лиофилизированный препарат на основе тетродотоксина и способ его производства

Формула изобретения

1. Способ получения лиофилизованного препарата тетродотоксина, содержащего тетродотоксин, солюбилизатор, наполнитель и стабилизатор, где указанный тетродотоксин имеет чистоту>96%, указанный наполнитель представляет собой хлорид натрия или маннит или их смесь; стабилизатор представляет собой декстран, трегалозу; а солюбилизатор представляет собой лимонную кислоту; включает также следующие стадии:

1) растворяют 0,1-20 мкг/доза тетродотоксина с 0,1% раствором лимонной кислоты для регулирования рН в пределах 3,5-4,5 в воде для инъекций и фильтруют для удаления пирогена,

2) растворяют стабилизатор, представляющий собой декстран в количестве 0,5-5,0 мг/доза или трегалозу в количестве 0,5-60 мг/доза, и наполнитель, представляющий собой изотонический раствор хлорида натрия в количестве 1,0-30 мг/доза или маннит в количестве 1.0-30 мг/доза, в воде для инъекций, добавляют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования рН в пределах 3,5-4,5, добавляют активированный уголь, выдерживают при температуре 60°С, перемешивая в течение более чем 30 минут и фильтруют для удаления пирогена и охлаждают до комнатной температуры,

3) равномерно смешивают полученные на стадиях 1 и 2 растворы, проводят ультрафильтрацию,

4) проводят лиофильную сушку, которая заключается в предварительном замораживании при температуре -35°С в течение 2,5 часов, сушке под вакуумом при пониженной температуре -10°С в течение 8 часов, сушке под вакуумом при температуре 10°С в течение 3 часов, сушке под вакуумом при температуре 20°С в течение 3 часов, сушке под вакуумом при температуре 40°С в течение 4 часов

5) заполняют инертным газом, контролируют содержание воды на уровне 3% и укупоривают.

2. Способ получения лиофилизованного препарата тетродотоксина по п.1, в котором указанный тетродотоксин имеет чистоту предпочтительно в пределах 98%~99,8%.

3. Препарат тетродотоксина для снятия абстинентного синдрома при зависимости от опиатов, получаемый лиофилизацией тетродотоксина, где массовое соотношение тетродотоксин:наполнитель, представляющий собой изотонический раствор хлорида натрия в количестве 1,0-30 мг/доза или маннит в количестве 1,0-30 мг/доза или их смесь, стабилизатор, представляющий собой декстран в количестве 0,5-5,0 мг/доза или трегалозу в количестве 0,5-60 мг/доза, составляет 1:(150-3000):(50-6000), полученный способом по п.1.

4. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание тетродотоксина составляет в пределах 0,1~20,0 мкг/доза.

5. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание тетродотоксина составляет предпочтительно в пределах 0,5~20,0 мкг/доза.

6. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание тетродотоксина составляет более предпочтительно в пределах 0,5~12,0 мкг/доза.

7. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание хлорида натрия в наполнителе составляет предпочтительно в пределах 5,0-30 мг/доза.

8. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание хлорида натрия в наполнителе составляет более предпочтительно в пределах 5,0-20 мг/доза.

9. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание маннита в наполнителе составляет предпочтительно в пределах 1,0~20 мг/доза.

10. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание маннита в наполнителе составляет более предпочтительно в пределах 3,0-10 мг/доза.

11. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание декстрана в стабилизаторе составляет предпочтительно в пределах 2,0~5,0 мг/доза.

12. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание декстрана в стабилизаторе составляет более предпочтительно в пределах 3,0~5,0 мг/доза.

13. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание трегалозы в стабилизаторе составляет предпочтительно в пределах 2-60 мг/доза.

14. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание трегалозы в стабилизаторе составляет более предпочтительно в пределах 10~60 мг/доза.

15. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание лимонной кислоты составляет в пределах 0,001-~0,080 мг/доза.

16. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание лимонной кислоты составляет предпочтительно в пределах 0,010~0,080 мг/доза.

17. Препарат тетродотоксина по п.3, где содержание лимонной кислоты составляет более предпочтительно в пределах 0,020~0,060 мг/доза.

18. Препарат тетродотоксина по любому из пп. 3-17, где в состав также входит лидокаина гидрохлорид.

19. Препарат тетродотоксина по любому из пп. 3-17, где в состав также входит инертный газ, такой как азот высокой очистки или диоксид углерода высокой очистки.

20. Препарат тетродотоксина по любому из пп. 3-17, вводимый инъекцией внутримышечно или подкожно.

21. Способ получения лиофилизованного препарата тетродотоксина, включающий следующие стадии:

1) растворяют 0,1-20 мкг/доза тетродотоксина и раствора лидокаина гидрохлорид с 0,1% раствором лимонной кислоты для регулирования рН в пределах 3,0-6,0 в воде для инъекций и фильтруют для удаления пирогена,

2) растворяют стабилизатор, представляющий собой декстран в количестве 0,5-5,0 мг/доза или трегалозу в количестве 0,5-60 мг/доза, и наполнитель, представляющий собой изотонический раствор хлорида натрия в количестве 1,0-30 мг/доза или маннит в количестве 1,0-30 мг/доза, в воде для инъекций, свободной от бактерий, добавляют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования рН в пределах 3,5-4,5, добавляют активированный уголь, выдерживают при температуре 60°С, перемешивая в течение более чем 30 минут и фильтруют для удаления пирогена и охлаждают до комнатной температуры,

3) равномерно смешивают полученные на стадиях 1 и 2 растворы, проводят ультрафильтрацию,

4) проводят лиофильную сушку, которая заключается в предварительном замораживании при температуре в пределах от -20°С до -40°С в течение 2-3 часов, сушке под вакуумом при пониженной температуре -10°С в течение 6-10 часов, сушке под вакуумом при температуре 10°С в течение 2-5 часов, сушке под вакуумом при температуре 20°С в течение 2-5 часов, сушке под вакуумом при температуре пределах 30-50°С в течение 6-10 часов,

5) заполняют инертным газом, контролируют содержание воды на уровне 3% и укупоривают.

22. Способ получения лиофилизованного препарата тетродотоксина по п.21, в котором растворяют 0,1-20 мкг/доза тетродотоксина и раствора лидокаина гидрохлорид с 0,1% раствором лимонной кислоты для регулирования рН предпочтительно в пределах 3,5-4,5.

23. Способ по п.21, где на стадии 2 используют активированный уголь в пределах 0,1-6,0 г/100 мл.

24. Способ по п.21, где на стадии 3 проводят фильтрацию при использовании 0,05 мкм-0,20 мкм субмикронной ультратонкой фильтрационной мембраны или заряженного ультратонкого фильтра.

25. Способ по п.21, где на стадии 3 предпочтительно температура предварительного замораживания составляет -35°С в течение 2,5 часов, температура основной сушки составляет -10°С в течение 8 часов, 10°С в течение 3 часов и 20°С в течение 3 часов; температура вторичной сушки составляет в пределах 40°С в течение 4 часов.

Описание изобретения к патенту

1. ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к лиофилизованному порошкообразному препарату ТТХ и способу его получения. В частности, настоящее изобретение относится к лиофилизованному препарату, включающему из стабилизатора и наполнителя с точно определенным количеством ТТХ в качестве основного активного ингредиента. Лиофилизованный порошкообразный препарат ТТХ и способ его получения могут быть использованы для снятия абстинентного синдрома при зависимости от опиатов, таких как лед и героин, и наркотиков амфетаминного типа с быстрым начальным эффектом привыкания и сильным воздействием. Он оказывает быстрое и сильное воздействие при избавлении от наркотической зависимости. Дополнительно, лиофилизованный препарат ТТХ стабилен и безопасен и оказывает слабое раздражающее воздействие на организм человека.

2. УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ, ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ ИЗОБРЕТЕНИЮ

Тетродотоксин представляет собой натуральный небелковый нейротоксин. Имеет следующую химическую структуру:

Химическое название: Октагидро-12-(гидроксиметил)-2-имино-5,9: 7,10а-диметано-10аН-[1,3] диоксоцино[6,5-d]пиримидин-4,7,10,11,12-пентол. Английское название tetrodotoxin (тетродотоксин) и аббревиатура ТТХ.

Исследования показывают, что ТТХ может быть использован для снятия абстинентного синдрома при зависимости от опиатов, таких как лед и героин, и наркотиков амфетаминного типа. Он также может быть использован для контроля чрезмерного привыкания к лекарственным средствам и снятия абстиненции и в то же самое время не приводит к зависимости после прекращения приема лекарственных средств.

Кристалл ТТХ сравнительно стабилен и по существу может сохранять качество в течение шести месяцев при температуре 40°C (см. Таблица 1). Однако в водном растворе тетродотоксин высокочувствителен к температуре и может легко разрушаться более быстро при более высокой температуре. При температуре 40°C нормальный раствор для инъекций тетродотоксина разрушается от содержания 99,20% до 65,57% после хранения в течение 30 дней, что является значительным разрушением, составляющим 33,63% (см. Таблица 2).

Таблица 1
Результаты теста на стабильность тетродотоксина при высокой температуре 40°С*
Время	0 месяцев	1 месяц	2 месяца	3 месяца	6 месяцев
Содержание (%)	100,4	99,16	99,90	100,68	99,52
Примеси	Пик содержания в контрольном растворе	Пик содержания в контрольном растворе	Пик содержания в контрольном растворе	Пик содержания в контрольном растворе	Пик содержания в контрольном растворе

Таблица 2
Результаты теста на стабильность тетродотоксина в кислом растворе при различных температурных условиях
Время	Содержание (%)			Примечание
	6°C	25°C	40°C	Растворитель представляет раствор уксусной кислоты при pH 4,05
День 0	99,2	99,20	99,20
День 5		97,88	91,58
День 10		97,54	86,30
День 30	96,99	93,88	69,57

Для нестабильных в водном растворе лекарственных средств используемым рутинным способом в этой области является лиофилизация для придания препарату для инъекции стабильности. Например, в CN 1835754 A описывается стабильный лиофилизованный порошкообразный тетродотоксин, где основу лекарственной формы выбирают из дисахарида, такого как лактоза, сахароза, мальтоза и целлобиоза, наряду с протеогликаном, включая полиглюкозу, декстран или его производные, включая стабилизаторы, такие как гидроксиэтиленкрахмал и гидроксипропилциклодекстрин, примененный в пределах 5-100 мг для каждой дозы. Дополнительно препарат также включает солюбилизатор, такой как лимонная кислота, винная кислота, яблочная кислота или лактобионовая кислота. Каждая доза составляет в пределах 0,00005-0,0005 мг. В CN 1835754 A указывается, что при применении в качестве наполнителя цитрата или маннита полученный лиофилизованный тетродотоксин нестабилен и концентрация тетродотоксина постепенно снижается в процессе хранения.

Таким образом, технический результат, обеспечиваемый данным изобретением, заключается в получении безопасных, оказывающих быстрое и сильное воздействие при избавлении от наркотической зависимости, и в то же самое время не приводящих к зависимости после прекращения приема лекарственных средств, стабильных и качественных продуктов для медицинского применения, оказывающих слабое раздражающее воздействие на организм человека, которые могут храниться в течение длительного периода времени для последующего клинического применения тетродотоксина.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ

Для получения стабильного тетродотоксина заявитель провел интенсивные исследования в области получения лиофилизованного порошкообразного препарата и технологии его получения. Результаты показывают, что основа, состоящая из наполнителя, стабилизатора тетродотоксина, солюбилизатора, и пределы рН осаждения раствора, технология замораживания, сублимации и сушки под вакуумом и контроль содержания влаги в тетродотоксине оказывают значительное воздействие на стабильность порошкообразного препарата, в частности абсорбцию влаги носителем, образующим основу порошкообразного препарата. В процессе длительного хранения вспомогательные материалы с высокой абсорбцией влаги постепенно повышают содержание влаги в препарате; а с повышением содержания влаги содержание тетродотоксина в препарате постепенно снижается.

Благодаря обширным экспериментальным исследованиям автор настоящего изобретения обнаружил, что использование выщелоченного хлорида натрия или маннита в качестве вспомогательных материалов, образующих основу лиофилизованного порошкообразного препарата, и использование декстрана 20 или трегалозы в качестве стабилизатора тетродотоксина при регулировании показателя рН в пределах 3,5-4,5 перед лиофильной сушкой позволяет получить лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина в виде белого и рыхлого слоя. Такая лекарственная форма препарата точно дозируется, белого цвета, имеет стабильное качество, безопасна и отвечает требованиям к инъекциям, используемым для введения в организм человека.

Следовательно, настоящее изобретение относится к лифилизованному порошкообразному препарату тетродотоксина для безопасного введения инъекцией в организм человека, где препарат содержит тетродотоксин, солюбилизатор, лиофилизованный наполнитель и стабилизатор. Чистота указанного тетродотоксина составляет более 96%, предпочтительно 98%~99,8%. Лиофилизованный наполнитель представляет собой хлорид натрия или маннит или их смесь. Стабилизатор представляет собой декстран или трегалозу или их смесь, а солюбилизатор представляет собой лимонную кислоту.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина предпочтительно имеет соотношение тетродотоксин: наполнитель:стабилизатор в пределах 1:150-3000:50-500 или 50-6000.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина имеет содержание тетродотоксина в пределах 0,1~20,0 мкг/доза, предпочтительно в пределах 0,5~20,0 мкг/доза и более предпочтительно в пределах 0,5~12,0 мкг/доза.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина имеет содержание хлорида натрия в наполнителе в пределах 1,0~30 мг/доза, предпочтительно в пределах 5,0~30 мг/доза и более предпочтительно в пределах 5,0~0 мг/доза.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина имеет содержание маннита в наполнителе в пределах 1,0~30 мг/доза, предпочтительно в пределах 1,0~20 мг/доза и более предпочтительно в пределах 3,0~10 мг/доза.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина имеет содержание декстрана в стабилизаторе в пределах 0,5~5,0 мг/доза, предпочтительно в пределах 2,0~5,0 мг/доза и более предпочтительно в пределах 3,0~5,0 мг/доза.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина имеет содержание трегалозы в стабилизаторе 0,5~60 мг/доза, предпочтительно в пределах 2,0~60 мг/доза и более предпочтительно в пределах 10~60 мг/доза.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина имеет содержание лимонной кислоты в пределах 0,001~0,080 мг/доза, предпочтительно в пределах 0,010~0,080 мг/доза и более предпочтительно в пределах 0,020~0,060 мг/доза.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина предпочтительно имеет функциональный модулятор, предпочтительно лидокаина гидрохлорид.

В настоящем изобретении лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина предпочтительно заполняют в среде инертного газа, такого как азот высокой очистки или диоксид углерода высокой очистки.

Предпочтительно лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина по настоящему изобретению предпочтительно вводят посредством внутримышечной или подкожной инъекции, при этом для растворения используют воду для инъекций, свободную от бактерий, количество используемой воды составляет в пределах 0,5~2,0 мл/доза.

Дополнительно настоящее изобретение также относится к способу получения лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина, включающему следующие стадии:

(1) Непосредственное растворение фиксированного объема тетродотоксина в растворе солюбилизатора, регулирование показателя pH в пределах 3,0~6,0, предпочтительно pH в пределах 3,5~4,5, и фильтрацию для удаления пирогена.

(2) Непосредственное растворение лиофилизованного наполнителя, стабилизатора и любого выбранного модулятора функций в воде для инъекций, свободной от бактерий, добавление активированного угля и перемешивание в течение 30 минут, затем фильтрование для удаления пирогена.

(3) Равномерное смешивание растворов, полученных на (1) и (2), фильтрование для удаления бактерий и вливание объема в пузырьки, лиофильная сушка под вакуумом, заполнение инертным газом, полное закупоривание, укупоривание с получением лиофилизованного порошкообразного препарата.

На стадии 1 способа по настоящему изобретению фильтрацию проводят предпочтительно ультрафильтрацией.

На стадии 2 способа по настоящему изобретению используемое количество активированного угля предпочтительно составляет в пределах 0,1~6,0 г/100 мл.

На стадии 3 способа по настоящему изобретению фильтрацию проводят при использовании субмикронных ультратонких мембран 0,05 мкм~0,20 мкм или заряженных ультратонких фильтрационных мембран.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Фигура 1 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием раствора для инъекций тетродотоксина при температуре 40°C на 0 день.

Фигура 2 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием раствора для инъекций тетродотоксина при температуре 40°C на 10 день.

Фигура 3 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава A1 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 0 день.

Фигура 4 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава A1 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 10 день.

Фигура 5 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава В1 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 0 день.

Фигура 6 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава В1 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°С на 10 день.

Фигура 7 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава С1 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 0 день.

Фигура 8 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава С1 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 10 день.

Фигура 9 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава D5 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 0 день.

Фигура 10 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава D5 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 10 день.

Фигура 11 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава Е5 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 0 день.

Фигура 12 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава Е5 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 10 день.

Фигура 13 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава F5 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 0 день.

Фигура 14 - ВЭЖХ с флуорисцентным детектированием рецептурного состава F5 лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C на 10 день.

ДЕТАЛЬНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ВОПЛОЩЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для определения содержания тетродотоксина в лиофилизованном порошкообразном препарате по настоящему изобретению используют высокоэффективную жидкостную хроматографию (Chinese Pharmacopoeia 2005 Editionm, Volume II, Appendix VII). Хроматография позволяет получить данные по содержанию тестируемого вещества, время удерживания пика образца раствора согласуется со временем удерживания пика контрольного раствора.

Хроматографию проводят при следующих условиях: используют связующий октил силан кремнезем в качестве фильтра и буферный раствор, содержащий 1-октан-сульфоновой кислоты натрий и фосфат в качестве мобильной фазы. Скорость тока составляет 0,3 мл/мин, длина волны при возбуждении составляет 365 нм и длина волны при эмиссии составляет 510 нм. Его постколонно-производный реагент представляет 4 моль/л раствора гидроксида натрия при скорости тока 0,2-0,5 мл/мин, температура в колонке для дериватива составляет 100°C~140°C. Число теоретических тарелок составляет не менее 2000 из расчета пика тетродотоксина.

Конкретный метод тестирования следующий: берут лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина (содержащий 10(мкг тетродотоксина) по настоящему изобретению и добавляют точно 2,0 мл воды для его растворения, точно отмеряют 20 мкл, вводят образец в готовый к работе хроматограф и регистрируют данные хроматографии с флуорисцентным детектированием. Также получают подходящий контрольный объем тетродотоксина. Для детектирования используют тот же способ. Расчет содержания тетродотоксина в каждой дозе/флаконе проводят, используя площадь пика внешнего стандарта. Тетродотоксин соответствует требованиям к лиофилизованным препаратам, если его содержание составляет 90%~110% от его меченного содержания.

Тестирование примесей: берут лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина по настоящему изобретению, добавляют воду с получением раствора образца с содержанием 1 мл 20 мкг тетродотоксина. Точно отмеряют 1,0 мл и помещают в 25 мл мерную колбу, доводят до метки, встряхивают для равномерного перемешивания и используют в качестве контрольного раствора. Точно отмеряют 20 мкл каждого образца раствора и контрольного раствора и переливают соответственно в жидкостный хроматограф, регистрируют данные хроматографии с флуоресцентным детектированием до момента, когда время удерживания основного пика содержания удваивается. Образец раствора отвечает медицинским требованиям, если сумма площади пика примесей не превышает площадь пика контрольного раствора в хроматографе.

В настоящем изобретении его авторы используют высокоэффективную жидкостную хроматографию в качестве флуоресцентного метода определения содержания тетродотоксина и примесей. По сравнению с обычной высокоэффективной жидкостной хроматографией с ультрафиолетовым детектированием ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием, более чувствительным и точным методом, следовательно, он лучше определяет стабильность продуктов тетродотоксина. Например, для тетродотоксина самый нижний порог детектирования при использовании ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием составляет 8,14 нг, а при использовании ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием нижний предел составляет 0,40 нг; что означает, что нижний предел флуоресцентного детектирования в 20 раз ниже, чем ультрафиолетового. Однако для препарата тетродотоксина предел количественного определения для ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием составляет 20,26 нг, в то время как для ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием оно составляет 0,81 нг, другими словами, установленное количество по пределу количественного определения для флуоресцентного метода в 25 раз ниже, чем для ультрафиолетового метода.

Как правило, норма продукта для инъекции тетродотоксина составляет 10 мг/флакон. При растворении образца концентрация для детектирования составляет в пределах 5 мкг/мл-20 мкг/мл. Если количество образца составляет 20 мкл и образец содержит 1% примесей, то содержание примесей составляет только 1-4 нг; это ниже пределов детектирования при использовании жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Если образец содержит 2% примесей, содержание примесей составляет только в пределах 2-8 нг; что также ниже предела детектирования жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. Следовательно, ясно, что, когда продукт имеет менее чем 5% примесей, возможно, что пределы детектирования при жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием в результате могут привести к неточному детектированию. Напротив, пределы детектирования для жидкостной хроматографии с флуоресцентным детектированием составляют 0,40 нг, и это полностью отвечает требованиям к детектированию.

При использовании указанных выше условий тестирования заявитель осуществляет поиск различных факторов, которые могут оказывать воздействие на стабильность лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина.

Скрининг наполнителя и стабилизатора лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина

При клиническом применении тетродотоксин измеряют в миллиграммах, следовательно, необходимо добавлять наполнитель в качестве вспомогательного материала для получения основы лиофилизованного порошкообразного препарата. При этом скрининг стабилизатора также имеет огромное значение, поскольку он необходим для стабильности порошкообразного препарата тетродотоксина. Путем многочисленных экспериментов заявитель обнаружил, что наилучшие результаты могут быть получены при использовании хлорида натрия и/или маннита в качестве вспомогательного наполнителя для лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина и при выборе в качестве стабилизатора декстрана 20 или трегалозы. В Таблицах 3 и 4, приведенных ниже, приведены суммированные результаты тестирования для рецептурного состава лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина при температуре 40°C при использовании наполнителя, содержащего хлорид натрия и/или маннит и стабилизатора, содержащего декстран 20 или трегалозу.

Таблица 3
Рецептурный состав лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина
Рецептурный состав	1	2	3	4	5	6
Тетродотоксин (мкг)	10	10	10	10	10	10
Вспомогательный наполнитель	Хлорид натрия (9 мг)	Хлорид натрия (9 мг)	Маннит (6 мг)	Маннит (10 мг)	Хлорид натрия (9 мг) Маннит (6 мг)	Хлорид натрия (9 мг)
Стабилизатор	Декстран 20 (4 мг)		Декстран 20 (4 мг)		Декстран 20 (4 мг)	Трегалоза (4 мг)

По внешнему виду продукт, использующий маннит в качестве наполнителя, выглядит хорошо с небольшой абсорбцией влаги. Декстран обладает значительной протективной функцией по отношению к лиофилизованному порошкообразному препарату тетродотоксина, но у него сильная абсорбция влаги. Для контроля содержания влаги в продукте лиофилизованного порошкообразного препарата с плотной лиофилизованной основой содержание декстрана 20 в препарате по настоящему изобретению составляет 4 мг/дозу и маннита 6 мг/дозу. С другой стороны, если изотонический раствор хлорид натрия используют в качестве вспомогательного материала наполнителя для получения основы, а декстран или трегалозу используют в качестве стабилизатора для получения рецептурного состава, содержание воды в продукте низкое и внешне он выглядит, как плотный сгусток. В конкретных вариантах воплощения настоящего изобретения добавление воды приводит к быстрому растворению. Проводят тест на стабильность, отвечающий медицинским требованиям, при высокой температуре 40°C в течение 10 дней.

Выбор растворителя и показатель pH рецептурного состава.

Тетродотоксин представляет собой небелковый морской нейротоксин с относительной молекулярной массой 319,27 и часто существует в форме амфипатической молекулы. Гуанидил проявляет функцию основания в структуре в соответствии с его активностью. Он не растворяется в воде или органическом растворителе. Он легко дегидратируется или разлагается при воздействии сильной кислотой или сильной щелочью. Он относительно стабилен в растворе слабой кислоты, следовательно, для лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина должен быть выбран подходящий кислотный растворитель в качестве солюбилизатора. Заявитель ссылается на Chinese Pharmacopoeia 2005 edition, на Handbook of Pharmaceutical Excipients and Chinese Pharmaceutical Necessities, он проанализировал и выбрал часто используемые материалы слабой кислоты для инъекций, такие как лимонная кислота, уксусная кислота, аскорбиновая кислота, дигидрогенный фосфат натрия. Исходя из приоритетной выборки Guiding Principle for Chemical и Pharmaceutical Preparation Research Technology уксусная кислота является летучей кислотой, и ее летучесть теряется в процессе лиофильной сушки. Это не способствует контролю pH при растворении порошкообразного препарата при добавлении воды. Химические и физические свойства аскорбиновой кислоты недостаточно стабильны при воздействии света и комнатной температуры. Дигидрогенный фосфат натрия представляет собой кислую соль со слабыми кислыми свойствамит, его показатель pH составляет только 4,56 при 5% концентрации. Его pH регулируют в узких пределах и он не подходит для кислого растворителя в лиофилизованной порошкообразном тетродотоксине. Лимонная кислота нелетучая, имеет слабокислые свойства с относительно широкими пределами регулирования pH. Далее при проведении анализов и сравнении авторы настоящего изобретения выбрали лимонную кислоту в качестве солюбилизатора в лиофилизованном порошкообразном тетродотоксине по настоящему изобретению. Для лиофилизованного порошкообразного препарата по настоящему изобретению предпочтительно использовать лимонную кислоту в качестве солюбилизатора в пределах от 0,001 мг до 0,080 мг на дозу.

Показатель pH раствора для инъекций является одним из важнейших факторов, близко связанных со стабильностью эффективного содержания в лекарственном средстве. Заявитель использует установленный рецептурный состав для лиофилизованного порошкообразного препарата и использует 0,1% лимонной кислоты для регулирования различных показателей pH. После лиофильной сушки порошкообразные продукты подвергают исследованию на внешний вид, растворение, показатель pH и стабильность. Основной тест на стабильность: выдерживают продукт при температуре 40°C и исследуют образцы на 0, 5 и 10 дни, а для тестирования используют жидкостную хроматографию с флуорисцентным детектированием. Содержание и примеси тетродотоксина рассчитывают при использовании метода нормировки площадей. Результаты эксперимента приведены в Таблице 5.

Из приведенных выше результатов экспериментов видно, что показатель pH раствора порошкообразного препарата тетродотоксина оказывает значительное воздействие на стабильность тетродотоксина. При температуре 40°C, показателе pH более чем 5 и времени выдержки 10 дней площадь основного пика разрушенных примесей из тетродотоксина больше, чем у контрольного раствора, и появляется новый пик примесей.

После повторного проведения экспериментов заявитель установил, что предпочтительный показатель pH лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина составляет в пределах 3,5-4,5 и наилучший показатель pH составляет около 4,0.

Воздействие различного содержания воды на стабильность лиофилизованного порошкообразного продукта тетродотоксина

Заявитель провел исследование воздействия, оказываемого различным содержанием воды, на стабильность лиофилизованного порошкообразного продукта тетродотоксина. Результаты приведены в Таблице 6.

Таблица 6
Результаты теста на воздействие, оказываемое различным содержанием воды, на стабильность лиофилизованного порошкообразного продукта тетродотоксина при температуре 40°C
Номер партии		1	2	3
Содержание воды в продукте (%)		8,56	5,23	2,50
Предел содержания (%)		90-100	90-100	90-100
0 день	Содержание (%)	100	100	100
	Примеси	<Площадь основного пика контрольного раствора	<Площадь основного пика контрольного раствора	<Площадь основного пика контрольного раствора
5 день	Содержание (%)	97,65	98,43	99,21
	Примеси	>Площадь основного пика контрольного раствора	<Площадь основного пика контрольного раствора	<Площадь основного пика контрольного раствора
10 день	Содержание (%)	95,28	97,89	98,64
	Примеси	>Площадь основного пика контрольного раствора	>Площадь основного пика контрольного раствора	<Площадь основного пика контрольного раствора
	Внешний вид

Эксперимент показывает, что при температуре 40°C по внешнему виду порошок сжимается и его стабильность становится относительно плохой при содержании воды в лиофилизованной порошкообразном продукте более чем 5%. При меньшем содержании воды в лиофилизованном порошкообразном продукте тетродотоксин продукта более стабилен. В настоящем изобретении содержание воды в лиофилизованном порошкообразном препарате тетродотоксина предпочтительно следует контролировать на уровне 3%.

Выбор технологии лиофильной сушки

Технология лиофильной сушки порошкообразного препарата тетродотоксина, в первую очередь, включает предварительное замораживание, основную сушку и вторичную сушку. Авторы настоящего изобретения получили пять лиофилизованных способов для эксперимента (приведено в Таблице 7) согласно технологии лиофильной сушки с использованием скрининга Эвтектической точки, наполнителя и стабилизатора в рецептурных составах продуктов. Проводя сравнительный анализ результатов тестирования, авторы настоящего изобретения определили контрольные параметры для наилучшей технологии лиофильной сушки для этого продукта (приведено в Таблице 8).

Таблица 7
Выбор технологии лиофильной сушки лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина
Раствор	Технология
Способ 1	Предварительное замораживание при температуре -35°C в течение 2,5 часов, сушка под вакуумом при -10°C в течение 15 часов, сушка под вакуумом при температуре 40°C в течение 4 часов
Способ 2	Предварительное замораживание при температуре -35°C в течение 2,5 часов, сушка под вакуумом при пониженной температуре -10°°C в течение 8 часов, сушка под вакуумом при температуре 10°C в течение 3 часов, сушка под вакуумом при температуре 20°C в течение 3 часов, сушка под вакуумом при температуре 30°C в течение 4 часов
Способ 3	Предварительное замораживание при температуре -35°C в течение 2,5 часов, сушка под вакуумом при пониженной температуре -10°C в течение 8 часов, сушка под вакуумом при температуре 10°C в течение 3 часов, сушка под вакуумом при температуре 20°C в течение 3 часов, сушка под вакуумом при температуре 35°C в течение 4 часов
Способ 4	Предварительное замораживание при температуре -35°C в течение 2,5 часов, сушка под вакуумом при пониженной температуре -10°C в течение 8 часов, сушка под вакуумом при температуре 10°C в течение 3 часов, сушка под вакуумом при температуре 20°C в течение 3 часов, сушка под вакуумом при температуре 40°C в течение 4 часов
Способ 5	Предварительное замораживание при температуре -35°C в течение 2,5 часов, сушка под вакуумом при пониженной температуре -10°C в течение 8 часов, сушка под вакуумом при температуре 10°C в течение 3 часов, сушка под вакуумом при температуре 20°C в течение 3 часов, сушка под вакуумом при температуре 40°C в течение 410 часов

Таблица 8
Результаты оценки технологии лиофильной сушки лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина
Раствор	Результаты оценки
Способ 1	Внешний вид основы плохой, содержание тетродотоксина в продукте значительно снижено.
Способ 2	Внешний вид основы продукта соответствует требованиям, высокое содержание воды, содержание тетродотоксина в продукте снижено.
Способ 3	Внешний вид продукта сравнительно хороший, содержание воды немного высокое, содержание тетродотоксина в продукте немного понижено.
Способ 4	Внешний вид продукта сравнительно хороший, содержание воды <3,0%, технологический процесс не снижает содержание тетродотоксина в продукте.
Способ 5	Внешний вид продукта сравнительно хороший, содержание воды <2,0%, технологический процесс не снижает содержание тетродотоксина в продукте.

При проведении эксперимента было установлено, что при получении по способу 1 продукта с предварительным замораживанием до температуры -10°С, сушкой под вакуумом в течение 15 часов, и непосредственным повышением температуры сушки до 40°С тетродотоксин в продукте значительно снижается. Это показывает, что последовательность и условия технологии лиофильной сушки оказывают значительное воздействие на качество лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина. Способ 4 применяет оптимальную сушку при температуре, градиентной на стадии основной сушки до стадии вторичной сушки при 40°С, и получают низкое содержание влаги в продукте. Технологический процесс лиофильной сушки не оказывает воздействие на содержание теродотоксина в продукте. Следовательно, авторы настоящего изобретения выбрали способ 4 как предпочтительную технологию лиофильной сушки для этого продукта.

Конкретные варианты воплощения изобретения

Вариант воплощения изобретения 1: Лиофилизованный порошкообразный препарат тетродотоксина включает в качестве наполнителя хлорид натрия, в качестве стабилизатора - декстран 20 и в качестве солюбилизатора - лимонную кислоту.

Приведены следующие композиции для получения лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина:

Композиция	Тетродотоксин (чистота >98%) (мкг/доза)	Хлорид натрия (мг/доза)	Декстран 20 (мг/доза)	Перед лиофильной сушкой применяют лимонную кислоту для регулирования показателя pH раствора
Рецептурный состав A1	10	9	4,0	4,0
Рецептурный состав A2	5	9	4,0	3.5
Рецептурный состав A3	10	9	4,0	3.8
Рецептурный состав A4	15	9	4,5	4,0
Рецептурный состав A5	8	9	4,5	4,2
Рецептурный состав A6	20	9	5,0	3,5

Способ получения: берут количество тетродотоксина по рецептурному составу и используют 10 мл 0,1% раствора лимонной кислоты для его растворения, добавляют количество хлорида натрия по рецептурному составу и добавляют воду для инъекций для разведения до около 250 мл. Используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, фильтруют с применением ультрафильтрации для удаления пирогена и получают раствор группы A. Также берут количество декстрана 20 по рецептурному составу, добавляют 200 мл воды для инъекций для его растворения, используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, затем добавляют в пределах 0,1%~1,0% соотношения масса:объем активированного угля и выдерживают при температуре 60°C, перемешивая при этом в течение 30 минут; затем фильтруют для удаления угля и пирогена и охлаждают до комнатной температуры с получением раствора группы B. Равномерно смешивая указанные выше растворы групп A и B, используют воду для инъекций для получения объема 500 мл, затем используют 0,22 мкм ультратонкую мембрану для фильтрации, берут образцы для проверки показателя pH, прозрачности и содержания для гарантии соответствия и проводят стерильную расфасовку. Затем проводят предварительное замораживание до температуры -35°C в течение 2~6 часов, проводят основную сушку при температуре -10°C~20°C в течение 10~20 часов и конечную сушку при температуре 20°C~50°C в течение 6~10 часов с получением продукта. По внешнему виду продукт представляет собой коркообразный белый слой.

С указанным выше лиофилизованным порошкообразным препаратом тетродотоксина вы можете также выбрать любой гидрохлорид лидокаина с функцией модулятора в количестве 3,0 мг/доза.

Вариант воплощения изобретения 2: Лиофилизованный порошкообразный препарат тетродоксина включает в качестве наполнителя маннит, в качестве стабилизатора декстран 20 и в качестве солюлизатора лимонную кислоту.

Приведены следующие композиции рецептурного состава для лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина:

Композиция	Тетродотоксин (чистота >99%) (мкг/доза)	Хлорид натрия (мг/доза)	Декстран 20 (мг/доза)	Перед лиофильной сушкой применяют лимонную кислоту для регулирования показателя рН раствора
Рецептурный состав B1	10	6	4,5	3,8
Рецептурный состав B2	20	15	5	3,5
Рецептурный состав B3	5	6	5	3,0
Рецептурный состав B4	3	6	4	4,0
Рецептурный состав B5	15	6	5	4,2
Рецептурный состав B6	12	10	5	4,5

Способ получения: берут количество тетродотоксина по рецептурному составу и используют 10 мл 0,1% раствора лимонной кислоты для его растворения, добавляют количество хлорида натрия по рецептурному составу и добавляют воду для инъекций для разведения до около 250 мл. Используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования конкретного показателя pH, фильтруют с применением фильтрационной мембраны для удаления пирогена и получают раствор группы A. Также берут количество декстрана 20 и маннит по рецептурному составу, добавляют 200 мл воды для инъекций для его растворения, используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, затем добавляют в пределах 0,2% соотношения масса:объем активированного угля и выдерживают при температуре 60°C, перемешивая при этом в течение 30 минут; затем фильтруют для удаления угля и пирогена и охлаждают до комнатной температуры с получением раствора группы B. Равномерно смешивая указанные выше растворы групп A и B, используют воду для инъекций для получения объема 500 мл, затем используют 0,22 мкм ультратонкую мембрану для фильтрации, берут образцы для проверки показателя pH, прозрачности и содержания для гарантии соответствия и проводят стерильную расфасовку. Затем проводят предварительное замораживание до температуры -35°C в течение 2~6 часов, проводят основную сушку при температуре -10°C~20°C в течение 10~20 часов и конечную сушку при температуре 20°C~0°C в течение 6~10 часов с получением продукта. По внешнему виду продукт представляет собой коркообразный белый слой.

С указанным выше лиофилизованным порошкообразным препаратом тетродотоксина вы можете также выбрать любой гидрохлорид лидокаина с функцией модулятора в количестве 3,0 мг/доза.

Вариант воплощения изобретения 3: Лиофилизованный порошкообразный препарат тетродоксина включает в качестве наполнителя хлорид натрия, в качестве стабилизатора трегалозу и в качестве солюбилизатора лимонную кислоту.

Приведены следующие композиции рецептурного состава для лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина:

Композиция	Тетродотоксин (чистота >99%) (мкг/доза)	Хлорид натрия (мг/доза)	Декстран 20 (мг/доза)	Перед лиофильной сушкой применяют лимонную кислоту для регулирования показателя pH раствора
Рецептурный состав C1	10	9	10	4,0
Рецептурный состав C2	15	9	10	4,2
Рецептурный состав C3	20	9	20	4,5
Рецептурный состав C4	8	9	30	3,8
Рецептурный состав C5	5	9	15	3,5
Рецептурный состав C6	3	9	10	4,0

Способ получения: берут количество тетродотоксина по рецептурному составу и используют 20 мл 0,1% раствора лимонной кислоты для его растворения, добавляют количество хлорида натрия и трегалозу по рецептурному составу и добавляют воду для инъекций для разведения до около 450 мл. Используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, фильтруют с применением фильтрационной мембраны для удаления пирогена и используют воду для инъекций для получения 500 мл, затем используют 0,22 мкм ультратонкую мембрану для фильтрации, берут образцы для проверки показателя pH, прозрачности и содержания для гарантии соответствия и проводят стерильную расфасовку. Затем проводят предварительное замораживание до температуры -35°C в течение 2~6 часов, проводят основную сушку при температуре -10°C~20°C в течение 10~20 часов и конечную сушку при температуре 20°C~0°C в течение 6~10 часов с получением продукта. По внешнему виду продукт представляет собой коркообразный белый слой.

С указанным выше лиофилизованным порошкообразным препаратом тетродотоксина можно также выбрать любой гидрохлорид лидокаина с функцией модулятора в количестве 3,0 мг/доза.

Вариант воплощения изобретения 4: Лиофилизованный порошкообразный препарат тетродоксина включает в качестве наполнителя маннит, в качестве стабилизатора трегалозу и в качестве солюбилизатора лимонную кислоту.

Приведены следующие композиции рецептурного состава для лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина:

Композиция	Тетродотоксин (чистота >99%) (мкг/доза)	Маннит (мг/доза)			Трегалоза (мг/доза)	Перед лиофильной сушкой применяют лимонную кислоту для регулирования показателя pH раствора
Рецептурный состав D1	3	5			5	3,8
Рецептурный	5	5			10	4,0
состав D2
Рецептурный состав D3	8		5	20		4,0
Рецептурный состав D4	15		5	40		3,5
Рецептурный состав D5	10		5	30		4,0
Рецептурный состав D6	20		5	60		4,5

Способ получения: берут количество тетродотоксина по рецептурному составу и используют 20 мл 0,1% раствора лимонной кислоты для его растворения, добавляют количество трегалозы по рецептурному составу и добавляют воду для инъекций для разведения до около 300 мл. Используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, фильтруют с применением ультрафильтрации для удаления пирогена и получают раствор группы A. Также берут количество маннита по рецептурному составу, добавляют 150 мл воды для инъекций для его растворения, используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, затем добавляют в пределах 0,1%~1,0% соотношения масса:объем активированного угля и выдерживают при температуре 60°C, перемешивая при этом в течение 30 минут; затем фильтруют для удаления угля и пирогена и охлаждают до комнатной температуры с получением раствора группы B. Равномерно смешивая растворы групп A и B, используют воду для инъекций для получения объема 500 мл, затем используют 0,22 мкм ультратонкую мембрану для фильтрации, берут образцы для проверки показателя pH, прозрачности и содержания для гарантии соответствия и проводят стерильную расфасовку. Затем проводят предварительное замораживание до температуры -35°~ в течение 2~6 часов, проводят основную сушку при температуре -10°C~20°C в течение 10~20 часов и конечную сушку при температуре 20°C~50°C в течение 6~10 часов с получением продукта. По внешнему виду продукт представляет собой коркообразный белый слой.

С указанным выше лиофилизованным порошкообразным препаратом тетродотоксина можно также выбрать любой гидрохлорид лидокаина с функцией модулятора в количестве 3,0 мг/доза.

Вариант воплощения изобретения 5: Лиофилизованный порошкообразный препарат тетродоксина включает в качестве наполнителя маннит и хлорид натрия, в качестве стабилизатора трегалозу и в качестве солюбилизатора лимонную кислоту.

Приведены следующие композиции рецептурного состава для лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина:

Композиция	Тетродотоксин (чистота >99%) (мкг/доза)	Маннит (мг/доза)	Хлорид натрия (мг/доза)	Трегалоза (мг/доза)	Перед лиофильной сушкой применяют лимонную кислоту для регулирования показателя pH раствора
Рецептурный состав E1	3	5	9	5	3,5
Рецептурный состав E2	5	5	9	10	4,0
Рецептурный состав E3	8	5	9	15	3,8
Рецептурный состав E4	15	5	9	30	4,0
Рецептурный состав E5	10	5	9	20	4,0
Рецептурный состав E6	20	5	9	40	4,5

Способ получения: берут количество тетродотоксина по рецептурному составу и используют 20 мл 0,1% раствора лимонной кислоты для его растворения, добавляют количество хлорида натрия и трегалозы по рецептурному составу и добавляют воду для инъекций для разведения до около 300 мл. Используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, фильтруют с применением ультрафильтрации для удаления пирогена и получают раствор группы A. Также берут количество маннита по рецептурному составу, добавляют 150 мл воды для инъекций для его растворения, используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, затем добавляют в пределах 0,1%~1,0% соотношения масса:объем активированного угля и выдерживают при температуре 60°C, перемешивая при этом в течение 30 минут; затем фильтруют для удаления угля и пирогена и охлаждают до комнатной температуры с получением раствора группы В. Равномерно смешивая растворы групп A и B, используют воду для инъекций для получения объема 500 мл, затем используют 0,22 мкм ультратонкую мембрану для фильтрации, берут образцы для проверки показателя pH, прозрачности и содержания для гарантии соответствия и проводят стерильную расфасовку. Затем проводят предварительное замораживание до температуры -35°C в течение 2~6 часов, проводят основную сушку при температуре -10°C~20°C в течение 10~20 часов и конечную сушку при температуре 20°C~50°C в течение 6~10 часов с получением продукта. По внешнему виду продукт представляет собой коркообразный белый слой.

С указанным выше лиофилизованным порошкообразным препаратом тетродотоксина можно также выбрать любой гидрохлорид лидокаина с функцией модулятора в количестве 3,0 мг/доза.

Вариант воплощения изобретения 6: Лиофилизованный порошкообразный препарат тетродоксина включает в качестве наполнителя маннит и хлорид натрия, в качестве стабилизатора декстран 20 и в качестве солюбилизатора лимонную кислоту.

Приведены следующие композиции рецептурного состава для лиофилизованного порошкообразного препарата тетродотоксина:

Композиция	Тетродотоксин (чистота >99%) (мкг/доза)	Маннит (мг/доза)	Хлорид натрия (мг/доза)	Декстран 20 (мг/доза)	Перед лиофильной сушкой применяют лимонную кислоту для регулирования показателя pH раствора
Рецептурный состав F1	3	3	9	4	3,5
Рецептурный состав F2	5	3	9	4	3,5
Рецептурный состав F3	10	3	9	4	4,0
Рецептурный состав F4	15	3	9	5	4,2
Рецептурный состав F5	10	3	9	4,5	4,0
Рецептурный состав F6	20	3	9	5	4,5

Способ получения: берут количество тетродотоксина по рецептурному составу и используют 20 мл 0,1% раствора лимонной кислоты для его растворения, добавляют количество хлорида натрия и маннита по рецептурному составу и добавляют воду для инъекций для разведения до около 300 мл. Используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, фильтруют с применением ультрафильтрации для удаления пирогена и получают раствор группы A. Также берут количество декстрана 20 по рецептурному составу, добавляют 150 мл воды для инъекций для его растворения, используют 0,1% раствор лимонной кислоты для регулирования до конкретного показателя pH, затем добавляют в пределах 0,1%~1,0% соотношения масса: объем активированного угля и выдерживают при температуре 60°C, перемешивая при этом в течение 30 минут; затем фильтруют для удаления угля и пирогена и охлаждают до комнатной температуры с получением раствора группы В. Равномерно смешивая растворы групп A и B, используют воду для инъекций для получения объема 500 мл, затем используют 0,22 мкм ультратонкую мембрану для фильтрации, берут образцы для проверки показателя pH, прозрачности и содержания для гарантии соответствия и проводят стерильную расфасовку. Затем проводят предварительное замораживание до температуры -35°C в течение 2~6 часов, проводят основную сушку при температуре -10°C~20°C в течение 10~20 часов и конечную сушку при температуре 20°C~50°C в течение 6~10 часов с получением продукта. По внешнему виду продукт представляет собой коркообразный белый слой.

С указанным выше лиофилизованным порошкообразным препаратом тетродотоксина можно также выбрать любой гидрохлорид лидокаина с функцией модулятора в количестве 3,0 мг/доза.

Вариант воплощения изобретения 7: Тест на стабильность.

Берут лиофилизованный порошкообразный препарат TTX по указанному выше варианту воплощения настоящего изобретения и проводят тест на стабильность при температуре 40°C в течение 10 дней. При проведении теста проводят следующие конкретные операции.

Помещают различные лиофилизованные продукты в экспериментальную камеру при температуре 40±2°C и относительной влажности 75%±5% для тестирования стабильности лекарственного средства. Продукты удаляют из камеры через 10 дней и проводят ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием. Изменения в чистоте TTX указывают на стабильность препарата.

В указанном выше тесте на стабильность лиофилизованный порошкообразный препарат TTX по настоящему изобретению демонстрирует довольно хорошую стабильность. Приведены следующие результаты тестов предпочтительных рецептурных составов.

Таблица 9: Результаты теста на стабильность предпочтительного рецептурного состава по настоящему изобретению лиофилизованного порошкообразного препарата TTX при температуре 40°C в течение 10 дней.

Рецептурный состав	Внешний вид	0 день		10 день
		Чистота (%)	Связанные материалы	Чистота (%)	Связанные материалы
A1	Коркообразный белый слой	99,20	< Площадь основного пика контроля	98,56	< Площадь основного пика контроля
В1	Коркообразный белый слой	99,20	<Площадь основного пика контроля	98,71	<Площадь основного пика контроля
С1	Коркообразный белый слой	99,20	<Площадь основного пика контроля	99,00	<Площадь основного пика контроля
D5	Коркообразный белый слой	99,20	<Площадь основного пика контроля	99,06	<Площадь основного пика контроля
Е5	Коркообразный белый слой	99,20	<Площадь основного пика контроля	99,10	<Площадь основного пика контроля
F5	Коркообразный белый слой	99,20	<Площадь основного пика контроля	98,63	<Площадь основного пика контроля

Применение вариантов воплощения изобретения

Всего 80 лиц, страдающих наркозависимостью, привыкших к употреблению наркотиков, применяют препарат по настоящему изобретению для лечения абстиненции: 49 мужчин и 31 женщина, самому старшему - 41 год и самому молодому - 18 лет. Самый длительный период потребления наркотиков составляет 13 лет, а самый короткий период - 2 года с самой большой дневной дозой потребления наркотиков в пределах 2~3 г и самой маленькой дневной дозой потребления - 0,1 г. Типы употребляемых наркотиков относятся к героину и к героину с седативными и снотворными препаратами, пути введения включают вдыхание при горении, внутримышечные или подкожные инъекции героина. Все 80 пациентов имеют подтвержденные DSM-III-R психические расстройства, вызванные веществами, активирующими психику, - стандартный диагноз при зависимости от опиатов и положительный тест на морфины в моче без каких-либо других серьезных телесных заболеваний. До начала лечения абстиненции при наркотической зависимости были выбраны только наркоманы с тяжелой формой зависимости. Лекарственная дозировка этого препарата составляет в пределах 10 мкг-20 мкг в день в течение 3~7 дней.

Симптомы абстиненции пациентов с опиатной зависимостью, вызванные прекращением приема наркотиков, могут быть различными. Пациентам соответственно вводят инъекции препарата по настоящему изобретению в соответствии с серьезностью формы наркотической зависимости и степенью развития симптомов абстиненции. Статистика показывает, что при первом приеме лекарственного средства 95% пациентов отмечают отсутствие симптомов абстиненции в течение 0,5~3 часов и пациенты остаются рассудительными и не испытывают боли. Симптомы абстиненции при первом приеме могут исчезнуть на ~6 часов, а при повторном появлении они значительно мягче, для пациентов с длительной формой наркозависимости и принимающих наркотики путем внутривенных инъекций авторы настоящего изобретения предлагают делать двухразовую инъекцию этого препарата в течение 24 часов. У всех пациентов легко прошел самый сильный период абстиненции и пациенты оставались рассудительными и не испытывали боли. При избавлении от симптомов абстиненции состояние пациентов оценивается как хорошее, у них хороший аппетит и быстро восстанавливаются жизненные функции организма. Как правило, нет необходимости в дополнительном лечении после 3~6 раз приема лекарственного средства. У всех пациентов не наблюдалось побочных эффектов или дискомфорта.

Типичные варианты воплощения изобретения

Пациент E. - мужчина наркозависим в течение 10 лет со средней дневной дозой 1,0 г наркотика типа героина, принимаемого главным образом путем внутримышечной или внутривенной инъекции. Пациент перестал принимать наркотики и находился на добровольном лечении. В 19:00 того же дня появились симптомы абстиненции и в 21:00 симптомы стали очень серьезными с выделениями из носа, слезотечением, зевотой, болями в мышцах и костях, дрожью, болью в области живота, диареей, тошнотой, рвотой, появлением гусиной кожи, подъемом волос на теле и судорогой тела и тому подобным. Сразу же после внутримышечной инъекции препарата по настоящему изобретению симптомы абстиненции достигли "++"~"+++". Спустя 0,5 часов симптомы абстиненции в значительной степени контролируются, и спустя 2,5 часа пациент может спать без боли. Спустя около 10 часов симптомы абстиненции повторяются, но значительно смягчены. В 9:30 следующего дня пациенту снова делается инъекция препарата и после инъекции пациент чувствует себя хорошо и не испытывает какого-либо дискомфорта. Через около 12 часов пациент опять испытывает симптомы абстиненции, в 21:00 пациенту делают инъекцию препаратом по настоящему изобретению, пациент чувствует себя достаточно хорошо и остается спокойным всю ночь. Далее пациент получает инъекцию препарата по настоящему изобретению каждый день до момента, когда он чувствует значительное улучшение, выражающееся в отсутствии диареи, восстановлении аппетита и нормальном стуле. На 5-й день симптомы абстиненции не появились и пациент не испытывал никакого дискомфорта. Процесс лечения длился 5 дней с введением лекарственного средства по настоящему изобретению всего 6 раз.