производные n-деацетилтиоколхицина и содержащие их фармацевтические композиции

Формула изобретения

1. Соединения формулы (I)

где: n представляет целое число от 0 до 8;

Y представляет СН₂-группу или, если n равно 1, может также быть группой NH.

2. Соединения по п.1, где Y представляет СН₂ .

3. Соединения по п.1, где Y представляет NH.

4. Фармацевтическая композиция, обладающая антипролиферативной активностью, содержащая соединение по пп.1-3.

Описание изобретения к патенту

Данное изобретение относится к производным N-деацетилтиоколхицина или их изостерам формулы (I)

где:

n представляет целое число от 0 до 8;

Y представляет СH₂ группу или, если n равно 1, может также быть группой NH.

Колхицины и тиоколхицины являются известными препятствующими росту соединениями, способными дестабилизировать микроканалы благодаря взаимодействию с тубулином.

Колхицин в настоящее время применяют в терапии подагры и родственных воспалительных заболеваний, но его применение ограничено острыми фазами из-за его высокой желудочно-кишечной токсичности.

Изучено большое число производных колхицина и тиоколхицина с точки зрения их возможного использования в качестве противоопухолевых медикаментов, но попытки исследований до сих пор были безуспешными вследствие очень ограниченных терапевтических показателей таких соединений.

Только одно производное колхицина, демеколцин, применяли в прошлом в клинике для лечения лейкемии, но со слабым успехом.

Обнаружено, что соединения формулы (I) оказывают антипролиферативное действие, в частности, на клетки, экспрессирующие фенотип MRD (резистентность ко многим лекарствам), с приблизительным отношением активности чувствительных клеток к активности резистентных клеток равном 1:1.

Соединения изобретения фактически обладают сильной антимитотической активностью и характеризуются благоприятным терапевтическим показателем, что делает их подходящими для терапевтического лечения различных форм опухолей, также как и дегенеративного ревматоидного артрита, заболевания, характеризующегося избыточной пролиферацией и аномальной миграцией лейкоцитов.

Соединения (I) имеют цитотоксичность, сравнимую с таковой наиболее эффективных противоопухолевых лекарственных средств, в то же время имея заметно более широкий спектр действия, в частности, против клеток, резистентных к известным лекарствам.

Соединения (I), где Y представляет СН₂, получают реакцией N-деацетилтиоколхицина с реакционноспособными производными дикарбоновых кислот в сухих растворителях. Примерами подходящих реакционноспособных производных дикарбоновых кислот являются хлорангидриды, реакционноспособные ангидриды или сложные эфиры, в частности диэфиры N-гидроксиянтарной кислоты, получаемые реакцией указанной кислоты с N-гидроксисукцинимидом. Реакцию предпочтительно проводят в растворителях, таких как этиловый эфир, диоксан или тетрагидрофуран, в присутствии основания, например триэтиламина.

С другой стороны, соединения (I), где Y представляет NH и n равно 1, могут быть получены реакцией N-деацетилтиоколхицина с N-гидроксисукцинимидом в присутствии аминов и конденсирующих агентов, таких как дициклогексилкарбодиимид (ДЦГК), в подходящем апротонном растворителе, предпочтительно хлорированном углеводороде (метиленхлорид, хлороформ). Указанные соединения могут также быть получены в качестве побочных продуктов по реакции между N-гидроксисукциниловыми диэфирами дикарбоновых кислот и N-деацетилтиоколхицином.

Активность указанных соединений оценивали на широком спектре резистентных опухолевых клеток, экспрессирующих фенотип MRD; указанные соединения, в частности, показали активность на различных чувствительных (клеточных) линиях кишечника, экспрессирующих MRD.

Следующая таблица включает примеры активности этих двух соединений, по сравнению с биологической активностью тиоколхицина и таксола, взятых в качестве сравнительных соединений.

Соединения	IC50 нМ
	MCF7	MCF7-ADRr	MCF7-ADRr/MCF7
Тиокол 39 (пример 1)	12	43	3, 58
Тиокол 43 (пример 4)	21	36	1,71
Тиокол 54 (пример 2)	2,6	2,8	1,07
Тиоколхицин	0,02	400	20000

Цитотоксическую активность оценивали согласно М.С.Alley и др., Cfncer Research, 48, 589-601, 1998.

Вышеприведенные данные свидетельствуют о высокой цитотоксической активности соединений изобретения по отношению к обеим клеточным линиям и о различной резистентности клеточных линий к различным противоопухолевым лекарствам.

Таким образом, соединения изобретения применимы для лечения пролиферативных патологий и, в частности, опухолей различных органов, ревматоидного артрита или других дегенеративных патологий, где показаны антипролиферативное и противовоспалительное действия.

Для указанной цели соединения (I) вводят в форме фармацевтических композиций, пригодных для перорального, парентерального, подкожного или чрезкожного введения. Дозы соединений (I) находятся в интервале от 1 до 100 мг/м² площади тела, в зависимости от пути введения. Соединения предпочтительно вводят перорально.

Примерами композиций являются капсулы, таблетки, ампулы, кремы, растворы, грануляты.

Следующие примеры более детально иллюстрируют изобретение.

ПРИМЕР 1

Получение соединений (I), где Y представляет СН₂ и n равно 2 (тиокол 39)

100 мг N-деацетилтиоколхицина (мол.вес=373 г/моль, 0,27 ммоля) растворяют в 6 мл диоксана при комнатной температуре в атмосфере азота. Прибавляют 46 мг активированной адипиновой кислоты в виде N-гидроксисукцинилового диэфира (мол.вес=340 г/моль, 0,135 ммоля) и 40 мкл сухого триэтиламина (мол.вес=101 г/моль, d=0,726 г/мл, 0,27 ммоля). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота 48 часов (контроль ТСХ: СНСl₃:МеОН=95:5). Растворитель упаривают и продукт выделяют флэш-хроматографией на диоксиде кремния (элюент: СНСl₃:МеОН=75:1).

Выход: 85%

ПРИМЕР 2

Получение соединения (I), где Y представляет NH и n равен 1 (тиокол 54)

Раствор 1 г деацетилтиоколхицина в 40 мл сухого СН₂Сl₂ объединяют с 154 мг N-гидроксисукцинимида, 276 мг ДЦГК и 476 мкл диизопропилэтиламина. Смесь кипятят с обратным холодильником под азотом по меньшей мере 2 дня. Ход реакции контролируют ТСХ (CH₂Cl₂-EtOH=95/5). Смесь концентрируют до небольшого объема и остаток извлекают этилацетатом. Продукт оставляют кристаллизоваться, затем очищают флэш-хроматографией (элюент AcOEt-гексан 7/3 или CH₂Cl₂-EtOH=95/5). Получают 500 мг продукта.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d6-300 МГц): 8,80 д; 7,82 шир.с; 7,75-7,60 с; 7,37; 7,18; 6,59% 4,66 м; 4,52 дд; 3,96 с ч.н.м.

¹³С-ЯМР (CDCl ₃): 182,5; 181,9; 172,2; 158,0; 175,5; 157,1; 153,8; 153,7; 153; 152,3; 151,3; 151,2; 141,6; 141,5; 139,4; 139,3; 135,5; 135,5 д, 134,8; 134,7; 129,0; 128,4 (д).

Масс-спектр (m/z) 866,4 [(M+Na)+]

ПРИМЕР 3

Получение соединения (1), где Y означает СH₂ и n равно 6 (тиокол 33)

200 мг N-деацетилтиоколхицина (мол. вес 373 г/моль, 0,54 ммоля) растворяют в 12 мл сухого диоксана при комнатной температуре в атмосфере азота. Прибавляют 91,8 мг активированной себациновой кислоты в виде N-гидроксисукцинилового диэфира (мол.вес=396 г/моль, 0,27 ммоля) и 75 мкл сухого триэтиламина (мол.вес=101 г/моль, d=0,726 г/мл, 0,54 ммоля). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота 48 часов (контроль ТСХ: СНСl₃:МеОН=95:5), затем через 20 часов нагревают до 50°С и растворитель упаривают. Сырой продукт реакции очищают флэш-хроматографией на диоксиде кремния (элюент: СНСl₃:МеОН=40:1), получая 30 мг смеси целевого соединения (с Rf:=0,3) и соединения примера 2.

ПРИМЕР 4

Получение соединения (I), где Y представляет СН ₂ и n равно 0 (тиокол 43)

Способ А

190 мг N-деацетилтиоколхицина (мол.вес=373 г/моль, 0,512 ммоля) растворяют в 6 мл сухого диоксана при комнатной температуре в атмосфере азота. Прибавляют 80 мг активированной янтарной кислоты в виде N-гидроксисукцинилового диэфира (мол.вес=312 г/моль, 0,256 ммоля) и 70 мкл сухого триэтиламина (мол.вес=101 г/моль, d=0,726 г/мл, 0,512 ммоля). Смесь перемешивают при комнатной температуре в атмосфере азота 48 часов (контроль ТСХ: СНСl₃:МеОН=95:5). Растворитель упаривают, остаток извлекают AcOEt для удаления остатков N-деацетилтиоколхицина и триэтиламина (продукт нерастворим).

Выход 45%

Способ В

100 мг N-деацетил-N-сукцинил-тиоколхицина (мол.вес=473 г/моль, 0,21 ммоля) растворяют в 8 мл сухого СН ₂Сl₂ при комнатной температуре в атмосфере азота. Прибавляют 93 мг ВОР [гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис(диметиламино)-фосфония (мол.вес=442,3 г/моль, 0,21 ммоля) и 60 мкл сухого триэтиламина (мол.вес=101 г/моль, d=0,726 г/мл, 0,42 ммоля). Через 10 минут 80 мг N-деацетилтиоколхицина (мол.вес=101 г/моль, d=0,726 г/мл, 0,42 ммоля) прибавляют к смеси, которую перемешивают при комнатной температуре 48 часов (контроль ТСХ: CHCl₃:MeOH=95:5), растворитель упаривают и остаток извлекают AcOEt для удаления остатков N-деацетилтиоколхицина и триэтиламина (продукт нерастворим).

Выход: 45%