоксильной группы к азоту аминогруппы, что представлено схематично ниже:

Максимумы порошковой рентгенограммы, ожидаемые из полученных атомных положений, превосходно согласуются с наблюдаемой порошковой (XRPD) рентгенограммой.

В другом аспекте кристаллическая Форма I охарактеризована посредством ее поведения при подвергании воздействию высокой температуры. Как продемонстрировано на Фигуре 2, кривая, полученная методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), показывает пик в эндотермическом тепловом потоке, определяемый как фазовый переход кристалл-расплав, в диапазоне от приблизительно 162°С до приблизительно 170°С, в том числе от приблизительно 164°С до приблизительно 168°С. Кривая, полученная методом термогравиметрического анализа (TGA), показывает незначительную потерю массы при температурах ниже температуры плавления и профиль перехода, соответствующий потере 1 моль воды на моль соединения 1 при температуре около температуры плавления. Высвобождение воды может быть объяснено химической реакцией разложения.

Кристаллическая Форма I, как продемонстрировано, имеет обратимый профиль сорбция/десорбция с небольшой тенденцией к гигроскопичности. Форма I продемонстрировала увеличение массы, составляющее менее чем приблизительно 2,5% в диапазоне влажности 2%-90% относительной влажности при комнатной температуре, что показано на Фигуре 3. В частности, Форма I продемонстрировала увеличение массы, составляющее менее чем приблизительно 1% в диапазоне влажности 40%-75% относительной влажности, диапазоне влажности, в котором обычно изготавливают составы для перорального введения.

В другом аспекте изобретение обеспечивает соединение 1 в кристаллической Форме II. Кристаллическая Форма II определена посредством порошковой (XRPD) рентгенограммы, показанной на Фигуре 4, и с помощью профиля, полученного методом дифференциальной сканирующей калориметрии, показанного на Фигуре 5. В одном аспекте кристаллическая Форма II охарактеризована посредством порошковой (XRPD) рентгенограммы, имеющей дифракционные максимумы пиков при значениях 2 , составляющих 9,05±0,20 и 16,52±0,20, и имеющей два или более дифракционных максимума, включая три или более и четыре или более дифракционных максимума, при значениях 2 , выбранных из 9,80±0,20, 12,44±0,20, 12,92±0,20, 14,21±0,20, 15,62±0,20, 17,27±0,20, 19,04±0,20, 19,85±0,20, 21,29±0,20, 22,43±0,20, 23,48±0,20, 23,99±0,20 и 26,09±0,20. В частности в этом аспекте Форма II охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, имеющей два или более дифракционных максимума, включая три или более и четыре или более дифракционных максимума, при значениях 2 , выбранных из 9,05±0,20, 9,80±0,20, 12,44±0,20, 12,92±0,20, 16,52±0,20, 23,99±0,20 и 26,09±0,20. Форма II также дополнительно охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, имеющей дифракционные максимумы пиков при значениях 2 , составляющих 9,05±0,20, 9,80±0,20, 12,44±0,20, 12,92±0,20, 16,52±0,20, 23,99±0,20 и 26,09±0,20. В еще одном аспекте кристаллическая Форма II охарактеризована посредством порошковой рентгенограммы, в которой положения максимумов пиков в значительной мере соответствуют положениям максимумов пиков, показанным на Фигуре 4.

Термическое поведение, показанное на Фигуре 5, согласуется с определением кристаллической Формы II как метастабильной формы, которая подвергается превращению при температуре около 114°С-115°С и имеет температуру плавления, сопровождающегося химическим разложением, около 157°С.

В еще одном аспекте изобретение обеспечивает кристаллический гидрохлорид соединения 1.

В одном аспекте кристаллический гидрохлорид настоящего изобретения охарактеризован посредством порошковой (XRPD) рентгенограммы, имеющей два или более дифракционных максимума, включая три или более и четыре или более дифракционных максимума, при значениях 2 , выбранных из 6,80±0,20, 9,80±0,20, 12,71±0,20, 13,31±0,20, 15,14±0,20, 19,97±0,20, 21,44±0,20, 22,64±0,20, 23,27±0,20, 24,44±0,20 и 25,37±0,20. В еще одном аспекте кристаллический гидрохлорид соединения 1 охарактеризован посредством порошковой рентгенограммы, в которой положения максимумов пиков в значительной мере соответствуют положениям максимумов пиков, показанным на Фигуре 6.

Кристаллический гидрохлорид также охарактеризован посредством кривой, полученной для нее методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), которая показывает первый максимум в эндотермическом тепловом потоке в диапазоне от приблизительно 185°С до приблизительно 193°, определяемый как фазовый переход кристалл-расплав, и второй максимум в диапазоне от приблизительно 220°С до приблизительно 140°С, который, как понимают, соответствует явлению разложения, что проиллюстрировано на Фигуре 7. Образцы кристаллического гидрохлорида, полученного в Примерах 8, 9 и 10, сохранили свой внешний вид и сыпучесть при подвергании воздействию относительной влажности в диапазоне от приблизительно 2% относительной влажности до приблизительно 90% относительной влажности при комнатной температуре.

Эти свойства кристаллических форм этого изобретения дополнительно проиллюстрированы в Примерах, которые следуют ниже.

Методики синтеза и промежуточные соединения

Соединение 1, (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота может быть получена из легко доступных исходных веществ в твердой аморфной форме с использованием методик, описанных в Примерах, приведенных ниже, или с использованием методик, описанных в принадлежащих одному и тому же правообладателю заявках США, приведенных в разделе 'Предпосылки Создания Изобретения' этой заявки.

В одном способе получения кристаллическую Форму I изобретения получают растворением аморфного соединения 1 в полярном разбавителе с образованием технологической смеси для кристаллизации и выдерживанием технологической смеси в течение от приблизительно 12 часов до приблизительно 4 дней. Обычно процесс кристаллизации проводят при температуре, приблизительно равной температуре окружающей среды. Подходящие разбавители включают метанол, изопропанол, 1-пропанол и ацетонитрил и смеси одного или более разбавителей из предыдущих разбавителей с водой. Типичные иллюстративные системы разбавителей включают смесь ацетонитрила, метанола и воды, например, состоящую из приблизительно 69% ацетонитрила, приблизительно 21% метанола и приблизительно 10% воды; смесь 1-пропанола, ацетонитрила, и воды, в частности, состоящую из от приблизительно 95% до приблизительно 97% (1-пропанол:ацетонитрил (2:1)) и от приблизительно 5% до приблизительно 3% воды; смесь метанола и воды, например, состоящую из приблизительно 90% метанола и приблизительно 10% воды; и смесь ацетонитрила и воды, например, состоящую из приблизительно 84% ацетонитрила и приблизительно 16% воды. Соединение 1 обычно присутствует в технологической смеси в концентрации от приблизительно 150 мг/мл до приблизительно 700 мг/мл.

В том случае, когда в системе разбавителей вода не присутствует, полезно выдерживать технологическую смесь в течение периода времени на верхней границе установленного диапазона (Смотри, Пример 4 ниже, где кристаллизации дают протекать в течение 4 дней). Следовательно, полезный способ получения кристаллической Формы I включает растворение соединения 1 в разбавителе, содержащем полярный разбавитель и от приблизительно 3% до приблизительно 20% воды с образованием технологической смеси; выдерживание технологической смеси в течение, по меньшей мере, приблизительно 12 часов; и извлечение (выделение) получающихся в результате кристаллов.

По завершении реакции кристаллическую Форму I выделяют из технологической смеси с использованием традиционного средства, такого как фильтрация, концентрирование, центрифугирование и тому подобное.

В другом способе получения кристаллическую Форму I преимущественно получают непосредственно из имеющего защитные группы вещества-предшественника 2 соединения 1 в соответствии со следующей схемой процесса:

Как обобщено в Схеме А, имеющий бензильные защитные группы альдегид 4 подвергают реакции с аминотетралиновым промежуточным соединением 3 с получением вещества-предшественника 2, имеющего бензильные защитные группы, с которого снимают защитные группы с получением соединения 1 в кристаллической Форме I. Альдегидный реагент 4 традиционно получают in situ из соответствующего бисульфитного аддукта 5 .

В типичном процессе раствор с между приблизительно 1 и приблизительно 1,5 эквивалентами альдегида 4 в инертном разбавителе получают путем обработки бисульфитного аддукта 5 равным количеством эквивалентов гидроксида натрия. Альдегид 4 затем приводят в контакт с аминотетралином 3 и с между приблизительно 1 и приблизительно 3 эквивалентами восстанавливающего вещества, такого как триацетоксиборгидрид натрия. Аминотетралин 3 может быть получен в виде соли кислоты, обычно гидрохлорида. Реакцию обычно проводят при температуре приблизительно между 0°С и приблизительно 30°С в течение между приблизительно 2 и приблизительно 24 часами или до тех пор, пока реакция по существу не завершится. Имеющее защитные группы промежуточное соединение 2 обычно выделяют в твердой форме в виде кристаллического гидрохлорида.

Наконец, промежуточное соединение 2 дебензилируют посредством каталитического гидрогенолиза, обычно с использованием катализатора на основе переходного металла, например палладия или платины, с получением кристаллической Формы II. В том случае, когда промежуточное соединение 2 получают в солевой форме, сначала посредством обработки основанием получают in situ нейтральную форму промежуточного соединения. Реакцию проводят в разбавителе, выбранном так, чтобы он отвечал требованиям гидрогенолиза и приводил к кристаллизации. Смеси, содержащие воду и другой полярный разбавитель, такой как метанол, изопропанол, 1-пропанол, ацетонитрил и/или диметилформамид, являются подходящими для этой реакции. Смеси, содержащие от приблизительно 10% до приблизительно 20% воды, например смесь ацетонитрила и от приблизительно 10% до приблизительно 20% воды, преимущественно используют в реакции дебензилирования. Продукт реакции, кристаллическая Форма I, может быть выделена традиционным способом, таким как фильтрация.

В связи с вышеизложенным в аспекте, касающемся способа, среди прочих способов изобретение обеспечивает способ получения кристаллической Формы I соединения 1, включающий снятие защитных групп с промежуточного соединения 2, имеющего бензильные защитные группы, каталитическим гидрогенолизом в присутствии полярного разбавителя, содержащего от приблизительно 10% до приблизительно 20% воды, с получением кристаллической Формы I.

В дополнительном аспекте способа изобретение обеспечивает способ получения кристаллической Формы I соединения 1, включающий (а) взаимодействие имеющего защитные группы альдегида 4 с аминотетралином 3 с получением имеющего защитные группы промежуточного соединения 2, и (b) снятие защитных групп с промежуточного соединения 2, имеющего бензильные защитные группы, каталитическим гидрогенолизом в присутствии полярного разбавителя, содержащего от приблизительно 10% до приблизительно 20% воды, с получением кристаллической Формы I.

Снятие защитных групп с промежуточного соединения 2 в разбавителе, который отвечает условиям гидрогенолиза, но не способствует кристаллизации, в таком как этилацетат, тетрагидрофуран или метил-тетрагидрофуран, приводит к получению соединения 1, хоть и необязательно в кристаллической форме. В еще одном аспекте, касающемся способа, изобретение обеспечивает способ получения соединения 1 , включающий (а) взаимодействие имеющего защитные группы альдегида 4 с аминотетралином 3 с получением имеющего защитные группы промежуточного соединения 2, и (b) снятие защитных групп с промежуточного соединения 2, имеющего бензильные защитные группы, каталитическим гидрогенолизом с получением соединения 1.

Кроме того, в аспекте, касающемся композиции, изобретение обеспечивает имеющий защитные группы альдегид 4, бензиловый сложный эфир (S)-2-циклогексилметил-4-оксо-масляной кислоты и бисульфитный аддукт 5, (S)-3-бензилоксикарбонил-4-циклогексил-1-гидрокси-бутан-1-сульфонат натрия, полезные в получении соединения 1. Как описано в разделе 'Получение 8', имеющий бензильные защитные группы бисульфитный аддукт 5 может быть получен из метилового сложноэфирного бисульфита, (S)-4-циклогексил-1-гидрокси-3-метоксикарбонил-бутан-1-сульфоната натрия, синтез которого описан в разделе 'Получение 7'. Альтернативно бисульфитный аддукт 5 мог быть получен способами, аналогичными способам, описанным в разделе 'Получение 7', через аналогичные имеющие бензильные защитные группы промежуточные соединения на основе карбоновой кислоты (5а) и спирта (5b):

В еще одном аспекте, касающемся композиции, изобретение обеспечивает имеющее бензильные защитные группы вещество-предшественник 2, бензиловый сложный эфир (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты и его гидрохлорид. Кристаллический гидрохлорид соединения охарактеризован посредством порошковой (XRPD) рентгенограммы, показанной на Фигуре 8, и посредством профиля, полученного с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), показанного на Фигуре 9, который имеет максимум в эндотермическом тепловом потоке, совпадающий с температурой плавления, при температуре от приблизительно 205°С до приблизительно 210°С. Фармацевтические промежуточные соединения в кристаллической форме являются желательными как в связи с обычным очищением, которое происходит в результате кристаллизации, так и по причине ожидаемой большей стабильности при хранении по сравнению с некристаллическим материалом.

Как описано в Примерах, которые следуют ниже, кристаллическую Форму II получают путем растворения аморфного соединения 1 в полярном разбавителе, состоящем из спирта, например из изопропанола или из изопропанола и ацетонитрила, при концентрации от приблизительно 150 мг/мл до приблизительно 700 мг/мл с образованием технологической смеси кристаллизации и путем выдерживания технологической смеси в течение менее приблизительно одного дня. Необязательно, для содействия кристаллизации из раствора перед периодом выдерживания в технологическую смесь может быть добавлен антирастворитель, например смесь ацетонитрил: этилацетат (1:1).

Кристаллический гидрохлорид настоящего изобретения преимущественно получают из аморфного гидрохлорида соединения 1. Аморфную соль соединения 1 диспергируют в умеренно полярном растворителе, таком как этилацетат или диметиловый эфир диэтиленгликоля, при концентрации от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 350 мг/мл, необязательно при нагревании с последующим медленным охлаждением и затем выдерживают в течение периода от приблизительно 3 дней до приблизительно 12 дней. Получающиеся в результате кристаллы могут быть выделены общепринятым способом.

Фармацевтические композиции

Кристаллические твердые формы изобретения обычно вводят пациенту в форме фармацевтической композиции или состава. Такие фармацевтические композиции могут быть введены пациенту любым приемлемым путем введения, включающим пероральный, ректальный, вагинальный, назальный, ингаляционный, местный (в том числе трансдермальный) и парентеральный способы введения, но не ограниченного этим.

В связи с вышеизложенным в одном из аспектов, касающихся его композиций, изобретение направлено на фармацевтическую композицию, содержащую фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент и терапевтически эффективное количество кристаллической твердой формы соединения 1 или кристаллического гидрохлорида соединения 1. Необязательно, такие фармацевтические композиции могут содержать другое терапевтическое средство и/или вещества, содействующие приготовлению состава, если это желательно. Когда рассматривают композиции, понятно, что термин «твердая форма изобретения» включает кристаллические Формы I и II соединения 1, а также кристаллический гидрохлорид соединения 1.

Фармацевтические композиции изобретения обычно содержат терапевтически эффективное количество активного вещества. Однако специалистам в данной области будет ясно, что фармацевтическая композиция может содержать активное вещество в количестве, большем, чем терапевтически эффективное количество, то есть может представлять собой балк-композицию в многодозовой упаковке или может содержать активное вещество в количестве, меньшем, чем терапевтически эффективное количество, то есть может представлять собой отдельные унифицированные дозы для многократного введения для достижения терапевтически эффективного количества.

Обычно такие фармацевтические композиции содержат от приблизительно 0,1% до приблизительно 95% по массе активного вещества; предпочтительно от приблизительно 5 до приблизительно 70% по массе и более предпочтительно от приблизительно 10 до приблизительно 60% по массе активного вещества.

Любой традиционный носитель или эксципиент может быть использован в фармацевтических композициях изобретения. Выбор конкретного носителя или эксципиента или комбинаций носителей или эксципиентов, будут зависеть от способа введения, используемого для лечения конкретного пациента, или от типа медицинского состояния, или от стадии заболевания. В этом отношении приготовление подходящей фармацевтической композиции для конкретного способа введения хорошо входит в компетенцию специалистов в фармацевтической области. Кроме того, носители или эксципиенты, используемые в фармацевтических композициях этого изобретения, являются коммерчески доступными. В целях дополнительной иллюстрации общепринятые методы приготовления составов описаны в публикации: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20^th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (2000); and H.C. Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7^th Edition, Lippincott Williams & White, Baltimore, Maryland (1999).

Репрезентативные примеры веществ, которые могут быть использованы в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают следующее: сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлозу, такую как микрокристаллическая целлюлоза и ее производные, например карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и ацетатцеллюлозы; порошковую трагакантовую камедь; ржаной солод; желатин; тальк; эксципиенты, такие как масло какао и воски для основы суппозиториев; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль; полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннитол и полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновую кислоту; апирогенную воду; изотонический раствор; раствор Рингера; этиловый спирт; фосфатно-буферные растворы; и другие нетоксичные совместимые вещества, применяемые в фармацевтических композициях, но не ограничиваются этим.

Фармацевтические композиции обычно получают путем тщательного и равномерного смешения или смешивания активного вещества с фармацевтически приемлемым носителем и одним или более необязательными ингредиентами. Получающейся в результате равномерного смешения смеси затем может быть придана форма таблеток, капсул, пилюль и тому подобного, или она может быть введена в таблетки, капсулы, пилюли и тому подобное с использованием общепринятых методик и оборудования.

Фармацевтические композиции изобретения предпочтительно расфасовывают в виде стандартных лекарственных форм. Термин «стандартная лекарственная форма» относится к физически дискретной единице, подходящей для введения пациенту активного вещества определенными дозами, как такового или в комбинации с одной или более дополнительными единицами, где каждая единица содержит заданное количество активного вещества, вычисленное для получения желательного терапевтического эффекта. Например, такие стандартные лекарственные формы могут представлять собой капсулы, таблетки, пилюли и тому подобное или упаковки, содержащие лекарственное средство в дозах на один прием, подходящие для парентерального введения.

В одном варианте осуществления фармацевтические композиции изобретения подходят для перорального введения. Подходящие фармацевтические композиции для перорального введения могут находиться в форме капсул, таблеток, пилюль, лекарственных леденцов, крахмальных капсул, драже, порошков, гранул; или в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости; или в виде жидкой эмульсии типа 'масло-в-воде' или 'вода-в-масле'; или в виде эликсира или сиропа и тому подобного; где каждая форма содержит заданное количество соединения настоящего изобретения в качестве активного ингредиента.

В том случае, когда предназначены для перорального введения в твердой лекарственной форме (то есть в форме капсул, таблеток, пилюль и тому подобного), фармацевтические композиции изобретения обычно будут содержать активное вещество и один или более фармацевтически приемлемых носителей, таких как цитрат натрия или дикальцийфосфат. Необязательно или альтернативно, такие твердые лекарственные формы также могут содержать: наполнители или удешевляющие добавки, такие как крахмалы, микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, сахароза, глюкоза, маннитол, и/или кремниевую кислоту; связующие вещества, такие как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и/или аравийская камедь; увлажняющие средства, такие как глицерин; вещества для улучшения распадаемости таблеток, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или маниоковый крахмал, альгиновая кислота, некоторые силикаты, и/или карбонат натрия; добавки, замедляющие процесс растворения, такие как парафин; ускорители абсорбции, такие как соединения четвертичного аммония; смачивающие вещества, такие как цетиловый спирт и/или моностеарат глицерина; абсорбенты, такие как каолиновая и/или бентонитовая глина; скользящие вещества, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия, и/или их смеси; окрашивающие вещества и буферные вещества.

Разделительные средства, смачивающие вещества, покровные вещества, подслащивающие вещества, вкусовые и ароматизирующие вещества, консерванты и антиоксиданты также могут присутствовать в фармацевтических композициях изобретения. Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, цистеин-гидрохлорид, бисульфат натрия, метабисульфат натрия, сульфит натрия и тому подобное; маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и тому подобное; и вещества с металл-хелатирующей способностью, такие как лимонная кислота, этилендиамин-тетрауксусная кислота, сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и тому подобное. Покровные вещества для таблеток, капсул, пилюль и тому подобного, включают покровные вещества, используемые для кишечнорастворимых покрытий таблеток, такие как ацетат-фталат целлюлозы, поливинилацетат-фталат, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, сополимеры метакриловой кислоты - сложного эфира метакриловой кислоты, ацетат-тримеллитат целлюлозы, карбоксиметилэтилцеллюлоза, ацетат-сукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы и тому подобное.

Фармацевтические композиции изобретения также могут быть составлены с обеспечением медленного или контролируемого высвобождения активного вещества с использованием, например, гидроксипропилметилцеллюлозы в варьируемых пропорциях; или других полимерных матриц, липосом и/или микросфер. Кроме того, фармацевтические композиции изобретения могут необязательно содержать опалесцирующие средства и могут быть составлены так, чтобы они высвобождали активный ингредиент только или предпочтительно в определенной части желудочно-кишечного тракта, необязательно отсроченным способом. Примеры заливочных композиций, которые могут быть использованы, включают полимерные вещества и воски. Активное вещество также может находиться в микроинкапсулированной форме (может быть включено в желатиновую микрокапсулу), при необходимости, с одним или более из вышеописанных эксципиентов.

Подходящие жидкие лекарственные формы для перорального введения включают, в качестве иллюстрации, фармацевтически-приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Жидкие лекарственные формы обычно содержат активное вещество и инертный разбавитель, такой как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие вещества и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в особенности хлопковое, арахисовое масло (масло земляного ореха), кукурузное, зародышевое, оливковое, касторовое и сезамовое масла), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот и сорбитана и их смеси. Суспензии в дополнение к активному ингредиенту могут содержать суспендирующие вещества, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбитана, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, камедь агар-агар и трагакантовая камедь, и их смеси.

Твердые формы этого изобретения также могут быть введены парентерально (например, посредством внутривенной, подкожной, внутримышечной или интраперитонеалльной инъекции). Для парентерального введения активное вещество обычно смешивают с подходящей средой для лекарства для парентерального введения, включающей, в качестве примера, стерильные водные растворы, физиологический раствор, спирты с низкой молекулярной массой, такие как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, желатин, сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат, и тому подобное. Парентеральные составы могут также содержать один или более антиоксидантов, солюбилизаторов, стабилизаторов, консервантов, смачивающих агентов, эмульгаторов или диспергирующих агентов. Эти составы могут быть сделаны стерильными путем использования стерильной инъецируемой среды, стерилизующего вещества, фильтрации, облучения или нагревания.

Альтернативно, фармацевтические композиции изобретения составляют для введения путем ингаляции. Подходящие фармацевтические композиции для введения ингаляцией обычно будут находиться в форме аэрозоля или порошка. Такие композиции, как правило, вводят с использованием общеизвестных устройств доставки, таких как дозированный ингалятор, ингалятор сухого порошка, небулайзер или подобное устройство доставки.

При введении путем ингаляции с использованием контейнера, находящегося под давлением, фармацевтические композиции изобретения обычно будут содержать активный ингредиент и подходящий газ-вытеснитель, такой как дихлордифторметан, трихлорфторметан, дихлортетрафторэтан, диоксид углерода или другой подходящий газ. Кроме того, фармацевтическая композиция может иметь форму капсулы или картриджа (изготовленной(ого), например, из желатина), содержащей(его) соединение изобретения и порошок, подходящий для использования в порошковом ингаляторе. Подходящие порошковые основы включают, в качестве примера, лактозу или крахмал.

Твердые формы изобретения также могут быть введены трансдермально с использованием известных трансдермальных систем доставки и эксципиентов. Например, активное вещество может быть смешано с веществами, усиливающими проникновение молекул лекарственных веществ через кожу, такими как пропиленгликоль, полиэтиленгликоль-монолаурат, азациклоалкан-2-оны и тому подобное, и внедрено в пластырь или подобную систему доставки. Если желательно, в таких трансдермальных композициях могут быть использованы дополнительные эксципиенты, включающие гелеобразующие вещества, эмульгаторы и буферные вещества.

Если желательно, твердые формы этого изобретения могут быть введены в комбинации с одним или более другими терапевтическими средствами. В этом варианте осуществления твердую форму этого изобретения либо физически смешивают с другим терапевтическим средством с образованием композиции, содержащей оба средства; либо каждое вещество присутствует в отдельно взятых и различных композициях, которые вводят пациенту одновременно или последовательно.

Например, твердая форма изобретения может быть скомбинирована со вторым терапевтическим средством с использованием общепринятых методик и оборудования с образованием композиции, содержащей соединение 1 и второе терапевтическое средство. Кроме того, терапевтические средства могут быть скомбинированы с фармацевтически приемлемым носителем с образованием фармацевтической композиции, содержащей соль изобретения, второе терапевтическое средство и фармацевтически приемлемый носитель. В этом варианте осуществления компоненты композиции обычно подмешивают или смешивают с получением физической смеси. Физическую смесь затем вводят в терапевтически эффективном количестве с использованием любых путей, описанных в этом документе. Альтернативно терапевтические средства могут сохраняться отдельно и быть легко различимыми до введения пациенту. В этом варианте осуществления вещества физически не смешивают вместе до введения, но вводят одновременно или в разные моменты времени в виде отдельно взятых композиций. Такие композиции могут быть расфасованы отдельно или могут быть расфасованы вместе в виде набора. Два терапевтических средства в наборе могут быть введены одним и тем же путем введения или различными путями введения.

Любое терапевтическое средство, совместимое с активным веществом настоящего изобретения, может быть использовано в качестве второго терапевтического средства. В частности, прокинетические средства, механизмы действия которых отличаются от антагонизма по отношению к мю-опиоидным рецепторам, могут быть использованы в комбинации с соединениями настоящего изобретения. Например, агонисты 5-НТ₄-рецептора, такие как тегасерод, рензаприд, мозаприд, прукалоприд, {(1S,3R,5R)-8-[2-(4-ацетилпиперазин-1-ил)этил]-8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ил}амид 1-изопропил-1Н-индазол-3-карбоновой кислоты, {(1S,3R,5R)-8-[(R)-2-гидрокси-3-(метансульфонил-метил-амино)пропил]-8-азабицикло[3.2.1]окт-3-ил}амид 1-изопропил-2-оксо-1,2-дигидрохинолин-3-карбоновой кислоты, или метиловый сложный эфир 4-(4-{[(2-изопропил-1Н-бензоимидазол-4-карбонил)амино]метил}-пиперидин-1-илметил)пиперидин-1-карбоновой кислоты, могут быть использованы в качестве второго терапевтического средства.

Дополнительные полезные прокинетические вещества включают агонисты 5-НТ₃-рецепторов (например, пумосетраг), антагонисты 5-НТ_1А-рецепторов (например, AGI 001), альфа-2-дельта-лиганды (например, PD-217014), активаторы канала-переносчика ионов хлора (например, лубипростон), антагонисты дофамина (например, итоприд, метаклопрамид, домперидон), агонисты GABA-B-рецепторов (например, баклофен, AGI 006), агонисты каппа-опиоидных рецепторов (например, азимадолин), антагонисты мускариновых М ₁- и М₂-рецепторов (например, акотиамид), агонисты мотилиновых рецепторов (например, mitemcinal), активаторы гуанилатциклазы (например, MD-1100) и агонисты грелиновых рецепторов (например, Tzp 101, RC 1139), но не ограничиваются этим.

Кроме того, твердые формы изобретения могут быть скомбинированы с опиоидными терапевтическими средствами. Такие опиоидные средства включают морфин, петидин, кодеин, дигидрокодеин, оксиконтин, оксикодон, гидрокодон, суфентанил, фентанил, ремифентанил, бупренорфин, метадон, и героин, но не ограничиваются этим.

Многочисленные дополнительные примеры таких терапевтических средств известны в данной области, и любые такие известные терапевтические средства могут быть применены в комбинации с соединениями этого изобретения. Добавочное(ые) средство(а) при включении присутствуют в терапевтически эффективном количестве, то есть в любом количестве, которое производит терапевтический благотворный эффект при совместном введении с соединением изобретения. Подходящие дозы для других терапевтических средств, вводимых в комбинации с соединением изобретения, обычно находятся в диапазоне от приблизительно 0,05 мкг/день до приблизительно 100 мг/день.

В соответствии с вышеизложенным фармацевтические композиции изобретения необязательно включают добавочное терапевтическое средство, которое описано выше.

Следующие примеры иллюстрируют репрезентативные фармацевтические композиции настоящего изобретения:

Приготовление состава Примера А: Твердые Желатиновые Капсулы для Перорального Введения

Твердую форму изобретения (50 г), высушенную распылением лактозу (200 г) и стеарат магния (10 г) тщательно смешивают. Получающуюся в результате композицию вводят в твердую желатиновую капсулу (260 мг композиции на капсулу).

Приготовление состава Примера B: Твердые Желатиновые Капсулы для Перорального Введения

Твердую форму изобретения (20 г), крахмал (89 мг), микрокристаллическую целлюлозу (89 мг) и стеарат магния (2 мг) тщательно смешивают и затем пропускают через сито с размером ячеек № 45 меш (США). Получающуюся в результате композицию вводят в твердую желатиновую капсулу (200 мг композиции на капсулу).

Приготовление состава Примера C: Желатиновые Капсулы для Перорального Введения

Твердую форму изобретения (10 г), полиоксиэтилен-сорбитан-моноолеат (50 мг) и порошок крахмала (250 мг) тщательно смешивают и затем вводят в желатиновую капсулу (310 мг композиции на капсулу).

Приготовление состава Примера D: Таблетки для Перорального Введения

Твердую форму изобретения (5 г), крахмал (50 мг) и микрокристаллическую целлюлозу (35 мг) пропускают через сито с размером ячеек № 45 меш (США) и тщательно смешивают. Раствор поливинилпирролидона (10 масс.% в воде, 4 мг) смешивают с получающимися в результате порошками и эту смесь затем пропускают через сито № 14 меш (США). Полученные таким образом гранулы сушат при 50-60°С и пропускают через сито с размером ячеек № 18 меш (США). Карбоксиметилкрахмал натрия (4,5 мг), стеарат магния (0,5 мг) и тальк (1 мг), которые были предварительно пропущены через сито с размером ячеек № 60 меш (США), затем добавляют к гранулам. После смешения смесь подвергают прессованию на таблеточной машине с получением таблетки, имеющей массу 100 мг.

Приготовление состава Примера Е: Таблетки для Перорального Введения

Твердую форму изобретения (25 мг), микрокристаллическую целлюлозу (400 мг), фьюмингированный диоксид кремния (10 мг) и стеариновую кислоту (5 мг) тщательно смешивают и затем подвергают прессованию с получением таблеток (440 мг композиции на таблетку).

Приготовление состава Примера F: Делимые Таблетки с риской на одной стороне для Перорального Введения

Твердую форму изобретения (15 мг), кукурузный крахмал (50 мг), кроскармеллозу натрия (25 мг), лактозу (120 мг), и стеарат магния (5 мг) тщательно смешивают и затем подвергают прессованию с получением делимой таблетки с риской на одной стороне (215 мг композиции на таблетку).

Приготовление состава Примера G: Суспензия для Перорального Введения

Следующие ингредиенты тщательно смешивают с получением суспензии для перорального введения, содержащей 100 мг активного ингредиента на 10 мл суспензии:

Ингредиенты	Количество
Твердая форма изобретения	0,1 г
Фумаровая кислота	0,5 г
Хлорид натрия	2,0 г
Метилпарабен	0,15 г
Пропилпарабен	0,05 г
Гранулированный сахар	25,5 г
Сорбит (70% раствор)	12,85 г
Veegum k (Vanderbilt Co.)	1,0 г
Вкусовая добавка	0,035 мл
Окрашивающие добавки	0,5 мг
Дистиллированная вода	по необходимости до 100 мл

Приготовление состава примера H: сухая порошковая композиция

Микронизированную твердую форму изобретения (1 мг) смешивают с лактозой (25 мг) и затем вводят в желатиновый ингаляционный картридж. Содержимое картриджа вводят с использованием порошкового ингалятора.

Приготовление состава примера J: инъецируемый состав

Твердую форму изобретения (0,1 г) смешивают с 0,1 М буферным раствором цитрата натрия (15 мл). рН получающегося в результате раствора доводят до рН 6 с использованием 1н. водного раствора хлористоводородной кислоты или 1н. водного раствора гидроксида натрия. Затем добавляют стерильный изотонический физиологический раствор в цитратном буферном растворе с получением общего объема 20 мл.

Будет понятно, что любая твердая форма изобретения, (то есть кристаллическая Форма I или Форма II или кристаллический гидрохлорид), который подходит для конкретного способа введения, может быть использована в фармацевтических композициях, рассмотренных выше.

Полезность

Активное вещество настоящего изобретения, (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота, является антагонистом мю-опиоидных рецепторов, и, следовательно, кристаллические твердые формы изобретения, как ожидают, являются полезными для лечения медицинских состояний, опосредованных мю-опиоидными рецепторами или связанных с активностью мю-опиоидных рецепторов, то есть медицинских состояний, интенсивность симптомов которых уменьшается в результате лечения антагонистом мю-опиоидных рецепторов. В частности, твердые формы изобретения, как полагают, являются полезными для лечения нежелательных/отрицательных эффектов, сопутствующих применению опиоидных анальгетиков, то есть таких симптомов, как констипация, сниженная эвакуация желудочного содержимого из желудка в двенадцатиперстную кишку, боль в области живота, вздутие живота/метеоризм, тошнота и гастроэзофагеальный рефлюкс, называемый обобщенно опиоид-индуцированная дисфункция кишечника. Твердые формы настоящего изобретения, как полагают, также являются полезными для лечения послеоперационной кишечной непроходимости, расстройства, связанного со сниженной моторикой желудочно-кишечного тракта, которая возникает после абдоминального или другого хирургического вмешательства. Кроме того, было выдвинуто предположение, что соединения-антагонисты мю-опиоидных рецепторов, такие как соединение 1, могут быть использованы для реверсии опиоид-индуцированных тошноты и рвоты.

Поскольку соединение 1, как было показано, увеличивает моторику желудочно-кишечного (GI) тракта в экспериментальных моделях на животных, то полагают, что твердые формы изобретения являются полезными для лечения расстройств желудочно-кишечного тракта, вызванных сниженной моторикой у млекопитающих, включая людей. Такие нарушения моторики желудочно-кишечного тракта включают, в качестве иллюстрации, хроническую констипацию, синдромом раздраженного кишечника с преобладающим нарушением типа констипации (С-IBS), диабетический и идиопатический гастропарез и функциональную диспепсию.

В одном аспекте, таким образом, изобретение обеспечивает способ усиления моторики желудочно-кишечного тракта у млекопитающих, где способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и твердую форму изобретения.

В том случае, когда применяют для лечения расстройств, связанных со сниженной моторикой желудочно-кишечного тракта, или других состояний, опосредованных мю-опиоидными рецепторами, твердые формы изобретения обычно вводят перорально однократной суточной дозировкой или многократно вводимыми дозами в день, хотя другие формы введения могут быть использованы. Например, в особенности в том случае, когда применяют для лечения послеоперационной кишечной непроходимости, твердые формы изобретения могут быть введены парентерально. Количество активного вещества, вводимое на дозу, или общее количество, вводимое в день, обычно будет определено лечащим врачом в свете релевантных обстоятельств, включая состояние, которое подлежит лечению, выбранный путь введения, вводимое действующее соединение и его относительная активность, возраст, вес, и индивидуальная реакция пациента, серьезность симптомов заболевания у пациента, и тому подобное.

Подходящие дозы для лечения расстройств, связанных со сниженной моторикой желудочно-кишечного тракта, или других расстройств, опосредованных мю-опиоидными рецепторами, будут находиться в диапазоне от приблизительно 0,0007 до приблизительно 20 мг/кг/день активного вещества, включая от приблизительно 0,0007 до приблизительно 1,4 мг/кг/день. Для человека, имеющего вес в среднем 70 кг, это будет составлять от приблизительно 0,05 до приблизительно 100 мг активного вещества в день.

В одном аспекте изобретения твердые формы изобретения используют для лечения опиоид-индуцированной дисфункции кишечника. В том случае, когда применяют для лечения опиоид-индуцированной дисфункции кишечника, твердые формы изобретения обычно вводят перорально однократной суточной дозировкой или многократно вводимыми дозами в день. Предпочтительно доза для лечения опиоид-индуцированной дисфункции кишечника будет находиться в диапазоне от приблизительно 0,05 до приблизительно 100 мг в день.

В другом аспекте изобретения твердые формы изобретения используют для лечения послеоперационной кишечной непроходимости. При применении для лечения послеоперационной кишечной непроходимости твердые формы изобретения обычно будут вводиться перорально или внутривенно однократной суточной дозировкой или многократно вводимыми дозами в день. Предпочтительно доза для лечения послеоперационной кишечной непроходимости будет находиться в диапазоне от приблизительно 0,05 до приблизительно 100 мг в день.

Изобретение также обеспечивает способ лечения млекопитающего, имеющего заболевание или состояние, связанное с активностью мю-опиоидного рецептора, где способ включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества твердой формы изобретения или фармацевтической композиции, содержащей твердую форму изобретения.

Активное вещество настоящего изобретения необязательно вводят в комбинации с другим терапевтическим средством или с другими терапевтическими средствами, в частности, в комбинации с прокинетическими средствами, действующими по не-мю-опиоидным механизмам. В связи с вышеизложенным в другом аспекте способы и композиции изобретения дополнительно включают терапевтически эффективное количество другого прокинетического средства.

Как описано выше, твердые формы изобретения являются антагонистами мю-опиоидных рецепторов. Таким образом, изобретение дополнительно обеспечивает способ антагонизации мю-опиоидных рецепторов у млекопитающих, где способ включает введение твердой формы изобретения млекопитающему.

Среди прочих свойств активное вещество настоящего изобретения, как было обнаружено, показывает эффективное связывание с мю-опиоидными рецепторами и проявляет небольшой агонизм или вовсе не проявляет агонизм в анализе функциональных свойств мю-рецепторов. Следовательно, твердые формы изобретения являются сильнодействующими антагонистами мю-опиоидных рецепторов. Кроме того, активное вещество продемонстрировало преимущественно периферическую активность в сравнении с активностью центральной нервной системы в экспериментальных моделях на животных. Следовательно, твердые формы изобретения, как можно ожидать, вызывают реверсию опиоид-индуцированных снижений моторики желудочно-кишечного тракта без оказывания влияния на благотворные связанные с центральной нервной системой аналгезические эффекты. Эти свойства, а также полезность соединений изобретения могут быть продемонстрированы с использованием различных методов анализа in vitro и in vivo, хорошо известных специалистам в данной области. Репрезентативные методы анализа описаны более подробно в следующих примерах.

ПРИМЕРЫ

Следующие синтетические и биологические примеры предложены для иллюстрации изобретения и не должны истолковываться никоим образом как ограничивающие объем изобретения. В примерах, изложенных ниже, следующие сокращения имеют следующие значения, если не указано иное. Сокращения, не определенные ниже, имеют их общепринятые значения.

DCM = дихлорметан

DMF = N,N-диметилформамид

MeOH = метанол

MeTHF = 2-метилтетрагидрофуран

MTBE = трет-бутил-метиловый эфир

psi = фунты на квадратный дюйм

RT = комнатная температура

Реагенты и растворители покупают у коммерческих поставщиков (Aldrich, Fluka, Sigma, и так далее) и используют без дополнительной очистки. Реакции проводят в атмосфере азота, если не отмечено иное. За изменением реакционных смесей в ходе протекания процесса отслеживают посредством тонкослойной хроматографии (TLC), высокоэффективной жидкостной хроматографией (HPLC) и масс-спектрометрией. Реакционные смеси обрабатывают с выделением продукта реакции так, как описано конкретно для каждой реакции; обычно их очищают экстракцией и другими способами очистки, такими как температура-, и растворитель- зависимое осаждение. Охарактеризовывание продуктов реакции выполняют по стандартной методике посредством масс-спектрометрии и ¹Н-ЯМР-спектрометрии. Для ЯМР-измерения образцы растворяют в дейтерированном растворителе (CD₃OD, CDCl₃ или DMSO-d₆) и ¹Н-ЯМР-спектры получают на приборе Varian Gemini 2000 (400 МГц) в стандартных условиях наблюдения. Масс-спектрометрическое определение соединений осуществляют с использованием метода с ионизацией электрораспылением (ESMS) на приборе Applied Biosystems (Foster City, CA) model API 150 EX или на приборе Agilent (Palo Alto, CA) model 1200 LC/MSD. Содержание воды определяют с помощью титрования по методу Карла Фишера с использованием кулометра Brinkmann (Westbury, NY) Metrohm Karl Fisher Model 813. Степень чистоты определяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием следующих условий:

Колонка: Zorbax SB-Aq, 5 мкм. 4,6×250 мм

Температура колонки: 40°С

Скорость потока: 1,0 мл/мин

Подвижные фазы: А = Вода/акрилонитрил (98:2) + 0,1% TFA (трифторуксусная кислота), В = Вода/акрилониторил (10:90) + 0,1% TFA (трифторуксусная кислота)

Объем введенной пробы: 10 мкл

Длина волны детектора: 214 нм

Соединения растворяют в смеси Вода/ацетонитрил (50:50) в концентрации приблизительно 1 мг/мл и анализируют с использованием следующего градиента состава в течение 20 минут (время (мин)/% В): 0/10, 2,5/20, 9/75, 15/90, 17/90, 18/10, 20/10.

Получение 1: Трет-бутиловый сложный эфир 7,7-диэтил-5-гидрокси-1а,2,7,7а-тетрагидро-1-аза-циклопропа[b]нафталин-1-карбоновой кислоты

а. 7-Амино-6-бром-8,8-диэтил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол-гидробромид

В колбу добавляют 7,7-диэтил-5-метокси-1а,2,7,7а-тетрагидро-1 Н-1-аза-циклопропа[b]нафталин (268 г, 1,16 моль) и бромид водорода (1,97 л, 17,38 моль), после этого добавляют бромид тетра-N-бутиламмония (38 г, 0,12 моль). Реакционную смесь нагревают при 100°С в течение ночи при перемешивании, охлаждают до комнатной температуры и затем выливают в перемешиваемый этилацетат (2,5 л). Продукт выделяют фильтрацией, фильтровальный осадок промывают этилацетатом (2×200 мл) и сушат, что дает сырой продукт (370 г) в виде твердого вещества лилового оттенка. Сырой продукт суспендируют в этаноле (1,50 л), затем греют при 80°С в течение 30 минут. Получающуюся в результате суспензионную смесь охлаждают до комнатной температуры в течение 1 часа и фильтруют. Колбу и фильтровальный осадок, находящийся в ней, промывают этанолом (2×100 мл) и затем этилацетатом (100 мл) и сушат в течение ночи, что дает указанное в заглавии соединение (275 г, степень чистоты ~96%).

b.Трет-бутиловый сложный эфир 7,7-диэтил-5-гидрокси-1а,2,7,7а-тетрагидро-1-аза-циклопропа[b]нафталин-1-карбоновой кислоты

В суспензионную смесь 7-амино-6-бром-8,8-диэтил-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-ол-гидробромида (20,0 г, 52,8 ммоль) и этилацетата (200 мл) добавляют 1,0 М раствор гидроксида натрия в воде (106 мл). Реакционную смесь перемешивают при 25°С в течение 2 часов, добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (15 г, 68 ммоль) в этилацетате (5 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. После удаления двух третей этилацетата (135 мл) добавляют гептан (135 мл) и получающуюся в результате суспензионную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут и затем при 5°С в течение ночи. Суспензионную смесь фильтруют и фильтровальный осадок прополаскивают водой (100 мл), прополаскивают гептаном (50 мл) и сушат в вакууме, что дает указанное в заглавии соединение (14,3 г).

Получение 2: Трет-бутиловый сложный эфир* транс-(7-циано-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-2-ил)-карбаминовой кислоты

а. трет-Бутиловый сложный эфир транс-(1,1-диэтил-7-гидрокси-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-ил)-карбаминовой кислоты

К суспензионной смеси трет-бутилового сложного эфира 7,7-диэтил-5-гидрокси-1а,2,7,7а-тетрагидро-1-аза-циклопропа[b]нафталин-1-карбоновой кислоты (170,0 г, 535,6 ммоль) и метанола (1700 мл) добавляют п-толуолсульфонат пиридиния (13,4 г, 53,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при 40°С в течение 4 часов. Объем снижают ротационным выпариванием до ~300 мл с получением в результате густой белой суспензионной смеси. Продукт выделяют фильтрацией; фильтровальный осадок промывают холодным метанолом (50 мл) и сушат на воздухе в течение 3 часов, что дает указанное в заглавии соединение (150 г). Объем фильтрата снижают до ~50 мл и перемешивают при 0°С в течение 2 часов, фильтруют и сушат, что дает дополнительный продукт (25 г).

b. 7-трет-Бутоксикарбониламино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-иловый сложный эфир транс-трифтор-метансульфоновой кислоты

Смесь трет-бутилового сложного эфира транс-(1,1-диэтил-7-гидрокси-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-ил)-карбаминовой кислоты (195,0 г, 0,558 моль), триэтиламина (160 мл, 1,1 моль) и этилацетата (2000 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение 15 минут и охлаждают до 0°С с последующим медленным добавлением трифтор-метансульфонилхлорида (150 г, 0,89 моль) при поддерживании внутренней температуры ниже 4°С. Получающуюся в результате смесь перемешивают при 0°С в течение 1 часа. Добавляют медленно дополнительный триэтиламин (16 мл), после этого добавляют медленно дополнительный трифторметансульфонилхлорид (15,0 г) при поддерживании температуры ниже 5°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение дополнительного часа. Добавляют разбавленный соляной раствор (1,0 л) и реакционную смесь перемешивают в течение 10 минут при комнатной температуре. Слои разделяют; органический слой промывают разбавленным раствором NaHCO₃ (1,0 л) и затем концентрируют до ~350 мл ротационным выпариванием при 28°С и перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут. Добавляют гептан (700 мл) и получающуюся в результате суспензионную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут, охлаждают до 4°С и перемешивают в течение 1 часа. Твердые частицы отфильтровывают, промывают гептаном и затем сушат в вакууме, что дает указанное в заглавии соединение (193,0 г, степень чистоты >97%). Фильтрат концентрируют, суспендируют в смеси изопропилацетата и гептана (1:3, 60 мл) в течение 30 минут, фильтруют и сушат, что дает дополнительный продукт (45,0 г, степень чистоты >97%).

c.трет -Бутиловый сложный эфир транс-(7-циано-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-2-ил)-карбаминовой кислоты

7-трет-Бутоксикарбониламино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-иловый сложный эфир трифтор-метансульфоновой кислоты (236,6 г, 0,49 моль) растворяют в N,N-диметилформамиде (851 мл, 10,99 моль) и воде (23,8 мл, 1,32 моль) при комнатной температуре. Раствор продувают азотом в течение 5 минут и затем подсоединяют к централизованной вакуумной системе на 5 минут. Продувание азотом и вакуумирование повторяют два раза. В реакционную смесь добавляют цианид цинка (34,2 г, 0,29 моль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (4,4 г, 4,8 ммоль) и 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (5,4 г, 9,7 ммоль) при перемешивании. Реакционную смесь продувают азотом в течение 5 минут, нагревают под азотом при 110°С в течение 1 часа, охлаждают до комнатной температуры и затем фильтруют через целит. Профильтрованную реакционную смесь медленно добавляют в воду (3 л), охлаждают до 0°С при перемешивании, перемешивают в течение 30 минут при 0°С и затем фильтруют. Фильтровальный осадок промывают водой (500 мл) и сушат на воздухе в течение 2 часов, суспендируют в этаноле (1 л) при перемешивании в течение 1 часа и затем фильтруют, что дает указанное в заглавии соединение (165,0 г, степень чистоты >96%). Фильтрат сушат (21,6 г) и растворяют в этаноле (110 мл) при перемешивании в течение 1 часа и получающуюся в результате суспензионную смесь фильтруют и сушат под вакуумом, что дает дополнительный продукт (10,2 г, степень чистоты >98%).

*В этом и последующих примерах, префикс транс относится к смеси (2S),(2S)-диастереомера и (2R),(2R)-диастереомера.

Получение 3: трет-Бутиловый сложный эфир транс -(7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-ил)-карбаминовой кислоты

Суспензионную смесь продукта, полученного в разделе 'Получение 2', (160,0 г, 446,3 ммоль), и метанола (3,3 л) нагревают при 55°С в течение 15 минут, добавляют моногидрат пербората натрия (280 г, 2800 ммоль) и воду (330 мл) и реакционную смесь нагревают при 55°С в течение ночи. Добавляют дополнительный моногидрат пербората натрия (90 г) и реакционную смесь нагревают при 55°С в течение ночи, затем охлаждают до комнатной температуры и отфильтровывают неорганические твердые вещества. Фильтрат переносят в 5-литровую колбу и большую часть растворителя удаляют ротационным выпариванием. К получающейся в результате суспензионной смеси добавляют воду (1,1 л) и этилацетат (450 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут. Реакционную смесь фильтруют и фильтровальный осадок промывают водой (200 мл) и затем этилацетатом (200 мл) и сушат, что дает указанное в заглавии соединение (123 г, степень чистоты ~95%). Фильтрат концентрируют досуха и сушат под вакуумом, что дает дополнительный продукт (18 г, степень чистоты ~65%).

Получение 4: Амид транс-7-амино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидро-нафталин-2-карбоновой кислоты

Ацетилхлорид (278,8 мл, 3920 ммоль) добавляют по каплям к этанолу (382 мл, 6530 ммоль) при -5°С в течение 2 часов при поддерживании внутренней температуры ниже 20°С. Получающийся в результате раствор добавляют порциями в течение 15 минут при поддерживании внутренней температуры ниже 30°С к суспензионной смеси трет-бутилового сложного эфира транс-(7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-ил)-карбаминовой кислоты (123,0 г, 327 ммоль) и этанола (500 мл), которая была охлаждена до 10°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов и концентрируют до ~200 мл ротационным выпариванием. Добавляют этилацетат (200 мл) и получающуюся в результате суспензионную смесь перемешивают при 0°С в течение 30 минут, фильтруют и сушат, что дает гидрохлорид указанного в заглавии соединения (102 г, степень чистоты >98%) в виде твердого вещества белого цвета.

Получение 5: 4-Нитро-фениловый (R)-1-фенил-этиловый сложный диэфир угольной кислоты

Смесь (R)-1-фенил-этанола (60,6 г, 0,496 моль), пиридина (42,5 мл, 0,526 моль) и 2-метил-тетрагидрофурана (600 мл) охлаждают до 0°С и в течение 15 минут добавляют п-нитрофенил-хлорформиат (100 г, 0,496 моль) при поддерживании внутренней температуры ниже 5°С. Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 часов. К реакционной смеси добавляют 1,0 М раствор HCl в воде (300 мл). Слои разделяют. Органический слой промывают 1н. раствором HCl (300 мл) и соляным раствором (300 мл), фильтруют, концентрируют досуха ротационным выпариванием и сушат под вакуумом, что дает указанное в заглавии соединение (140 г) в виде масла светло/прозрачно-желтого цвета.

Получение 6: Амид (6S,7S)-7-амино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидро-нафталин-2-карбоновой кислоты

а. (R)-1-фенил-этиловый сложный эфир ((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-2-ил)-карбаминовой кислоты

Смесь 4-нитро-фенилового (R)-1-фенил-этилового сложного диэфира угольной кислоты (102 г, 357 ммоль), N,N-диметилформамида (200 мл) и триэтиламина (32,7 мл, 235 ммоль) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляют гидрохлоридамида транс-7-амино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидро-нафталин-2-карбоновой кислоты (100 г, 320 ммоль), N,N-диметилформамид (320 мл) и триэтиламин (98,0 мл, 703 ммоль). Реакционную смесь нагревают при 85°С в течение 5 часов и затем перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Приблизительно 90% диметилформамида удаляют перегонкой (дистиллицией) при 70°С и получающееся в результате густое масло охлаждают до комнатной температуры и затем оно распределяется между этилацетатом (1,5 л) и разбавленным соляным раствором (500 мл). Органический слой промывают 1М раствором NaOH (3×500 мл) и сушат над Na₂SO₄. Большую часть растворителя удаляют ротационным выпариванием, добавляют 3 объема этилацетата и получающуюся в результате суспензионную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 минут, фильтруют и сушат, что дает указанное в заглавии соединение (48 г, химическая и оптическая чистота >99%).

Фильтрат промывают 1М раствором NaOH (200 мл) и затем разбавленным соляным раствором (2×200 мл). Большую часть растворителя удаляют ротационным выпариванием, что дает густое масло, к которому добавляют этилацетат (100 мл). Добавляют щепотку гранул указанного в заглавии соединения и реакционную смесь замораживают при 0°С после перемешивания в течение ~30 минут. Получающуюся в результате жидкую суспензионную смесь перемешивают в течение 5 минут и фильтруют; колбу и фильтровальный осадок промывают этилацетатом (2×15 мл), что дает дополнительное указанное в заглавии соединение (4,1 г, химическая чистота 97% и оптическая чистота >99%, суммарный выход 38%).

b. Амид (6S,7S)-7-амино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидронафталин-2-карбоновой кислоты

Ацетилхлорид (193 мл, 2710 ммоль) добавляют по каплям к этанолу (260 мл, 4500 ммоль) при -5°С в течение 40 минут при поддерживании внутренней температуры ниже 30°С. Получающийся в результате раствор добавляют в течение 5 минут при 10°С к смеси (R)-1-фенил-этилового сложного эфира ((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-2-ил)-карбаминовой кислоты (49,0 г, 115 ммоль) и этанола (200 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и концентрируют до ~100 мл ротационным выпариванием. Добавляют этилацетат (100 мл) и получающуюся в результате суспензионную смесь перемешивают при 0°С в течение 30 минут и фильтруют. Фильтровальный осадок промывают этилацетатом и сушат, что дает гидрохлорид указанного в заглавии соединения (30 г, степень чистоты >99%). Объем фильтрата снижают выпариванием почти досуха. Добавляют изопропиловый спирт (20 мл) и получающуюся в результате густую суспензионную смесь перемешивают в течение 30 минут и фильтруют. Фильтровальный осадок промывают этилацетатом (2×20 мл) и сушат под вакуумом в течение ночи, что дает дополнительное указанное в заглавии соединение (5,5 г, степень чистоты >97%). ¹H ЯМР (DMSO-d₆): (м.д.) 0,49 (т, 3H), 0,63 (т, 3H), 1,62 (кв., 2H), 1,89 (м, 1H), 2,09 (м, 1H), 2,60 (дд, 1H), 3,22 (м, 1H), 3,41 (с, 3H), 3,50 (дд, 1H), 3,82 (кв., 1H), 7,19 (д, 1H), 7,31 (шир., 1H), 7,70 (д, 1H), 7,71 (с, 1H), 7,98 (шир., 1H), 8,15 (шир., 3H).

Получение 7: (S)-4-Циклогексил-1-гидрокси-3-метоксикарбонил-бутан-1-сульфонат натрия

а. Метиловый сложный эфир (S)-2-циклогексилметил-4-гидрокси-масляной кислоты

Смесь 1-метилового сложного эфира (S)-2-циклогексилметил-янтарной кислоты (60,0 г, 263 ммоль) и тетрагидрофурана (600 мл) перемешивают при комнатной температуре и затем охлаждают до -5°С в течение 30 минут. К реакционной смеси добавляют 1,0 М раствор боргидрида в тетрагидрофуране (520 мл) по каплям в течение 45 минут при поддерживании внутренней температуры ниже 0°С. К реакционной смеси добавляют по каплям метиловый спирт (100 мл) для остановки протекания реакции. Реакционную смесь концентрируют до приблизительно 100 мл ротационным выпариванием. Добавляют (трифторметил)бензол (200 мл) и объем снижают до 25 мл ротационным выпариванием. К получающемуся в результате густому маслу добавляют (трифторметил)бензол (100 мл) и объем снижают до ~25 мл с получением сырого указанного в заглавии продукта (56,3 г).

b. (S)-4-Циклогексил-1-гидрокси-3-метоксикарбонил-бутан-1-сульфонат натрия

Смесь метилового сложного эфира (S)-2-циклогексилметил-4-гидрокси-масляной кислоты (44,8 г, 209 ммоль) и дихлорметана (310 мл) охлаждают до 5°С при перемешивании. В реакционную смесь добавляют раствор бромида калия (2,5 г, 21 ммоль) и бикарбоната натрия (2,4 г, 29 ммоль) в дистиллированной воде (130 мл) и затем 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил (TEMPO) (0,33 г, 2,1 ммоль) с последующим добавлением гипохлорита натрия (140 мл, 210 ммоль) со скоростью 130 мл/час при поддерживании внутренней температуры в диапазоне 6-8°С. Реакционную смесь перемешивают в течение 15 минут и добавляют дихлорметан (200 мл). Слои разделяют и органический слой промывают насыщенным соляным раствором (200 мл) и сушат над Na₂SO₄ .

К органическому слою добавляют этилацетат (40 мл) с последующим добавлением бисульфита натрия (21,8 г, 209 ммоль). Реакционный раствор концентрируют с удалением половины дихлорметана (~175 мл) ротационным выпариванием. Добавляют воду (2 мл) в реакционный раствор, который перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Получающуюся в результате суспензионную смесь фильтруют; фильтровальный осадок сушат под вакуумом в течение ночи, что дает указанное в заглавии соединение (61,9 г). ¹H ЯМР (DMSO-d₆): (м.д.) 0,78 (м, 2H), 0,95-1,20 (м, 4H), 1,33 (м, 1H), 1,40-1,95 (м, 5H), 2,45-2,65 (м, 1H), 3,21 (м, 2H), 3,45 (с, 3H), 3,6-3,8 (м, 1H), 5,18 (д, 1H).

Получение 8: (S)-3-бензилоксикарбонил-4-циклогексил-1-гидрокси-бутан-1-сульфонат натрия

а. Метиловый сложный эфир (S)-2-циклогексилметил-4,4-диметокси-масляной кислоты

В суспензионную смесь (S)-4-циклогексил-1-гидрокси-3-метоксикарбонил-бутан-1-сульфоната натрия (400,0 г, 1,26 моль) и метанола (2 л) добавляют 4,0 М раствор HCl в 1,4-диоксане (400 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 15 минут. Добавляют триметоксиметан (340 мл, 3,11 моль) и реакционную смесь нагревают при 50°С в течение ночи и затем охлаждают до комнатной температуры. Отфильтровывают твердое вещество белого цвета и отбрасывают. Большую часть растворителя удаляют из фильтрата ротационным выпариванием. Добавляют этилацетат (800 мл), что приводит к большему осаждению. Осадок белого цвета удаляют фильтрацией. Растворитель удаляют из фильтрата ротационным выпариванием и затем под высоким вакуумом при комнатной температуре в течение ночи, что дает указанное в заглавии соединение (211 г) в виде густого масла. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d ₆): (м.д.) 4,25 (т, 1H), 3,57 (с, 3H), 3,18 (с, 6H), 2,43 (м, 1H), 1,55-1,81 (м, 2H), 1,50-1,72 (м, 5H), 1,20-1,48 (м, 2H), 1,05-1,21 (м, 4H), 0,71-0,92 (м, 2H).

b. (S)-2-циклогексилметил-4,4-диметокси-бутират калия

Гидроксид калия (289,6 г, 2322 ммоль) добавляют к раствору продукта предыдущей стадии (200,0 г, 0,77 моль) в метаноле (700 мл) одной порцией и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 часов. Хлорводород (130 мл, 1,5 моль) добавляют медленно до тех пор, пока реакционная смесь не достигнет значения рН ~8 (изменение цвета от зеленоватого до оранжевого), что приводит к осаждению тонкодисперсных твердых частиц. Твердые вещества удаляют фильтрацией. Растворитель удаляют из фильтрата. К сырому продукту добавляют ацетонитрил (1 л) и получающуюся в результате суспензионную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Густую суспензионную смесь фильтруют, фильтровальный осадок промывают ацетонитрилом (50 мл) и сушат, что дает первую порцию указанного в заглавии соединения (133 г) в виде твердого вещества не совсем белого цвета. Растворитель удаляют из фильтрата, который затем сушат под вакуумом, что дает приблизительно 100 г пастообразного твердого вещества. Добавляют MTBE (трет-бутил метиловый эфир) (500 мл) и твердое вещество перемешивают при комнатной температуре, что дает в результате густую суспензионную смесь, которую фильтруют и сушат под высоким вакуумом, что дает вторую порцию указанного в заглавии соединения (82 г). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): (м.д.) 4,28 (дд, 1H), 3,12 (с, 3H), 3,15 (с, 3H), 1,95 (м, 1H), 1,75 (м, 1H), 1,51-1,65 (м, 6H), 1,22-1,39 (м, 2H), 1,05-1,20 (м, 4H), 0,85-0,93 (м, 1H), 0,65-0,81 (м, 2H).

с. Бензиловый сложный эфир (S)-2-циклогексилметил-4,4-диметокси-масляной кислоты

Бензилбромид (50,54 мл, 424,9 ммоль) добавляют к суспензионной смеси продукта предыдущей стадии (150,0 г, 531,1 ммоль) в ацетонитриле (2,0 л) одной порцией и гетерогенную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Добавляют дополнительный бензилбромид (5,05 мл, 42,49 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 часов. Твердые частицы удаляют фильтрацией. Фильтрат сушат ротационным выпариванием и затем под высоким вакуумом в течение ночи, что дает указанное в заглавии соединение (162 г). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): (м.д.) 7,22-7,40 (м, 5H), 5,0-5,15 (кв., 2H), 4,23 (т, 1H), 3,15 (с, 3H), 3,17 (с, 3H), 2,52 (м, 1H), 1,78 (м, 1H), 1,69 (м, 1H), 1,45-1,61 (м, 6H), 1,20-1,43 (м, 2H), 1,0-1,15 (м, 4H), 0,70-0,83 (м, 2H).

d. (S)-3-Бензилоксикарбонил-4-циклогексил-1-гидрокси-бутан-1-сульфонат натрия

К смеси продукта предыдущей стадии (160,0 г, 478,4 ммоль) и ацетонитрила (1,0 л) добавляют 1,0 М раствор HCl в воде (1,2 л) и реакционную смесь нагревают при 35-40°С в течение 2 часов. Добавляют этилацетат (1,2 л), фазы разделяют и органический слой промывают соляным раствором (1 л). К влажному органическому слою добавляют бисульфит натрия (74,7 г, 718 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Большую часть растворителя удаляют ротационным выпариванием и добавляют ацетонитрил (1 л) и получающуюся в результате суспензионную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Получающуюся в результате густую суспензионную смесь белого цвета фильтруют и фильтровальный осадок промывают ацетонитрилом (2×100 мл) и сушат под вакуумом, что дает указанное в заглавии соединение (200 г, степень чистоты >98%) в виде твердого вещества белого цвета. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): (м.д.) 7,23-7,41 (м, 5H), 5,30 (д, 1H), 4,98-5,18 (кв., 2H), 3,75-3,88 (м, 1H), 3,60-3,79 (м, 1H), 2,05 (м, 0,5H), 1,45-1,82 (м, 2,5H), 1,45-1,60 (м, 5H), 1,20-1,42 (м, 2H), 1,0-1,17 (м, 4H), 0,69-0,82 (м, 2H).

Пример 1: (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетгидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота

а. Метиловый сложный эфир (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты

К суспензионной смеси (S)-4-циклогексил-1-гидрокси-3-метоксикарбонил-бутан-1-сульфоната натрия (25,8 г, 81,5 ммоль) и 2-метил-тетрагидрофурана (300 мл) добавляют 1,0 М раствор NaOH в воде (76,1 мл) и реакционную смесь перемешивают в течение 20 минут при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляют гидрохлорид амида (6S,7S)-7-амино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидро-нафталин-2-карбоновой кислоты (17,0 г, 54,3 ммоль); реакционную смесь перемешивают в течение 40 минут при комнатной температуре, четырьмя порциями добавляют триацетоксиборгидрид натрия (46,1 г, 217 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи после первых двух порций. Добавляют воду (200 мл) и 2-метил-тетрагидрофуран (100 мл); фазы разделяют и органический слой промывают 1 М раствором NaOH (2×200 мл), разбавляют соляным раствором (200 мл), сушат над Na₂SO₄ и растворитель удаляют, что дает сырое указанное в заглавии промежуточное соединение (22 г) в виде стеклообразного желтого твердого вещества.

Сырой продукт очищают обращенно-фазовой хроматографией с использованием колонки Microsorb 100-10 BDS (4 дюйма). Сырой продукт растворяют в смеси растворителей ацетонитрил: 1 М водный раствор HCl (150 мл) и элюируют подвижной фазой вода (0,1% раствор HCl)/ацетонитрил (градиент состава 10-40%). Чистые фракции (>98%) объединяют, большую часть ацетонитрила удаляют ротационным выпариванием, рН доводят до значения рН ~12 посредством твердого Na₂ CO₃ и очищенный продукт экстрагируют 2-метил-тетрагидрофураном (3×1 л). Объединенные органические слои сушат над Na ₂SO₄ и растворитель удаляют, что дает указанное в заглавии соединение (16,5 г).

b.(S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота

К раствору метилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (12,0 г, 25,4 ммоль) в метаноле добавляют 5,0 М раствор NaOH (25 мл) и реакционную смесь нагревают при 30°С в течение 8 часов и затем при 25°С в течение ночи. Большую часть метанольного растворителя удаляют ротационным выпариванием при 25°С, добавляют воду (100 мл) и изопропилацетат (100 мл) и получающуюся в результате смесь перемешивают в течение 15 минут. Два слоя из трех нижних слоев экстрагируют изопропилацетатом (100 мл). Нижние слои охлаждают до -5°С и добавляют 2-метил-тетрагидрофуран (200 мл) и затем добавляют порциями концентрированную HCl (~15 мл) до достижения рН ~2. Фазы разделяют, водный слой промывают 2-метил-тетрагидрофураном (100 мл) и объединенные органические слои сушат над Na₂SO₄. Большую часть органического растворителя удаляют ротационным выпариванием, добавляют этилацетат (200 мл) и объем снижают до 50 мл. Добавляют этилацетат (200 мл) и получающуюся суспензионную смесь перемешивают/растирают при комнатной температуре в течение 3 часов. Продукт фильтруют под азотом и сушат под вакуумом в течение 48 часов, что дает гидрохлорид указанного в заглавии соединения (11 г, степень чистоты 98,2%) в виде твердого вещества белого цвета. ¹H ЯМР (DMSO-d₆): (м.д.) 0,54 (т, 3H), 0,63 (т, 3H), 0,82 (м, 2H), 1,05-1,3 (м, 6H), 1,45 (м, 1H), 1,55-2,0 (м, 10H), 2,40 (м, 1H), 2,67 (дд, 1H), 3,06 (м, 1H), 3,22 (м, 1H), 3,30 (дд, 1H), 3,41 (с, 3H), 3,45 (дд, 1H), 4,05 (м, 1H), 7,19 (д, 1H), 7,50 (шир., 1H), 7,69 (д, 1H), 7,70 (с, 1H), 7,95 (шир., 2H), 9,26 (шир., 1H).

Пример 2: (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота

Гидрохлорид (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (2,18 г, 4,40 ммоль) растворяют в метаноле (30 мл) и добавляют воду (30 мл) и 1,0 М раствор NaOH (4,65 мл). Удаляют метанол ротационным выпариванием, что приводит к осаждению, и добавляют 1,0 М раствор HCl (0,045 мл), что дает в результате дополнительное осаждение. Твердые вещества экстрагируют смесью растворителей дихлорметан: изопропиловый спирт (4:1,3×40 мл) и сушат над сульфатом натрия. Добавляют воду (30 мл) и органические вещества удаляют ротационным выпариванием, что обеспечивает камедеобразный осадок в воде. Добавляют ацетонитрил (25 мл) и реакционную смесь лиофилизуют с получением указанного в заглавии соединения в виде аморфного твердого вещества (1,99 г).

Пример 3: Кристаллическая (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота

а. Гидрохлорид бензилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты

К суспензии (S)-3-бензилоксикарбонил-4-циклогексил-1-гидрокси-бутан-1-сульфоната натрия (160 г, 400 ммоль), продукта, полученного в разделе 'Получение 8', в 2-метил-тетрагидрофуране (2,0 л) и воде (600 мл) добавляют 1,0 М раствор NaOH в воде (400 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 90 минут. Фазы разделяют и раствор концентрируют до объема ~300 мл.

Получающийся в результате концентрированный раствор добавляют к суспензионной смеси гидрохлорида амида (6S,7S)-7-амино-8,8-диэтил-6-метокси-5,6,7,8-тетрагидро-нафталин-2-карбоновой кислоты (100,0 г, 319,7 ммоль) в диметилформамиде (1 л). Получающуюся в результате суспензионную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов, реакционную смесь охлаждают до 0°С с последующим добавлением порциями триацетоксиборгидрида натрия (169 г, 799 ммоль) в течение 15 минут. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, охлаждают до 0°С и затем добавляют 1,0 М раствор NaOH в воде (3 л) и этилацетат (5 л). Реакционную смесь перемешивают в течение 10 минут, фазы разделяют и органический слой промывают разбавленным соляным раствором (1:1, 2 л). В органический слой добавляют 1,0 М раствор HCl в воде (520 мл, 520 ммоль) и большую часть этилацетата удаляют ротационным выпариванием. Добавляют воду (500 мл) и этанол (1 л) и объем медленно снижают ротационным выпариванием до ~1 л. Получающуюся в результате свободно-текучую суспензионную смесь не совсем белого цвета перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Продукт выделяют фильтрацией, колбу и фильтровальный осадок промывают водой (2×200 мл) и затем сушат, что дает указанное в заглавии соединение (175 г) в виде твердого вещества белого цвета (степень чистоты ~99%, выход 90%, в расчете исходя из аминотетралинового реагента). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): (м.д.) 9,33 (шир., 1H), 8,09 (шир., 1H), 7,98 (с, 1H), 7,70 (с, 1H), 7,68 (д, 1H), 7,28-7,36 (м, 2H), 7,19 (д, 1H), 5,10 (кв., 2H), 4,04 (м, 1H), 3,45 (дд, 1H), 3,38 (с, 3H), 3,25 (м, 2H), 3,05 (м, 1H), 2,62 (м, 2H), 1,95-2,15 (м, 2H), 1,61-1,82 (м, 3H), 1,50-1,61 (м, 4H), 1,42-1,50 (м, 1H), 1,24-1,32 (м, 1H), 0,98-1,18 (м, 4H), 0,71-0,89 (м, 2H), 0,63 (т, 3H), 0,52 (т, 3H).

b. Кристаллическая (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляная кислота

Продукт предыдущей стадии (175,0 г, 299 ммоль) распределяется между этилацетатом (2,5 л), водой (1 л) и 1,0 М раствором NaOH в воде (300 мл, 299 ммоль). Фазы разделяют, органический слой промывают разбавленным соляным раствором (1:1, 250 мл) и сушат над сульфатом натрия. Растворитель удаляют ротационным выпариванием и получающийся в результате продукт сушат в течение ночи под высоким вакуумом, что обеспечивает свободное основание промежуточного соединения: бензиловый сложный эфир (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (~160 г) в виде липкого твердого вещества.

Промежуточное соединение в виде свободного основания растворяют в смеси ацетонитрила (1,6 л) и воды (300 мл). К половине раствора (1 л) добавляют 10% палладий (10 г, 9 ммоль) на углеродном носителе (влажный). Реакционную смесь продувают азотом и затем водородом в течение 2 минут и затем подвергают воздействию давления Н ₂ 10-15 фунтов на квадратный дюйм (psi) в течение 3 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют через целит и колбу и фильтровальный осадок промывают ацетонитрилом (50 мл). Желтоватый фильтрат перемешивают тиол-модифицированным диоксидом кремния (10 г) при комнатной температуре в течение 2 часов и затем фильтруют через целит. Большую часть растворителя удаляют ротационным выпариванием при 25°С. Ацетонитрил (500 мл) добавляют и большую часть растворителя удаляют ротационным выпариванием. Добавляют дополнительный ацетонитрил (500 мл), что приводит к быстрому осаждению липких твердых частиц. Реакционную смесь перемешивают энергично при комнатной температуре в течение ночи, что приводит к образованию свободно-текучей суспензионной смеси не совсем белого цвета. Продукт выделяют фильтрацией; фильтровальный осадок промывают ацетонитрилом (2×50 мл) и затем сушат под вакуумом, что дает кристаллическое указанное в заглавии соединение (56 г, степень чистоты 98,8%). Содержание воды 0,49% (масса/масса). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): (м.д.) 7,89 (шир., 1H), 7,65 (с, 1H), 7,60 (д, 1H), 7,22 (шир., 1H), 7,11 (д, 1H), 3,55 (м, 1H), 3,38 (с, 3H), 3,25 (дд, 1H), 2,95 (м, 1H), 2,59 (д, 1H), 2,49 (м, 2H), 1,81 (м, 2H), 1,49-1,63 (м, 5H), 1,41-1,50 (м, 2H), 1,05-1,25 (м, 4H), 0,72-0,90 (м, 2H), 0,45 (т, 3H), 0,57 (т, 3H).

Примечание: В тексте следующих примеров (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляную кислоту упоминают как соединение 1.

Пример 4: Кристаллизация (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (Форма II)

Аморфное соединение 1 (100 мг, 0,22 ммоль) растворяют в изопропаноле (0,83 мл). По истечении четырех дней в растворе становятся видны кристаллы. Маточный ликер декантируют и добавляют смесь растворителей ацетонитрил: этилацетат (1:1) (0,2 мл и затем дополнительные 0,3 мл) с получением суспензионной смеси, содержащей указанное в заглавии соединение.

Пример 5:Кристаллизация (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (Форма I)

Аморфное соединение 1 (33 мг, 0,072 ммоль) растворяют в предварительно смешанном растворе, содержащем ацетонитрил (0,04 мл), 1-пропанол (0,0605 мл) и воду (0,0035 мл), и технологическую смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Осадок начинает образовываться менее чем за приблизительно 1 час. Твердые вещества собирают фильтрацией, промывают смесью растворителей ацетонитрил: изопропанол (3:2) (2 мл) и сушат под вакуумом с получением указанного в заглавии соединения.

Пример 6:Кристаллизация (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (Форма I)

Аморфное соединение 1 (84,2 мг, 0,18 ммоль) растворяют в смеси растворителей, состоящей из воды (0,003 мл) и метанола (0,027 мл) и затем добавляют смесь воды (0,013 мл) и ацетонитрила (0,090 мл). Кристаллы становятся видны в пределах 2 минут. Технологическую смесь выдерживают в течение 3 дней при комнатной температуре без перемешивания. Маточный ликер декантируют и твердые вещества выделяют вакуумной фильтрацией и промывают ацетонитрилом с получением указанного в заглавии соединения (54 мг, выход 64%).

Пример 7: Кристаллизация (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты (Форма II)

Аморфное соединение 1 (70 мг, 0,15 ммоль) растворяют в предварительно смешанном растворе, содержащем ацетонитрил (0,136 мл) и изопропанол (0,090 мл), и технологическую смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Осадок начинает образовываться менее чем за приблизительно 1 час. Твердые частицы собирают фильтрацией, промывают смесью растворителей ацетонитрил: изопропанол (3:2) (2 мл) и сушат под вакуумом с получением указанного в заглавии соединения (64 мг).

Пример 8:Кристаллизация гидрохлорида (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты

Аморфный гидрохлорид соединения 1 (56,7 мг, 0,12 ммоль) диспергируют в диметиловом эфире диэтиленгликоля (DEGDME) (0,50 мл), нагревают до 50°С в течение 20 минут и медленно охлаждают в течение ночи. Технологическую смесь оставляют при температуре окружающей среды на 11 дней. Получающиеся в результате кристаллы выделяют и промывают диметиловым эфиром диэтиленгликоля (~0,1 мл) с получением указанного в заглавии соединения.

Пример 9:Кристаллизация гидрохлорида (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты

Аморфный гидрохлорид соединения 1 (72,2 мг, 0,15 ммоль) диспергируют в этилацетате (1,0 мл), диспергируют с помощью ультразвука в течение менее чем 1 минута, нагревают до 50°С и медленно охлаждают. Технологическую смесь оставляют при температуре окружающей среды на 3 дня. Получающиеся в результате кристаллы выделяют с получением указанного в заглавии соединения.

Пример 10:Кристаллизация гидрохлорида (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты

Аморфный гидрохлорид соединения 1 (50 мг, 0,11 ммоль) диспергируют в этилацетате (0,5 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение 4 дней. Получающиеся в результате кристаллы выделяют с получением указанного в заглавии соединения (30 мг).

Примеры 11-15: Свойства твердых форм изобретения

Образцы кристаллической (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты(соединение 1), полученные в Примерах 3 и 7, и образцы кристаллического гидрохлорида соединения 1 , полученные в Примере 9, а также образец гидрохлорида бензилового сложного эфира (S)-4-((2S,3S)-7-карбамоил-1,1-диэтил-3-метокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-2-иламино)-2-циклогексилметил-масляной кислоты, (гидрохлорида соединения 2), полученный так, как в Примере 3а, анализируют с помощью рентгеновской порошковой дифрактометрии (XRPD), дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и термогравиметрического анализа (TGA).

Пример 11: Рентгеновская порошковая дифрактометрия

Порошковые рентгенограммы, представленные на Фигурах 1, 4 и 6, получают на дифрактометре Rigaku с использованием Cu K -излучения (30,0 кВ, 15,0 мА). Анализ проводят с помощью гониометра, функционирующего в непрерывном режиме сканирования 2° в минуту (Фигура 1) или 3° в минуту (Фигуры 4, 6 и 8) с размером шага 0,03° в пределах диапазона 2-40°. Образцы подготавливают на кварцевых держателях образцов в виде тонкого слоя порошкового материала. Прибор калибруют посредством эталона из кремния. Фигуру 8 получают с помощью дифрактометра Thermo XTRA модель ARL, сканирующего в режиме 1,22° в минуту с размером шага 0,03° в пределах диапазона 2-40°.

Пример 12: Термический анализ

Дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC) проводят с использованием модуля TA Instruments Model Q-100. Данные собирают и анализируют с использованием программного обеспечения TA Instruments Thermal Advantage for Q Series . Образец массой приблизительно 1-10 мг точно отвешивают в алюминиевый тигель с крышкой. Образец оценивают с использованием линейного изменения температуры при нагревании 10°С/мин от 5°С до, обычно, 265°С. DSC-Камеру продувают сухим азотом во время применения. Репрезентативные кривые, полученные методом дифференциальной сканирующей калориметрии, для образцов кристаллической Формы I и Формы II, образцов кристаллического гидрохлорида соединения 1, а также кристаллического гидрохлорида соединения 2, показаны соответственно на Фигурах 2, 5, 7 и 9.

Термогравиметрический анализ (TGA) проводят с использованием модуля TA Instruments Model Q-500. Данные собирают и анализируют с использованием программного обеспечения TA Instruments Thermal Advantage for Q Series . Образец, имеющий массу приблизительно 1-5 мг, помещают в алюминиевый тигель на платиновом каркасе и сканируют от температуры окружающей среды до 300°С с линейной скоростью нагревания 10°С/мин. Печную систему с весами продувают азотом во время использования. Репрезентативные кривые, полученные методом термогравиметрического анализа, для образцов кристаллической Формы I и кристаллического гидрохлорида соединения 1, также показаны соответственно на Фигурах 2 и 7.

Пример 13: Оценка динамической сорбции влаги

Оценку динамической сорбции влаги (DMS) проводят при 25°С с использованием атмосферных микровесов VTI, системы SGA-100 (VTU Corp., Hialeah, FL 33016). Используют образец массой приблизительно 5-10 мг и устанавливают влажность на значении, соответствующем значению влажности окружающей среды, в начале проведения анализа. Обычный анализ динамической сорбции влаги состоит из трех или четырех этапов сканирования: от относительной влажности (RH), соответствующей значению влажности окружающей среды, до относительной влажности 2%, от RH 2% до RH 90%, от RH 90% до RH 5% при скорости сканирования 5% RH/этап, и в некоторых случаях второй адсорбции от RH 2% до RH 90%. Массу измеряют каждые две минуты и относительную влажность изменяют до следующего значения (± 5% RH), когда масса образца является стабильной в пределах 0,02% для 5 последовательных точек. Репрезентативная кривая, полученная посредством анализа динамической сорбции влаги, для образца кристаллической Формы I, полученного в Примере 3, показана на Фигуре 3.

Пример 14: Рентгеноструктурный анализ кристаллов

Анализируют иглоподобный кристалл кристаллической Формы I, имеющий размеры 0,20×0,10×0,06 мм, полученный в Примере 6. Данные рентгеноструктурного анализа кристаллов получают посредством дифрактометра Nonius Kappa-CCD с использованием Mo K -излучения. Полносферные данные собирают вплоть до =27,5 градусов при температуре 120 K и анализируют с использованием программного обеспечения SHELX-97. Получают следующие параметры кристаллической решетки: элементарная ячейка является орторомбической с размерами а=7,546 Å, b=17,003 Å, с=20,628 Å, объем ячейки (V) составляет 2646,7 ų; вычисленная плотность составляет 1,151 г/см³; группа симметрии кристаллической решетки представляет собой Р2₁2 ₁2₁. Максимумы пиков на порошковой рентгенограмме, прогнозируемые исходя из полученных положений атомов, находятся в превосходном соответствии с экспериментально определенными положениями максимумов пиков, о чем судят на основании визуального инспектирования.

Анализ 1: Анализ радиолигандного связывания на мю-опиоидных рецепторах человека, дельта-опиоидных рецепторах человека и на каппа-опиоидных рецепторах морской Свинки

а. Приготовление мембран

Клетки яичника китайского хомячка (CHO-K1), стабильно трансфицированные посредством кДНК мю-опиоидного рецептора человека или каппа-опиоидного рецептора гвинейской свиньи, выращивают в среде, состоящей из питательной среды Ham's-F12, дополненной 10% FBS (фетальная бычья сыворотка), 100 ед./мл пенициллина - 100 мкг/мл стрептомицина и 800 мкг/мл Генетицина в атмосфере 5% СО₂, в увлажняемом инкубаторе при 37°С. Уровни экспрессии рецепторов (B _max ~2,0 и ~0,414 пмоль/мг белка соответственно) определяют с использованием [³H]-Дипренорфина (удельная активность ~50-55 Ки/ммоль) в анализе связывания радиолиганда мембраны.

Клетки выращивают до конфлюэнтности 80-95% (<25 пассажей клеток субкультуры). Для проведения пассажа клеточной линии клеточный монослой инкубируют в течение 5 минут при комнатной температуре и собирают механическим взбалтыванием в 10 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS), дополненного 5 мМ EDTA (этилендиамин-тетрауксусная кислота). После повторного суспендирования клетки переносят в 40 мл свежеприготовленной среды для выращивания для центрифугирования в течение 5 минут со скоростью 100 оборотов в минуту (rpm) и повторно суспендируют в свежеприготовленной среде для выращивания при приемлемом индексе разведения.

Для приготовления мембраны клетки собирают осторожным механическим перемешиванием с 5 мМ этилендиамин-тетрауксусной кислоты (EDTA) в забуференном фосфатом физиологическом растворе с последующим центрифугированием (2500 g в течение 5 минут). Гранулы повторно суспендируют в Аналитическом буферном растворе (50 мМ HEPES (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-этансульфокислота N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N'-(2-этансульфокислота)), рН 7,4, и гомогенизируют посредством дезинтегратора типа Polytron на льду. Получающиеся в результате гомогенаты центрифугируют (1200 g в течение 5 минут), гранулы отбрасывают и супернатант центрифугируют (40000 g в течение 20 минут). Гранулы промывают однократно повторным суспендированием в Аналитическом Буферном растворе с последующим дополнительным центрифугированием (40000 g в течение 30 минут). Конечные гранулы повторно суспендируют в Аналитическом Буферном растворе (колба с эквивалентом 1 T-225 /1 мл аналитического буферного раствора). Концентрацию белка определяют с использованием Набора реагентов для анализа белка Bio-Rad Bradford Protein Assay и мембраны хранят в виде замороженных аликвот при -80°С, до тех пор пока не потребуются.

Мембраны с дельта-опиоидными рецепторами человека (hDOP) закупают в компании Perkin Elmer. Сообщаемые значения K_d и B_max для этих мембран, определяемые посредством анализа насыщения центров связывания в анализе связывания радиолиганда [³H]-Натриндола, составляют 0,14 нМ (pK_d =9,85) и 2,2 пмоль/мг белка соответственно. Концентрацию белка определяют с использованием Аналитического набора реагентов для анализа белка Bio-Rad Bradford Protein Assay. Мембраны хранят в виде замороженных аликвот при -80°С, до того момента пока не потребуются.

b. Анализ радиолигандного связывания

Анализ радиолигандного связывания проводят на 96-луночном полипропиленовом аналитическом планшете с глубокими лунками (1,1 мл) Axygen в общем аналитическом объеме 200 мкл, содержащем соответствующее количество мембранного белка (соответственно ~3, ~2 и ~20 мкг для мю-, дельта- и каппа) в Аналитическом Буферном Растворе, дополненном 0,025% бычьего сывороточного альбумина (BSA). Исследования связывания при насыщении центров связывания для определения значений K_d радиолиганда проводят с использованием [³Н]-Дипренорфина при 8-12 различных концентрациях, колеблющихся в диапазоне от 0,001 нМ до 5 нМ. Анализ вытеснения для определения значений pKi для соединений проводят с помощью [³Н]-Дипренорфина при 0,5, 1,2 и 0,7 нМ соответственно для мю-, дельта- и каппа-рецепторов и при одиннадцати концентрациях соединения, колеблющихся от 10 пМ до 100 мкМ.

Данные по связыванию анализируют посредством нелинейного регрессионного анализа с помощью пакета программного обеспечения GraphPad Prism Software package (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA) с использованием модели с 3 параметрами для конкуренции на одном сайте. Минимум кривой устанавливают за значением для неспецифического связывания, которое определяют в присутствии 10 мкМ налоксона. Значения K_i для испытуемых соединений вычисляют в программе Prism исходя из наиболее точно подобранных значений IC₅₀ и значения K_d для радиолиганда с использованием равенства Cheng-Prusoff (K _i=IC₅₀/(1+([L]/K_d)), где [L]=концентрация [³H]-Дипренорфина. Результаты выражают в виде отрицательного десятичного логарифма значений K_i, pK_i.

Испытуемые соединения, имеющие более высокое значение pK_i в этих анализах, имеют более высокое сродство к связыванию в отношении мю-, дельта-, или каппа-опиоидного рецептора. Соединение 1 показывает значение pK_i, равное 9,4, на мю-опиоидном рецепторе человека.

Анализ 2: Агонист-опосредованная активация мю-опиоидного рецептора в мембранах, приготовленных из клеток яичника китайского хомячка (CHO-K1), экспрессирующих мю-опиоидный рецептор человека

В этом анализе значения эффективности и внутренней активности для испытуемых соединений определяют путем измерения количества связанного GTP-Eu, присутствующего после активации рецепторов в мембранах, приготовленных из клеток CHO-K1, экспрессирующих мю-опиоидный рецептор человека.

а. Приготовление мембран с мю-опиоидными рецепторами:

Мембраны с мю-опиоидными рецепторами человека (hMOP) либо приготавливают так, как описано выше, или закупают в компании Perkin Elmer. Сообщаемые значения K_d и B_max для закупленных мембран, определяемые посредством анализа насыщения центров связывания в анализе связывания радиолиганда [³H]-Дипренорфина, составляют 10,06 и 2,4 пмоль/мг белка соответственно. Концентрацию белка определяют с использованием Набора реагентов для анализа белка Bio-Rad Bradford Protein Assay. Мембраны хранят в виде замороженных аликвот при -80°С, до того момента, пока не потребуются. Лиофилизованные GTP-Eu и GDP разбавляют до концентраций соответственно 10 мкМ и 2 мМ в дважды перегнанной Н₂ О, затем смешивают и дают постоять при комнатной температуре в течение 30 минут, прежде чем переносить в отдельно взятые аликвотные части образцов для хранения при -20°С.

b. Анализ нуклеотидного обмена с использованием Eu-меченного GTP при участии мю-опиоидного рецептора человека

Анализ GTP-Eu-нуклеотидного обмена проводят с использованием набора реагентов для исследования GTP-связывания DELPHIA (компания Perkin/Elmer) в 96-луночных фильтрационных планшетах AcroWell в соответствии с рекомендациями производителя. Мембраны приготавливают так, как описано выше, и прежде чем начать проведение анализа, аликвоты разбавляют до концентрации 200 мкг/мл в Аналитическом буферном растворе (50 мМ HEPES, рН 7,4 при 25°С), затем гомогенизируют в течение 10 секунд с использованием гомогенизатора Polytron. Испытуемые соединения получают в виде 10 мМ стоковых растворов в DMSO, разбавляют до 400 мкМ в Аналитическом Буферном растворе, содержащем 0,1% BSA (бычий сывороточный альбумин), и делают последовательные (1:5) разведения с получением десяти концентраций соединения, находящихся в диапазоне от 40 пМ до 80 мкМ - GDP, и GTP-Eu разбавляют до 4 мкМ и 40 нМ соответственно в Аналитическом Буферном растворе. Анализ проводят в общем объеме 100 мкл, содержащем 5 мкг мембранного белка, испытуемое соединение, концентрация которого находится в диапазоне от 10 пМ до 20 мкМ, 1 мкМ GDP и 10 нМ GTP-Eu, разбавленные в 10 мМ растворе MgCl ₂, 50 мМ растворе NaCl и 0,0125% растворе BSA, (конечные аналитические концентрации). Кривую зависимости 'концентрация (DAMGO=Tyr-D-Ala-Gly-(methyl)Phe-Gly-ol) (колеблется от 12,8 пМ до 1 мкМ) - эффект' включают в исследование на каждом планшете.

Аналитические планшеты подготавливают непосредственно перед проведением анализа после добавления 25 мкл Аналитического Буферного раствора, 25 мкл испытуемого соединения и 25 мкл GDP и GTP-Eu. Анализ начинают с добавления 25 мкл мембранного белка и оставляют на 30 минут инкубироваться. Аналитические планшеты затем фильтруют с помощью вакуумного коллектора Waters, подсоединенного к центральной вакуумной системе, отрегулированной на 10-12 дюймах ртутного столба, и промывают отмывающим раствором GTP при комнатной температуры (2×300 мл). Нижние части планшет блоттируют с удалением избыточной жидкости. Затем планшеты немедленно считываются для определения количества связанного GTP-Eu путем измерения Время-Разрешенной Флуоресценции (TRF) на ридер-планшете Packard Fusion Plate ReaderVehicle: DMSO не превышает 1% конечной аналитической концентрации.

Количество связанного GTP-Eu пропорционально степени активации мю-опиоидных рецепторов посредством испытуемого соединения. Внутреннюю активность (IA), выраженную как процентное содержание, определяют в виде соотношения количества связанного GTP-Eu, наблюдаемого при активации посредством испытуемого соединения, к количеству, наблюдаемому при активации посредством DAMGO, который, как предполагают, является полным агонистом (IA=100). Соединение 1 демонстрирует в этом анализе внутреннюю активность, равную -8. Таким образом, активное вещество настоящего изобретения, как показано, является антагонистом.

Анализ 3: Экспериментальная модель на крысах эффективности in vivo

В этом анализе эффективность испытуемых соединений оценивают в экспериментальной модели транзита пищи по желудочно-кишечному тракту, которая позволяет оценить периферическую активность. Это исследование одобрено Комитетом по Институциональному Уходу за Животными и их Использованию (Theravance, Inc.) и согласуется с Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных, опубликованным Национальной Академией Наук (© 1996).

а. Анализ эвакуации желудочного содержимого из желудка в двенадцатиперстную кишку у крыс

Испытуемые соединения оценивают в анализе эвакуации желудочного содержимого из желудка в двенадцатиперстную кишку для определения их способности вызывать реверсию (обратное течение) вызванного лоперамидом замедления эвакуации содержимого желудка. Крысам не дают есть в течение ночи вплоть до введения испытуемых соединений или среды для лекарства посредством внутривенных, подкожных, внутримышечных или пероральных путей введения в дозах, колеблющихся в диапазоне от 0,001 до приблизительно 30 миллиграмм/килограмм (мг/кг). За введением испытуемого соединения следует подкожное введение лоперамида в дозе 1 мг/кг или среды для лекарства. Через пять минут после введения лоперамида или среды для лекарства вводят перорально через желудочный зонд не обладающую пищевыми качествами, невсасывающуюся пищу на основе активированного угля и животным дают свободный доступ к воде в течение 60-минутного периода эксперимента. Затем животных подвергают эвтаназии посредством асфиксии под действием диоксида углерода с последующим проведением торакотомии и желудок осторожно удаляют оперативно. Желудок перевязывают в нижнем пищеводном сфинктере и в пилорическом сфинктере для предотвращения дополнительной эвакуации во время удаления ткани. Затем определяют массу желудка после удаления ниток для перевязки желудка.

b. Анализ данных и результаты

Данные анализируют с использованием пакета программного обеспечения GraphPad Prism Software (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA). Кривые, отражающие реверсию (обратное течение болезни) в процентах, строят посредством нелинейного регрессионного анализа с использованием сигмоидальной модели зависимости 'доза-реакция' (варьируемый наклон) и вычисляют величины наилучшего согласия для ID₅₀. Минимальные значения и максимальные значения на кривой закрепляют соответственно за контрольными значениями, полученными для лоперамида (которые указывают на 0% реверсии), и контрольными значениями, полученными для среды для лекарства (которые указывают на 100% реверсию). Результаты выражают в виде ID₅₀, то есть дозы, требуемой для 50% реверсии эффектов лоперамида, в миллиграммах на килограмм. Соединение 1, вводимое перорально, показывает значение ID₅₀, равное 0,09 мг/кг, в модели эвакуации содержимого желудка.

Хотя настоящее изобретение было описано на примерах его конкретных вариантов осуществления, специалистам в данной области будет ясно, что могут быть сделаны различные изменения и могут быть сделаны замены на эквиваленты без выхода за рамки истинных сущности и объема изобретения. Кроме того, могут быть выполнены многие модификации для адаптации конкретных ситуации, вещества, смеси веществ, химически или механически связанных между собой, способа, стадии или стадий способа к цели, сущности и объему настоящего изобретения. Все такие модификации, как полагают, попадают в рамки объема пунктов формулы, прилагаемых к этому документу. Кроме того, все публикации, патенты, и патентные документы, на которые имеются ссылки в материалах заявки, включены путем ссылки в этот документ в полном объеме как отдельно включенные путем ссылки.