низкомолекулярные ингибиторы n-концевой активации рецептора андрогенов

Формула изобретения

1. Соединение формулы В:



или его фармацевтически приемлемая соль, где:

Х представляет собой N;

Y означает О;

R ¹ представляет собой OJ, где J является линейной или разветвленной, насыщенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода;

R² представляет линейную или разветвленную, насыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель выбран из одной или нескольких групп из числа: F, Cl, Br и I;

R³ представляет собой Н;

R⁴ представляет собой Н или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель выбран из одной или нескольких групп из числа: F, Cl, Br и I; и

R⁵ представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель выбран из одной или нескольких групп из числа: F, Cl, Br и I;

Z представляет собой Bu, Pr, Et или Me;

обозначение относится к двойной связи;

и при условии, что соединение не является:

2. Соединение по п.1, где R¹ означает OJ, где J представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода.

3. Соединение по п.1 или 2, где R¹ означает ОМе.

4. Соединение по п.1 или 2, где R⁴ означает Н.

5. Соединение по п.1 или 2, где R⁴ представляет собой метил.

6. Соединение по п.1, которое имеет следующую формулу С:



или его фармацевтически приемлемая соль, где

А означает Pr, Et или Me;

М представляет собой OBu, OPr, OEt или ОМе;

Т представляет собой

или ;

Е означает Bu, Pr, Et или Me;

Q представляет собой

или ;

L означает Bu, Pr, Et или Me;

R⁸ представляет собой Cl₃C, Cl₂HC, ClH ₂C, Bu, Pr, Et или Me; и

R⁹ представляет собой Cl₃C, Cl₂HC, ClH₂C, Bu, Pr, Et или Me.

7. Соединение по п.1, которое имеет следующую формулу (D):



или его фармацевтически приемлемая соль, где:

А означает Pr, Et или Me;

D представляет собой Bu, Pr, Et или Me;

Е означает Bu, Pr, Et или Me;

L означает Bu, Pr, Et или Me;

R⁸ представляет собой Cl₃C, Cl₂HC, ClH₂C, Bu, Pr, Et или Me;

и

R⁹ представляет собой Cl₃C, Cl₂HC, ClH₂C, Bu, Pr, Et или Me.

8. Соединение по п.1, которое имеет следующую формулу Е:



или его фармацевтически приемлемая соль, где:

R⁸ представляет собой Cl₃C, Cl ₂HC, ClH₂C, Et или Me; и

R⁹ представляет собой Cl₃C, Cl₂HC, ClH ₂C, Et или Me.

9. Соединение по п.1, которое имеет одну из следующих структур:

10. Способ ингибирования активности AR, включающий введение в клетку млекопитающего соединения по п.1.

11. Применение одного или нескольких соединений по пп.1-9 для ингибирования активности рецептора андрогенов (AR).

12. Применение одного или нескольких соединений по пп.1-9 для получения лекарственного средства, предназначенного для ингибирования активности рецептора андрогенов (AR).

13. Одно или несколько соединений по пп.1-9 для ингибирования активности рецептора андрогенов (AR).

14. Фармацевтическая композиция, для ингибирования активности рецептора андрогенов (AR), включающая соединение, соответствующее любому из соединений по пп.1-9, а также фармацевтически приемлемый наполнитель.

15. Способ получения соединения формулы (К):



где:

R²⁵ означает линейную или разветвленную, насыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель выбран из одной или нескольких групп из числа: F, Cl, Br и I;

R²⁶ означает линейную или разветвленную, насыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель выбран из одной или нескольких групп из числа: F, Cl, Br и I; и

R²⁷ является Bu, Pr, Et или Me,

включающий:

смешивание соединения формулы (Q):



где R²⁵ соответствует данному выше определению, с н-BuLi с образованием смеси, и взаимодействие этой смеси с соединением формулы (S):



где R²⁶ соответствует данному выше определению, и Prot является защитной группой, с образованием соединения формулы (Т):



где R²⁵, R²⁶ и Prot соответствуют данным выше определениям;

снятие защиты в соединении формулы (Т) с образованием соединения формулы (U):



где R²⁵ и R²⁶ соответствуют данным выше определениям; и взаимодействие соединения формулы (U) с соединением формулы (V):

(R²⁷CO) ₂O (V)

где R²⁷ соответствует данному выше определению, в пиридине с образованием соединения формулы (К).

16. Способ по п.15, дополнительно включающий:

смешивание в любом порядке соединения формулы (R):



где R²⁶ и Prot соответствуют определению в п.15, с п-нитрофенолом и карбодиимид-содержащим соединением, с образованием соединения формулы (S):



где R²⁶ и Prot соответствуют определению в п.15.

17. Способ по п.15 или 16, дополнительно включающий взаимодействие соединения формулы (Р):



где R²⁵ соответствует определению в п.15, с моногидратом гидразина в МеОН с образованием соединения формулы (Q):



где R²⁵ соответствует определению в п.15.

18. Способ по п.17, дополнительно включающий взаимодействие соединения формулы (О):



где R²⁵ соответствует определению в п.15, с триметилортоформиатом в присутствии концентрированной H₂SO₄ в качестве катализатора, в метаноле с образованием соединения формулы (Р):



где R²⁵ соответствует определению в п.15.

19. Способ по п.18, дополнительно включающий взаимодействие соединения формулы (М):



где R²⁵ соответствует определению в п.15, с хлорирующим агентом с образованием соединения формулы (N):



где R²⁵ соответствует определению в п.15; и

взаимодействие соединения формулы (N) с суспензией, которая получена смешиванием моноэтилмалоната с алкиллитием, с образованием соединения формулы (О):



где R²⁵ соответствует определению в п.15.

20. Способ по п.19, дополнительно включающий взаимодействие соединения формулы (L):



где R²⁵ соответствует определению в п.15, с N-карбэтоксифталимидом в присутствии Na₂ CO₃ и H₂O при комнатной температуре с образованием соединения формулы (М):



где R²⁵ соответствует определению в п.15.

21. Применение по п.11, где ингибирование активности AR происходит в клетке человека.

22. Применение по п.11, где ингибирование активности AR осуществляется для ингибирования активности N-концевого домена (NTD) AR.

23. Применение по п.11, где ингибирование активности AR осуществляется для профилактики или лечения рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна.

24. Применение по п.23, где ингибирование активности AR осуществляется для профилактики или лечения рака простаты.

25. Применение по п.24, где рак простаты представляет собой андроген-независимый рак простаты.

26. Применение по п.24, где рак простаты является андроген-зависимым раком простаты.

Описание изобретения к патенту

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка претендует на приоритет предварительной заявки на патент США с порядковым № 61/136277, озаглавленной «Низкомолекулярные ингибиторы N-концевой активации рецептора андрогенов», поданной 22 Августа 2008 г, которая включена в настоящую заявку с помощью ссылки во всей ее полноте.

ЗАЯВЛЕНИЕ О ФИНАНСИРОВАНИИ ИССЛЕДОВАНИЯ ИЗ ФЕДЕРАЛЬНОГО БЮДЖЕТА

Настоящее изобретение было осуществлено при частичной поддержке правительства по гранту номер W81XWH-05-1-0058 (PC040768), предоставленному U.S. Army Medical Research and Materiel Command (Группе медицинских исследований и материального обеспечения армии США). Правительство Соединенных Штатов может иметь определенные права на настоящее изобретение.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к лекарственным средствам, их применению и способам лечения различных заболеваний, включая различные виды рака. В частности, изобретение относится к терапии и способам лечения таких раковых заболеваний, как рак простаты, включая все его стадии, а также андроген-зависимые, андроген-восприимчивые и андроген-независимые формы (последние именуются также гормоно-рефрактерными, кастрационно-устойчивыми, устойчивыми к антиандрогенной терапии, устойчивыми к подавлению андрогенов, независимыми от устранения андрогенов, кастрационно-резистентными и антиандроген-рецидивирующими формами).

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Действие андрогенов опосредовано рецептором андрогенов (AR). Андрогены принимают участие в широком спектре процессов развития и физиологических реакций, и они вовлечены в половую дифференциацию мужчин, поддержание сперматогенеза и регулирование мужского гонадотропного гормона. Ряд данных показывает, что андрогены связаны с канцерогенезом простаты. Во-первых, андрогены вызывают развитие рака простаты у грызунов, и люди, принимающие андрогены в форме анаболических стероидов, имеют более высокую заболеваемость раком простаты. Во-вторых, рак простаты не развивается, если люди или собаки подверглись кастрации до периода полового созревания. Кастрация взрослых мужчин вызывает регрессию простаты и апоптоз эпителия простаты, но не оказывает влияния на другие мужские наружные половые органы. Эта зависимость от андрогенов дает основание для лечения рака простаты при помощи химической или хирургической кастрации (подавления андрогенов).

Кроме того, андрогены играют определенную роль в развитии раковых заболеваний у женщин. Одним из примеров является рак яичников у женщин, для которого повышенные уровни андрогенов связаны с повышенной опасностью развития рака яичников. AR был обнаружен в значительном большинстве случаев рака яичников, тогда как рецептор эстрогена альфа (ERa) и рецептор прогестерона обнаружены менее, чем в 50% случаев опухолей яичников.

Единственным эффективным способом лечения, существующим для рака простаты на поздних стадиях, является устранение андрогенов, которые играют существенную роль в выживании эпителиальных клеток простаты. Терапия, направленная на подавление андрогенов, вызывает временное уменьшение опухолевой массы с одновременным снижением уровня специфического антигена простаты (PSA) в сыворотке. К сожалению, со временем рак простаты может вновь начать рост в отсутствии андрогенов (андроген-независимая форма заболевания). Андроген-независимая форма заболевания выявляется биохимически до проявления симптомов по повышению титра специфического антигена простаты (PSA) в сыворотке. После того, как заболевание приобретает андроген-независимый характер, большинство пациентов умирает в течение двух лет.

В молекуле AR имеются различные функциональные домены, в число которых входят карбокси-концевой лиганд-связывающий домен (LBD), ДНК-связывающий домен (DBD), включающий два фрагмента «цинковых пальцев», и N-концевой домен (NTD), который содержит один или несколько доменов активации транскрипции. Связывание андрогена (лиганда) с LBD AR приводит к его активации, в результате чего рецептор приобретает способность эффективно связываться со специфичным для него консенсусным сайтом ДНК, именуемым андроген-респонсивным элементом (ARE), на промоторной и энхансерной областях генов, регулируемых андрогенами в «нормальной» ситуации (например, PSA), для инициирования транскрипции. В отсутствии андрогенов AR может быть активирован под влиянием сигнального пути cAMP-зависимой протеин киназы (PKA), при действии интерлейкина-6 (IL-6) и различных факторов роста. Было показано, что механизм лиганд-независимой трансформации AR включает 1) увеличение содержания белка AR в ядре, что предполагает транслокацию в ядро; 2) увеличение образования комплекса AR/ARE; и 3) NTD (Sadar 1999 J. Biol. Chem. 274, 7777-7783; Ueda et al 2002 A J. Biol. Chem. 277, 7076-7085; и Ueda et al 2002 B J. Biol. Chem.277, 38087-38094). При андроген-независимой форме заболевания, в отсутствии тестикулярных андрогенов, AR может быть активирован в результате альтернативных путей передачи сигналов, что согласуется с данными о присутствии в ядре белка AR при вторичных раковых опухолях простаты (Kim et al 2002 Am. J. Pathol. 160, 219-226; и van der Kwast et al 1991 Inter. J. Cancer 48, 189-193).

Имеющиеся в наличии ингибиторы AR включают нестероидные антиандрогены, например, бикалутамид (Casodex^TM), нилутамид и флутамид, а также стероидный антиандроген, а именно ципротерона ацетат. Эти антиандрогены нацелены на домен LBD AR и преимущественно действуют неэффективно, по-видимому, из-за низкого сродства и мутаций, которые ведут к активации AR самими антиандрогенами (Taplin, M.E., et al. Cancer Res., 59, 2511-2515 (1999)).

Стандартная терапия сосредоточена на андроген-зависимой активации AR, происходящей через его C-концевой домен. Исследования последних лет, относящиеся к разработке антагонистов для AR, были сосредоточены на этом C-концевом домене и, конкретно, на: 1) аллостерическом кармане и активности AF-2 (Estébanez-Perpi á et al 2007, PNAS 104, 16074-16079); 2) in silico (компьютерном) моделировании методики «видоизменения лекарственных средств» для идентификации нестероидных антагонистов (Bisson et al 2007, PNAS 104, 11927-11932); и коактиваторных или корепрессорных взаимодействиях (Chang et al 2005, Mol Endocrinology 19, 2478-2490; Hur et al 2004, PLoS Biol 2, E274; Estébanez-Perpi á et al 2005, JBC 280, 8060-8068; He et al 2004, Mol Cell 16, 425-438).

Домен AR-NTD также является мишенью для разработки лекарственных средств (например, WO 2000/001813), поскольку домен NTD принимает участие в активации AR в отсутствии андрогенов (Sadar, M. D. 1999 J. Biol. Chem. 274, 7777-7783 Sadar MD et al 1999 Endocr Relat Cancer. 6, 487-502; Ueda et al 2002 J. Biol. Chem. 277, 7076-7085; Ueda 2002 J. Biol. Chem. 277, 38087-38094; Blaszczyk et al 2004 Clin Cancer Res. 10, 1860-9; Dehm et al 2006 J Biol Chem. 28, 27882-93; Gregory et al 2004 J Biol Chem. 279, 7119-30). AR-NTD играет важную роль в гормональном прогрессировании рака простаты, что показано путем применения имитирующих молекул (Quayle et al 2007, Proc Natl Acad Sci USA. 104, 1331-1336).

В то время как пространственное строение карбокси-концевого домена AR расшифровано, для NTD этого сделать не удалось из-за его высокой гибкости и собственного беспорядка структуры в растворе, что затрудняет подход к обнаружению лекарственных средств путем виртуального моделирования (докинга).

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение частично основано на неожиданном обнаружении того факта, что соединения, описанные в настоящей заявке, модулируют активность рецептора андрогенов (AR). Конкретно, соединения, выявленные в настоящем изобретении, демонстрируют ингибирование трансактивации N-концевого домена AR (NTD), что может быть применимо для блокирования роста опухоли in vivo в присутствии и отсутствии андрогенов.

Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться для in vivo или in vitro исследований (т.е. не клинических), направленных на выявление механизмов действия рецепторов-сирот (не имеющих природных лигандов) и ядерных рецепторов (в том числе рецепторов стероидов, как, например, рецепторов андрогенов). Кроме того, эти соединения могут применяться индивидуально или в качестве составной части набора для in vivo или in vitro исследований, нацеленных на выявление путей передачи сигналов и/или активации рецепторов-сирот и ядерных рецепторов, с использованием рекомбинантных белков, культивируемых клеток и/или животных моделей. В качестве альтернативы, описанные в настоящей заявке соединения можно включать в комбинацию с товарной упаковкой и/или инструкциями по применению.

Кроме того, настоящее изобретение частично основано на неожиданном обнаружении того, что описанные в заявке соединения могут также применяться для модулирования активности рецептора андрогенов либо in vivo, либо in vitro, как для исследовательских, так и для терапевтических целей. Эти соединения могут применяться в эффективных количествах, с тем, чтобы можно было модулировать активность рецептора андрогенов. Рецептор андрогенов может быть рецептором млекопитающего. Рецептор андрогенов может быть человеческим рецептором. В частности, соединения по настоящему изобретению можно применять для ингибирования трансактивации N-концевого домена AR (NTD). Модулирующее действие соединений может найти применение в in vivo или in vitro моделях для изучения по меньшей мере одного из следующих заболеваний: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Кроме того, модулирующее действие соединений можно применять для лечения по меньшей мере одного из следующих заболеваний: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания (тестоксикоза) и возрастной дегенерации желтого пятна. Показанием для лечения может являться рак простаты. Рак простаты может являться андроген-независимым раком простаты. Рак простаты может являться андроген-зависимым раком простаты.

Согласно одному из вариантов осуществления, в изобретении разработано соединение, структура которого соответствует формуле A:

или его соль, где X может означать C или N; Y может означать O или S;

R¹ может представлять собой H, OH, J, OJ, SJ или NJJ , где J или J может являться линейной, разветвленной, неароматической циклической, или ароматической или частично ароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, COOR, CONH₂, CONHR, CONR ₂, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR ₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO ₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C ₁-C₁₀ алкил;

R² может представлять собой H или боковую цепь аминокислоты за исключением пролина и фенилаланина, или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, COOR, CONH₂ , CONHR, CONR₂, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂ , NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃ R, SO₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C₁₀ алкил;

R³ может представлять собой H, OH, OG, SG, NGG или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, или ароматическую или частично ароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где G и G может являться линейной, разветвленной, неароматической циклической, или ароматической или частично ароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, и где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, COOR, CONH₂, CONHR, CONR₂, R, F, Cl, Br, I, NH₂, CN, SH, SO ₃H и NO₂, и где R может представлять собой незамещенный C₁-C₁₀ алкил; и

R⁴ и R⁶ могут быть независимо выбраны из группы, состоящей из: H или боковых цепей аминокислот, за исключением пролина и фенилаланина, или линейной, разветвленной, ароматической или частично ароматической циклической, или неароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группы, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, OR, R, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой незамещенный C₁-C₁₀ алкил, при условии, что оба фрагмента R⁴ и R⁶ не являются атомами H, и при условии, что ни R⁴, ни R⁶ не являются:

или ; и

R⁵ может представлять собой H или боковую цепь аминокислоты, за исключением пролина или фенилаланина, или линейную, разветвленную или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, CONH₂, OH, F, Cl, Br, I, NH ₂, SO₃H и NO₂;

обозначение может относиться к простой связи или двойной связи;

и при условии, что соединение не является:

или

Согласно другому варианту осуществления, в изобретении разработано соединение, имеющее структуру, которая соответствует формуле A:

или его соль, где X может представлять собой C или N; Y может означать O или S;

R ¹ может представлять собой H, OH, J или OJ, где J может являться линейной, разветвленной, неароматической циклической, или ароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃ R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C ₁₀ алкил;

R² может представлять собой H или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C₁₀ алкил;

R³ может представлять собой H, OH или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, CN, SH, SO₃H и NO ₂; и

R⁴ и R⁶ независимо выбраны из группы, состоящей из: H или линейной, разветвленной или неароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группы, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Br, I, NH₂, CN, SH, SO₃H и NO ₂, и где алкильный углерод может быть необязательно замещен атомом O, при условии, что оба фрагмента R⁴ и R ⁶ не являются атомами H, и при условии, что ни R⁴ , ни R⁶ не являются:

t-Boc; Fmoc; и Cbz (которые описаны в настоящей заявке); и

R ⁵ может представлять собой H или линейную, разветвленную или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃H и NO₂ ;

обозначение может относиться к простой связи или двойной связи;

и при условии, что соединение не является:

Согласно еще одному варианту осуществления, в изобретении разработано соединение, структура которого соответствует формуле (A)

или его соль, где: X может представлять собой C или N; Y может означать O или S;

R ¹ может представлять собой H, OH, J или OJ, где J может являться линейной, разветвленной, неароматической циклической, или ароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃ R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C ₁₀ алкил;

R² может представлять собой H или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C₁₀ алкил;

R³ может представлять собой H, OH или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, CN, SH, SO₃H и NO ₂; и

R⁴ и R⁶ независимо выбраны из группы, состоящей из: H или COOCH₂CH ₃, при условии, что оба фрагмента R⁴ и R ⁶ не являются атомами H;

R⁵ может представлять собой H или линейную, разветвленную или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH ₂, SO₃H и NO₂; и

обозначение может относиться к простой связи или двойной связи.

Согласно следующему варианту осуществления в изобретении разработано соединение, имеющее структурную формулу B:

или его соль, где: X может представлять собой C или N; Y может означать O или S;

R ¹ может представлять собой H, OH, J,OJ, SJ или NJJ , где J или J может являться линейной, разветвленной, неароматической циклической, или ароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, CN, SH, SO₃H и NO₂;

R² может представлять собой H или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C₁₀ алкил;

R³ может представлять собой H, OH, OG, SG, NGG или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где G и G представляют собой линейные, разветвленные или неароматические циклические, насыщенные или ненасыщенные алкильные группы, содержащие от одного до десяти атомов углерода, и где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, CN, SH, SO₃ H и NO₂; и

R⁴ может представлять собой H или линейную, разветвленную, ароматическую циклическую или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, OR, R, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой незамещенный C₁-C₁₀ алкил, при условии, что фрагмент R⁴ не является t-Boc; Fmoc; и Cbz (структуры которых определены в настоящей заявке); и

R ⁵ может представлять собой H или линейную, разветвленную или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃H и NO₂ ;

Z может представлять собой необязательно замещенный Bu, Pr, Et или Me, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃H и NO₂ ;

обозначение может относиться к простой связи или двойной связи;

и при условии, что соединение не является:

или

R³ может представлять собой H, OH, OG или линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где G может представлять собой линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, и где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, CN, SH, SO₃H и NO₂. В качестве альтернативы, R ³ может представлять собой H, OH, OBu, OPr, OEt или OMe. В качестве альтернативы R³ может означать H.

R¹ может представлять собой H, OH, J или OJ, где J может являться линейной, разветвленной, неароматической циклической, или ароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂ и NO₂. В качестве альтернативы, R¹ может представлять собой H, OH, J или OJ, где J может являться линейной, или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I и NH₂. R¹ может также представлять собой H, OH, OBu, OPr, OEt, OMe, Bu, Pr, Et или Me. В качестве еще одной альтернативы, R¹ может представлять собой H, OH, J или OJ, где J может являться линейной, или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, OH, F, Cl, Br, I и NH₂. R ¹ может также являться H, OH, OBu, OPr, OEt или OMe. R ¹ может представлять собой OMe.

обозначение может относиться к двойной связи.

R ² может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂ и NO ₂. В качестве альтернативы, R² может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, OH, F, Cl, Br, I и NH₂. В качестве следующей альтернативы, R ² может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может представлять собой один или несколько атомов галогена. В качестве еще одной альтернативы, R² может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может представлять собой один или несколько атомов Cl.

R⁴ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SH, SO ₃H и NO₂. В качестве альтернативы, R⁴ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, OH, F, Cl, Br, I и NH₂. В качестве следующей альтернативы, R⁴ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одного или нескольких атомов галогенов. В качестве еще одной альтернативы, R⁴ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может представлять собой один или несколько атомов галогенов. В качестве еще одной альтернативы, R⁴ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может являться одним или несколькими атомами Cl.

R⁵ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃H и NO₂ . В качестве альтернативы, R⁵ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, OH, F, Cl, Br, I и NH₂. В качестве следующей альтернативы, R ⁵ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может представлять собой один или несколько галогенов. В качестве еще одной альтернативы, R⁵ может представлять собой H, или линейную или разветвленную, насыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может представлять собой один или несколько атомов Cl.

X может представлять собой N. Y может означать O.

Z может представлять собой необязательно замещенный Bu, Pr, Et или Me, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, OH, F, Cl, Br и I. В качестве альтернативы, Z может представлять собой необязательно замещенный Bu, Pr, Et или Me, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: F, Cl, Br и I.

Согласно следующему варианту осуществления, в изобретении разработано соединение, имеющее структурную формулу C:

или его соль, где A может означать Bu, Pr, Et или Me; M может представлять собой H, OH, OBu, OPr, OEt, OMe, Bu, Pr, Et или Me;

T может представлять собой

или ;

E может означать Bu, Pr, Et или Me;

Q может представлять собой

или ;

L может означать Bu, Pr, Et или Me; R ⁸ может представлять собой Cl₃C, Cl₂ HC, ClH₂C, Bu, Pr, Et или Me; и R⁹ может представлять собой Cl₃C, Cl₂HC, ClH ₂C, Bu, Pr, Et или Me; и где фрагменты A, T, E, Q и L являются необязательно замещенными, причем необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃H и NO ₂.

Согласно другому варианту осуществления, в изобретении разработано соединение, имеющее структурную формулу D:

или его соль, где A может означать Bu, Pr, Et или Me; D может представлять собой Bu, Pr, Et или Me; E может означать Bu, Pr, Et или Me; L может означать Bu, Pr, Et или Me; R⁸ может представлять собой Cl₃ C, Cl₂HC, ClH₂C, Bu, Pr, Et или Me; и R ⁹ может представлять собой Cl₃C, Cl₂ HC, ClH₂C, Bu, Pr, Et или Me.

Согласно следующему варианту осуществления, в изобретении разработано соединение, имеющее структурную формулу E:

или его соль, где R⁸ может представлять собой Cl₃C, Cl₂HC, ClH ₂C, Et или Me; и R⁹ может представлять собой Cl₃C, Cl₂HC, ClH₂C, Et или Me.

Согласно следующему варианту осуществления, в изобретении разработано соединение или его соль, выбранное из одного или нескольких соединений со следующими структурами:

Согласно еще одному варианту осуществления, в изобретении разработано соединение или его соль, выбранное из одного или нескольких соединений, имеющих следующие структуры:

Согласно следующему варианту осуществления, в изобретении разработан способ модулирования активности AR, где указанный способ включает введение в клетку млекопитающего соединения, имеющего структуру, отображаемую формулой A:

или его соли, где X может означать C или N; Y может означать O или S;

R¹ может представлять собой H, OH, J, OJ, SJ или NJJ , где J или J может являться линейной, разветвленной, неароматической циклической, или ароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C ₁-C₁₀ алкил;

R² может представлять собой H или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R, OH, OR, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃ H, SO₃R, SO₂R, OSO₃R и NO ₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C₁₀ алкил;

R³ может представлять собой H, OH, OG, SG, NGG или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где G и G являются линейными, разветвленными, неароматическими циклическими, насыщенными или ненасыщенными, необязательно замещенными алкильными группами, содержащими от одного до десяти атомов углерода, и где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH ₂, CN, SH, SO₃H и NO₂;

R⁴ и R⁶ независимо выбраны из группы, состоящей из: H или линейной, разветвленной, ароматической циклической, или неароматической циклической, насыщенной или ненасыщенной, необязательно замещенной алкильной группы, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, OR, R, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR, NR₂, CN, SH, SR, SO₃H, SO₃R, SO₂R, OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный насыщенный и незамещенный C ₁-C₁₀ алкил;

R⁵ может представлять собой H или линейную, разветвленную или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH ₂, SO₃H и NO₂; и

обозначение может относиться к простой связи или двойной связи.

В качестве альтернативы, соединение, подходящее для применения в способах/приложениях, описанных в настоящей заявке, может иметь структуру, отображаемую любой из формул A-E, приведенных в настоящей заявке.

Согласно следующему варианту осуществления, изобретение относится к применению соединения, описанного в настоящей заявке, для модулирования активности рецептора андрогенов (AR). В качестве альтернативы, это применение может относиться к получению лекарственного средства, предназначенного для модулирования рецептора андрогенов (AR). В качестве следующей альтернативы, это применение может относиться к лечению или к получению лекарственного средства, предназначенного для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Показанием для лечения может являться рак простаты. Рак простаты может являться андроген-независимым раком простаты. Рак простаты может быть андроген-зависимым раком простаты.

Согласно другому варианту осуществления, изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей соединение, которое имеет структуру, отображаемую одной из приведенных выше формул A, B, C, D, E или любое из описанных выше соединений, а также фармацевтически приемлемый наполнитель.

Согласно следующему варианту осуществления, изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей соединение, являющееся любым из описанных выше соединений, а также фармацевтически приемлемый наполнитель.

Согласно еще одному варианту осуществления, изобретение относится к способу скрининга соединений, модулирующих рецептор андрогенов, где отобранные соединения выбраны из соединений, описанных в настоящей заявке.

Согласно другому варианту осуществления, изобретение относится к одному или нескольким из соединений, описанных в настоящей заявке, для модулирования активности андрогенного рецептора (AR).

Предполагается, что соединения, описанные в настоящей заявке, включают все рацемические смеси, а также все индивидуальные энантиомеры или их комбинации, независимо от того, представлены ли они в настоящей заявке. Необязательный заместитель может являться галогеном. R², R⁴ , R⁵ и R⁶ могут являться боковыми цепями любых природных аминокислот или их замещенными вариантами. С другой стороны, R² не является остатком пролина или фенилаланина. Кроме того, R⁴ и R⁶ не являются остатками пролина или фенилаланина. Также R⁵ не является остатком пролина. Боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из алифатических боковых цепей валина, лейцина, изолейцина или вариантов боковых цепей валина, лейцина, изолейцина с моно-, ди- или три- галогензамещенным метилом. Аминокислотная боковая цепь может быть выбрана из гидрофобных боковых цепей аланина, валина, лейцина, изолейцина, триптофана, метионина, цистеина и глицина. В качестве альтернативы, аминокислотная боковая цепь может быть выбрана из гидрофильных боковых цепей аспарагина, глутамина, серина, треонина и тирозина. В качестве следующей альтернативы, аминокислотная боковая цепь может быть выбрана из основных боковых цепей лизина, аргинина и гистидина. В качестве другой альтернативы, аминокислотная боковая цепь может быть выбрана из основных боковых цепей аспартата и глутамата. В качестве еще одной альтернативы, аминокислотная боковая цепь может быть выбрана из любых боковых цепей, перечисленных в настоящей заявке, или их моно-, ди- или три- галогензамещенных вариантов. Галоген может представлять собой F, Cl, Br или I. В качестве альтернативы заместители R¹, R², R³, R⁴, R ⁵ и R⁶ могут представлять собой замещенные или незамещенные ацилы, включающие от одного до десяти атомов углерода, например, ацетил, пропионил, бутаноил или пентаноил.

Клетки млекопитающего могут являться клетками человека. Модулирующая активность в отношении AR может проявляться за счет ингибирования активности N-концевого домена AR. Модулирующая активность в отношении AR может проявляться за счет ингибирования активности N-концевого домена (NTD) AR. Указанное модулирование может иметь место in vivo. Модулирование активности AR может быть предназначено для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Показанием для лечения может являться рак простаты. Рак простаты может являться андроген-независимым раком простаты. Рак простаты может быть андроген-зависимым раком простаты.

Согласно еще одному варианту осуществления в изобретении разработан способ получения соединения формулы (K):

где:

R²⁵ может означать H или боковую цепь аминокислоты, за исключением пролина или фенилаланина, или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, COOR , CONH₂, CONHR , CONR ₂, R , OH, OR , F, Cl, Br, I, NH₂, NHR , NR ₂, CN, SH, SR , SO₃H, SO₃R , SO₂R , OSO₃R и NO₂ и где R может являться линейным или разветвленным насыщенным и незамещенным C₁-C₁₀ алкилом;

R²⁶ может означать H или боковую цепь аминокислоты, за исключением пролина или фенилаланина, или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, CONH₂, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃ H и NO₂; и

R²⁷ может являться необязательно замещенным Bu, Pr, Et или Me, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃ H и NO₂.

Согласно другому варианту осуществления, в изобретении предложено применение соединения формулы (F):

или его фармацевтически приемлемой соли для модулирования активности рецептора андрогенов (AR), где:

R¹⁰ может являться H или линейной, разветвленной или циклической, насыщенной или ненасыщенной необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R¹⁴ , OH, OR¹⁴, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR ¹⁴, NR¹⁴ ₂, CN, SH, SR¹⁴, SO₃H, SO₃R¹⁴, SO₂R¹⁴, OSO ₃R¹⁴ и NO₂, и где R¹⁴ может означать незамещенную С₁-С₁₀ линейную, разветвленную или циклическую, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу;

R¹¹ может являться H или линейной, разветвленной или циклической, насыщенной или ненасыщенной необязательно замещенной алкильной группой, содержащей от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R¹⁵ , OH, OR¹⁵, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR ¹⁵, NR¹⁵ ₂, CN, SH, SR¹⁵, SO₃H, SO₃R¹⁵, SO₂R¹⁵, OSO ₃R¹⁵ и NO₂, и где R¹⁵ может означать незамещенную С₁-С₁₀ линейную, разветвленную или циклическую, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу;

R¹² может представлять собой H или линейную, разветвленную или циклическую, насыщенную или ненасыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R¹⁶, OH, OR¹⁶, F, Cl, Br, I, NH ₂, NHR¹⁶, NR¹⁶ ₂, CN, SH, SR¹⁶, SO₃H, SO₃R¹⁶, SO₂R¹⁶, OSO ₃R¹⁶ и NO₂, и где R¹⁶ может означать незамещенную С₁-С₁₀ линейную, разветвленную или циклическую, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу; и

R¹³ может представлять собой H или линейную, разветвленную или циклическую, насыщенную или ненасыщенную необязательно замещенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких групп из числа: оксо, COOH, R¹⁷, OH, OR¹⁷, F, Cl, Br, I, NH ₂, NHR¹⁷, NR¹⁷ ₂, CN, SH, SR¹⁷, SO₃H, SO₃R¹⁷, SO₂R¹⁷, OSO ₃R¹⁷ и NO₂, и где R¹⁷ может означать незамещенную С₁-С₁₀ линейную, разветвленную или циклическую, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу.

В одном из вариантов осуществления, R ¹⁰ может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, H, C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C _3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C _1-10 ацил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C _1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или C_1-10 алкокси, где каждый заместитель из упомянутых C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила, C_2-10 алкинила, C_3-10 циклоалкила, C_3-10 циклоалкенила, C_3-10 циклоалкинила, C_1-10 ацила, C _6-10 арила, C_6-9 арил-C_1-4 алкила, C_6-8 арил-C_2-4 алкенила, C_6-8 арил-C_2-4 алкинила, 4-10-членной неароматической гетероциклической группы, содержащей один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, 5-10-членной ароматической гетероциклической группы, содержащей один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или C_1-10 алкокси, является незамещенным или же замещен одним или несколькими заместителями, каждый из которых может независимо представлять собой оксо, COOH, R¹⁴ , OH, OR¹⁴, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR ¹⁴, NR¹⁴ ₂, CN, SH, SR¹⁴, SO₃H, SO₃R¹⁴, SO₂R¹⁴, OSO ₃R¹⁴ или NO₂, где R¹⁴ может, например, означать, не ограничиваясь перечисленным, C _1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O;

R¹¹ может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, H, C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_1-10 ацил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или C_1-10 алкокси, где каждый заместитель из упомянутых C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила, C_2-10 алкинила, C_3-10 циклоалкила, C_3-10 циклоалкенила, C_3-10 циклоалкинила, C_1-10 ацила, C_6-10 арила, C_6-9 арил-C_1-4 алкила, C_6-8 арил-C_2-4 алкенила, C_6-8 арил-C_2-4 алкинила, 4-10-членной неароматической гетероциклической группы, содержащей один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, 5-10-членной ароматической гетероциклической группы, содержащей один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или C_1-10 алкокси, является незамещенным или же замещен одним или несколькими заместителями, каждый из которых может независимо представлять собой оксо, COOH, R¹⁵, OH, OR¹⁵, F, Cl, Br, I, NH₂ , NHR¹⁵, NR¹⁵ ₂, CN, SH, SR¹⁵, SO₃H, SO₃R¹⁵, SO₂R¹⁵, OSO ₃R¹⁵ или NO₂, где R¹⁵ может, например, означать, не ограничиваясь перечисленным, C _1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O;

R¹² может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, H, C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_1-10 ацил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или C_1-10 алкокси, где каждый заместитель из упомянутых C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила, C_2-10 алкинила, C_3-10 циклоалкила, C_3-10 циклоалкенила, C_3-10 циклоалкинила, C_1-10 ацила, C_6-10 арила, C_6-9 арил-C_1-4 алкила, C_6-8 арил-C_2-4 алкенила, C_6-8 арил-C_2-4 алкинила, 4-10-членной неароматической гетероциклической группы, содержащей один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, 5-10-членной ароматической гетероциклической группы, содержащей один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или C_1-10 алкокси, является незамещенным или же замещен одним или несколькими заместителями, каждый из которых может независимо представлять собой оксо, COOH, R¹⁶, OH, OR¹⁶, F, Cl, Br, I, NH₂ , NHR¹⁶, NR¹⁶ ₂, CN, SH, SR¹⁶, SO₃H, SO₃R¹⁶, SO₂R¹⁶, OSO ₃R¹⁶ или NO₂, где R¹⁶ может, например, означать, не ограничиваясь перечисленным, C _1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O; и

R¹³ может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, H, C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_1-10 ацил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или C_1-10 алкокси, где каждый заместитель из упомянутых C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила, C_2-10 алкинила, C_3-10 циклоалкила, C_3-10 циклоалкенила, C_3-10 циклоалкинила, C_1-10 ацила, C_6-10 арила, C_6-9 арил-C_1-4 алкила, C_6-8 арил-C_2-4 алкенила, C_6-8 арил-C_2-4 алкинила, 4-10-членной неароматической гетероциклической группы, содержащей один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, 5-10-членной ароматической гетероциклической группы, содержащей один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или C_1-10 алкокси, является незамещенным или же замещен одним или несколькими заместителями, каждый из которых может независимо представлять собой оксо, COOH, R¹⁷, OH, OR¹⁷, F, Cl, Br, I, NH₂ , NHR¹⁷, NR¹⁷ ₂, CN, SH, SR¹⁷, SO₃H, SO₃R¹⁷, SO₂R¹⁷, OSO ₃R¹⁷ или NO₂, где R¹⁷ может, например, означать, не ограничиваясь перечисленным, C _1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O.

В одном из вариантов осуществления R¹⁰ может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, H или незамещенный C_1-10 алкил. В другом варианте осуществления, R¹⁰ может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, Me.

В одном из вариантов осуществления R¹¹ может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, H или незамещенный C_1-10 алкил. В другом варианте осуществления, R ¹¹ может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, Me.

В другом варианте осуществления, R ¹² может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, H, C_1-10 алкил или C_2-10 алкенил, где каждый заместитель из числа C_1-10 алкила или C_2-10 алкенила является незамещенным или замещен одним или несколькими заместителями, каждый из которых может независимо представлять собой оксо, COOH, R¹⁶, OH, OR¹⁶, F, Cl, Br, I, NH₂, NHR¹⁶ , NR¹⁶ ₂, CN, SH, SR¹⁶, SO₃H, SO₃R¹⁶, SO₂R¹⁶, OSO ₃R¹⁶ или NO₂, где R¹⁶ может представлять собой C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O. В другом варианте осуществления, R¹² может являться боковой цепью любой природной аминокислоты или ее замещенным вариантом. Боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из алифатических боковых цепей валина, лейцина, изолейцина или вариантов боковых цепей валина, лейцина, изолейцина с моно-, ди- или три- галогензамещенным метилом. Боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из гидрофобных боковых цепей аланина, валина, лейцина, изолейцина, триптофана, метионина, цистеина и глицина. Боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из гидрофильных боковых цепей аспарагина, глутамина, серина, треонина и тирозина. В качестве альтернативы, боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из основных боковых цепей лизина, аргинина и гистидина. В качестве следующей альтернативы, боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из основных боковых цепей аспартата и глутамата. В качестве еще одной альтернативы, боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из любых боковых цепей, перечисленных в настоящей заявке, или их моно-, ди- или три- галогензамещенных вариантов. Галоген может представлять собой F, Cl, Br или I. В другом варианте осуществления, R¹² может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, боковую цепь валина, лейцина, изолейцина или ее замещенный вариант. В следующем варианте осуществления R¹² может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, вариант боковой цепи валина, лейцина и изолейцина, с моно- ди- или три- галогензамещенным метилом. В еще одном варианте, R¹² может, например, означать, не ограничиваясь перечисленным, -CH₂-CH(CH ₃)CH₃; -CH₂-CH(CR¹⁸ ₃)CH₃; -CH₂-CH(CHR ¹⁸ ₂)CH₃; -CH₂-CH(CH ₂R¹⁸)CH₃; -CH₂-CH(CR ¹⁸ ₃)CH₂R¹⁸; -CH₂ -CH(CHR¹⁸ ₂)CH₂R¹⁸; -CH₂ -CH(CH₂R¹⁸)CH₂R¹⁸ ; -CH₂-CH(CR¹⁸ ₃)CHR¹⁸ ₂; -CH₂-CH(CHR¹⁸ ₂)CHR¹⁸ ₂; -CH₂-CH(CH₂R¹⁸ )CHR¹⁸ ₂; CH₂-CH(CR¹⁸ ₃)CR¹⁸ ₃; -CH₂-CH(CHR¹⁸ ₂)CR¹⁸ ₃; -CH₂-CH(CH₂R¹⁸ )CR¹⁸ ₃; -CH(CH₃)CH₃; -CH(CR ¹⁸ ₃)CH₃; -CH(CHR¹⁸ ₂)CH₃; -CH(CH₂R¹⁸ )CH₃; -CH(CR¹⁸ ₃)CH₂R¹⁸; -CH(CHR ¹⁸ ₂)CH₂R¹⁸; -CH(CH₂ R¹⁸)CH₂R¹⁸; -CH(CR¹⁸ ₃)CHR¹⁸ ₂; -CH(CHR¹⁸ ₂)CHR¹⁸ ₂; -CH(CH₂R¹⁸)CHR ¹⁸ ₂; -CH(CR¹⁸ ₃)CR¹⁸ ₃; -CH(CHR¹⁸ ₂)CR¹⁸ ₃; -CH(CH₂R¹⁸)CR¹⁸ ₃; -CH(CH₃)-CH(CH₃)CH ₃; -CH(CH₃)-CH(CR¹⁸ ₃)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CHR ¹⁸ ₂)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CH ₂R¹⁸)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CR ¹⁸ ₃)CH₂R¹⁸; -CH(CH₃ )-CH(CHR¹⁸ ₂)CH₂R¹⁸; -CH(CH₃ )-CH(CH₂R¹⁸)CH₂R¹⁸ ; -CH(CH₃)-CH(CR¹⁸ ₃)CHR¹⁸ ₂; -CH(CH₃)-CH(CHR¹⁸ ₂)CHR¹⁸ ₂; -CH(CH₃)-CH(CH₂R ¹⁸)CHR¹⁸ ₂; -CH(CH₃)-CH(CR¹⁸ ₃)CR¹⁸ ₃; -CH(CH₃)-CH(CHR¹⁸ ₂)CR¹⁸ ₃; или -CH(CH₃)-CH(CH₂ R¹⁸)CR¹⁸ ₃, где R¹⁸ может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим F, Cl, Br или I. В одном из вариантов осуществления R¹⁸ может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, Cl. В еще одном варианте осуществления R¹² может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим -CH₂-CH(CCl₃)CH₃ или -CH ₂-CH(CHCl₂)CH₃. В качестве альтернативы, R¹² может представлять собой замещенный или незамещенный ацил, содержащий от одного до десяти атомов углерода, например, ацетил, пропионил, бутаноил или пентаноил.

В другом варианте осуществления, R¹³ может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, H, C _1-10 алкил или C_2-10 алкенил, где каждый заместитель из числа C_1-10 алкила или C_2-10 алкенила является незамещенным или замещен одним или несколькими заместителями, каждый из которых может независимо представлять собой оксо, COOH, R¹⁷, OH, OR¹⁷, F, Cl, Br, I, NH₂ , NHR¹⁷, NR¹⁷ ₂, CN, SH, SR¹⁷, SO₃H, SO₃R¹⁷, SO₂R¹⁷, OSO ₃R¹⁷ или NO₂, где R¹⁷ может представлять собой C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил, C_2-10 алкинил, C_3-10 циклоалкил, C_3-10 циклоалкенил, C_3-10 циклоалкинил, C_6-10 арил, C_6-9 арил-C_1-4 алкил, C_6-8 арил-C_2-4 алкенил, C_6-8 арил-C_2-4 алкинил, 4-10-членную неароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O, или 5-10-членную ароматическую гетероциклическую группу, содержащую один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой N, S или O. В другом варианте осуществления, R¹³ может являться боковой цепью любой природной аминокислоты или ее замещенным вариантом. Боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из алифатических боковых цепей валина, лейцина, изолейцина или вариантов боковых цепей валина, лейцина, изолейцина с моно-, ди- или три- галогензамещенным метилом. Боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из гидрофобных боковых цепей аланина, валина, лейцина, изолейцина, триптофана, метионина, цистеина и глицина. Боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из гидрофильных боковых цепей аспарагина, глутамина, серина, треонина и тирозина. В качестве альтернативы, боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из основных боковых цепей лизина, аргинина и гистидина. В качестве следующей альтернативы, боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из основных боковых цепей аспартата и глутамата. В качестве еще одной альтернативы, боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из любых боковых цепей, перечисленных в настоящей заявке, или их моно-, ди- или три- галогензамещенных вариантов. Галоген может представлять собой F, Cl, Br или I. В следующем варианте осуществления R¹³ может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, вариант боковой цепи валина, лейцина и изолейцина, с моно- ди- или три- галогензамещенным метилом. В одном из вариантов осуществления, R¹³ может, например, означать, не ограничиваясь перечисленным, -CH₂ -CH(CH₃)CH₃; -CH₂-CH(CR ¹⁹ ₃)CH₃; -CH₂-CH(CHR ¹⁹ ₂)CH₃; -CH₂-CH(CH ₂R¹⁹)CH₃; -CH₂-CH(CR ¹⁹ ₃)CH₂R¹⁹; -CH₂ -CH(CHR¹⁹ ₂)CH₂R¹⁹; -CH₂ -CH(CH₂R¹⁹)CH₂R¹⁹ ; -CH₂-CH(CR¹⁹ ₃)CHR¹⁹ ₂; -CH₂-CH(CHR¹⁹ ₂)CHR¹⁹ ₂; -CH₂-CH(CH₂R¹⁹ )CHR¹⁹ ₂; CH₂-CH(CR¹⁹ ₃)CR¹⁹ ₃; -CH₂-CH(CHR¹⁹ ₂)CR¹⁹ ₃; -CH₂-CH(CH₂R¹⁹ )CR¹⁹ ₃; -CH(CH₃)CH₃; -CH(CR ¹⁹ ₃)CH₃; -CH(CHR¹⁹ ₂)CH₃; -CH(CH₂R¹⁹ )CH₃; -CH(CR¹⁹ ₃)CH₂R¹⁹; -CH(CHR ¹⁹ ₂)CH₂R¹⁹; -CH(CH₂ R¹⁹)CH₂R¹⁹; -CH(CR¹⁹ ₃)CHR¹⁹ ₂; -CH(CHR¹⁹ ₂)CHR¹⁹ ₂; -CH(CH₂R¹⁹)CHR ¹⁹ ₂; -CH(CR¹⁹ ₃)CR¹⁹ ₃; -CH(CHR¹⁹ ₂)CR¹⁹ ₃; -CH(CH₂R¹⁹)CR¹⁹ ₃; -CH(CH₃)-CH(CH₃)CH ₃; -CH(CH₃)-CH(CR¹⁹ ₃)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CHR ¹⁹ ₂)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CH ₂R¹⁹)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CR ¹⁹ ₃)CH₂R¹⁹; -CH(CH₃ )-CH(CHR¹⁹ ₂)CH₂R¹⁹; -CH(CH₃ )-CH(CH₂R¹⁹)CH₂R¹⁹ ; -CH(CH₃)-CH(CR¹⁹ ₃)CHR¹⁹ ₂; -CH(CH₃)-CH(CHR¹⁹ ₂)CHR¹⁹ ₂; -CH(CH₃)-CH(CH₂R ¹⁹)CHR¹⁹ ₂; -CH(CH₃)-CH(CR¹⁹ ₃)CR¹⁹ ₃; -CH(CH₃)-CH(CHR¹⁹ ₂)CR¹⁹ ₃; или -CH(CH₃)-CH(CH₂ R¹⁹)CR¹⁹ ₃, где R¹⁹ может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим F, Cl, Br или I. В одном из вариантов осуществления R¹⁹ может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, Cl. В еще одном варианте осуществления R¹³ может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим -CH₂-CH(CCl₃)CH₃ или -CH ₂-CH(CHCl₂)CH₃. В качестве альтернативы, R¹³ может представлять собой замещенный или незамещенный ацил, содержащий от одного до десяти атомов углерода, например, ацетил, пропионил, бутаноил или пентаноил.

Согласно другому варианту осуществления, предложено применение соединения формулы:

или его фармацевтически приемлемой соли для модулирования активности рецептора андрогенов (AR), где каждая из групп R²⁰ и R²¹ может, например, независимо являться, не ограничиваясь этим, CCl₃ или CHCl₂.

Согласно другому варианту осуществления, предложено применение соединения формулы:

или его фармацевтически приемлемой соли для модулирования активности рецептора андрогенов (AR), где каждая из групп R²⁰ и R²¹ может, например, независимо являться, не ограничиваясь этим, CCl₃ или CHCl₂.

В следующем варианте осуществления разработано применение соединения формулы:

или его фармацевтически приемлемой соли для модулирования активности рецептора андрогенов (AR).

В еще одном варианте осуществления разработано применение соединения формулы

или его фармацевтически приемлемой соли для модулирования активности рецептора андрогенов (AR).

В другом варианте осуществления разработано применение соединения формулы:

или его фармацевтически приемлемой соли для модулирования активности рецептора андрогенов (AR).

В следующем варианте осуществления разработано применение соединения формулы

или его фармацевтически приемлемой соли для модулирования активности рецептора андрогенов (AR).

Согласно другому варианте осуществления, в изобретении предложено применение соединений, показанных выше по тексту, для модулирования активности рецептора андрогенов (AR). В качестве альтернативы, это применение может относиться к получению лекарственного средства, предназначенного для модулирования рецептора андрогенов (AR). В качестве еще одной альтернативы, это применение может относиться к лечению или к получению лекарственного средства для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Показанием для лечения может являться рак простаты. Рак простаты может являться андроген-независимым раком простаты. Рак простаты может являться андроген-зависимым раком простаты. Согласно еще одному варианту осуществления, разработан способ модулирования активности AR, где указанный способ включает введение в клетку млекопитающего одного из показанных выше соединений или его соли.

Согласно другому варианту осуществления, в изобретении разработана фармацевтическая композиция, включающая показанное выше соединение или любое из соединений, представленных в настоящей заявке, а также фармацевтически приемлемый наполнитель.

Согласно следующему варианту осуществления, в изобретении разработан способ скрининга соединений, модулирующих рецептор андрогенов, где отобранные соединения выбирают из числа соединений, описанных в настоящей заявке.

Согласно еще одному варианту осуществления, в изобретении предложено одно или несколько соединений, описанных в настоящей заявке, для модулирования активности рецептора андрогенов (AR).

Предполагается, что описанные в заявке соединения включают все рацемические смеси, и все индивидуальные энантиомеры или их комбинации, независимо от того, представлены ли они в настоящей заявке.

Упомянутая боковая цепь аминокислоты может быть выбрана из числа одного или нескольких из следующих фрагментов, или одной или нескольких из следующих групп боковых цепей:

Боковые цепи аминокислот (исключая пролин)

Гидрофобные (неполярные) боковые цепи аминокислот, исключая пролин

Гидрофильные (полярные) боковые цепи аминокислот

Основные боковые цепи аминокислот

Алифатические боковые цепи аминокислот

Ароматические боковые цепи аминокислот

Заряженные боковые цепи аминокислот

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

На Фиг.1A показано CLIPR изображение активности люциферазы в лизатах клеток LNCaP, устойчиво трансфицированных ARR3-luc и обработанных R1881 и экстрактами морских губок (10 мкг/мл) в течение 48 часов. Все лунки обрабатывали R1881 (1нМ) и каждый экстракт добавляли в три лунки поперечного ряда (4 экстракта в каждом ряду). Заключенные в рамку лунки на данном планшете соответствуют экстракту 06-80 (в трех экземплярах) и демонстрируют более чем 90% ингибирование.

На Фиг.1B показаны микрофотографии морфологии клеток LNCaP, обработанных активным соединением, выделенным из экстракта 06-80, и названным CB3.1 (10 мкг/мл), или R1881 (1 нм) и ДМСО (носителем для соединений) в течение 48 часов, полученные с помощью инвертированного микроскопа.

На Фиг.2A-C показано, что CB3.1 (5 мкг/мл) ингибировал активность ARE-люциферазы, но не ингибировал активность GRE-люциферазы или PRE-люциферазы в клетках LNCaP, которые были трансфицированы векторами экспрессии GR и PR и соответствующими им репортерными генными конструкциями (PSA-luc, GRE-luc или PRE-luc) и подвергнуты действию соответствующих им стероидов (10 нМ, черные столбцы) в течение 24 ч. Белые столбцы соответствуют отсутствию стероида (этанол в качестве контроля). В данном случае GR означает рецептор глюкокортикоидов и PR означает рецептор прогестерона.

На Фиг.3A показана гистограмма, иллюстрирующая блокирование синтокамидом A индуцированной FSK трансактивации AR-NTD. Синтокамид A (CB3.1) (5 мкг/мл) тестировали на способность ингибировать AR NTD. Клетки LNCaP ко-трансфицировали вектором экспрессии Gal4DBD-AR_1-558 и комплиментарным репортером 5XGal4UAS-люцифераза. Индукция этого репортера под действием FSK является мерой трансактивации слитого белка Gal4DBD-AR_1-558 (Sadar 1999 J. Biol. Chem. 274, 7777-7783). Индукция при действии R1881 в этих анализах не проявлялась (т.к. он связывается с лиганд-связывающим доменом (LBD) AR, который отсутствует в химерном белке Gal4DBD-AR _1-558) и, следовательно, не использовалась.

На Фиг.3B показана гистограмма, иллюстрирующая блокирование синтокамидом A (CB 3.1) андроген-зависимой пролиферации клеток LNCaP, обработанных бикалутамидом (BIC, 10 мкМ) или CB3.1 (5 мкг/мл) за 1 час до добавления R1881 (0,1 нм). Клетки собирали и измеряли включение BrdU (5-бром-2-дезоксиуридина) после 3 дней действия андрогена. p=0,0001 между экспериментами, в которых проводилась обработка CB3.1 плюс R1881, и только R1881.

На фиг.3C показана гистограмма, демонстрирующая неспособность синтокамида A (CB3.1) блокировать пролиферацию клеток PC3. Клетки обрабатывали носителем (ДМСО), CB3.1 (5 мкг/мл) в течение 1 дня, затем собирали и измеряли включение BrdU. Столбцы гистограммы отображают среднее значение ± SEM (n=6).

На Фиг.4 показана гистограмма, демонстрирующая, что синтокамиды ингибируют индуцированное андрогенами повышение уровней мРНК PSA в клетках LNCaP. Клетки предварительно в течение 1 часа обрабатывали бикалутамидом (BIC, 10 мкМ) или 10 мкг/мл каждого их соединений (CB3.0 (дизамид A), CB3.1 (синтокамид A) и CB4.0 (синтокамид B) в носителе ДМСО), после чего добавляли синтетический андроген R1881 (1 нм) и затем инкубировали в течение еще 16 часов, после чего собирали и выделяли всю РНК. Содержание мРНК PSA измеряли количественным анализом PCR в реальном времени (qRT)-PCR и нормализовали по содержанию мРНК GAPDH (конститутивный ген). Белый столбец гистограммы: без R1881. Черные столбцы гистограммы: R1881 (1 нм). MNE: средняя нормализованная экспрессия. ДМСО (в отсутствии R1881) произвольным образом присваивали значение 1,0 для каждого индивидуального эксперимента. Столбцы гистограммы отображают среднее значение ± SE на основании 3 отдельных экспериментов, при использовании трех экземпляров технических образцов из каждого эксперимента.

На Фиг.5 показана гистограмма, демонстрирующая ингибирование стимулирования PSA (6.1)-люциферазы под действием R1881, синтокамидами A, B, C и E и дизамидом A. Клетки LNCaP (8×10⁴ клеток на лунку) высевали в 12-луночные планшеты в среду RPMI без фенолового красного, с добавлением 5% FBS, и на следующий день клетки трансфицировали репортерной плазмидой PSA(6.1 kb)-люцифераза (0,5 мкг/лунку), pLuc (1 мкг/лунку), используя липофектин в количестве 2,5 мкл на лунку в среде RPMI без сыворотки и фенолового красного. Через 24 часа после трансфекции, клетки подвергали предварительной обработке в течение 1 часа бикалутамидом (BIC, 10 мкМ), нехлорированным синтокамидом (10 мкМ) или 5 мкг/мл экстракта CB-0 или синтокамидами и дизамидом A, после чего добавляли носитель (ДМСО) или R1881 (1 нМ). Через 24 часа клетки собирали и анализировали для определения активности люциферазы. Данные нормализовали по белку, содержание которого определяли с помощью анализа Бредфорда.

На фиг.6 показана зависимость объема ксенотрансплантата LNCaP от времени под влиянием синтокамида A (CB3.1). CB3.1 уменьшал размер опухолей, в то время, как опухоли, обработанные ДМСО продолжали рост. Животных кастрировали за 7 дней до 1-й инъекции, и объем опухоли приравнивали к 100%. Инъекции осуществляли каждые три дня при дозировке 30 мг/кг массы тела. B. Фотография отображает типовой полученный ксенотрансплантат LNCaP, обработанный CB3.1. Черная линия соответствует отрезку 10 мм.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Новые соединения, описанные в настоящей заявке, включают синтокамиды A(1) - E(5), причем все они, по-видимому, родственны небольшому семейству хлорированных пептидов, которые были выделены из морских губок [a) Kazlauskas, R. Murphy, P. Т.; Wells, R. J.; Schoenholzer, P. Tetrahedron Lett. 1978, 4951-, b) Kazlauskas, R. Murphy, P.T.; Wells, R. J. Tetrahedron Lett. 1978, 4949-, c) Hofheinz, W.; Oberhansli, W.E. Helv. Chim. Acta 1977, 60, 660-, d) Erickson, K.; Wells, R. Aust. J. Chem. 1982, 35, 31-38, e) Unson, M. D.; Rose, СВ.; Faulkner, D. J.; Brinen, L.S.; Steiner, J. R.; Clardy, J. J. Org. Chem. 1993, 55, 6336-6343], nudibranchs [Fahey, S.J.; Garson, M. J. J. Chem. Ecol. 2002, 28, 1773-1785], голожаберных моллюсков [Fahey, S. J.; Garson, M. J. J. Chem. Ecol.2002, 28, 1773-1785] и цианобактерий [Orjala, J.; Gerwick, W. H. J. Nat. Prod.1996, 59, 427-430]. Кроме того, синтез и модификации описаны, например, в Willard et al, J. Org. Chem., 1984, 49, 3489-3493 и Brantley et al, Organic Letters, 1999, vol 1, No. 13, 2165-2167.

В настоящем описании фраза «C_x-y алкил» или «C_x-C_y алкил» используется в том значении, в котором она обычно понимается специалистом в данной области техники, и, как правило, фраза относится к химическому фрагменту, который имеет углеродный скелет или основную углеродную цепь, включающую атомы углерода в количестве от x до y (причем сюда относятся все отдельные целые числа данного диапазона, включая целые числа x и y). Например, «C_1-10 алкил» означает фрагмент химической структуры, углеродный скелет или основная цепь которого включает 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомов углерода.

В настоящем описании термины «циклический C_x-y алкил» или «циклический C_x-C_y алкил» используются в том значении, в котором они обычно понимаются специалистом в данной области техники, и, как правило, термины относятся к соединению или химическому фрагменту, в которых по меньшей мере часть углеродного скелета или основной цепи структуры связаны таким образом, что они образуют «петлю», кольцо или цикл из атомов, которые связаны друг с другом. Все эти атомы не должны быть непосредственно связаны друг с другом, но они могут быть непосредственно связаны с хотя бы двумя другими атомами в «петле». Не ограничивающие примеры циклических алкилов включают бензол, толуол, циклопентан, бисфенол и 1-хлор-3-этилциклогексан.

В настоящем описании термин «разветвленный» используется в том значении, в котором он обычно понимается специалистом в данной области техники, и, как правило, термин относится к химическому фрагменту, включающему углеродный скелет или основную углеродную цепь, которая расщепляется на несколько связанных друг с другом цепей. Части углеродного скелета или основной цепи, которые отходят в более, чем одном направлении, могут быть линейными, циклическими или представлять собой любую комбинацию указанных структур. Не ограничивающими примерами разветвленных алкилов являются трет-бутил и изопропил.

В настоящем описании термин «неразветвленный» используется в том значении, в котором он обычно понимается специалистом в данной области техники, и, как правило, термин относится к химическому фрагменту, включающему углеродный скелет или основную углеродную цепь, которая не расщепляется на несколько связанных друг с другом цепей. Не ограничивающими примерами неразветвленных алкилов являются метил, этил, н-пропил и н-бутил.

В настоящем описании термин «замещенный» используется в том значении, в котором он обычно понимается специалистом в данной области техники, и, как правило, термин относится к химическому фрагменту, в котором одна химическая группа замещена другой химической группой, которая содержит один или несколько гетероатомов. Если конкретно не указано иное, замещенный алкил представляет собой алкил, в котором один или несколько атомов замещен/замещены одним или несколькими атомами, которые не является/являются атомом (атомами) водорода. Например, хлорметил является не ограничивающим примером замещенного алкила, более конкретно, примером замещенного метила. Аминоэтил является другим не ограничивающим примером замещенного алкила, более конкретно, он является замещенным этилом. Функциональные группы, описанные в настоящей заявке, могут быть, например, замещены, не ограничиваясь этим, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 заместителями.

В настоящем описании термин «незамещенный» используется в том значении, в котором он обычно понимается специалистом в данной области техники, и, как правило, термин относится к химическому фрагменту, который является углеводородом и/или не содержит гетероатомов. Не ограничивающие примеры незамещенных алкилов включают метил, этил, трет-бутил и пентил.

В настоящем описании термин «насыщенный» в отношении химического фрагмента используется в том значении, в котором он обычно понимается специалистом в данной области техники, и, как правило, термин относится к химическому фрагменту, который включает только простые связи. Не ограничивающие примеры насыщенных химических фрагментов включают этан, трет-бутил и N⁺H₃.

В настоящем описании термины «галогенированный» или «галогензамещенный» используются в том значении, в котором они могли бы обычно пониматься специалистом в данной области техники, и, как правило, термины относятся к фрагменту или химической структуре, в который атом водорода заменен атомом галогена, например, хлора, фтора, йода или брома. Например, термин «хлорированная боковая цепь природной аминокислоты» относится к боковой цепи, природной аминокислоты, в которой один или несколько атомов водорода, имеющиеся в боковой цепи природной аминокислоты, заменены одним или несколькими атомами хлора.

Не ограничивающие примеры насыщенного C₁ -C₁₀ алкила могут включать метил, этил, н-пропил, изопропил, втор-пропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, т-бутил, н-пентил, изопентил, втор-пентил, т-пентил, н-гексил, изогексил, 1,2-диметилпропил, 2-этилпропил, 1-метил-2-этилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 1,1,2-триэтилпропил, 1,1-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 2-этилбутил, 1,3-диметилбутил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, втор-гексил, т-гексил, н-гептил, изогептил, втор-гептил, т-гептил, н-октил, изооктил, втор-октил, т-октил, н-нонил, изононил, втор-нонил, т-нонил, н-децил, изодецил, втор-децил и т-децил. Не ограничивающие примеры C₂-C₁₀ алкенила могут включать винил, аллил, изопропенил, 1-пропен-2-ил, 1-бутен-1-ил, 1-бутен-2-ил, 1-бутен-3-ил, 2-бутен-1-ил, 2-бутен-2-ил, октенил или деценил. Не ограничивающие примеры C₂-C₁₀ алкинила могут включать этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил, гептинил, октинил, нонинил и децинил. В углеродную цепь насыщенного C₁-C₁₀ алкила, C₂ -C₁₀ алкенила или C₂-C₁₀ алкинила могут быть, например, включены, не ограничиваясь этим, один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой азот, серу или кислород.

Не ограничивающие примеры насыщенной С₃-С₁₀ циклоалкильной группы могут включать циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклононил и циклодецил. Не ограничивающие примеры С₃-С₁₀ циклоалкенильной группы могут включать циклопропенил, циклобутенил, циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил, циклооктенил, циклононенил и циклодеценил. Не ограничивающие примеры С₃-С₁₀ циклоалкинилов могут включать циклопропинил, циклобутинил, циклопентинил, циклогексинил, циклогептинил и циклооктинил. Не ограничивающие примеры C ₆-C₁₀ арильной группы могут включать фенил (Ph), пенталенил, инденил, нафтил и азуленил. C_6-9арил-C _1-4алкильная группа может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, C_1-4 алкильную группу, соответствующую любому определению, данному выше по тексту, у которой в качестве заместителя имеется C_6-9 арильная группа, соответствующая любому из определений, данных выше по тексту. C_6-8 арил-C_2-4алкенильная группа может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, C_2-4 алкенил, соответствующий любому определению, данному выше по тексту, имеющий в качестве заместителя C_6-8 арильную группу, соответствующую любому из определений, данных выше по тексту. C_6-8 арил-C_2-4алкинильная группа может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, C_2-4 алкинильную группу, соответствующую любому определению, данному выше по тексту, имеющую в качестве заместителя C_6-8 арильную группу, соответствующую любому из определений, данных выше по тексту. Не ограничивающие примеры 4-10-членных неароматических гетероциклических групп, содержащих один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой азот, серу или кислород, могут включать пирролидинил, пирролинил, пиперидинил, пиперазинил, имидазолинил, пиразолидинил, имидазолидинил, морфолинил, тетрагидропиранил, азетидинил, оксетанил, оксатиоланил, фталимид и сукцинимид. Не ограничивающие примеры 5-10-членных ароматических гетероциклических групп, содержащих один или несколько гетероатомов, которые независимо представляют собой азот, серу или кислород, могут включать пирролил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, имидазолил, тиазолил и оксазолил.

Не ограничивающие примеры замещенного или незамещенного ацила, содержащего от одного до десяти атомов углерода, включают ацетил, пропионил, бутаноил и пентаноил. Не ограничивающие примеры C₁-C₁₀ алкоксигрупп включают метокси, этокси, пропокси и бутокси.

Боковые цепи природных аминокислот (в отношении которых в настоящей заявке часто применяется обозначение «(aa)») хорошо известны специалисту в данной области и могут быть найдены в целом ряде учебных пособий, как, например, James Darnell et al Molecular Cell Biology Third Edition, опубликовано Scientific American Books 1995. Как правило, природные аминокислоты отображаются формулой (NH₂)C(COOH)(H)(R), где каждая из помещенных в скобки групп связана с атомом углерода, находящимся за пределами скобок. В данной конкретной формуле R означает боковую цепь.

В настоящей заявке символ означает связь в месте соединения между двумя химическими фрагментами, один из которых отображен, а другой чаще всего не отображен. Например показывает, что фрагмент XY связан с другим фрагментом через место присоединения связи. Кроме того, конкретная точка присоединения к не отображенному химическому фрагменту может быть определена логическим путем. Например, в случае соединения CH₃-R³, где R³ означает H или , можно прийти к заключению, что если R³ представляет собой XY , точкой присоединения связи является та же самая связь, посредством которой изображено связывание R³ с CH ₃.

Примеры природных аминокислотных боковых цепей или их хлорированных вариантов включают: -CH₂ -CH(CH₃)CH₃; -CH₂-CH(CCl ₃)CH₃; -CH₂-CH(CHCl₂)CH ₃; -CH₂-CH(CH₂Cl)CH₃; -CH₂-CH(CCl₃)CH₂Cl; -CH ₂-CH(CHCl₂)CH₂Cl; -CH₂ -CH(CH₂Cl)CH₂Cl; -CH₂-CH(CCl ₃)CHCl₂; -CH₂-CH(CHCl₂ )CHCl₂; -CH₂-CH(CH₂Cl)CHCl ₂; CH₂-CH(CCl₃)CCl₃; -CH ₂-CH(CHCl₂)CCl₃; -CH₂-CH(CH ₂Cl)CCl₃; -CH(CH₃)CH₃; -CH(CCl₃)CH₃; -CH(CHCl₂)CH ₃; -CH(CH₂Cl)CH₃; -CH(CCl₃ )CH₂Cl; -CH(CHCl₂)CH₂Cl; -CH(CH ₂Cl)CH₂Cl; -CH(CCl₃)CHCl₂ ; -CH(CHCl₂)CHCl₂; -CH(CH₂Cl)CHCl ₂; -CH(CCl₃)CCl₃; -CH(CHCl₂ )CCl₃; -CH(CH₂Cl)CCl₃; -CH(CH ₃)-CH(CH₃)CH₃; -CH(CH₃ )-CH(CCl₃)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CHCl ₂)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CH₂ Cl)CH₃; -CH(CH₃)-CH(CCl₃)CH ₂Cl; -CH(CH₃)-CH(CHCl₂)CH₂ Cl; -CH(CH₃)-CH(CH₂Cl)CH₂Cl; -CH(CH₃)-CH(CCl₃)CHCl₂; -CH(CH ₃)-CH(CHCl₂)CHCl₂; -CH(CH₃ )-CH(CH₂Cl)CHCl₂; -CH(CH₃)-CH(CCl ₃)CCl₃; -CH(CH₃)-CH(CHCl₂ )CCl₃ или -CH(CH₃)-CH(CH₂Cl)CCl ₃.

Варианты осуществления, включающие химические формулы, приведенные в настоящей заявке, охватывают все возможные стереохимические альтернативы, в т.ч. и те, которые показаны или описаны в настоящей заявке.

В некоторых вариантах осуществления, описанные в тексте заявки соединения или их приемлемые соли могут применяться для системного лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. В некоторых вариантах осуществления, описанные в тексте заявки соединения или их приемлемые соли могут применяться при получении лекарственного средства или композиции, предназначенной для системного лечения указанных в заявке заболеваний. В некоторых вариантах осуществления разработаны также способы системного лечения любых из заболеваний, указанных в настоящей заявке. Некоторые аспекты настоящего изобретения относятся к применению композиций, включающих описанное в заявке соединение, а также фармацевтически приемлемые наполнители или носители. В некоторых вариантах осуществления, рак простаты является андроген-независимым раком простаты (именуемым также гормоно-рефрактерным, кастрационно-устойчивым, устойчивым к антиандрогенной терапии, устойчивым к подавлению андрогенов, независимым от устранения андрогенов, кастрационно-рецидивирующим, антиандроген-рецидивирующим). В некоторых вариантах осуществления рак простаты является андроген-зависимым или андроген-чувствительным. Кроме того, разработаны способы лечения любых заболеваний, описанных в настоящей заявке. Эти способы могут включать введение субъекту описанного в заявке соединения или композиции описанного в заявке соединения, или эффективного количества описанного в заявке соединения или композиции описанного в заявке соединения, при наличии такой необходимости.

Согласно некоторым вариантам осуществления изобретение относится также к пролекарствам соединений, описанных в настоящей заявке. Рядовой специалист в данной области поймет, что пролекарства представляют собой соединения, которые в определенных условиях претерпевают превращение в описанные в заявке соединения или их соли. Эти определенные условия могут, например, включать, не ограничиваясь этим, действие ферментов или соединений, не являющихся ферментами, in vivo. Превращение пролекарства может, например, осуществляться, не ограничиваясь указанными путями, самопроизвольно, или оно может быть катализировано, индуцировано другим агентом, или изменением физических параметров или параметров окружающей среды, например, ферментом, светом, кислотой, температурой или pH. В некоторых вариантах осуществления, само по себе пролекарство может иметь незначительную фармакологическую активность или не иметь ее вообще, и иметь желаемую активность в случае превращения в соединения, описанные в настоящей заявке. Пролекарства можно, например, получать, не ограничиваясь этим, путем превращения соответствующих функциональных групп (например, функциональной группы карбоновой кислоты -COOH, спиртовой функциональной группы -OH, или первичной или вторичной аминогруппы) соединений, описанных в настоящей заявке, в подходящие фрагменты. Рядовой специалист в данной области техники мог бы представить себе и определить эти подходящие фрагменты. Например, и не ограничиваясь указанным, пролекарство можно получить путем превращения первичной или вторичной аминогруппы в амидную группу. Например, и не ограничиваясь указанным, пролекарство можно получить путем превращения функциональной группы карбоновой кислоты в сложноэфирную группу, или путем превращения спиртовой группы в простой эфир. Фрагмент пролекарства может, например, и не ограничиваясь этим, представлять собой защитную группу, которая маскирует функциональную группу, группу, которая является субстратом для одного или нескольких активных или пассивных механизмов переноса, или группу, которая придает соединению определенные свойства, например, растворимость, биодоступность или локализацию, или усиливает их. В некоторых вариантах осуществления, описанные в заявке соединения или их соли могут сами по себе являться пролекарствами других соединений, описанных в настоящей заявке.

Описанные в настоящей заявке соединения могут находиться в свободной форме или в форме соли указанной свободной формы. В некоторых вариантах осуществления описанные в заявке соединения могут иметь форму фармацевтически приемлемых солей, которые известны в технике (Berge et al., J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1). Фармацевтически приемлемые соли в настоящей заявке включают, например, соли, которые имеют желаемую фармацевтическую активность исходного соединения (соли, которые сохраняют биологическую эффективность и/или свойства исходного соединения, и которые не являются нежелательными с биологической и/или иной точки зрения). Соединения, описанные в настоящей заявке, которые содержат одну или несколько функциональных групп, способных образовывать соли, могут, например, иметь форму фармацевтически приемлемой соли. Соединения, содержащие одну или несколько основных функциональных групп, могут быть способны к образованию фармацевтически приемлемых солей, например, с фармацевтически приемлемыми органическими или неорганическими кислотами. Фармацевтически приемлемые соли могут, например, быть получены из, не ограничиваясь перечисленным, уксусной кислоты, адипиновой кислоты, альгиновой кислоты, аспарагиновой кислоты, аскорбиновой кислоты, бензойной кислоты, бензолсульфоновой кислоты, масляной кислоты, коричной кислоты, лимонной кислоты, камфорной кислоты, камфорсульфоновой кислоты, циклопентанпропионовой кислоты, диэтилуксусной кислоты, диглюконовой кислоты, додецилсульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, муравьиной кислоты, фумаровой кислоты, глюкогептановой кислоты, глюконовой кислоты, глицерофосфорной кислоты, гликолевой кислоты, гемисульфоновой кислоты, гептановой кислоты, гексановой кислоты, хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, йодистоводородной кислоты, 2-гидроксиэтансульфоновой кислоты, изоникотиновой кислоты, молочной кислоты, яблочной кислоты, малеиновой кислоты, малоновой кислоты, миндальной кислоты, метансульфоновой кислоты, 2-нафталинсульфоновой кислоты, нафталиндисульфоновой кислоты, п-толуолсульфоновой кислоты, никотиновой кислоты, азотной кислоты, щавелевой кислоты, памовой кислоты, пектиновой кислоты, 3-фенилпропионовой кислоты, фосфорной кислоты, пикриновой кислоты, пимелиновой кислоты, пивалиновой кислоты, пропионовой кислоты, пировиноградной кислоты, салициловой кислоты, янтарной кислоты, серной кислоты, сульфаминовой кислоты, винной кислоты, тиоциановой кислоты или ундекановой кислоты. Соединения, содержащие одну или несколько кислотных функциональных групп, могут быть способны к образованию фармацевтически приемлемых солей, например, с фармацевтически приемлемыми основаниями, например, и не ограничиваясь перечисленными, неорганическими основаниями, являющимися производными щелочных металлов или щелочноземельных металлов, или органическими основаниями, как, например, первичными аминами, вторичными аминами, третичными аминами четвертичными производными аминов, замещенными аминами, природными замещенными аминами, циклическими аминами или основными ионообменными смолами. Например, фармацевтически приемлемые соли могут быть получены, не ограничиваясь перечисленным, из гидроксидов, карбонатов или бикарбонатов катионов фармацевтически приемлемых металлов, например, аммония, натрия, калия, лития, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца или алюминия, а также аммиака, бензатина, меглумина, метиламина, диметиламина, триметиламина, этиламина, диэтиламина, триэтиламина, изопропиламина, трипропиламина, трибутиламина, этаноламина, диэтаноламина, 2-диметиламиноэтанола, 2-диэтиламиноэтанола, дициклогексиламина, лизина, аргинина, гистидина, кофеина, гидрабамина, холина, бетаина, этилендиамина, глюкозамина, глюкамина, метилглюкамина, теобромина, пуринов, пиперазина, пиперидина, прокаина, N-этилпиперидина, теобромина, тетраметиламмониевых соединений, тетраэтиламмониевых соединений, пиридина, N,N-диметиланилина, N-метилпиперидина, морфолина, N-метилморфолина, N-этилморфолина дициклогексиламина, дибензиламина, N,N-дибензилфенэтиламина, 1-эфенамина, N,N -дибензилэтилендиамина или полиаминных смол. В некоторых вариантах осуществления, описанные в настоящей заявке соединения могут содержать как кислотные, так и основные группы, и могут иметь форму внутренних солей или цвиттерионов, например, и не ограничиваясь этим, бетаинов. Описанные в настоящей заявке соли можно получать по обычным методикам, известным специалистам в данной области техники, например, и не ограничиваясь этим, взаимодействием соединения в свободной форме с органической кислотой, неорганической кислотой, органическим основанием или неорганическим основанием, или путем анионного обмена, или катионного обмена из других солей. Специалист в данной области техники поймет, что получение солей может осуществляться in situ при выделении и/или очистке соединений, или же получение солей можно осуществлять путем отдельного взаимодействия выделенного и/или очищенного соединения.

В некоторых вариантах осуществления, соединения и все их разнообразные формы (например, свободные формы, соли, полиморфы, изомерные формы), которые описаны в настоящей заявке, могут находиться в форме, включающей присоединенный растворитель, например, сольватов. Сольваты включают стехиометрические или не стехиометрические количества растворителя в физической ассоциации с соединением или его солью. Этот растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь указанным, фармацевтически приемлемый растворитель. Например, если растворитель является водой, образуются гидраты, и если растворитель является спиртом, образуются алкоголяты.

В некоторых вариантах осуществления, соединения и все их различные формы (например, свободные формы, соли, сольваты, изомерные формы), которые описаны в настоящей заявке, могут включать кристаллические и/или аморфные формы, например, полиморфы, псевдополиморфы, конформационные полиморфы, аморфные формы или их комбинации. Полиморфы включают различные структуры кристаллической упаковки вещества с одним и тем же элементным составом. Полиморфы обычно имеют отличающиеся картины дифракции рентгеновских лучей, инфракрасные спектры, температуры плавления, плотности, твердости, формы кристаллов, оптические и электрические свойства, стабильности и/или растворимости. Специалист в данной области техники поймет, что различные факторы, в т.ч. растворитель, применяемый для перекристаллизации, скорость кристаллизации и температура хранения могут привести к преобладанию одной из кристаллических форм.

В некоторых вариантах осуществления, соединения и все их различные формы (например, свободные формы, соли, сольваты, полиморфы), которые описаны в настоящей заявке, включают изомеры, например, геометрические изомеры, оптические изомеры на основе асимметрического атома углерода, стереоизомеры, таутомеры, индивидуальные энантиомеры, индивидуальные диастереомеры, рацематы, смеси диастереомеров и их комбинации, и они не ограничены описанием формулы, приведенной ради удобства.

В некоторых вариантах осуществления, фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут включать соль описанного соединения, предпочтительно фармацевтически или физиологически приемлемую соль. Фармацевтические препараты, как правило, будут включать один или несколько носителей, наполнителей или разбавителей, приемлемых для выбранного способа введения препарата, будь то введение с помощью инъекции, ингаляции, местное введение, промывание или другие пути, подходящие для выбранного способа лечения. Подходящие носители, наполнители или разбавители включают вещества, известные в технике для применения при выбранных способах введения.

Подходящие фармацевтические композиции можно получать с помощью известных в технике способов, причем путь их введения и дозировка определяются практикующим специалистом. При парентеральном введении, соединение можно растворить в стерильной воде или солевом растворе, или фармацевтически приемлемом носителе, применяемом для введения соединений, нерастворимых в воде, например, применяемом для витамина K. При энтеральном применении, соединения можно вводить в форме таблеток, капсул, или растворенными в виде жидкой лекарственной формы. Таблетка или капсула может иметь кишечное покрытие или содержать состав для продолжительного высвобождения. Известно большое число подходящих составов, включая полимерные или белковые микрочастицы, инкапсулирующие соединения, которые предполагается высвобождать, мази, пасты, гели, гидрогели или растворы, которые для введения соединения можно применять поверхностно или местно. С целью обеспечения выделения лекарственного соединения в течение длительного периода времени могут применяться пластыри или имплантаты с продолжительным высвобождением. Большое количество способов, известных специалисту в данной области, описано в Remington: the Science & Practice of Pharmacy by Alfonso Gennaro, 20^th ed., Lippencott Williams & Wilkins (2000). Составы для парентерального введения могут, например, содержать наполнители, полиалкиленгликоли, такие как полиэтиленгликоль, масла растительного происхождения или гидрированные нафталины. Для регулирования высвобождения соединений могут применяться биосовместимые, биоразрушаемые лактидные полимеры, сополимеры лактид/гликолид или сополимеры полиоксиэтилен-полиоксипропилен. Другие потенциально применимые парентеральные системы доставки модулирующих соединений, включают частицы сополимера этилен-винилацетат, осмотические насосы, имплантируемые системы инфузии и липосомы. Составы для ингаляции могут содержать наполнители, например, лактозу или могут являться водными растворами, содержащими, например, полиоксиэтилен-9-лауриловый эфир, гликохолат и деоксихолат, или могут представлять собой масляные растворы для введения в форме капель для носа или в виде геля.

Соединения или фармацевтические композиции по настоящему изобретению или для применения в настоящем изобретении можно вводить с помощью медицинского устройства или прибора, как, например, имплантата, трансплантата, протеза, стента и т.д. Кроме того, могут быть разработаны имплантаты, которые предназначены для помещения в них таких соединений или композиций с последующим высвобождением. Примером мог бы являться имплантат, изготовленный из полимерного материала, который приспособлен для высвобождения соединения в течение определенного периода времени.

«Эффективное количество» фармацевтической композиции по настоящему изобретению включает терапевтически эффективное количество или профилактически эффективное количество. «Терапевтически эффективное количество» относится к количеству, которое эффективно, при дозировках и в течение необходимого периода времени, для достижения желаемого терапевтического результата, например, уменьшения размера опухоли, увеличения продолжительности жизни или увеличения ожидаемой продолжительности жизни. Терапевтически эффективное количество соединения может меняться в соответствии с такими факторами, как заболевание, возраст, пол и масса субъекта, а также способность соединения вызывать желаемую реакцию у субъекта. Можно регулировать режимы дозировки для обеспечения оптимальной терапевтической реакции. Кроме того, терапевтически эффективное количество представляет собой такое количество, при котором любые токсические или вредоносные действия соединения перевешиваются терапевтически благоприятными результатами. Термин «профилактически эффективное количество» относится к количеству, которое эффективно, при дозировках и в течение необходимого периода времени, для достижения желаемого профилактического результата, как, например, уменьшения опухоли, увеличения ожидаемой продолжительности жизни или предупреждения прогрессирования рака простаты до андроген-независимой формы. Как правило, профилактические дозы применяются у субъектов до начала заболевания или на его ранних стадиях, поэтому профилактически эффективное количество может быть меньше, чем терапевтически эффективное количество.

Следует отметить, что дозировки могут меняться в зависимости от тяжести состояния, которое необходимо облегчить. Для каждого конкретного субъекта, конкретные режимы дозировки можно регулировать с течением времени, в соответствии с индивидуальными потребностями и профессиональным суждением специалиста, вводящего композиции или контролирующего их введение. Пределы дозировок, приведенные в настоящем описании, являются лишь иллюстративными, и они не ограничивают диапазона дозировок, который может быть выбран практикующими медиками. Количество действующего соединения (соединений) в композиции может меняться в соответствии с такими факторами, как заболевание, возраст, пол и масса субъекта. Режимы дозировки можно регулировать для обеспечения оптимальной терапевтической реакции. Например, можно вводить разовую ударную дозу, несколько отдельных доз в течение определенного периода времени, или же дозы можно пропорционально уменьшать или увеличивать в соответствии с необходимостью в существующей терапевтической ситуации. Для легкости введения и постоянства дозировок, может оказаться предпочтительным придавать парентеральным композициям вид дозированных лекарственных форм.

В некоторых вариантах осуществления, описанные в настоящей заявке соединения и их различные формы могут, например, применяться, не ограничиваясь этим, в комбинации с другими способами лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Например, соединения и все их различные формы, описанные в настоящей заявке, могут применяться в качестве неоадъювантной (до), дополнительной (во время) и/или вспомогательной (после) терапии в сочетании с хирургией, радиационной терапией (контактной лучевой терапией или дистанционной терапией), или другими видами терапии (например, HIFU).

Как правило, применение соединений по настоящему изобретению не должно вызывать значительного токсического действия. Токсичность соединений по настоящему изобретению можно определить с использованием стандартных методик, например, тестированием на клеточных культурах или экспериментальных животных, с определением терапевтического коэффициента, т.е. отношения между LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и LD100 (дозы, летальной для 100% популяции). Однако в некоторых обстоятельствах, например, при тяжелых заболеваниях, может быть необходимо введение значительного избытка композиций. Некоторые из соединений по настоящему изобретению при некоторых концентрациях могут оказаться токсичными. Для определения токсичных и нетоксичных концентраций могут применяться титриметрические исследования. Токсичность можно оценить путем исследования специфичности конкретного соединения или композиции в отношении клеточных линий, с использованием клеток PC3, не экспрессирующих AR, в качестве отрицательного контроля. Если соединение обладает каким-либо действием на другие ткани, можно проводить исследования на животных, у которых вызывают соответствующее заболевание. Системная терапия, которая нацелена на AR, вероятно не вызовет больших проблем с другими тканями, поскольку синдром нечувствительности к антиандрогенам и андрогенам не является смертельным.

Описанные в настоящей заявке соединения можно вводить субъекту. В настоящей заявке «субъект» может являться человеком, приматом, кроме человека, крысой, мышью, коровой, лошадью, свиньей, овцой, козой, собакой, кошкой и т.д. Субъект может быть субъектом, у которого предполагается наличие или опасность возникновения рака, например, рака простаты, рака груди, рака яичников или рака эндометрия, или предполагается наличие или опасность возникновения акне, гирсутизма, облысения, доброкачественной гиперплазии простаты, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Способы диагностики различных видов рака, например, рака простаты, рака груди, рака яичников или рака эндометрия, и способы диагностики акне, гирсутизма, облысения, доброкачественной гиперплазии простаты, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна, а также клиническая картина рака, например, рака простаты, рака груди, рака яичников или рака эндометрия, диагностика и клиническая картина акне, гирсутизма, облысения, доброкачественной гиперплазии простаты, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна известны рядовым специалистам в данной области техники.

Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться для лечения рака простаты. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться для лечения андроген-независимого рака простаты. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться для лечения андроген-зависимого рака простаты. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться с целью получения лекарственного средства, предназначенного для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться с целью получения лекарственного средства, предназначенного для лечения рака простаты. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться с целью получения лекарственного средства, предназначенного для лечения андроген-независимого рака простаты. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться с целью получения лекарственного средства, предназначенного для лечения андроген-зависимого рака простаты. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться в способе, предназначенном для лечения по меньшей мере одного заболевания, выбранного из группы, состоящей из: рака простаты, рака груди, рака яичников, рака эндометрия, потери волос, акне, гирсутизма, кист яичников, поликистозной болезни яичников, преждевременного полового созревания и возрастной дегенерации желтого пятна. Этот способ может включать введение субъекту, при наличии такой необходимости, эффективного количества соединения, описанного в настоящей заявке. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться в способе лечения рака простаты, где указанный способ включает введение субъекту, при наличии такой необходимости, эффективного количества соединения, описанного в настоящей заявке. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться в способе лечения андроген-независимого рака простаты, где указанный способ включает введение субъекту, при наличии такой необходимости, эффективного количества соединения, описанного в настоящей заявке. Описанные в настоящей заявке соединения могут применяться в способе лечения андроген-зависимого рака простаты, где указанный способ включает введение субъекту, при наличии такой необходимости, эффективного количества соединения, описанного в настоящей заявке.

Описанные в настоящей заявке соединения могут также найти применение в анализах и для исследовательских целей. Термин «лиганд-независимая активация AR» относится к трансактивции AR в отсутствии андрогена (лиганда), например, при стимулировании сигнального пути cAMP-зависимой протеин киназы (PKA) под действием форсколина (FSK). Некоторые соединения и композиции по настоящему изобретению могут ингибировать индукцию ARE-люциферазы (ARE-luc) под действием как FSK, так и андрогенов (например R1881). Эти соединения могут блокировать механизм, который является общим как для лиганд-зависимой, так и для лиганд-независимой активации AR. Этот механизм мог бы включать любую стадию активации AR, в т.ч. диссоциацию белков теплового шока, существенные посттрансляционные модификации (например, ацетилирование, фосфорилирование), ядерную транслокацию, взаимодействия белок-белок, образование транскрипционного комплекса, высвобождение ко-репрессоров и/или усиление деградации. Некоторые соединения или композиции по настоящему изобретению могут ингибировать только R1881 и могут препятствовать механизму, специфичному для лиганд-зависимой активации (например, доступности лиганд-связывающего домена (LBD) для андрогенов). Помимо рака простаты, механизмы, связанные с андрогенами, задействованы при многих расстройствах (например, акне, гирсутизме, облысении, доброкачественной гиперплазии простаты), и соединения, препятствующие реализации этих механизмов, могут применяться для лечения таких состояний. Некоторые соединения и композиции по настоящему изобретению могут ингибировать только индукцию FSK и могут являться специфическими ингибиторами лиганд-независимой активации AR. Эти соединения и композиции могут препятствовать осуществлению последовательности событий, которая обычно происходит при действии FSK и/или PKA, или любых следующих за ними эффектов, которые могут оказывать влияние на AR (например, FSK увеличивает активность MAPK, которая оказывает мощное воздействие на активность AR). Примеры могут включать ингибитор cAMP и/или PKA или других киназ. Некоторые соединения и композиции по настоящему изобретению могут индуцировать базальные уровни активности AR (т.е. уровни, характерные для отсутствия андрогенов или стимулирования сигнальным путем PKA). Некоторые соединения и композиции по настоящему изобретению могут увеличивать индукцию при действии R1881 или FSK. Эти соединения и композиции могут стимулировать транскрипцию или трансактивацию AR. Некоторые соединения и композиции по настоящему изобретению могут ингибировать активность N-концевого домена рецептора андрогенов (AR-NTD). Интерлейкин-6 (IL-6) также вызывает лиганд-независимую активацию AR в клетках LNCaP, и его можно применять в дополнение к FSK. Соединения и композиции по настоящему изобретению могут взаимодействовать с AR-NTD или с другим белком, необходимым для трансактивации AR-NTD.

Соединения, предназначенные для применения в настоящем изобретении, могут быть получены у поставщиков медицинских препаратов, или же их можно получить модификацией природных соединений с помощью известных методик. Кроме того, методики получения или синтеза соединений по настоящему изобретению будут понятны специалисту в данной области техники, знакомому с известными принципами химического синтеза. Например, Willard et al, J. Org. Chem., 1984, 49, 3489-3493, а также Brantley et al, Organic Letters, 1999, vol 1, No.13, 2165-2167 описывают подходящие методики синтеза, которые можно взять за основу и легко адаптировать для получения соединений формул A-E.

Общие методики химического синтеза соединений формул A-E описаны следующими не ограничивающими типовыми схемами.

Соединения формул A-E можно также получать способами, описанными следующими не ограничивающими типовыми схемами.

В приведенных выше схемах R²⁵ , R²⁶ и R²⁷ соответствуют определениям, данным в тексте настоящей заявки.

Общая методика получения соединений формул A-E приведена также на следующей иллюстративной не ограничивающей схеме, где в качестве примера используется не галогенированная боковая цепь лейцина.

Для получения галогензамещенных вариантов можно адаптировать способы, известные из литературы, в т.ч. методику получения трихлорметильного заместителя, описанную в Brantley, S et al., (1999) Organic Letters 1:2165-67.

Согласно другому варианту осуществления разработан способ получения соединения формулы (K):

где: R²⁵ может означать H или боковую цепь аминокислоты, за исключением пролина и фенилаланина, или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, COOH, COOR , CONH₂, CONHR , CONR ₂, R , OH, OR , F, Cl, Br, I, NH₂, NHR , NR ₂, CN, SH, SR , SO₃H, SO₃R , SO₂R , OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C₁₀ алкил; R²⁶ может означать H или боковую цепь аминокислоты, за исключением пролина и фенилаланина, или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, COOH, CONH₂, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃H и NO₂ ; и R²⁷ может представлять собой необязательно замещенный Bu, Pr, Et или Me, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃H и NO₂ .

В одном из вариантов осуществления, R²⁵ может означать H или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, COOH, R , OH, OR , F, Cl, Br, I, NH₂, NHR , NR ₂, CN, SH, SR , SO₃H, SO₃R , SO₂R , OSO₃R и NO₂, и где R может представлять собой линейный или разветвленный, насыщенный и незамещенный C₁-C₁₀ алкил. В другом варианте осуществления R²⁵ может представлять собой H или линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂ и NO₂. В качестве альтернативы, R²⁵ может представлять собой H или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, OH, F, Cl, Br, I и NH₂. Например, в одном из вариантов осуществления, и не ограничиваясь этим, R²⁵ может иметь то же значение, которое определено для R² в тексте настоящей заявки.

В одном из вариантов осуществления, R²⁶ может означать H или линейную, разветвленную, или неароматическую циклическую, насыщенную или ненасыщенную, необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до десяти атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, COOH, OH, F, Cl, Br, I, NH₂, SO₃H и NO₂. В качестве альтернативы R²⁶ может означать H или линейную или разветвленную, насыщенную необязательно замещенную алкильную группу, включающую от одного до четырех атомов углерода, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, OH, F, Cl, Br, I и NH₂. Например, в одном из вариантов осуществления, и не ограничиваясь этим, R²⁶ может иметь то же значение, которое определено для R⁵ в тексте настоящей заявки.

В одном из вариантов осуществления, R²⁷ может представлять собой необязательно замещенный Bu, Pr, Et или Me, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: оксо, OH, F, Cl, Br и I. В качестве альтернативы R²⁷ может представлять собой необязательно замещенный Bu, Pr, Et или Me, где необязательный заместитель может быть выбран из одной или нескольких из следующих групп: F, Cl, Br и I. Например, в одном из вариантов осуществления, и не ограничиваясь этим, R²⁷ может иметь то же значение, которое определено для Z в тексте настоящей заявки.

Согласно одному из вариантов осуществления этот способ может, например, включать, не ограничиваясь этим, смешивание соединения формулы (Q):

где R²⁵ соответствует определениям данным выше по тексту заявки, с н-BuLi с образованием смеси, и взаимодействие этой смеси с соединением формулы (S):

где R²⁶ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки, и Prot является защитной группой, с образованием соединения формулы (T):

где R²⁵ и R²⁶ соответствуют определениям, данным выше по тексту заявки и Prot является защитной группой; снятие защиты соединения формулы (T) с образованием соединения формулы (U):

где R²⁵ и R²⁶ соответствуют определениям, данным выше по тексту заявки; и

взаимодействие соединения формулы (U) с соединением формулы (V):

(R²⁷CO)₂O (V)

где R²⁷ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки, в пиридине с образованием соединения формулы (K).

Согласно одному из вариантов осуществления, соединение формулы (Q) можно, например, смешивать с н-BuLi, не ограничиваясь этим, в растворителе. На растворитель не накладывается конкретных ограничений, и рядовой специалист в данной области мог бы предложить и определить подходящие растворители. В одном из вариантов осуществления, этот растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь указанным, апротонный растворитель. В одном из вариантов осуществления, этот растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, диэтиловый эфир, диметилформамид (ДМФА) или тетрагидрофуран (ТГФ). В одном из вариантов осуществления, этот растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь указанным, ТГФ. Подходящие температуры для смешивания соединения формулы (Q) с н-BuLi могут быть установлены и определены рядовым специалистом в данной области. В одном из вариантов осуществления, соединение формулы (Q) можно, например, смешивать с н-BuLi, не ограничиваясь этим, при температуре примерно -50°C или ниже, включая все конкретные значения в указанном диапазоне, как, например, и не ограничиваясь этим, -50°C. В одном из вариантов осуществления, температура смешивания может составлять, например, -50°C.

Согласно другому варианту осуществления, полученная смесь может быть введена во взаимодействие с соединением формулы (S), например, и не ограничиваясь этим, в растворителе. На растворитель не накладывается конкретных ограничений, и рядовой специалист в данной области мог бы предложить и определить подходящие растворители. В одном из вариантов осуществления, этот растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь указанным, апротонный растворитель. В одном из вариантов осуществления, этот растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, диэтиловый эфир, диметилформамид (ДМФА) или тетрагидрофуран (ТГФ). В одном из вариантов осуществления, этот растворитель может, например, являться, не ограничиваясь указанным, ТГФ.

На защитную группу, а именно, Prot, соединения формулы (S) и соединения формулы (T) не накладывается конкретных ограничений, и подходящие аминозащитные группы могли бы быть предложены и определены рядовым специалистом в данной области техники. В одном из вариантов осуществления, эта защитная группа может быть, например, и не ограничиваясь этим, трет-бутоксикарбонильной группой (Boc) или карбобензилокси группой (Cbz). В одном из вариантов осуществления, защитная группа может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, Boc.

Подходящие методики снятия защиты или удаления защитной группы, т.е. Prot, из соединения формулы (T) могли бы быть предложены и определены рядовым специалистом в данной области. В одном из вариантов осуществления, защита соединения формулы (T) может, например, быть снята, не ограничиваясь указанным, сильной кислотой. В одном из вариантов осуществления, защита соединения формулы (T) может, например, быть снята, не ограничиваясь указанным, трифторуксусной кислотой (TFA). В одном из вариантов осуществления, снятие защиты соединения формулы (T) может осуществляться, например, и не ограничиваясь этим, в растворителе. В одном из вариантов осуществления, этот растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, дихлорметан (DCM), ДМФА, хлороформ или ТГФ. В одном из вариантов осуществления, этот растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, DCM.

Подходящие температуры проведения взаимодействия соединения формулы (U) с соединением формулы (V) мог бы предложить и определить рядовой специалист в данной области техники. В одном из вариантов осуществления соединение формулы (U) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), например, и не ограничиваясь этим, при температуре от примерно -20°C или выше до примерно 100°C включительно, включая любые конкретные значения в указанном диапазоне. В одном из вариантов осуществления соединение формулы (U) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), например, и не ограничиваясь этим, при комнатной температуре.

Согласно другому варианту осуществления, способ получения соединения формулы (K) может, например, дополнительно включать, не ограничиваясь этим, смешивание в любом порядке соединения формулы (R):

где группы R²⁶ и Prot соответствуют определениям, данным выше по тексту заявки, с нитрофенолом и карбодиимид-содержащим соединением, с образованием соединения формулы (S):

где группы R²⁶ и Prot соответствуют определениям, данным выше по тексту заявки. Соединение формулы (R), п-нитрофенол и карбодиимид-содержащее соединение можно, например, и не ограничиваясь этим, смешивать в любом порядке. Например, в одном из вариантов осуществления, не ограничиваясь этим, соединение формулы (R) можно смешать с п-нитрофенолом перед смешиванием с карбодиимид-содержащим соединением. В другом варианте осуществления, соединение формулы (R) можно, например, и не ограничиваясь этим, смешать с карбодиимид-содержащим соединением до смешивания с п-нитрофенолом. В еще одном варианте осуществления, соединение формулы (R), п-нитрофенол и карбодиимид-содержащее соединение можно, например, и не ограничиваясь этим, смешать одновременно. В одном из вариантов осуществления, соединение формулы (S) можно, например, получать, не ограничиваясь этим, в растворителе. Рядовой специалист в данной области техники мог бы предложить и определить подходящие растворители. В одном из вариантов осуществления, соединение формулы (S) можно, например, получать, не ограничиваясь этим, в ДМФА, ТГФ, диалкиловом эфире или галогенированном растворителе. Например, в одном из вариантов осуществления этот растворитель может представлять собой, не ограничиваясь этим, ДМФА, DCM или ТГФ. В одном из вариантов осуществления, этот растворитель, например, может представлять собой, не ограничиваясь указанным, ТГФ. Подходящие температуры проведения реакции для получения соединения формулы (S) мог бы предложить и определить рядовой специалист в данной области техники. В одном из вариантов осуществления температура проведения реакции получения соединения формулы (S) может составлять, например, и не ограничиваясь этим, от примерно -20°C или выше до примерно 50°C включительно, включая все конкретные значения в указанном диапазоне. В одном из вариантов осуществления, температура проведения реакции получения соединения формулы (S) может быть, например, равна, не ограничиваясь этим, 5°C. В одном из вариантов осуществления карбодиимид-содержащее соединение может, например, представлять собой, не ограничиваясь указанным, дициклогексилкарбодиимид (DCC) или диизопропилкарбодиимид (DIPC). В одном из вариантов осуществления, карбодиимид-содержащее соединение может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, DCC.

Согласно другому варианту осуществления, способ получения соединения формулы (K) может, например, дополнительно включать, не ограничиваясь этим, взаимодействие соединения формулы (P):

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки, с моногидратом гидразина в MeOH с получением соединения формулы (Q):

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки.

Согласно другому варианту осуществления, способ получения соединения формулы (K) может, например, дополнительно включать, не ограничиваясь этим, взаимодействие соединения формулы (O):

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки, с триметилортоформиатом в присутствии концентрированной H₂SO₄ в качестве катализатора в MeOH, с получением соединения формулы (P):

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки. В одном из вариантов осуществления, MeOH может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, безводный MeOH.

Согласно другому варианту осуществления, способ получения соединения формулы (K) может дополнительно включать, например, и не ограничиваясь этим, взаимодействие соединения формулы (M):

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки, с хлорирующим агентом с образованием соединения формулы (N):

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки; и

взаимодействие соединения формулы (N) с суспензией, где суспензия получена смешиванием моноэтилмалоната с алкиллитиевым соединением с образованием соединения формулы (O):

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки. В одном из вариантов осуществления упомянутый хлорирующий агент может, например, представлять собой, не ограничиваясь указанным, SOCl₂, оксалилхлорид или треххлористый фосфор (PCl₃). В одном из вариантов осуществления, хлорирующим агентом может, например, являться, не ограничиваясь указанным, SOCl₂. В одном из вариантов осуществления, соединение формулы (M), может быть, например, и не ограничиваясь этим, введено в реакцию с хлорирующим агентом в растворителе. Подходящие растворители могли бы быть предложены и определены рядовым специалистом в данной области. В одном из вариантов осуществления, растворитель может, например, представлять собой, не ограничиваясь этим, DCM, ТГФ, ДМФА, хлороформ или диэтиловый эфир. В одном из вариантов осуществления, растворитель может являться, например, и не ограничиваясь этим, DCM. В одном из вариантов осуществления, суспензию можно, например, получать, не ограничиваясь этим, смешивая моноэтилмалонат с алкиллитием в растворителе. В одном из вариантов осуществления, алкиллитиевое соединение может являться, например, и не ограничиваясь перечисленным, этиллитием, пропиллитием, пентиллитием, фениллитием или бутиллитием (н-BuLi). В одном из вариантов осуществления, алкиллитий может, например, являться, не ограничиваясь этим, н-BuLi. Температуры, подходящие для осуществления реакции соединения формулы (N) с упомянутой суспензией, мог бы предложить и определить рядовой специалист в данной области. В одном из вариантов осуществления, соединение формулы (N) можно, например, и не ограничиваясь этим, вводить во взаимодействие с суспензией при температуре примерно -50°C или ниже, включая все конкретные значения температур в этом диапазоне. В одном из вариантов осуществления, соединение формулы (N) можно, например, и не ограничиваясь этим, вводить во взаимодействие с суспензией при температуре примерно -78°C.

Согласно другому варианту осуществления, способ получения соединения формулы (K) может, например, дополнительно включать, не ограничиваясь этим, взаимодействие соединения формулы (L)

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки, c N-карбэтоксифталимидом в присутствии Na₂CO₃ и H₂O примерно при комнатной температуре с образованием соединения формулы (M):

где R²⁵ соответствует определениям, данным выше по тексту заявки.

В некоторых вариантах осуществления, дополнительно разработаны соединения формул (L), (M), (N), (O), (P), (Q), (R), (S), (T) или (U), где группы R ²⁵, R²⁶ и R²⁷ соответствуют определениям, данным выше по тексту заявки. В некоторых вариантах осуществления, R²⁵ и R²⁶ могут, например, независимо представлять собой, не ограничиваясь перечисленным, боковые цепи лейцина с моно-, ди- или три-замещенной метильной группой.

В данной заявке описаны различные альтернативные варианты осуществления и примеры по настоящему изобретению. Эти варианты осуществления и примеры являются иллюстративными, и их не следует истолковывать как ограничение объема настоящего изобретения.

ОБЩИЕ МЕТОДИКИ

Клеточные линии, андрогены и репортеры

На первом этапе для всех экспериментов применяли клетки LNCaP, поскольку они являются хорошо дифференцированными клетками рака простаты человека, для которых была описана лиганд-независимая активация AR под действием FSK (Nazareth et al, 1996 J. Biol. Chem. 271, 19900-19907; и Sadar 1999 J. Biol. Chem. 274, 7777-7783). Клетки LNCaP экспрессируют эндогенный AR и секретируют специфический антиген простаты (PSA) (Horoszewicz et al 1983 Cancer Res. 43, 1809-1818). Клетки LNCaP можно выращивать либо в виде монослоев в клеточной культуре, либо в виде опухолей в хорошо охарактеризованных моделях ксенотрансплантатов, которые развиваются до состояния независимости от андрогенов у кастрированных животных-хозяев (Sato et al 1996 J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 58, 139-146; Gleave et al 1991 Cancer Res. 51, 3753-3761; Sato et al 1997 Cancer Res. 57, 1584-1589; и Sadar et al 2002 Mol. Cancer Ther. 1(8), 629-637). Клетки рака простаты человека PC3 не экспрессируют функциональный AR (Kaighn et al 1978 Natl. Cancer Inst. Monogr. 49, 17-21) и их использовали для исследования специфичности соединений к AR. Малые молекулы, которые специфично нацелены на AR-NTD, не должны оказывать влияния на клетки PC3. Это значит, что они не должны менять пролиферацию клеток PC3, если они специфично блокируют AR, чтобы опосредовать свое ингибирующее действие. Андроген R1881 применяли по причине его стабильности и потому, что он позволяет избежать проблем, связанных с лабильным физиологическим лигандом дигидротестостероном (DHT). Специфичность репортера можно определить используя несколько альтернативных репортерных генных конструкций. Некоторыми из хорошо охарактеризованных и находивших широкое применение ARE-регулируемых репортерных генных конструкций являются энхансер/промотор PSA (6,1 т.п.н.), который содержит несколько AREs и подвергается сильной индукции со стороны андрогенов и FSK (Ueda et al 2002 A J. Biol. Chem.277, 7076-7085), а также ARR3-тимидин киназа (tk)-люцифераза, которая представляет собой искусственную репортерную конструкцию, содержащую три тандемных повторения областей пробазина крыс ARE1 и ARE2, за которой следует репортер люцифераза (Snoek et al 1996 J. Steroid Biochem. Mol. Biol.59, 243-250). CMV-luc (отсутствуют ARE и является конститутивно активным) применяли для определения того, что соединение не оказывает общего ингибирующего действия на транскрипцию.

Животные модели

В некоторых экспериментах использовали мышей SCID. Мыши SCID были выбраны потому, что клеточные линии и трансплантабельные опухоли человека выживают в организмах животных с иммунной недостаточностью, и мыши SCID продемонстрировали наилучшую частоту приживаемости. Все методики были одобрены комитетом по этике обращения с животными University of British Columbia и проходят ежегодную проверку. В случае опасности, что нельзя будет обеспечить надлежащее обращение с животным, его подвергали эвтаназии по усмотрению ветеринарных врачей Animal Care Team (группы ухода за животными). Ветеринары несли ответственность за осмотр и консультации. В подписанном сертификате по обращению с животными, было конкретно заявлено: «Комитет по обращению с животными проверил и утвердил использование животных для описанного выше экспериментального проекта или учебного курса и дал гарантию того, что обращение с данными животными будет соответствовать принципам, содержащимся в Care of Experimental Animals - A Guide for Canada (Обращение с экспериментальными животными - руководство для Канады), опубликованном Canadian Council on Animal Care (Канадским советом по обращению с животными)».

Подкожные ксенотрансплантаты

Самцам бестимусных мышей SCID в возрасте шести-восьми недель с помощью иглы 27 калибра осуществляли подкожную прививку в подвздошную область 150 мкл суспензии клеток рака простаты человека LNCaP или PC3 (1×10⁶ клеток). Прививки проводились животным, находившимся под изофлурановой анестезией. Частота приживаемости составляла примерно 75%. Мышей с опухолями объемом 100 мм³ случайным образом распределяли по группам. Кастрацию осуществляли, как описано ниже. Объем опухоли (формула L×W×H×0,5236) измеряли у мышей с подкожными опухолями LNCaP, которые обнаруживались пальпацией или визуально, и имели объем, по меньшей мере, 40 мм³. Осуществляли ежедневное наблюдение за животными и измеряли объем опухолей каждые 5 дней.

Продолжительность экспериментов

Критерием определения момента прекращения эксперимента с подкожным ксенотрансплантатом являлась оценка объема опухоли (не более 1000 мм³).

Гистология и иммуногистохимия

Для проведения стандартных гистологических исследований по завершении эксперимента извлекали основные органы и ксенотрансплантаты, фиксировали их в 10% нейтральном буферированном формалине и затем заливали в парафин. Делали срезы фиксированных тканей и окрашивали их H&E. Для определения возможного влияния соединений на скорости пролиферации и апоптоз в ксенотрансплантатах, выполняли иммунное окрашивание Ki-67 и анализ TUNEL. При иммуноокрашивании Ki-67 на обрабатываемых срезах тканей использовали моноклональные антитела MIB-1 при концентрации IgG 0,5 мкг/мл (1:50). Уровни AR определяли с помощью иммуногистохимических исследований или Вестерн-блоттинга.

Устранение андрогенов для стимулирования прогрессирования опухоли

Устранение андрогенов проводили путем кастрации. Под изофлурановой анестезией осуществляли 5 мм вертикальный разрез, через который осторожно оттягивали эпидидемальную прослойку жира, к которой крепились семенники, и удаляли семенники из организма. Канатики, соединяющие семенники с кровотоком, перевязывали нитью и затем отрезали. После этого канатики возвращали в брюшную полость. Для зашивания разреза применяли хирургическую нить. Для облегчения боли перед хирургическим вмешательством осуществляли инъекцию бупренорфина (0,05 мг/кг).

Извлечение ксенотрансплантата и органов

Все ксенотрансплантаты и основные органы извлекали для исследования. Извлечение производили после умерщвления животного в результате остановки сердечной деятельности под действием газообразного CO₂, и удаляли ксенотрансплантаты или органы для иммуногистохимического анализа.

Эвтаназия

Животных умерщвляли путем остановки деятельности сердца при действии газообразного CO₂. Применение этой методики является принципиальной установкой Комитета по обращению с животными, и она не наносит ущерба окружающей среде, является эффективной, экономичной и одобрена с этической точки зрения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1: Выделение и фракционирование соединений, сопровождаемое аналитическими исследованиями.

Образцы Dysidea sp. собирали вручную, используя маску для подводного плавания SCUBA, на глубине примерно 15 м вблизи Palau Sintok, архипелаг Karimunjawa, Indonesia в июне 2006 г (N 55° 02,52, E 119° 19,48). Губка была идентифицирована профессором Rob van Soest из университета Амстердама, и контрольный образец был депонирован в Зоологическом музее Амстердама (ZMA POR. 20602).

Свежесобранную серую губку (140 г) вначале консервировали в MeOH и перевозили в Ванкувер, Британская Колумбия, Канада, при комнатной температуре в течение 5 дней, после чего образцы замораживали. Губку разрезали на мелкие кусочки, погружали в метанол и затем несколько раз экстрагировали MeOH (3×200 мл). Объединенные метанольные экстракты концентрировали в вакууме и затем распределяли полученное масло между EtOAc (4×5 мл) и H₂O (20 мл). Объединенные EtOAc экстракты упаривали досуха и полученное пурпурное масло хроматографировали на Sephadex LH-20, используя в качестве элюента смесь 4:1 MeOH/CH₂ Cl₂, с целью получения фракции, проявляющей активность в анализе с ARR3-люциферазой. Это вещество фракционировали далее, используя флэш-хроматографию на силикагеле и применяя ступенчатый градиент от 19:1 гексан/EtOAc до EtOAc. Фракцию, элюированную смесью 1:1 гексан/EtOAc, подвергали ВЭЖХ на обращенной фазе C ₁₈, используя колонку CSC-Intersil 150A/ODS2, 5 мкм 25×0,94 см и смесь 13:7 MeCN/H₂O в качестве элюента, и получали 5 фракций. Наименее полярная фракция содержала чистый синтокамид B (2) (4,4 мг), и вторая наиболее полярная фракция содержала чистый дизамид D (7) (0,2 мг). Первая элюированная наиболее полярная фракция состояла из смеси синтокамида C (3) и синтокамида D (4). На дополнительной стадии ВЭЖХ, где использовали ту же самую колонку, но смесь MeOH/H₂O 67:33 в качестве элюента, получали чистый синтокамид C (3) (0,4 мг) и синтокамид D (4) (0,3 мг). Из третьей полученной фракции после дополнительного ВЭЖХ фракционирования с применением смеси MeOH/H₂O 70:30 в качестве элюента, получали чистый образец синтокамида E (5) (0,5 мг), наряду с очень незначительным количеством синтокамида A (1). Из последней фракции используя смесь MeOH/H₂O 3:1 выделяли синтокамид A (1) (29,6 мг). Кроме того, выделяли известные дикетопиперазины, а именно дизамид A (6) и B (7).

Оптическое вращение измеряли с использованием поляриметра Jasco P-1010 в линии натрия (589 нм). УФ-спектры фиксировали с помощью прибора Waters 2487 с детектором поглощения для двух длин волн. Спектры ¹ H и ¹³C ЯМР регистрировали на спектрометре Bruker AV-600 с 5-мм криозондом CPTCI. Химические сдвиги в спектрах ¹H относили по остаточному сигналу C₆D ₆ ( 7,15 мд), и химические сдвиги в спектрах ¹³ C определяли по сигналу растворителя ( 128,0 мд). Спектры низкого разрешения ESI-QIT-MS регистрировали на системе ЖХ-масс спектрометр Bruker-Hewlett Packerd 1100 Esquire. Пластины с силикагелем Merck Type 5554 и пластины Whatman MKC18F использовали для аналитической тонкослойной хроматографии. Очистку ВЭЖХ на обращенной фазе проводили на устройстве для жидкостной хроматографии Waters 600E System Controller, присоединенном к детектору на фотодиодной матрице Waters 996 Photodiode Array Detector. Все растворители, использованные для ВЭЖХ, были произведены фирмой Fisher и относились к категории для ВЭЖХ. Структуры соединений (6) и (7) подтверждали сравнением их спектроскопических данных с литературными значениями (Su,J.-Y et. al. (1993) J. Nat. Prod. 56:637-642). Кристаллы синтокамида A (1), которые подходили для рентгеноструктурного дифракционного анализа, получали при кристаллизации из метанола. Диаграмма ORTEP подтвердила строение, определенное на основе данных ЯМР, и позволила установить абсолютную конфигурацию 2S,4S,10R,16S. Структуры синтокамидов B(2)-E(5) отличались от структуры синтокамида A (1) степенью замещения Me-18 или Me-19 атомами хлора.

1 R30=CCl3, R 31=CHCl2	6 R32 =CCl3
2 R30 =CCl3, R31=CCl3	7 R32=CHCl2
3 R30=CHCl2, R31=CHCl2
4 R30=CCl 3, R31=CH2Cl
5 R30=CCl 3, R31=CH3

Синтокамид A (1): Выделен в виде прозрачного масла; [ ]²⁵ _D +35,9° (c 19,73, CH₂Cl ₂); УФ (CH₂Cl₂) _max 224, 242 нм; ¹H, смотрите таблицу 1; ¹³C и ¹⁵N ЯМР, смотрите таблицу 2; HRESIMS (МС высокого разрешения с ионизацией электронным ударом) для положительных ионов [M+Na]⁺ m/z 531,0145 (вычислено для C₁₈H₂₅N₂O₄Cl ₅Na, 531,0154).

Синтокамид B (2): Выделен в виде прозрачного масла; [ ]²⁵ _D +35,0° (c 2,93, CH₂Cl ₂); УФ (CH₂Cl₂) _max 224, 242 нм; ¹H, смотрите таблицу 1; ¹³C и ¹⁵N ЯМР, смотрите таблицу 2; HRESIMS для положительных ионов [M+Na]⁺ m/z 564,9738 (вычислено для C₁₈H₂₄N₂O₄Cl ₅Na, 564,9765).

Синтокамид C (3): Выделен в виде прозрачного масла; [ ]²⁵ _D +58,7° (c 0,26, CH₂Cl ₂); УФ (CH₂Cl₂) _max 224, 242 нм; ¹H, смотрите таблицу 1; ¹³C и ¹⁵N ЯМР, смотрите таблицу 2; HRESIMS для положительных ионов [M+Na]⁺ m/z 497,0532 (вычислено для C₁₈H₂₆N₂O₄Cl ₄Na, 497,0544).

Синтокамид D (4): Выделен в виде прозрачного масла; [ ]²⁵ _D +42,0° (c 0,20, CH₂Cl ₂); УФ (CH₂Cl₂) _max 224, 242 нм; ¹H, смотрите таблицу 1; ¹³C и ¹⁵N ЯМР, смотрите таблицу 2; HRESIMS для положительных ионов [M+Na]⁺ m/z 497,0532 (вычислено для C₁₈H₂₆N₂O₄Cl ₄Na, 497,0544).

Синтокамид E (5): Выделен в виде прозрачного масла; [ ]²⁵ _D +42,6° (c 0,33, CH₂Cl ₂); УФ (CH₂Cl₂) _max 224, 242 нм; ¹H, смотрите таблицу 1; ¹³C и ¹⁵N ЯМР, смотрите таблицу 2; HRESIMS для положительных ионов [M+Na]⁺ m/z 463,0931 (вычислено для C₁₈H₂₇N₂O₄Cl ₃Na, 463,0934).

Таблица 1
Данные 1H ЯМР для синтокамида A (1), синтокамида B (2), синтокамида C (3), синтокамида D (4) и синтокамида E (5), зарегистрированные на 600 МГц спектрометре с 5 мм CPTCI криозондом в C6D6
Атом №	1	2	3	4	5
	1,02 д J=6,7 Гц	1,32 д J=6,4 Гц	0,98 д J=6,7 Гц	0,86 д J=6,5 Гц	0,84 д J=6,2 Гц
	2,20 м	2,86 м	2,11 м	1,82	1,71

	1,97 1,78 ддд J=13,9, 7,7, 5,3 Гц	2,31 дд J=14,0, 6,3 Гц 2,00 ддд J=14,0, 9,8, 3,7 Гц	1,93 дт J=14,0, 5,1 Гц 1,76 ддд J=14,0, 7,9, 5,1 Гц	1,83 1,65	1,71
	4,16 т J=5,3 Гц	4,25 дд J=6,3, 3,7 Гц	4,05 т J=5,1 Гц	4,18 т J=4,7 Гц	4,33 т J=4,9 Гц
	4,47 с	4,37 с	4,32 с	4,37 с	4,41 с
	6,13 м	6,14 ддд J=7,0, 7,0, 7,0 Гц	6,15 ддд J=10,1, 7,9, 3,5 Гц	6,17 м	6,27 м
	6,06 уш.	5,65 уш.с	5,73 уш.д J=7,9 Гц	5,78 уш.с	5,88 уш.с
	1,95 м	1,87 м	1,83 м	1,84 м	1,83 м
	1,08 т J=7,6 Гц	1,04 т J=7,5 Гц	1,02 т J=7,6 Гц	1,04 т J=7,6 Гц	1,04 т J=7,5 Гц
	2,84 дд, J=13,8, 5,3 Гц 1,65 ддд J=13,8, 9,6, 6,7 Гц	2,85 м 1,58 м	2,32 ддд, J=14,2, 7,6, 3,5 Гц 1,36 ддд J=14,2, 10,1, 5,3 Гц	2,86 дд, J=13,4, 5,5 Гц 1,64	2,90 уш.дд, J=14,2, 5,5 Гц 1,71
	3,09 м	3,11 м	2,49 м	3,10 м	3,13 м
	1,42 д J=6,7 Гц	1,39 д J=6,5 Гц	1,17 д J=6,7 Гц	1,42 д J=6,4 Гц	1,45 д J=6,4 Гц
	5,45 д J=2,8 Гц		5,37 д J=2,8 Гц	3,08 м 3,01 м	0,84 д J=6,2 Гц
			6,42 д J=2,2 Гц
	2,79 с	2,68 с	2,69 с	2,70 с	2,72 с

Таблица 2
Данные 13C и 15N ЯМР для синтокамида A (1), синтокамида B (2), синтокамида C (3), синтокамида D (4) и синтокамида E (5), зарегистрированные на 600 МГц спектрометре с 5 мм CPTCI криозондом в C6D6
13С						15Na
Атом №	1	2	3	4	5	1	2	3	4	5
1	16,0	17,5	16,2	18,8	23,8
2	40,8	52,0	40,7	32,2	24,61
3	34,0	35,9	33,6	34,8	39,61
4	57,5	57,7	57,3	57,9	58,3
5	179,0	178,3	178,6	179,3	180,2
6	93,7	93,8	93,7	93,5	93,4
7	169,1	169,1	168,6	169,1	169,3
8						-212,0	-211,5	-213,6	-211,1	-213,0
9	172,4	172,8	172,3	172,1	172,0
10	51,8	51,8	51,3	51,8	51,7

11						-262,6	-263,0	-265,6	-262,8	-264,0
12	173,0	172,9	173,1	172,7	172,6
13	29,4	29,4	29,4	29,4	29,5
14	9,9	9,8	9,9	9,8	9,8
15	37,0	37,0	37,3	37,2	37,4
16	53,3	53,4	41,8	53,3	53,3
17	17,1	17,0	15,3	17,1	17,1
18	78,7	106,1	78,7	50,5	22,6
19	106,5	106,5	78,5	106,6	106,6
20	58,0	57,6	57,8	57,7	57,6
a Значения химических сдвигов в спектрах 15N не были калиброваны с помощью внешнего стандарта. Значения имеют точность примерно 1 м.д. по отношению к CH3 NO2 (0 м.д.) и отнесены на основании корреляций 15NHSQC и 15NlrHMQC (гетероядерной одноквантовой корреляции и гетероядерной многоквантовой корреляции). 1 Отнесения в колонке являются взаимозаменяемыми.

Пример 2: Синтез N-((R)-1-((S)-2-изобутил-3-метокси-5-оксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)пропионамид N-фталимид-L-лейцина (1)

L-лейцин (5,12 г, 39,1 ммоль) и Na ₂CO₃ (4,14 г, 39,1 ммоль) растворяли в 40 мл дистиллированной H₂O. К раствору добавляли N-карбэтоксифталимид (8,55 г, 39,1 ммоль) и затем перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Полученный прозрачный раствор подкисляли 6н HCl до pH=0 и затем экстрагировали гексаном (3×100 мл). Объединенные органические слои высушивали в вакууме. В результате проведения колоночной хроматографии на силикагеле, при элюировании смесью гексан/ацетон (3:1), получали N-фталимид-L-лейцин (1) (10,2 г, 39,1 ммоль, количественный выход) в виде бесцветного масла.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 0,92 (д, 7=6,70 Гц, 3H), 0,94 (д, J=6,70 Гц, 3H), 1,37-1,60 (м, 1 H), 1,95 (ддд, J=14,31, 10,05, 4,26 Гц, 1H), 2,36 (ддд, J=14,31, 10,05, 4,26 Гц, 1H), 4,99 (дд, J=11,57, 4,26 Гц, 1H), 7,73 (дд, J=5,48, 3,05 Гц, 2H), 7,85 (дд, J=5,48, 3,05 Гц, 2H), 11,32 (уш.с, 1H); ¹³C ЯМР (75 МГц, CDCl₃ ) : 21,2, 23,3, 25,3, 37,2, 50,6, 123,8, 131,9, 134,4, 167,9, 176,0.

(S)-этил 6-метил-4-фталимидо-3-оксогептаноат (3)

N-фталимид-L-лейцин (1) (550 мг, 2,11 ммоль) кипятили с SOCl₂ (1,5 мл, 20,5 ммоль) в 4 мл сухого DCM в течение 5 ч. Избыток SOCl₂ и растворителя упаривали при пониженном давлении, получая N-фталимид-L-лейцинил хлорид (2) (535 мг, 1,91 ммоль, 90%) в виде желтого масла, и полученный продукт использовали без дополнительной очистки. Добавление н-BuLi (3,7 мл, 2,0М в гексане, 7,4 ммоль) по каплям к моноэтилмалонату (450 мг, 3,41 ммоль) в 5 мл сухого ТГФ при -70°C приводило к получению белой суспензии, которую осторожно нагревали до -5°C и затем вновь охлаждали до -78°C. Хлорангидрид (2) (535 мг, 1,91 ммоль), растворенный в 2 мл сухого ТГФ, добавляли к этой суспензии одной порцией, и полученный раствор перемешивали в течение еще 20 минут, после чего выливали в 7 мл 1н раствора HCl и 10 мл эфира, и перемешивали еще 5 мин. Смесь разделяли и экстрагировали водный слой эфиром (2×10 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (3×10 мл). После высушивания над безводным MgSO₄ , эфирную фазу упаривали в вакууме, получая красное масло. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле (гексан/ацетон=97:3) получая гомолог 1,3-дикетоэфира (3) (336 мг, 1,01 ммоль, 53%) в виде желтого масла.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) : 0,93 (д, J=7,08 Гц, 3H), 0,95 (д, J=7,08 Гц, 3H), 1,23 (т, J=7,08 Гц, 3H), 1,37-1,57 (м, 1H), 1,91 (ддд, J=14,16, 10,05, 4,11 Гц, 1H), 2,24 (ддд, J=14,16, 10,05, 4,11 Гц, 1H), 3,52 (с, 2H), 4,14 (кв, J=7,08 Гц, 2H), 5,00 (дд, J=11,31, 4,23 Гц, 1H), 7,76 (дд, J=5,60, 3,08 Гц, 2H), 7,88 (дд, J=5,60, 3,08 Гц, 2H); ¹³C ЯМР (75 МГц, CDCl₃) : 14,2, 21,3, 23,5, 25,3, 36,5, 46,5, 57,7, 61,9, 123,8, 131,9, 134,6, 166,6, 168,0, 198,3.

(S,E)-метил 3-метокси-6-метил-4-фталимидогепт-2-еноат (4)

1,3-дикетонэтиловый эфир (3) (186 мг, 0,56 ммоль) в 5 мл безводного MeOH кипятили с обратным холодильником с триметилортоформиатом (2,5 мл, 2,24 ммоль) в присутствии каталитического количества конц. H₂SO₄ в течение 12 ч. После добавления эфира (80 мл), органический слой промывали насыщенным раствором NaHCO₃ (3×10 мл), высушивали над безводным MgSO ₄, и затем концентрировали в вакууме. Флэш-хроматография неочищенного продукта на силикагеле, при элюировании смесью гексан/ацетон (9:1), позволяла получить переэтерифицированный енол-эфир (4) (130 мг, 0,39 ммоль) в виде желтого масла с выходом 70%.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) : 0,96 (д, J=6,40 Гц, 3H), 1,00 (д, J=6,62 Гц, 3H), 1,49-1,60 (м, 1H), 1,67 (ддд, J=13,19, 11,48, 3,88 Гц, 1H), 2,66 (ддд, J=13,19, 11,48, 3,88 Гц, 1H), 3,63 (с, 3H), 3,74 (с, 3H), 5,05 (с, 1H), 6,33 (дд, J=11,42, 4,80 Гц, 1H), 7,71 (дд, J=5,48, 2,97 Гц, 2H), 7,83 (дд, J=5,48, 2,97 Гц, 2H); ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) : 21,2, 23,4, 25,6, 38,3, 50,2, 51,4, 56,3, 91,2, 123,4, 132,2, 134,0, 167,0, 168,7, 172,3.

(S)-5-изобутил-4-метокси-1H-пиррол-2(5H)-он (5)

Енол эфир (4) (53 мг, 0,16 ммоль) в MeOH кипятили с обратным холодильником с избытком моногидрата гидразина (2 мл) в течение ночи. После удаления растворителя, остаток растворяли в 50 мл DCM и добавляли 40 мл дистиллированной воды. Отделяли органическую фазу и водный слой экстрагировали DCM (3×40 мл). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na₂SO₄ и затем концентрировали в вакууме. Проводили флэш-хроматографию на силикагеле, используя в качестве элюента смесь DCM/MeOH (200:1), и получали тетрамовую кислоту (5) (15 мг, 0,088 ммоль) в виде белого твердого вещества с выходом 55%.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl ₃) 0,95 (д, J=2,05 Гц, 3H), 0,97 (д, J=2,05 Гц, 3H), 1,38 (тд, J=9,22, 4,78 Гц, 1H), 1,64 (тд, J=9,22, 4,78 Гц, 1H), 1,70-1,83 (м, 1H), 3,79 (с, 3H), 4,06 (дд, J=9,56, 3,41 Гц, 1H), 5,00 (д, J=1,02 Гц, 1H), 6,24 (уш.с, 1H); ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) 22,0, 23,6, 25,6, 41,6, 56,2, 58,4, 93,3, 174,5, 179,2; ESI МС [M+H]⁺ 170,2.

(R)-4-нитрофенил 2-(трет-бутоксикарбониламино)-4-метилпентаноат (6)

Boc-D-лейцин (462 мг, 2,0 ммоль) в 5 мл сухого ТГФ добавляли к п-нитрофенолу (294 мг, 2,1 ммоль) и затем обрабатывали смесь DCC (413 мг, 2,0 ммоль) при 5°C после чего перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Полученный раствор фильтровали и затем высушивали в вакууме. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле (гексан/ацетон=3:2), получая Boc-D-Leu-ONP (6) (420 мг, 1,2 ммоль) в виде бесцветного масла с выходом 60%.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) : 1,02 (д, J=2,05 Гц, 3H), 1,04 (д, J=2,05 Гц, 3H), 1,47 (с, 9H), 1,61 -1,71 (м, 1H), 1,75-1,86 (м, 2H), 4,52 (уш.с, 1H), 4,94 (д, J=6,14 Гц, 1H), 7,31 (д, J=9,22 Гц, 2H), 8,28 (д, J=9,22 Гц, 2H); ¹³C ЯМР (100 МГц, CDCl₃) 21,9, 23,0, 25,1, 28,5, 41,3, 52,7, 80,6, 122,5, 125,4, 145,6, 155,5, 155,7, 171,6.

трет-бутил (R)-1-((S)-2-изобутил-3-метокси-5-оксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)-4-метил-1-оксопентан-2-илкарбамат (7)

Тетрамовую кислоту (5) (11,2 мг, 0,066 ммоль) в 2 мл сухого ТГФ обрабатывали н-BuLi (32 мкл, 1,60 М, 0,066 ммоль) при -50°C в течение 10 мин, после чего по каплям в течение 15 мин добавляли Boc-D-Leu-ONp (6) (25,6 мг, 0,073 ммоль) в 2 мл сухого ТГФ. Полученную смесь перемешивали в течение еще 10 мин, гасили 0,1 мл AcOH и упаривали в вакууме. Чистый продукт сочетания (7) (12,0 мг, 0,031 ммоль) получали в виде белого порошка с выходом 47% после флэш-хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат = 3:1).

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) 0,89 (д, J=5,87 Гц, 3H), 0,93 (д, J=6,60 Гц, 6H), 1,04 (д, J=6,36 Гц, 3H), 1,32-1,40 (м, 1H), 1,46 (с, 9H), 1,75-1,88 (м, 6H), 4,58 (т, J=5,12 Гц, 1H), 5,04 (с, 3H), 5,10 (уш.,д, J=8,07 Гц, 1H), 5,45 (тд, J=2,93, 1,96 Гц, 1H).

(S)-1-((R)-2-амино-4-метилпентаноил)-5-изобутил-4-метокси-1H-пиррол-2(5H)-он (8)

Защищенный группой Boc продукт сочетания (7) (5,0 мг, 0,013 ммоль) в 1 мл сухого DCM добавляли к 1 мл 33% раствора TFA в DCM и перемешивали в течение 10 мин. Раствор нейтрализовали 10 мл 25% раствора аммиака и экстрагировали DCM (3×10 мл). Органические фазы объединяли, высушивали над безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали флэш-хроматографией на силикагеле, элюируя DCM/MeOH (98:2), получая продукт со снятой защитной группой (8) (3,3 мг, 0,012 ммоль) в виде белого порошка с выходом 95%.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl ₃) 0,90 (д, J=6,43 Гц, 3H), 0,93 (д, J=2,92 Гц, 3H), 0,95 (д, J=2,63 Гц, 3H), 0,98 (д, J=6,72 Гц, 3H), 1,32 (тд, J=8,99, 4,82 Гц, 1H), 1,54 (ддд, J=13,45, 9,06, 4,38 Гц, 1H), 1,76 (тд, J=13,37, 6,58 Гц, 1H), 1,83-1,92 (м, 2H), 3,87 (с, 3H), 4,55 (дд, J=9,50, 4,24 Гц, 1H), 4,60 (т, J=5,12 Гц, 1H), 5,05 (с, 1H); ESI MS [M+H]⁺ 283,3.

N-((R)-1-((S)-2-изобутил-3-метокси-5-оксо-2,5-дигидро-1H-пиррол-1-ил)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)пропионамид (9)

Перемешивали соединение (8), включающее свободную аминогруппу (1,0 мг, 0,0035 ммоль), с ангидридом пропионовой кислоты (1,4 мкл, 0,011 ммоль) в 2 мл сухого пиридина при комнатной температуре в течение 12 ч. Раствор подкисляли 10 мл 1н HCl и экстрагировали этилацетатом (3×10 мл). Объединенные органические фазы высушивали над безводным MgSO₄ и упаривали в вакууме. N-пропионилзамещенный продукт (9) (1,0 мг, 0,0029 ммоль) получали после флэш-хроматографии на силикагеле (гексан/этилацетат=3:1) в виде бесцветного твердого вещества с выходом 80%.

¹H ЯМР (600 МГц, CDCl₃) 0,88 (д, J=6,24 Гц, 3H), 0,92 (д, J=6,60 Гц, 6H), 1,05 (д, J=6,60 Гц, 3H), 1,17 (т, J=7,52 Гц, 3H), 1,40 (дт, J=6,97, 3,67 Гц, 1H), 1,59 (дт, J=6,97, 3,67 Гц, 1H), 1,75-1,79 (м, 1Н), 1,80-1,83 (м, 3H), 2,25 (кв, J=7,70 Гц, 2H), 3,87 (с, 3H), 4,57 (дд, J=6,24, 4,03 Гц, 1H), 5,05 (с, 1H), 5,75 (ддд, J=10,73, 9,08, 2,93 Гц, 1H), 6,04 (д, J=8,80 Гц, 1H); ¹³C ЯМР (150 МГц, CDCl₃ ) 10,0, 21,4, 22,7, 23,8, 23,9, 24,3, 25,2, 29,9, 39,3, 41,7, 51,6, 58,9, 58,9, 93,6, 169,6, 173,1, 173,3, 181,0.

В общей сложности синтез включал 9 стадий, и их общий выход составил 3,9%.

Пример 3: Биологическая активность синтокамида A

Методика отбора для выявления CB3.1

Для выявления активных соединений, которые ингибируют рецептор андрогенов (AR), применяли методику отбора, которая обеспечивала высокую производительность. Методика первичного отбора представляла собой клеточный анализ, в котором использовались клетки LNCaP, устойчиво экспрессирующие репортер ARR3-люциферазы. Анализ заключался в активации эндогенного AR с использованием синтетического андрогена, а именно R1881, и измерении уровней активности люциферазы. Экстракты морских губок добавляли к клеткам за 1 ч до добавления R1881, и инкубировали в течение еще 48 часов, после чего собирали клетки и измеряли активность люцферазы в клеточных лизатах. Экстракт морской губки 06-80 сильно ингибировал активность люциферазы, индуцированную андрогеном (Фиг.1A).

Цитотоксичность

Из этого экстракта выделяли чистое действующее соединение, т.е. синтокамид A (CB3.1), и исследовали морфологию клеток LNCaP, чтобы убедиться в том, что ингибирующее действие CB3.1 не вызвано общей цитотоксичностью. На фиг.1B показано, что клетки LNCaP, обработанные CB3.1 (10 мкМ) в течение 48 часов, не имеют очевидных признаков цитотоксического воздействия, указывая на то, что ингибирующее действие CB3.1 на активацию AR не является просто результатом общей цитотоксичности. Кроме того на рисунке приведены клетки, обработанные R1881, в качестве показателя числа клеток и для сравнения. CB3.1 не понижает активность стимулированной андрогеном люциферазы, за счет действия механизма, включающего неспецифическую токсичность.

Трансактивация AR NTD

Для установления того, блокирует ли CB3.1 трансактивацию AR NTD, клетки LNCaP трансфицировали плазмидами химерного белка AR NTD-Gal4DBD, репортером Gal4-люцифераза, и предварительно обрабатывали в течение 1 ч CB3.1 (5 мкг/мл), после чего еще на 24 часа добавляли форсколин (FSK 50мкМ) (смотрите: Sadar et al.(1999) J. Biol. Chem. 274:7777-83). CB3.1 уменьшал вызванную FSK трансактивацию AR NTD до исходных уровней (смотрите Фиг.3A) и ингибировал трансактивацию AR NTD.

Специфичность к рецепторам стероидов

В AR и родственных рецепторах стероидов человека (рецепторе глюкокортикоидов (GR) и рецепторе прогестерона (PR)) имеется значительное подобие аминокислотных последовательностей некоторых доменов, например, ДНК-связывающего домена (DBD). Хотя гомология AR-NTD с PR и GR составляет менее 15%, эти рецепторы в некоторых случаях действительно взаимодействует с одними и теми же белками, например SRC-1 (коактиватором-1 рецептора стероидов). Поэтому использовали анализ с участием репортерных генов для определения того, оказывают ли исследуемые соединения, которые блокируют активность AR, какое либо влияние на транскрипционную активность GR и PR. Клетки ко-трансфицировали экспрессионными плазмидами полноразмерных hGR и PR и соответствующих репортеров (т.е. репортеров pGR-Luc или PRE-E1b-Luc). Затем клетки обрабатывали носителем (этанолом), дексаметазоном (GR), 4-прегнен-3,20 дионом (прогестероном) (PR), после чего измеряли активность люциферазы. CB3.1 (5 мкг/мл) сильно ингибировал активность AR по результатам измерений с использованием репортера PSA (6.1) люциферазы (смотрите Фиг.2A), но не ингибировал активность PRE-люциферазы или GRE-люциферазы под влиянием лиганда (смотрите фиг.2B-C). Эти данные показывают, что CB3.1 не меняет трансактивацию других рецепторов стероидов и не имеет неспецифического и общего действия на транскрипцию или трансляцию, поскольку он не ингибирует индукцию репортеров GR и PR люциферазы. По-видимому, CB3.1 специфичен для рецептора AR, и это дает основание предположить, что можно было бы ожидать незначительного количества побочных эффектов от его системного введения.

Исследование пролиферации

CB3.1 ослаблял пролиферацию клеток LNCaP, обработанных андрогеном (R1881). Клетки LNCaP предварительно обрабатывали в течение 1 ч бикалутамидом (cdx, 10мкМ, положительный контроль) или CB3.1 (5 мкг/мл) после чего добавляли 0,1 нМ R1881. Для выявления изменений в пролиферации под действием андрогена, через 3 дня измеряли включение BrdU (5-бром-2-дезоксиуридина) (смотрите фиг.3B). R1881 в концентрации 0,1 нМ увеличивал пролиферацию по сравнению с контролем (носитель для R1881 и малые молекулы). CB3.1 эффективно блокировал индуцированную андрогеном пролиферацию. CB3.1 не блокировал пролиферацию клеток рака простаты человека PC3 (смотрите фиг. 3C), которые не экспрессируют AR (Kaighn et al 1978 Natl. Cancer Inst. Monogr. 49, 17-21) и, следовательно, их рост и выживание не зависят от AR.

Пример 4: Синтокамиды ингибируют индуцированные андрогенами уровни мРНК PSA в клетках LNCaP

PSA является андроген-регулируемым геном, содержащим в энхансерных и промоторных областях несколько хорошо описанных андроген-респонсивных элементов (AREs). Андрогены стимулируют повышение уровней мРНК PSA с помощью механизма, зависимого от рецептора андрогенов. Для выявления того, блокируют ли синтокамиды также и эндогенную экспрессию генов, стимулируемую андрогенами, измеряли уровни мРНК PSA при действии синтетического андрогена R1881. R1881 вызывал, по меньшей мере, 3-кратное повышение уровней мРНК PSA (смотрите Фиг.4) и этот эффект можно было блокировать действием антиандрогенов, например, бикалутамида, а также любого из синтокамидов. Полученные результаты согласуются с блокированием транскрипционной активности рецептора андрогенов под действием синтокамидов.

Пример 5: Ингибирование синтокамидами стимулирующего действия R1881 на PSA(6.1)-люциферазу

Активацию эндогенного AR измеряли в клетках рака простаты человека LNCaP, путем измерения андроген-респонсивного репортера, содержащего андроген-респонсивные элементы (AREs). Репортерная генная конструкция PSA (6.1 т.п.н.)-люцифераза содержала несколько хорошо охарактеризованных AREs и подвергалась стимулирующему действию андрогена. Клетки LNCaP, которые содержали в виде монослоев, трансфицировали PSA-люциферазой и использовали для исследования неочищенного экстракта (CB-0), полученного из морских губок, а также очищенных синтокамидов и дизамидов (CB3.0 (Дизамид A), CB2.1 (Синтокамид E), CB1.1 (Синтокамид C), CB3.1 (Синтокамид A) и CB4.0 (Синтокамид B) и нехлорированного синтокамида. Синтетический андроген R1881 (1нМ) вызывал рост активности PSA-люциферазы приблизительно в 6 раз. Антиандроген бикалутамид (BIC) блокировал это действие на 100% (смотрите Фиг.5). Частично очищенный экстракт CB-0 сильно ингибировал индуцированную андрогеном активность. Нехлорированный синтокамид обладал определенной активностью, как и все очищенные синтокамиды и дизамид A. Эти данные подтверждают вывод о том, что синтокамиды и дизамиды обладают ингибирующим действием на экспрессию PSA на транскрипционном уровне.

Пример 6: Синтокамид A (CB3.1) ослабляет рост опухолевой массы ксенотрансплантатов LNCaP

Модель подкожного ксенотрансплантата использовали для получения ответа на вопрос окажут ли синтокамиды, которые ингибируют активацию рецептора андрогенов in vitro, какое-либо воздействие на эти опухоли. CB3.1 тестировали in vivo, используя модель подкожного ксенотрансплантата LNCaP. Проводили эксперименты in vivo для получения информации, относящейся к токсичности и к определению, того, оказывает ли CB3.1 какое-либо влияние на рост опухоли и развитие независимости от андрогенов. Клетки рака простаты человека LNCaP экспрессируют эндогенный рецептор андрогенов (AR) и специфический антиген простаты (PSA), и у кастрированных особей развивается до состояния независимости от андрогенов. Клетки LNCaP (10 ⁶/мл) имплантировали под кожу самцам мышей NOD-SCID в возрасте не менее 8 недель. Клетки суспендировали в 75 мкл среды RPMI 1640 (5% FBS) c 75 мкл Matrigel и инъецировали в подвздошную область животных под анестезией. Клетки LNCaP имплантировали под кожу самцов мышей NOD-SCID, кастрировали животных, когда опухоль достигала объема примерно 100 мм³ (среднее значение=123,3±27,4 мм³; n=18), и случайным образом делили мышей на две группы. Через неделю после кастрации животным каждые три дня интратуморально вводили дозу CB3.1 30 мг/кг массы тела или соответствующий объем носителя (контроль, ДМСО). CB3.1 продемонстрировал уменьшение объема опухоли (смотрите Фиг.6). Через пятнадцать дней после первой инъекции CB3.1 объемы опухолей составляли 111,81%±38,12 от объемов в день 1-й инъекции. В то же время после 15 дней введения ДМСО, объемы опухолей равнялись 180,27%±111,67 от объемов опухолей в день 1-й инъекции. Уровень PSA в сыворотке явился показателем прогноза роста. Для животных, получавших CB3.1, уровень PSA в сыворотке на 15-й день после 1-й инъекции составлял 98,47%±170,51. Животные, которым вводили ДМСО, на 15-й день после первой инъекции имели двойной уровень PSA (т.е. 203,73%±315,63). Объем опухоли и уровни PSA в сыворотке согласовывались с тем фактом, что CB3.1 уменьшает опухолевую массу и уровни PSA в сыворотке по сравнению с животными, получавшими носитель. На протяжении эксперимента не было обнаружено изменения массы тела животных (в начале 24,6±1,1 граммов, в конце 25,0±1,4 граммов), и это показывает, что CB3.1 не оказывает общего токсического действия на животных.

Хотя в настоящей заявке раскрыты различные варианты осуществления изобретения, в рамках изобретения могут быть произведены многочисленные адаптации и модификации, в соответствии с общими знаниями, имеющимися у специалистов в данной области техники. Эти модификации для любых аспектов настоящего изобретения включают замены на известные эквиваленты, для достижения тех же самых результатов в основном таким же путем. Диапазоны числовых значений включают граничные значения, определяющие эти диапазоны. Слово «включающий» использовано в настоящей заявке в качестве не ограничивающего термина, в основном эквивалентного фразе «включая, но не ограничиваясь этим», и слово «включает» имеет аналогичное значение. В настоящем описании формы единственного числа a , an и the включают соответствующие формы множественного числа, если контекст явно не указывает на иное. Так, например, упоминание какого-либо «предмета» включает упоминание более, чем одного такого «предмета». Цитирование в настоящей заявке литературных источников не является признанием факта, что эти литературные источники являются известным уровнем техники по отношению к настоящему изобретению.