композиция пролонгированного действия и способ получения указанной композиции

Формула изобретения

1. Композиция замедленного высвобождения, содержащая полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее или его соль и пептид, выраженный формулой

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z,

где Y означает DLeu, DAla, DTrp, DSer (tBu), D2Nal или DHis (ImBzl) и Z означает HN-C₂H ₅ или Gly-NH₂ или его соль.

2. Композиция замедленного высвобождения по п.1, в которой полимер молочной и гликолевой кислот имеет среднюю молекулярную массу от около 3000 до около 100000.

3. Композиция замедленного высвобождения по п.2, в которой полимер молочной и гликолевой кислот имеет среднюю молекулярную массу от около 8000 до около 15000.

4. Композиция замедленного высвобождения по п.1, в которой низкомолекулярная фракция полимера молочной и гликолевой кислот с молекулярной массой около 3000 или менее составляет около 9% или менее.

5. Композиция замедленного высвобождения по п.4, в которой низкомолекулярная фракция полимера молочной и гликолевой кислот с молекулярной массой около 3000 или менее составляет от около 3% до около 9%.

6. Композиция замедленного высвобождения по п.1, в которой указанный полимер характеризуется молярным соотношением молочной кислоты и гликолевой кислоты от 100:0 до 40:60.

7. Композиция замедленного высвобождения по п.1, в которой указанный полимер характеризуется молярным соотношением молочной кислоты и гликолевой кислоты от 70:30 до 80:20.

8. Композиция замедленного высвобождения по п.1, в которой пептид выражен формулой

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C ₂H₅,

или его ацетат.

9. Композиция замедленного высвобождения по п.1, в которой пептид или его соль содержится в количестве от около 5% (мас./мас.) до около 24% (мас./мас.).

10. Композиция замедленного высвобождения по п.1, которая предназначена для инъекций.

11. Композиция замедленного высвобождения по п.1, которая высвобождает пептид или его соль по меньшей мере в течение двух недель.

12. Композиция замедленного высвобождения по п.1, которая не содержит вещество, удерживающее лекарственное средство.

13. Композиция замедленного высвобождения по п.1, которая не содержит желатин.

14. Способ получения композиции замедленного высвобождения по п.1, который включает удаление растворителя из раствора, содержащего пептид формулы

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z,

где Y означает DLeu, DAla, DTrp, DSer (tBu), D2Nal или DHis (ImBzl) и Z означает HN-C₂H ₅ или Gly-NH₂ или его соль и полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее, или его соль.

15. Способ по п.14, который включает смешивание и диспергирование пептида или его соли в смешанном растворе органического растворителя, содержащего полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее или его соли и последующее удаление органического растворителя.

16. Способ по п.15, в котором пептид или его соль используют в виде водного раствора, содержащего пептид или его соль.

17. Фармацевтический препарат, содержащий композицию замедленного высвобождения по п.1 с дозировкой 10 мг/кг веса тела.

18. Лекарственное средство для предотвращения или лечения рака предстательной железы, простатомегалии, эндометриоза, миомы матки, метрофибромы, преждевременного полового созревания и дисменореи или для контрацепции, которое содержит композицию замедленного высвобождения по п.1.

19. Лекарственное средство для предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, которое содержит композицию замедленного высвобождения по п.1.

20. Способ предотвращения или лечения рака предстательной железы, простатомегалии, эндометриоза, миомы матки, метрофибромы, преждевременного полового созревания и дисменореи или для контрацепции, который включает введение млекопитающему эффективной дозы композиции замедленного высвобождения по п.1.

21. Способ предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, который включает введение млекопитающему эффективной дозы композиции замедленного высвобождения по п.1.

22. Способ получения полимера молочной и гликолевой кислот, имеющего среднюю молекулярную массу от около 8000 до около 15000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее, или его соли, который включает добавление воды к органическому растворителю, содержащему полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 5000 до около 15000, при соотношении менее чем около 5-50 частей (в объемном отношении) на 100 частей органического растворителя.

23. Способ получения полимера по п.22, в котором органический растворитель является гидрофильным.

24. Способ получения полимера по п.23, в котором гидрофильный органический растворитель является ацетоном.

25. Способ получения полимера по п.22, в котором соотношение воды на 100 частей органического растворителя составляет от около 10 до около 45 частей (в объемном отношении).

26. Способ получения полимера по п.22, в котором соотношение воды на 100 частей органического растворителя составляет около 40 частей (в объемном отношении).

27. Полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 8000 до около 15000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее, или его соль и имеющий молекулярное соотношение молочной кислоты и гликолевой кислоты от 100:0 до 40:60, который получают добавлением воды к органическому растворителю, содержащему полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 5000 до около 15000, при соотношении менее чем около 5-50 частей (в объемном отношении) на 100 частей органического растворителя.

28. Применение полимера молочной и гликолевой кислот по п.27 или его соли для получения композиции замедленного высвобождения, не содержащей желатина.

29. Микросфера, содержащая полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 11600 до около 14000 или его соль и пептид формулы

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z,

где Y означает DLeu, DAla, DTrp, DSer(tBu), D2Nal или DHis (ImBzl) и Z означает HN-C₂Н₅ или Gly-NH ₂ или его соль, и не содержащая желатина.

30. Микросфера по п.29, в которой пептид или его соль представляет пептид формулы

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C ₂H₅,

или его ацетат.

31. Микросфера по п.29, которая содержит пептид или его соль в количестве от около 5% (мас./мас.) до около 24% (мас./мас.).

32. Микросфера по п.29, которая представляет микрокапсулу.

33. Микросфера по п.29, которая высвобождает пептид или его соль по крайней мере в течение более 2 недель.

34. Лекарственное средство для предотвращения или лечения рака предстательной железы, простатомегалии, эндометриоза, миомы матки, метрофибромы, преждевременного полового созревания и дисменореи или для контрацепции, которое содержит микросферу по п.29.

35. Лекарственное средство для предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, которое содержит микросферу по п.29.

36. Способ предотвращения или лечения рака предстательной железы, простатомегалии, эндометриоза, миомы матки, метрофибромы, преждевременного полового созревания и дисменореи или для контрацепции, который включает введение млекопитающему эффективной дозы микросферы по п.29.

37. Способ предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, который включает введение млекопитающему эффективной дозы микросферы по п.29.

Приоритет по пунктам:

29.06.2001 по пп.1-18, 22-27;

06.11.2001 по пп.19-21, 28-37.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Настоящее изобретение относится к препарату пролонгированного действия, содержащему физиологически активное вещество, и способу получения указанного препарата.

Предпосылки изобретения

В заявке на патент Японии №60-100516 описана микрокапсула пролонгированного действия с водорастворимым лекарственным средством, которая представляет частицу со средним диаметром от 2 до 200 мкм, содержащую водорастворимое лекарственное средство, диспергированное в матрице из полимера молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой около 5000-200000, включающей около 100-50 мас.% молочной кислоты и около 0-50 мас.% гликолевой кислоты, которую получают методом сушки в воде.

В заявке на патент Японии №62-201816 описана микрокапсула пролонгированного действия, отличающаяся тем, что вязкость эмульсии вода в масле при получении эмульсии вода в масле в воде доводят примерно до 150-10000 сантипуаз, и способ получения указанной микрокапсулы.

В заявке на патент Японии №62-54760 описан биологически разлагаемый эфир полиоксикарбоксилкарбоновой кислоты, представляющий сополимер или полимер со средней молекулярной массой около 2000-50000, содержащий водорастворимую оксикарбоновую кислоту в количестве менее 0,01 моль/100 г в пересчете на одноосновную кислоту, и предназначенная для инъекций микрокапсула пролонгированного действия, содержащая указанный полимер.

В заявке на патент Японии №61-28521 описан полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой около 5000-30000, не содержащий катализатора, который характеризуется диспергируемостью (по результатам гельпроникающей хроматографии) около 1,5-2 и содержит около 50-95 мас.% молочной кислоты и 50-5 мас.% гликолевой кислоты, и фармацевтический препарат, содержащий указанный полимер в качестве основы.

В заявке на патент Японии №6-192068 описан способ получения микрокапсулы пролонгированного действия, который заключается в том, что микрокапсулу нагревают при температуре выше температуры стеклования полимера, при которой соответствующие частицы микрокапсулы не прилипают друг к другу.

В заявке на патент Японии №4-218528 описан способ очистки биологически разлагаемого алифатического полиэфира, который заключается в том, что биологически разлагаемый алифатический полиэфир, содержащий низкомолекулярный полимер с молекулярной массой 1000 или менее, растворяют в органическом растворителе, добавляют воду для осаждения полимерной массы и удаляют низкомолекулярный полимер с молекулярной массой 1000, причем воду добавляют в количестве 50-150 частей (в объемном отношении) на 100 частей органического растворителя.

Цели изобретения

Настоящее изобретение относится к препарату пролонгированного действия, который не содержит желатина, содержащему физиологически активное вещество в большом количестве и обеспечивающему стабильную скорость высвобождения на протяжении примерно одного месяца при подавлении высокого начального высвобождения физиологически активного вещества.

Краткое изложение существа изобретения

Чтобы решить вышеуказанную проблему, авторы настоящего изобретения провели всестороннее исследование, в результате которого был создан препарат пролонгированного действия, содержащий большое количество физиологически активного вещества и не содержащий желатина, который подавляет высокое начальное высвобождение физиологически активного вещества и обеспечивает стабильную скорость высвобождения на протяжении примерно одного месяца, причем при создании указанного препарата в качестве основы использован сополимер PLGA с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее либо полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 11600 до около 140000 или его соль.

Таким образом, объектами настоящего изобретения являются:

(1) композиция пролонгированного действия, содержащая полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее или его соль и физиологически активное вещество;

(2) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), в которой физиологически активное вещество представляет физиологически активный пептид;

(3) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (2), в которой физиологически активное вещество представляет производное LH-RH;

(4) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), в которой полимер молочной и гликолевой кислот имеет среднюю молекулярную массу от около 3000 до около 100000;

(5) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (4), в которой полимер молочной и гликолевой кислот имеет среднюю молекулярную массу от около 8000 до около 15000;

(6) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), в которой низкомолекулярная фракция полимера молочной и гликолевой кислот с массой около 3000 или ниже составляет около 9% или менее;

(7) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (6), в которой низкомолекулярная фракция полимера молочной и гликолевой кислот с массой около 3000 или ниже составляет от около 3% до около 9%;

(8) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), в которой указанный полимер характеризуется молярным соотношением молочной кислоты и гликолевой кислоты от 100:0 до 40:60;

(9) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), в которой указанный полимер характеризуется молярным соотношением молочной кислоты и гликолевой кислоты от 70:30 до 80:20;

(10) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (3), в которой производное LH-RH представляет пептид, выраженный формулой

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

где Y означает DLeu, DAla, DTrp, DSer (tBu), D2Nal или DHis (ImBzl) и Z означает HN-С₂H ₅ или Gly-NH₂ или его соль;

(11) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (3), в которой производное LH-RH представляет пептид, выраженный формулой

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C ₂H₅,

или его ацетат;

(12) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (3), в которой производное LH-RH или его соль находится в количестве от около 5% (мас./мас.) до около 24% (мас./мас.);

(13) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), в которой физиологически активное вещество или его соль являются малорастворимыми в воде или водорастворимыми;

(14) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), которая предназначена для инъекций;

(15) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), которая высвобождает физиологически активное вещество или его соль по крайней мере в течение двух недель;

(16) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), которая не содержит вещество, удерживающее лекарственное средство;

(17) композиция пролонгированного действия, описанная в пункте (1), которая не содержит желатин;

(18) способ получения композиции пролонгированного действия, описанной в пункте (1), который включает удаление растворителя из смешанного раствора, содержащего физиологически активное вещество или его соль и полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее или его соль;

(19) способ, описанный в пункте (18), который включает смешивание и диспергирование физиологически активного вещества или его соли в растворе в органическом растворителе, содержащем полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее или его соли и последующее удаление органического растворителя;

(20) способ, описанный в пункте (19), в котором физиологически активное вещество или его соль используют в виде водного раствора, содержащего физиологически активное вещество или его соль;

(21) фармацевтический препарат, содержащий композицию пролонгированного действия, описанную в пункте (1);

(22) лекарственное средство для предотвращения или лечения рака предстательной железы, простатомегалии, эндометриоза, миомы матки, метрофибромы, преждевременного полового созревания, дисменореи и рака молочной железы или противозачаточное средство, которое содержит композицию пролонгированного действия, описанную в пункте (3);

(23) лекарственное средство для предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, которое содержит композицию пролонгированного действия, описанную в пункте (3);

(24) способ предотвращения или лечения рака предстательной железы, простатомегалии, эндометриоза, миомы матки, метрофибромы, преждевременного полового созревания и дисменореи или применения противозачаточного средства, который включает введение млекопитающему эффективной дозы композиции пролонгированного действия, описанной в пункте (3);

(25) способ предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, который включает введение млекопитающему эффективной дозы композиции пролонгированного действия, описанной в пункте (3);

(26) способ получения полимера молочной и гликолевой кислот, имеющего среднюю молекулярную массу от около 8000 до около 15000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее, или его соли, который включает добавление воды к органическому растворителю, содержащему полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 5000 до около 15000, при соотношении менее 5-50 частей (в объемном отношении) на 100 частей органического растворителя;

(27) способ получения полимера, описанный в пункте (26), в котором органический растворитель является гидрофильным;

(28) способ получения полимера, описанный в пункте (27), в котором гидрофильный органический растворитель является ацетоном;

(29) способ получения полимера, описанный в пункте (26), в котором соотношение воды на 100 частей органического растворителя составляет от около 10 до около 45 частей (в объемном отношении);

(30) способ получения полимера, описанный в пункте (26), в котором соотношение воды на 100 частей органического растворителя составляет около 40 частей (в объемном отношении);

(31) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 8000 до около 15000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее, или его соль;

(32) применение полимера молочной и гликолевой кислот, описанного в пункте (31), или его соли для получения композиции пролонгированного действия, не содержащей желатина;

(33) микросфера, содержащая полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 11600 до около 14000 или его соль и производное LH-RH или его соль и не содержащая желатина;

(34) микросфера, описанная в пункте (33), в которой производное LH-RH или его соль представляет пептид, выраженный формулой

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

где Y означает DLeu, DAla, DTrp, DSer (tBu), D2Nal или DHis (ImBzl) и Z означает HN-С₂H ₅ или Gly-NH₂ или его соль;

(35) микросфера, описанная в пункте (33), в которой производное LH-RH или его соль представляет пептид, выраженный формулой:

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C ₂H₅,

или его ацетат;

(36) микросфера, описанная в пункте (33), которая содержит производное LH-RH или его соль в количестве от около 5% (мас./мас.) до около 24% (мас./мас.);

(37) микросфера, описанная в пункте (33), которая представляет микрокапсулу;

(38) микросфера, описанная в пункте (33), которая высвобождает производное LH-RH или его соль по крайней мере в течение более 2 недель;

(39) лекарственное средство для предотвращения или лечения рака предстательной железы, простатомегалии, эндометриоза, миомы матки, метрофибромы, преждевременного полового созревания и дисменореи или противозачаточное средство, которое содержит микросферу, описанную в пункте (33);

(40) лекарственное средство для предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, которое содержит микросферу, описанную в пункте (33);

(41) способ предотвращения или лечения рака предстательной железы, простатомегалии, эндометриоза, миомы матки, метрофибромы, преждевременного полового созревания и дисменореи или применения противозачаточного средства, который включает введение млекопитающему эффективной дозы микросферы, описанной в пункте (33);

(42) способ предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, который включает введение млекопитающему эффективной дозы микросферы, описанной в пункте (33);

Подробное описание изобретения

Физиологически активное вещество, используемое в настоящем изобретении, не имеет конкретных ограничений, если оно является фармацевтически полезным и непептидным или пептидным соединением. Примеры приемлемого непептидного соединения включают агонист, антагонист и соединение, обладающее ингибирующей фермент активностью. Кроме того, предпочтительным пептидным соединением является физиологически активный пептид. Для достижения указанной цели пригодны физиологически активные пептиды с молекулярной массой от около 3000 до около 40000, предпочтительно от около 4000 до около 30000, более предпочтительно от около 5000 до около 200000.

Примеры физиологически активных пептидов включают рилизинг-гормон лютеинизирующего гормона (LH-RH), инсулин, соматостатин, соматотропин, рилизинг-гормон гормона роста (GH-RH), пролактин, эритропоэтин, кортикальный гормон коры надпочечников, меланоцитстимулирующий гормон, рилизинг-гормон тиреоидного гормона, гормон, стимулирующий щитовидную железу, лютеинизирующий гормон, фолликулостимулирующий гормон, вазопрессин, окситоцин, кальцитонин, гастрин, секретин, панкреозимин, холецистокинин, ангиотензин, плацентарный лактоген человека, гонадотропин хориона человека, энкефалин, эндорфин, киотрофин, туфтсин, тимопоэтин, тимозин, тимотимурин, гуморальный фактор тимуса, фактор крови тимуса, фактор некроза опухоли, колониеиндуцирующий фактор, мотилин, динорфин, бомбезин, нейротензин, церулеин, брадикинин, фактор усиления мочевыделения, фактор роста нервов, стимулятор роста клеток, нейротрофический фактор, пептиды, обладающие антагонистической активностью в отношении эндотелина, и их производные, фрагменты и производные указанных фрагментов.

Физиологически активное вещество, используемое в настоящем изобретении, может представлять само вещество или его фармакологически приемлемую соль.

Если физиологически активное вещество имеет основную группу, такую как аминогруппа, примеры солей включают соли с неорганическими кислотами (именуемыми также свободными неорганическими кислотами) (например, угольная кислота, биугольная кислота, хлористоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, борная кислота и тому подобные) и органическими кислотами (именуемыми также свободными органическими кислотами) (например, янтарная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, трифторуксусная кислота и тому подобные); если физиологически активное вещество имеет кислотную группу, такую как карбоксильная группа и тому подобная, примеры солей включают соли с неорганическими основаниями (именуемыми также свободными неорганическими основаниями) (например, щелочной металл, такой как натрий, калий и тому подобные, щелочноземельный металл, такой как кальций, магний и тому подобные) и органическими основаниями (именуемыми также свободными органическими основаниями) (например, органические амины, такие как триэтиламин и тому подобные, основные аминокислоты, такие как аргинин и тому подобные). Кроме того, физиологически активный пептид может образовывать комплексное соединение металла (например, комплекс меди, комплекс цинка и тому подобные).

Предпочтительные примеры физиологически активных пептидов включают производные LH-RH или их соли, которые позволяют эффективно лечить гормональные заболевания, в частности раковые опухоли, вызываемые половым гормоном (например, рак предстательной железы, рак матки, рак молочной железы, опухоль гипофиза и тому подобные), заболевания, вызываемые половым гормоном, такие как простатомегалия, эндометриоз, миома матки, преждевременное половое созревание, дисменорея, аменорея, предменструальный синдром, синдром многокамерного яичника и тому подобные, обеспечивают контрацепцию (или восстановление активности после прекращения приема контрацептивов и лечение бесплодия), профилактику рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы. Кроме того, указанные примеры включают производные LH-RH или их соли, позволяющие эффективно лечить доброкачественные и злокачественные опухоли, не вызываемые половым гормоном, но чувствительные к LH-RH.

Типичные примеры производных LH-RH или их солей включают пептиды, описанные в Treatment with GnRH analogs: Controversies and perspectives (The Parthenon Publishing Group Ltd.), опубликованном в 1996 г, заявках на патент Японии №№3-503165, 3-101695, 7-97334 и 8-259460.

Примеры производных LH-RH включают агонисты LH-RH и антагонисты LH-RH. В качестве антагонистов LH-RH можно использовать, например, физиологически активные пептиды общей формулой [I]

X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH ₂

[где Х означает N(4Н₂-фуроил) Gly или NAc, А означает остаток, выбранный из NHeTyr, Tyr, Aph(Atz) и NMeAph(Atz), В означает остаток, выбранный из DLys(Nic), DCit, DLis (AzaglyNic), DLis(AzaglyFur), DhArg(Et₂ ), DAph(Atz) и DhCi, и С означает Lys(Nisp), Arg или hArg(Et ₂)],

или их соли.

В качестве агонистов LH-RH можно использовать, например, физиологически активные пептиды, выраженные общей формулой [II]

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z

[где Y означает остаток, выбранный из DLeu, DAla, DTrp, DSer(tBu), D2Nal и DHis(ImBzl), и Z означает NH-C₂ H₅ или Gly-NH₂]

или их соли. В частности, для указанной цели пригоден пептид, в котором Y означает DLeu и Z означает NH-C₂ H₅ (то есть пептид А, выраженный формулой 5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C ₂H₅; лейпрорелин) или его соль (например, ацетат).

Указанные пептиды можно получить способами, описанными в приведенных выше публикациях и опубликованных патентах или аналогичными способами.

Аббревиатуры, используемые в настоящем описании изобретения, имеют нижеследующие значения:

Аббревиатура	Наименование
N(4H2-фуроил)Gly	Остаток N-тетрагидрофуроилглицина
NAc	N-ацетильная группа
N2Nal	остаток D-3-(2-нафтил)аланина
D4ClPhe	остаток D-3-(4-хлор)фенилаланина
D3Pal	остаток D-3-(3-пиридил)аланина
NMeTyr	остаток N-метилтирозина
Aph(Atz)	остаток N-[5'-(3'-амино-1'H-1',2',4'-триазолил)]фенилаланина
NmeAph(Atz)	остаток N-метил[5'-(3'-амино-1'H-1',2',4'-триазолил)]фенилаланина
DLys(Nic)	остаток D-(e-N-никотиноил)лизина
Dcit	остаток D-цитруллина
DLys(AzaglyNic)	остаток D-(азаглицилникотиноил)лизина
DLys(AzaglyFur)	остаток D-(азаглицилфуранил)лизина
DhArg(Et2)	остаток D-(N,N'-диэтил)гомоаргинина
DAph(Atz)	остаток D-N-[5'-(3'-амино-1'H-1',2',4'-триазолил)]фенилаланина
DhCi	остаток D-гомоцитруллина
Lys(Nisp)	остаток (e-N-изопропил)лизина
hArg(Et 2)	остаток (N,N'-диэтил)гомоаргинина

Что касается других кислот, то используемые аббревиатуры соответствуют аббревиатурам, утвержденным (IUPAC-IUB) (European Journal of Biochemistry, Vol. 138, pp 9-37 (1984)), или обычным аббревиатурам, принятым в данной области. Кроме того, если аминокислота имеет оптический изомер, такая кислота определяется как L-аминокислота за исключением особо оговоренных случаев.

При осуществлении настоящего изобретения предпочтительно используют полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы, равное примерно 1,90 или менее.

Полимер молочной и гликолевой кислот может представлять соль. Примеры такой соли включают соли с неорганическими основаниями (например, с щелочным металлом, таким как натрий, калий и тому подобные, щелочноземельным металлом, таким как кальций, магний и тому подобные) или органическими основаниями (например, с органическими аминами, такими как триэтиламин и тому подобные, и основными аминокислотами, такими как аргинин и тому подобное), соли с переходными металлами (например, с цинком, железом, медью и тому подобное) и комплексные соли.

Молярное соотношение молочной кислоты и гликолевой кислоты в полимере предпочтительно составляет от около 100/0 до около 40/60, более предпочтительно от около 70/30 до около 80/20.

Соотношение оптических изомеров, представляющее D-изомер/L-изомер (моль/мол.%), в молочной кислоте, которая является одним из минимальных структурных звеньев в "полимере молочной и гликолевой кислот", предпочтительно составляет от около 75/25 до около 25/75. В частности, часто используется соотношение D-изомер/L-изомер (моль/мол.%) в пределах от около 60/40 до около 30/70.

Средняя молекулярная масса "полимера молочной и гликолевой кислот" обычно равна от 3000 до около 100000, предпочтительно от около 3000 до около 50000, наиболее предпочтительно от около 8000 до около 15000.

Низкомолекулярная фракция с молекулярной массой около 3000 или менее "полимера молочной и гликолевой кислот" предпочтительно составляет около 9% или менее, более предпочтительно около 3-9% или менее.

Кроме того, полимер молочной и гликолевой кислот по настоящему изобретению имеет соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее, предпочтительно от около 1,40 до около 1,90, более предпочтительно от около 1,45 до около 1,80.

Предпочтительные примеры включают:

(1) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 3000 до 100000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее;

(2) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 3000 до 50000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее;

(3) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 8000 до 15000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее;

(4) композиция пролонгированного действия, описанная в пунктах (1) - (3), в которой низкомолекулярная фракция с молекулярной массой около 3000 или менее полимера молочной и гликолевой кислот составляет около 9% или менее;

(5) композиция пролонгированного действия, описанная в пунктах (1) - (3), в которой низкомолекулярная фракция с молекулярной массой около 3000 или менее полимера молочной и гликолевой кислот составляет от около 3% до около 9%.

Более предпочтительные примеры включают:

(6) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 3000 до 100000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы от около 1,40 до около 1,90;

(7) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 3000 до 50000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы от около 1,40 до около 1,90;

(8) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 8000 до 15000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы от около 1,40 до около 1,90;

(9) композиция пролонгированного действия, описанная в пунктах (6) - (8), в которой низкомолекулярная фракция с молекулярной массой около 3000 или менее полимера молочной и гликолевой кислот составляет около 9% или менее;

(10) композиция пролонгированного действия, описанная в пунктах (6) - (8), в которой низкомолекулярная фракция с молекулярной массой около 3000 или менее полимера молочной и гликолевой кислот составляет от около 3% до около 9%.

Наиболее предпочтительные примеры включают:

(11) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 3000 до 100000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы от около 1,45 до около 1,80;

(12) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 3000 до 50000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы от около 1,45 до около 1,80;

(13) полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 3000 до 15000 и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы от около 1,45 до около 1,80;

(14) композиция пролонгированного действия, описанная в пунктах (11) - (13), в которой низкомолекулярная фракция с молекулярной массой около 3000 или менее полимера молочной и гликолевой кислот составляет около 9% или менее;

(15) композиция пролонгированного действия, описанная в пунктах (11) - (13), в которой низкомолекулярная фракция с молекулярной массой около 3000 или менее полимера молочной и гликолевой кислот составляет от около 3% до около 9%.

Кроме того, можно использовать полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 11600 до около 14000 или его соль.

Термины "средняя молекулярная масса" и "среднечисленная молекулярная масса" в настоящем описании изобретения означают молекулярную массу в пересчете на молекулярную массу полистирола, измеренную гельпроникающей хроматографией (GPC) с использованием в качестве стандартного вещества десяти типов монодисперсного полистирола (GPC1) со средней молекулярной массой 397000, 189000, 98900, 37200, 17100, 9490, 5870, 2500, 1050 и 495.

Кроме того, содержание низкомолекулярной фракции полимера с молекулярной массой около 3000 или менее соответствует количеству фракции с молекулярной массой около 3000 или менее на картине распределения средней молекулярной массы, полученной в результате выполнения вышеуказанного измерения GPC. В частности, определяют площадь под кривой части, соответствующей молекулярной массе около 3000 или менее, по отношению к площади под кривой картины распределения вычисленной средней молекулярной массы. Измерение выполняют при помощи ряда высокоскоростных устройств для GPC (фирмы Toso, HLC-8120GPC, метод обнаружения с использованием дифференциального показателя преломления) с колонками TSKguard Super H-L (внутренний диаметр 4,6 мм х 35 мм), TSKgel Super H4000 (внутренний диаметр 6 мм х 150 мм) х 2 и TSKgel SuperH2000 (внутренний диаметр 6 мм х 150 мм) (все колонки производства фирмы Toso) и ТГФ в качестве подвижной фазы со скоростью потока 0,6 мл/мин.

Если взаимодействие между полимером молочной и гликолевой кислот и физиологически активным веществом представляет межионное взаимодействие, то основное взаимодействие происходит между физиологически активным веществом и концевой карбоновой кислотой полимера молочной и гликолевой кислот. Когда низкомолекулярная фракция присутствует в большом количестве, физиологически активное вещество легко взаимодействует с низкомолекулярным полимером молочной и гликолевой кислот, обладающим высокой реакционной способностью. Физиологически активное вещество, входящее в состав инъекционного средства пролонгированного действия, которое высвобождается в процессе получения и на начальной стадии действия, представляет главным образом физиологически активное вещество, взаимодействующее с низкомолекулярной фракцией полимера молочной и гликолевой кислот. Чтобы увеличить количество физиологически активного вещества и снизить его начальное высвобождение, необходимо уменьшить ниже определенного уровня содержание низкомолекулярной фракции указанного полимера молочной и гликолевой кислот и соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы. Например, для получения препарата пролонгированного действия, высвобождающего лекарственное средство в течение одного месяца, желательно использовать полимер молочной и гликолевой кислот, имеющий среднюю молекулярную массу от около 8000 до около 15000, соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее, предпочтительно от около 1,40 до около 1,90, более предпочтительно от около 1,45 до около 1,80, и низкомолекулярную фракцию со средней молекулярной массой 3000 или менее в количестве около 9% или менее, предпочтительно от около 3% до около 9%.

"Полимер молочной и гликолевой кислот" можно получить дегидратирующей поликонденсацией без катализатора из молочной кислоты и гликолевой кислоты (заявка на патент Японии 61-28521) или полимеризацией с раскрытием кольца из лактида и циклического сложного диэфира, такого как гликолид и тому подобные (Encyclopedic Handbook of Biomaterials and Bioengineering Part A: Materials, Volume 2, Marcel Dekker, Inc., 1995).

Полимер молочной и гликолевой кислот, полученный дегидратирующей поликонденсацией без катализатора из молочной кислоты и гликолевой кислоты, обычно содержит большое количество низкомолекулярной фракции и имеет соотношение средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 2 или более. Средняя молекулярная масса полимера молочной и гликолевой кислот по настоящему изобретению составляет от около 5000 до около 15000. Содержание низкомолекулярной фракции с молекулярной массой около 3000 или менее может изменяться в зависимости от средней молекулярной массы, и, когда средняя молекулярная масса равна примерно 10000, количество низкомолекулярной фракции с молекулярной массой около 3000 или менее составляет около 10% или более.

Полученный полимер молочной и гликолевой кислот можно очистить при помощи органического растворителя, получив при этом конечный полимер.

Примеры органического растворителя, используемого в настоящем изобретении, предпочтительно включают гидрофильные или легкорастворимые в воде органические растворители, такие как, например, ацетон, тетрагидрофуран, диоксан, диметилформамид и диметилсульфоксид, причем для указанной цели предпочтительно используют ацетон.

Количество добавляемой воды и органического растворителя не имеет конкретных ограничений. Однако когда количество воды является слишком большим, нельзя в достаточной степени уменьшить содержание низкомолекулярной фракции, и поэтому трудно получить конечный полимер. С другой стороны, когда количество воды является недостаточным, полимер плохо осаждается, поэтому ухудшается его выход и образуется полимер с более высокой молекулярной массой по сравнению с требуемой молекулярной массой. Количество воды на 100 частей органического растворителя обычно составляет около 5-50 частей, предпочтительно от около 10 до около 45 частей, более предпочтительно от около 24 до около 40 частей, особенно предпочтительно около 40 частей. Например, 10 г полимера молочной и гликолевой кислот растворяют в 100 мл ацетона, являющегося органическим растворителем, постепенно добавляют 40 мл очищенной воды, перемешивая приемлемым способом для осаждения конечного полимера, который можно высушить приемлемым способом. Если конечный полимер нельзя получить в процессе выполнения одной стадии растворения и осаждения, указанную процедуру можно повторить.

В препарате пролонгированного действия по настоящему изобретению в качестве основы предпочтительно используют полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее или его соль либо полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 11600 до около 14000 или его соль. Молярное соотношение молочной кислоты и гликолевой кислоты в полимере предпочтительно составляет от 100/0 до 40/60. Физиологически активным веществом предпочтительно является производное LH-RH, и производное LH-RH предпочтительно представляет пептид, выраженный формулой

5-оксо-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C ₂H₅

или его ацетат. Производное LH-RH или его соль предпочтительно присутствуют в количестве от около 5% (мас./мас.) до около 24% (мас./мас.). Кроме того, предпочтителен препарат пролонгированного действия, не содержащий желатина и высвобождающий физиологически активное вещество или его соль по крайней мере в течение двух недель.

Способ получения микрокапсулы

Полученный таким образом полимер молочной и гликолевой кислот можно использовать в качестве основы для получения препарата пролонгированного действия. Ниже дано описание способа получения композиции пролонгированного действия по настоящему изобретению, например микрокапсулы, содержащей физиологически активное вещество или его соль и полимер молочной и гликолевой кислот или его соль.

(I) Способ сушки в воде

(i) Способ получения эмульсии масло в воде

В соответствии со способом по настоящему изобретению сначала получают раствор полимера молочной и гликолевой кислот или его соли в органическом растворителе. Органический растворитель, используемый для получения препарата пролонгированного действия по настоящему изобретению, предпочтительно имеет температуру кипения, равную 120°С или ниже.

В качестве органического растворителя можно использовать, например, галогенированный углеводород (например, дихлорметан, хлороформ, дихлорэтан, трихлорэтан, тетрахлорид углерода и тому подобные), простые эфиры (например, этиловый эфир, изопропиловый эфир и тому подобные), сложные эфиры жирных кислот (например, этилацетат, бутилацетат и тому подобные), ароматические углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и тому подобные), спирты (например, этанол, метанол и тому подобные) и ацетонитрил, а также смесь указанных растворителей. Предпочтительным органическим растворителем для полимера молочной и гликолевой кислот или его соли является дихлорметан.

Концентрация полимера молочной и гликолевой кислот в растворе органического растворителя может изменяться в зависимости от молекулярной массы полимера молочной и гликолевой кислот и типа органического растворителя. Например, при использовании дихлорметана в качестве органического растворителя концентрацию обычно выбирают от около 0,5 до около 70 мас.%, более предпочтительно от около 1 до около 60 мас.%, особенно предпочтительно от около 2 до около 50 мас.%.

Затем добавляют физиологически активное вещество или его соль, которое растворяют или диспергируют в полученном растворе полимера молочной и гликолевой кислот в органическом растворителе. Полученный раствор в органическом растворителе, содержащий композицию из физиологически активного вещества или его соли и полимера молочной и гликолевой кислот или его соли, добавляют к водной фазе для образования эмульсии масляной фазы в водной фазе, после чего растворитель в масляной фазе испаряют или диффундируют в водной фазе с образованием микрокапсулы. Объем водной фазы обычно выбирают так, чтобы он был примерно в 1-10000 раз, более предпочтительно примерно в 5-50000 раз, наиболее предпочтительно примерно в 10-2000 раз больше объема масляной фазы. Помимо вышеуказанных компонентов к водной фазе может быть добавлен эмульгатор. Можно использовать любой эмульгатор, позволяющий получить устойчивую эмульсию масляной фазы в водной фазе. Например, можно использовать анионогенные поверхностно-активные вещества (олеат натрия, стеарат натрия, лаурилсульфат натрия и тому подобные), неионогенные поверхностно-активные вещества (сложные эфиры жирных кислот полиоксиэтиленсорбита) (твин 80, твин 60 фирмы Atlas Powder), полиоксиэтиленовые производные касторового масла (НСО-60, НСО-50 фирмы Nikko Chemical), поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, карбоксиметилцеллюлозу, лецитин, желатин и гиалуроновую кислоту. Указанные вещества можно использовать отдельно или в сочетании друг с другом. Концентрация указанных веществ предпочтительно находится в пределах от около 0,0001 до 10 мас.%, более предпочтительно от около 0,001 до 5 мас.%

Помимо вышеуказанных компонентов к водной фазе может быть добавлено вещество, регулирующее осмотическое давление. Можно использовать любой регулятор осмотического давления, способный создавать требуемое осмотическое давление при введении в водный раствор.

Примеры регуляторов осмотического давления включают многоатомные спирты, одноатомные спирты, моносахариды, дисахариды, олигосахариды и аминокислоты или их производные.

В качестве многоатомных спиртов можно использовать, например, трехатомные спирты, такие как глицерин и тому подобные, пятиатомные спирты, такие как арабит, ксилит, адонит и тому подобные, и шестиатомные спирты, такие как маннит, сорбит, дульцит и тому подобные. Предпочтительными спиртами являются шестиатомные спирты, в частности маннит.

Примеры одноатомных спиртов включают метанол, этанол и изопропиловый спирт, причем этанол является более предпочтительным.

В качестве моносахаридов можно использовать, например, пентозы, такие как арабиноза, ксилоза, рибоза, 2-дезоксирибоза и тому подобные, и гексозы, такие как глюкоза, фруктоза, галактоза, манноза, сорбоза, рамноза, фукоза и тому подобные, причем гексозы являются более предпочтительными.

В качестве олигосахаридов можно использовать, например, трисахариды, такие как мальтотриоза, раффиноза и тому подобные, и тетрасахариды, такие как стахиоза и тому подобные, причем трисахариды являются более предпочтительными.

В качестве производных моносахаридов, дисахаридов и олигосахаридов можно использовать, например, глюкозамин, галактозамин, глюкуроновую кислоту и галактуроновую кислоту.

В качестве аминокислот можно использовать любые L-аминокислоты, примеры которых включают глицин, лейцин и аргинин. Среди указанных аминокислот более предпочтительным является L-аргинин.

Указанные регуляторы осмотического давления можно использовать отдельно или в сочетании друг с другом.

Регуляторы осмотического давления используют в такой концентрации, чтобы осмотическое давление внешней водной фазы было примерно в 1/50 - 5 раз, предпочтительно примерно в 1/25 - 3 раза больше осмотического давления физиологического раствора. При использовании маннита в качестве регулятора осмотического давления его концентрация предпочтительно равна 0,5-1,5%.

Для удаления органического растворителя можно использовать известный или подобный способ. Примеры таких способов включают испарение органического растворителя при нормальном давлении или при постепенном понижении давления и перемешивании пропеллерной мешалкой, магнитной мешалкой или при помощи ультразвукового устройства; выпаривание органического растворителя при регулировании степени вакуума с помощью роторного испарителя и постепенное удаление органического растворителя с использованием мембраны для диализа.

Полученные таким образом микрокапсулы центрифугируют или фильтруют для удаления свободного физиологически активного вещества или его соли, после чего вещество, удерживающее лекарственное средство, и эмульгатор на поверхности микрокапсул несколько раз промывают дистиллированной водой и лиофилизованные микрокапсулы снова диспергируют в дистиллированной воде.

Так как в микрокапсуле по настоящему изобретению в качестве основы использован полимер молочной и гликолевой кислот с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы, равным 1,90 или менее, или его соль либо полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 11600 до около 14000 или его соль, такая микрокапсула может содержать лекарственное средство в большом количестве, и поэтому при получении микрокапсулы нет необходимости использовать вещество, удерживающее лекарственное средство, такое как желатин и загуститель.

Указанные полимеры предпочтительно можно использовать для получения композиции пролонгированного действия, высвобождающей лекарственное средство по крайней мере в течение двух недель.

На стадии получения микрокапсулы может быть добавлено вещество, препятствующее агрегации частиц. В качестве вещества, препятствующего агрегации, можно использовать, например, водорастворимый полисахарид, такой как маннит, лактоза, глюкоза и крахмалы (например, кукурузный крахмал и тому подобные), аминокислоту, такую как глицин, и белок, такой как фибрин и коллаген. Особенно пригодным является маннит.

Воду и органический растворитель, оставшиеся в микрокапсуле после лиофилизации, при необходимости можно удалить, нагревая микрокапсулу в условиях, не вызывающих ее разрушения. Нагревание предпочтительно производят при температуре, которая равна или несколько выше промежуточной температуры стеклования микрокапсулы, установленной при помощи дифференциального сканирующего калориметра, повышая температуру со скоростью 10-20°С в минуту. Более предпочтительно микрокапсулы нагревают при температуре, равной промежуточной температуре стеклования микрокапсулы, или в температурном интервале от промежуточной температуры стеклования микрокапсулы до температуры, которая примерно на 30°С выше промежуточной температуры стеклования. Микрокапсулы предпочтительно нагревают в температурном интервале от промежуточной температуры стеклования микрокапсулы до температуры, которая на 10°С выше промежуточной температуры стеклования, более предпочтительно в температурном интервале от промежуточной температуры стеклования до температуры, которая на 5°С выше промежуточной температуры стеклования.

Время нагревания может изменяться в зависимости от количества микрокапсул и обычно составляет от около 12 часов до 168 часов, предпочтительно от около 24 часов до 120 часов, особенно предпочтительно от около 48 часов до 96 часов после достижения микрокапсулой заранее определенной температуры.

Способ нагревания не имеет конкретных ограничений, если достигается равномерный нагрев всех микрокапсул.

Нагревание и сушку можно производить, например, в термостатической камере, камере с псевдоожиженным слоем, подвижной камере, сушильной печи или микроволновой печи. Предпочтительным способом является нагревание и сушка в термостатической камере.

(ii) Способ получения эмульсии вода в масле в воде (W/O/W)

Сначала получают раствор полимера молочной и гликолевой кислот или его соли в органическом растворителе, и полученный таким образом раствор в органическом растворителе представляет масляную фазу. Способ получения масляной фазы аналогичен способу, описанному в приведенном выше разделе (I) (i). Концентрация полимера молочной и гликолевой кислот в органическом растворителе может изменяться в зависимости от молекулярной массы полимера молочной и гликолевой кислот и типа органического растворителя. Например, при использовании дихлорметана в качестве органического растворителя концентрацию обычно выбирают в интервале от около 0,5 до около 70 мас.%, более предпочтительно от около 1 до около 60 мас.%, особенно предпочтительно от около 2 до около 50 мас.%.

Затем получают раствор или дисперсию физиологически активного вещества или соли [растворителем является вода или смесь воды и спиртов (например, метанола, этанола и тому подобных)].

Концентрация добавляемого физиологически активного вещества или его соли обычно составляет от 0,001 мг/мл до 10 г/мл, предпочтительно от 0,1 мг/мл до 5 г/мл, более предпочтительно от 10 мг/мл до 3 г/мл.

Если вышеописанное физиологически активное вещество имеет основную группу, такую как аминогруппа, соли физиологически активного вещества включают соли с неорганическими кислотами (именуемыми также свободными неорганическими кислотами) (например, угольная кислота, карбонат кислоты, хлористоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, борная кислота и тому подобные) и органическими кислотами (именуемыми также свободными органическими кислотами) (например, янтарная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, трифторуксусная кислота и тому подобные).

Если физиологически активное вещество имеет кислотную группу, такую как карбоксильная группа, соли физиологически активного вещества включают соли с неорганическими основаниями (именуемыми также свободными неорганическими основаниями) (например, щелочные металлы, такие как натрий и калий, щелочноземельные металлы, такие как кальций, магний и тому подобные) и органическими основаниями (именуемыми также свободными органическими основаниями) (например, органические амины, такие как триэтиламин, основные аминокислоты, такие как аргинин и тому подобное). Кроме того, физиологически активные пептиды могут образовывать комплексные соединения металлов (например, комплекс меди, комплекс цинка и тому подобное). Когда физиологически активным веществом является производное LH-RH, предпочтительно добавляют уксусную кислоту.

В качестве солюбилизатора и стабилизатора можно использовать известные соединения. Чтобы растворить или диспергировать физиологически активное вещество или добавку, смесь нагревают, встряхивают и перемешивают так, чтобы сохранить активность указанного вещества, получая при этом водный раствор, представляющий внутреннюю водную фазу.

Полученную таким образом внутреннюю водную фазу и масляную фазу эмульгируют известными способами, такими как гомогенизация и ультразвуковая обработка, с образованием эмульсии вода в масле.

Объем смешиваемой масляной фазы примерно в 1-1000 раз, предпочтительно в 2-100 раз, более предпочтительно примерно в 3-10 раз больше объема внутренней водной фазы.

Вязкость полученной эмульсии вода в масле обычно равна примерно 10-10000 сантипуаз, предпочтительно примерно 100-5000 сантипуаз, более предпочтительно примерно 500-2000 сантипуаз при температуре около 12-25°С.

Затем полученную эмульсию вода в масле, содержащую физиологически активное вещество или его соль и полимер молочной и гликолевой кислот или его соль, добавляют к водной фазе с образованием эмульсии вода (W) (внутренняя водная фаза/масляная фаза) (W/O) во внешней водной фазе (W), после чего растворитель в масляной фазе испаряют или диффундируют во внешней водной фазе с образованием микрокапсулы. Объем внешней водной фазы обычно выбирают так, чтобы он был примерно в 1-10000 раз, более предпочтительно примерно в 5-50000 раз, наиболее предпочтительно примерно в 10-2000 раз больше объема масляной фазы.

Помимо вышеуказанных компонентов к водной фазе могут быть добавлены эмульгатор и регулятор осмотического давления, при этом способы получения микрокапсул аналогичны описанным в приведенном выше разделе (I)(i).

(II) Способ разделения фаз

При получении микрокапсул способом по настоящему изобретению к раствору физиологически активного вещества или его соли и полимера молочной и гликолевой кислот в органическом растворителе, описанному в способе сушки в воде в разделе (I), при перемешивании постепенно добавляют коацервирующий агент для осаждения и отверждения микрокапсулы. Объем коацервирующего агента может быть примерно в 0,01-1000 раз, предпочтительно примерно в 0,05-500 раз, особенно предпочтительно примерно в 0,1-200 раз больше объема масляной фазы.

Тип коацервирующего агента не имеет конкретных ограничений, если он представляет полимерное соединение минерального или растительного масла, совместимое с органическим растворителем и не растворяющее комплекс физиологически активного вещества или соли и полимера молочной и гликолевой кислот или его соли. В частности, можно использовать силиконовое масло, кунжутное масло, соевое масло, кукурузное масло, хлопковое масло, кокосовое масло, льняное масло, минеральное масло, н-гексан или н-гептан. Можно использовать смесь двух или большего числа указанных веществ.

Полученные таким образом микрокапсулы выделяют, несколько раз промывают гептаном или подобным веществом, чтобы удалить коацервирующий агент из композиции, включающей физиологически активное вещество или его соль и полимер молочной и гликолевой кислот или его соль, и сушат при пониженном давлении. Микрокапсулы альтернативно промывают способом, описанным в способе сушки в воде лиофилизованных микрокапсул в приведенном выше разделе (I) (i), после чего микрокапсулы нагревают и сушат.

(III) Распылительная сушка

При получении микрокапсул способом по настоящему изобретению раствор физиологически активного вещества или его соли и полимера молочной и гликолевой кислот или его соли в органическом растворителе, описанный в способе сушки в воде в разделе (I), распыляют в сушильной камере распылительной сушилки при помощи распылительного сопла, после чего органический растворитель в тонко раздробленных каплях испаряют в течение короткого времени с образованием микрокапсул. Примеры распылительного сопла включают сопло для распыления в псевдоожиженном слое, сопло для распыления под давлением, сопло с роторным диском. Затем при необходимости микрокапсулы промывают, лиофилизуют, еще раз промывают и сушат аналогично способу сушки в воде, описанному в разделе (I).

При получении дозированной лекарственной формы, не являющейся вышеуказанной микрокапсулой, раствор физиологически активного вещества или его соли и полимера молочной и гликолевой кислот или его соли в органическом растворителе, который описан в способе получения микрокапсулы сушкой в воде в разделе (I), сушат, испаряя органический растворитель и воду при регулировании степени вакуума с помощью, например, роторного испарителя, после чего полученный продукт измельчают в струйной мельнице, получая при этом мелкий порошок (именуемый также микрочастицами).

Тонко измельченный порошок промывают способом, аналогичным способу сушки в воде, используемому при получении микрокапсулы (I), лиофилизуют, нагревают и сушат.

Полученные микрокапсулы или мелкий порошок могут высвобождать лекарственное средство при меньшем расходе используемого полимера молочной и гликолевой кислот.

Композиция пролонгированного действия по настоящему изобретению может иметь любую форму, такую как микросфера, микрокапсула или мелкий порошок (микрочастицы), причем микрокапсула является наиболее приемлемой формой.

Композицию пролонгированного действия по настоящему изобретению можно использовать без дальнейшей обработки или как исходное сырье для получения разных дозированных лекарственных форм, предназначенных для внутривенного и подкожного введения в качестве инъекционного или имплантируемого средства, а также для введения внутрь органа, через слизистую оболочку и перорально (например, в виде твердой капсулы, мягкой капсулы и тому подобного) и использования в виде твердых препаратов, таких как гранулы, порошок и тому подобные, или жидких средств, таких как сироп, эмульсия, суспензия и тому подобные для введения в нос, прямую кишку или матку.

Например, для изготовления композиции пролонгированного действия по настоящему изобретению в виде инъекционного средства получают водную суспензию вместе с диспергатором (таким как поверхностно-активные вещества, например, твин-80, НСО-60 и тому подобные, и полисахариды, например гиалуронат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, аргинат натрия и тому подобные), консервантом (таким как метилпарабен и пропилпарабен), веществом для получения изотонического раствора (таким как хлорид натрия, маннит, сорбит, глюкоза и пролин), либо указанную композицию диспергируют в масляной суспензии вместе с растительным маслом, таким как кунжутное или кукурузное масло, получая при этом инъекционное средство пролонгированного действия, которое можно использовать без дальнейшей обработки.

Диаметр частиц композиции пролонгированного действия по настоящему изобретению, предназначенной для использования в виде суспензии инъекционного средства, должен соответствовать требуемой степени дисперсности и проникающей способности иглы. Например, средний диаметр частиц может быть равен примерно 0,1-300 мкм, предпочтительно примерно 0,5-150 мкм, более предпочтительно примерно 1-100 мкм.

Композицию пролонгированного действия по настоящему изобретению в виде асептического препарата можно получить способами, которые включают, не ограничиваясь ими, асептическое выполнение всех стадий процесса получения, стерилизацию гамма-лучами, добавление антисептика и тому подобные.

Так как композиция пролонгированного действия по настоящему изобретению характеризуется низкой токсичностью, ее можно использовать в качестве безопасного лекарственного средства для млекопитающего (например, человека, крупного рогатого скота, свиней, собак, кошек, мышей, крыс, кроликов и других млекопитающих), при этом доза композиции пролонгированного действия по настоящему изобретению может изменяться в зависимости от типа и содержания физиологически активного вещества, типа дозированной лекарственной формы, продолжительности высвобождения физиологически активного вещества, подлежащего лечению заболевания, вида животного и эффективного количества физиологически активного вещества. Однократная доза физиологически активного вещества может предпочтительно составлять для взрослого человека от около 0,01 мг до 10 мг/кг массы тела, более предпочтительно от около 0,05 мг до 5 мг/кг массы тела, например, при использовании в препарате продолжительного действия с высвобождением активного вещества в течение шести месяцев.

Однократная доза композиции пролонгированного действия может предпочтительно составлять для взрослого человека от около 0,05 мг до 50 мг/кг массы тела, более предпочтительно от около 0,1 мг до 30 мг/кг массы тела.

Время введения может быть выбрано в зависимости от типа и содержания физиологически активного вещества, используемого в качестве основы, дозированной лекарственной формы, продолжительности высвобождения физиологически активного вещества, предназначенного для лечения заболевания и вида животного, например, препарат можно вводить один раз в несколько недель, один раз в месяц, один раз в несколько месяцев (например, через три месяца, четыре месяца, шесть месяцев и т.д.) и т.д.

Композицию пролонгированного действия по настоящему изобретению можно использовать в качестве средства для предотвращения или лечения разных заболеваний в зависимости от типа физиологически активного вещества, содержащегося в данной композиции; например, когда физиологически активным веществом является производное LH-RH, такую композицию можно использовать для предотвращения или лечения гормональных заболеваний, в частности раковых опухолей, зависимых от полового гормона (например, рак предстательной железы, рак матки, рак молочной железы, опухоль гипофиза и тому подобные), заболеваний, зависимых от полового гормона, таких как простатомегалии, эндометриоз, миома матки, преждевременное половое созревание, дисменорея, аменорея, предменструальный синдром, синдром многокамерного яичника и тому подобные, для предотвращения рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы, для предотвращения и лечения болезни Альцгеймера или аутоиммунных заболеваний, и для контрацепции (или предотвращения или лечения бесплодия с целью восстановления активности после прекращения приема контрацептивов). Кроме того, указанную композицию можно также использовать в качестве средства для предотвращения или лечения доброкачественных или злокачественных опухолей, не вызываемых половым гормоном, но чувствительных к LH-RH.

Таким образом, введение млекопитающему эффективной дозы лечебного или профилактического средства по настоящему изобретению делает возможным предотвращение или лечение гормональных заболеваний, в частности раковых опухолей, зависимых от полового гормона (например, рака предстательной железы, рака матки, рака молочной железы, опухоли гипофиза и тому подобных), заболеваний, зависимых от полового гормона, таких как простатомегалия, эндометриоз, миома матки, преждевременное половое созревание, дисменорея, аменорея, предменструальный синдром, синдром многокамерного яичника и тому подобные, предотвращение зачатия и профилактику рецидива рака молочной железы после операции по поводу предклимактерического рака молочной железы.

Примеры

Настоящее изобретение далее будет более подробно объяснено при помощи примеров, сравнительных примеров и экспериментальных примеров, но настоящее изобретение не ограничено указанными примерами.

Пример А1

10 г полимера молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой 9700 и среднечисленной молекулярной массой 5030, синтезированного дегидратирующей поликонденсацией из молочной и гликолевой кислот, растворяют в 100 мл ацетона и при перемешивании по каплям добавляют 40 мл очищенной воды для осаждения полимера. Раствор кроме осажденного сиропообразного полимера в виде клейкого крахмала декантируют и полученный полимер сушат в вакууме. Выход полимера после сушки составляет 8,37 г, средняя молекулярная масса равна 10500 и среднечисленная молекулярная масса равна 6700.

Пример А2

4,87 г полимера, полученного в примере А1, растворяют в 8,03 г дихлорметана в масляной фазе. Масляную фазу смешивают с водной фазой, представляющей раствор 0,597 г ацетата пептида А в 0,6 мл очищенной воды, и эмульгируют со скоростью 25000 оборотов/мин при помощи политрона, получая при этом эмульсию вода в масле. Эмульсию вода в масле добавляют к 1000 мл 0,1% водного раствора поливинилового спирта при 15°С и превращают в эмульсию вода в масле в воде (W/O/W) в гомогенизирующем смесителе, вращающемся со скоростью 7000 оборотов/мин. Микрокапсулы отверждают, десольватируя их при помощи пропеллерной мешалки в течение трех часов, после чего микрокапсулы, проходящие через сито с размером ячеек 200 меш, отделяют и лиофилизуют после добавления 0,48 г маннита. Выход лиофилизованных микрокапсул равен 3,92 г, и содержание пептида А составляет 10,18%.

Сравнительный пример А1

Микрокапсулы получают при использовании полимера молочной и гликолевой кислот по примеру А1 способом по примеру А2 с выходом 3,97 г, и содержанием пептида А 9,50%.

Экспериментальный пример А1

Микрокапсулы, полученные в примере А2 и сравнительном примере А1, диспергируют в 0,3 мл диспергирующей среды (дистиллированная вода, в которой растворено 0,25 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,5 мг полисорбата 80 и 25 мг маннита) в количестве 2,25 мг в пересчете на пептид А и вводят подкожно в спину самцам крыс SD в возрасте 7 недель при помощи иглы для инъекций 22G. В заранее определенное время после введения крыс умерщвляют, удаляют микрокапсулы, оставшиеся в месте введения, и определяют в них содержание пептида А, величину которого делят на начальное количество, определяя таким образом процентное значение оставшегося количества, как показано в таблице 1. Кроме того, в указанной таблице приведены соотношения средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы (Mw/Mn) полимеров, использованных в примере А2 и сравнительном примере А1.

Таблица 1
	Сравнительный пример А1	Пример А2
Соотношение Mw/Mn	1,93	1,57
1 день	84,64%	91,17%
2 недели	32,2%	54,31%
4 недели	2,54%	10,28%

Как показано в таблице 1, при использовании для получения микрокапсул полимера по примеру А2 с соотношением Mw/Mn, равным 1,90 или менее, достигнутым при обработке ацетоном, подавляется начальное высвобождение пептида А из микрокапсулы и обеспечивается пролонгированное высвобождение в течение длительного периода времени, равного четырем неделям.

Пример А3

185,7 г полимера молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой 10600 и среднечисленной молекулярной массой 6600 растворяют в 300,1 г дихлорметана, доводя температуру до 29,5°С. Отвешивают 330,2 г полученного раствора в органическом растворителе, смешивают с водным раствором, который получают, растворяя 15,62 г ацетата пептида А в 15,31 г дистиллированной воды, предварительно нагретой до 54,3°С, перемешивают в течение 1 минуты и получают сырую эмульсию, которую затем эмульгируют в течение двух минут в гомогенизаторе со скоростью вращения 10000 оборотов/минуту с образованием эмульсии вода в масле (W/O). Полученную эмульсию вода в масле охлаждают до 17,8°С, выливают в 25 литров 0,1% (мас./мас.) водного раствора поливинилового спирта (EG-40, фирмы Nihongoseikagaku), который предварительно доводят до 17,9°С в течение 1 минуты и 16 секунд, и перемешивают со скоростью 7005 оборотов/мин в устройстве HOMOMIC LINE FLOW (фирмы Tokushukika), получая при этом эмульсию вода в масле в воде (W/O/W). Полученную эмульсию вода в масле в воде перемешивают в течение 3 часов для испарения дихлорметана или диффузии дихлорметана во внешнюю водную фазу, масляную фазу отверждают и фильтруют через сито с отверстиями 75 мкм, микрокапсулы формируют при непрерывном вращении в центрифуге (Н-600S, фирмы Kokusanenshinki) со скоростью 2000 оборотов/мин и собирают. Собранные микрокапсулы снова диспергируют в небольшом количестве дистиллированной воды, фильтруют через сито с отверстиями 90 мкм, растворяют, добавляя 17,2 г маннита и лиофилизуют, получая порошок. Выход микрокапсул равен 76,4%, и содержание пептида А в микрокапсулах составляет 8,79%.

Экспериментальный пример А2

Примерно 26 мг микрокапсул, описанных в примере А3, диспергируют в 0,3 мл диспергирующей среды (дистиллированная вода, в которой растворено 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата 80 и 15 мг маннита) и вводят подкожно в спину самцам крыс SD в возрасте 7 недель при помощи иглы для инъекций 22G. В заранее определенное время после введения крыс умерщвляют, удаляют микрокапсулы, оставшиеся в месте введения, и определяют в них содержание пептида А, величину которого делят на начальное количество, определяя таким образом процентное значение оставшегося количества, как показано в таблице 2.

Таблица 2
Время	1 день	1 неделя	2 недели	3 недели	4 недели	5 недель
Оставшееся количество	90,29%	68,06%	36,63%	12,75%	4,48%	1,12%

Как показано в таблице 2, несмотря на высокое содержание физиологически активного вещества в микрокапсулах, описанных в примере А3, количество физиологически активного вещества, оставшееся через один день после введения, составляет 90%. Таким образом, когда соотношение Mw/Mn полимера не превышает 1,6, достигается значительное подавление высокого начального высвобождения физиологически активного вещества. Кроме того, указанные микрокапсулы обеспечивают высвобождение физиологически активного вещества с постоянной скоростью в течение длительного периода времени.

Пример В1

197,7 г полимера молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой 12600 и среднечисленной молекулярной массой 6400 растворяют в 320,1 г дихлорметана, фильтруют через фильтр-пресс с размером отверстий 0,2 мкм (EMFLOW, DFA4201FRP) и доводят температуру до около 30,0°С. Отвешивают 330,1 г раствора, смешивают с водным раствором, который получают, растворяя 15,68 г ацетата пептида А в 15,31 г дистиллированной воды, предварительно нагретой до 56,0°С, перемешивают в течение 1 минуты и получают сырую эмульсию, которую эмульгируют в течение двух минут со скоростью вращения 10000 оборотов/мин с образованием эмульсии вода в масле. Полученную эмульсию вода в масле охлаждают до 18,2°С, выливают в 25 литров 0,1% (мас./мас.) раствора поливинилового спирта (EG-40, фирмы Nihongoseikagaku), который предварительно доводят до 18,4°С в течение 1 минуты и 46 секунд, и перемешивают со скоростью 7007 оборотов/мин при помощи устройства HOMOMIC LINE FLOW (фирмы Tokushukika), получая при этом эмульсию вода в масле в воде (W/O/W). Полученную эмульсию вода в масле в воде перемешивают в течение 3 часов для испарения дихлорметана или диффузии дихлорметана во внешнюю водную фазу, затем масляную фазу отверждают и фильтруют через сито с отверстиями 75 мкм, микрокапсулы формируют при непрерывном вращении в центрифуге (Н-600S, фирмы Kokusanenshinki) со скоростью 2000 оборотов/мин и собирают. Собранные микрокапсулы снова диспергируют в небольшом количестве дистиллированной воды, фильтруют через сито с отверстиями 90 мкм, растворяют, добавляя 17,2 г маннита и лиофилизуют, получая порошок. Выход микрокапсул равен 73,47%, и содержание пептида А в микрокапсулах составляет 8,43%.

Экспериментальный пример В1

Примерно 26,7 мг микрокапсул, описанных в примере В1, диспергируют в 0,3 мл диспергирующей среды (дистиллированная вода, в которой растворено 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата 80 и 15 мг маннита) и вводят подкожно в спину самцам крыс SD в возрасте 7 недель при помощи иглы для инъекций 22G. В заранее определенное время после введения крыс умерщвляют, удаляют микрокапсулы, оставшиеся в месте введения, и определяют в них содержание пептида А, величину которого делят на начальное количество, определяя таким образом процентное значение оставшегося количества, как показано в таблице 3.

Таблица 3
Время	1 день	1 неделя	2 недели	3 недели	4 недели	5 недель
Оставшееся количество	82,43%	68,33%	47,07%	23,58%	9,05%	2,08%

Как показано в таблице 3, микрокапсулы, описанные в примере В1, могут содержать физиологически активное вещество в большом количестве даже без использования желатина и способны существенно подавлять начальное высвобождение физиологически активного вещества, обеспечивая высвобождение физиологически активного вещества в течение длительного периода времени.

Экспериментальный пример В2

Примерно 44,6 мг микрокапсул, описанных в примере В1, диспергируют в 1,0 мл диспергирующей среды (дистиллированная вода, в которой растворено 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата 80 и 15 мг маннита) и вводят подкожно в спину коротконогим гончим с массой тела 7-12 кг при помощи иглы для инъекций 22G. В заранее определенное время после введения у собак из вены передней лапы берут пробы крови и определяют концентрацию пептида А и тестостерона; полученные результаты приведены в таблице 4.

Таблица 4
Время	1 день	1 неделя	2 недели	3 недели	4 недели	5 недель
Пептид А	2,21	0,398	0,525	0,433	0,603	0,358
Тестостерон	2,79	0,57	0,35	0,35	0,30	0,39

Как показано в таблице 4, микрокапсулы, описанные в примере В1, высвобождают физиологически активное вещество в течение длительного периода времени и сохраняют в крови необходимую концентрацию физиологически активного вещества. Кроме того, физиологически активное вещество, высвобождаемое в кровь, не утрачивает активность, благодаря чему лекарственное средство остается эффективным.

Промышленная применимость

Препарат пролонгированного действия по настоящему изобретению, включающий в качестве основы сополимер PLGA с соотношением средней молекулярной массы и среднечисленной молекулярной массы около 1,90 или менее либо полимер молочной и гликолевой кислот со средней молекулярной массой от около 11600 до около 14000 или его соль, содержит физиологически активное вещество в большом количестве даже без использования желатина и подавляет высокое начальное высвобождение физиологически активного вещества, обеспечивая стабильную скорость высвобождения в течение примерно одного месяца.

Таким образом, препарат по данному изобретению обладает такими полезными свойствами, что его можно получить при сокращении производственного процесса и уменьшении затрат, так как не нужно использовать вещество, удерживающее лекарственное средство, такое как желатин, и загуститель, в результате чего сокращается количество добавок, благодаря чему данный препарат может содержать лекарственное средство в высокой концентрации без использования вещества, удерживающего лекарственное средство, и загустителя; кроме того, вследствие увеличения температуры стеклования можно получить композицию пролонгированного действия, высвобождающую лекарственное средство по крайней мере в течение двух недель, и препарат, обладающий высокой устойчивостью.