фармацевтический состав, обладающий противотуберкулезной активностью

Формула изобретения

1. Комбинированный фармацевтический состав, содержащий в качестве действующих веществ противотуберкулезные средства изониазид и этамбутола гидрохлорид, отличающийся тем, что вспомогательным веществом является пектин, снижающий токсичность композиции, и обеспечивает пролонгированный эффект лекарственных веществ, входящих в него в следующих соотношениях, г:

Изониазида	0,30
Этамбутола гидрохлорида	0,30
Пектина	0,30

2. Комбинированный фармацевтический состав, обладающий противотуберкулезной активностью, по п.1, отличающийся тем, что представляет собой гранулы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и касается фармацевтического состава, обладающего противотуберкулезной активностью, и пригодно для лечения туберкулеза.

Повсеместное ухудшение экологической обстановки и снижение социального благосостояния населения в России привело в последние 10-15 лет к росту заболеваемости туберкулезом, которая в отдельных районах начинает принимать характер эпидемии.

Основными химиотерапевтическими средствами для лечения различных форм туберкулеза являются производные изоникотиновой кислоты, прежде всего изониазид, а также лекарственные препараты, различные по химической структуре и механизмам действия, например этамбутола гидрохлорид, обладающий высокой противотуберкулезной активностью (Справочник. Видаль. Лекарственные препараты в России. Изд. 12-е переработанное, исправленное и дополненное. Астра Фарм Сервис, 2006 г. стр.1497, 1554). Изониазид по своей бактериостатической активности до сих пор остается основным препаратом для лечения туберкулеза. Однако в настоящее время отмечается, что особенностью лечения туберкулеза является лекарственная устойчивость M.tuberculita. В этом случае назначают одновременный прием нескольких туберкулостатических лекарственных средств различных химических групп и механизмов действия. Для обеспечения комфортности лечения больных целесообразно создание комплексных лекарственных средств.

Для достижения стойкого лечебного эффекта основной курс химиотерапии при различных формах туберкулеза длителен и составляет от 6 до 12 месяцев; профилактические курсы проводят 2 раза в год, и их продолжительность составляет 2-3 месяца (А.А.Визель, М.Э.Гурылева. Туберкулез. М., Медицина, 1999, стр.131-140). При пероральном приеме в виде таблеток и капсул в организм наравне с лекарственным веществом поступает значительное количество вспомогательных веществ, не всегда индифферентных, а иногда и токсичных для человека, например тальк, который вызывает раздражение слизистой желудочно-кишечного тракта.

Прототипами изобретения являются таблетки изониазида и таблетки этамбутола гидрохлорида (Справочник. Видаль. Лекарственные препараты в России. Изд. 12-е переработанное, исправленное и дополненное. Астра Фарм Сервис, 2006 г. стр.1497, 1554), а также комбинированный лекарственный препарат: таблетки, содержащие 0,15 г изониазида и 0,4 г этамбутола гидрохлорида - «Фтизоэтам» (Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств, 2005, В.12, Инфармхим., М., ООО «РЛС-2005», стр.994). Этот лекарственный препарат применяется для лечения туберкулеза. Недостатком его является высокая токсичность, быстрое выведение из организма, высокие дозы лекарственных веществ, входящих в состав препаратов, большое количество вспомогательных веществ.

Для создания стабильной, удовлетворяющей фармакопейным требованиям твердой лекарственной формы необходимо использовать вспомогательные вещества, индифферентные для организма, в количествах, определяемых фармацевтической и терапевтической целесообразностью.

Задачей данного изобретения является создание комбинированного фармацевтического состава для лечения туберкулеза, удовлетворяющего всем требованиям к фармацевтическим средствам и устойчивого в течение достаточно длительного времени (не менее 2-х лет), который можно будет производить в условиях отечественной фармацевтической промышленности.

Обеспечение оптимальных биофармацевтических свойств ингредиентов лекарственного препарата изониазида и этамбутола гидрохлорида может быть достигнуто путем введения в качестве вспомогательного вещества пектина, который обеспечит пролонгирование действия лекарственных веществ и понизит гепатотоксичность изониазида (Л.А.Саджая. Биохимическое обоснование путей снижения гепатотоксичности изониазида на основе сочетания с полисахаридами. Дис. канд. фармац. наук. - Пятигорск, 1999. - 120 с.).

В заявляемый состав входят в качестве действующих веществ изониазид и этамбутола гидрохлорид и вспомогательные вещества, взятые в количестве от 40 до 50% от массы действующих веществ. Фармацевтический состав выполнен в виде гранул. Состав соответствует требованиям на фармацевтические средства и обладает повышенной стабильностью при хранении.

Техническим заданием предлагаемого изобретения является создание комплексного состава, обладающего туберкулостатической активностью по отношению к изониазид-устойчивым M.tuberculosis, a также усиливающим специфическое фармакологическое действие изониазида и этамбутола гидрохлорида за счет синергизма. Задание решено с помощью следующего состава гранул в граммах:

Изониазида	0,3000
Этамбутола гидрохлорида	0,3000
Пектина	0,3000
Спирта этилового 70%	0,396

Пример 1.

Приготовление гранул осуществляется методом влажного гранулирования.

Изониазид и этамбутола гидрохлорид предварительно высушивают в термостате при температуре 60°С до остаточной влажности 2-3%. Взвешенное сырье (количества изониазида 0,75 кг и этамбутола гидрохлорида 0,75 кг) предварительно измельчали в барабане шаровой мельницы вместе с шарами при оптимальной скорости в течение 5-8 минут. Измельченные продукты просеивали через сито-капрон №38 с диаметром отверстия 0,16±0,025 мм.

Для приготовления увлажнителя на весах отвешивали 0,655 кг спирта этилового и 0,335 кг воды и помещали их в емкость для приготовления увлажнителя. 0,75 кг пектина предварительно просеивали через сито №2. В смеситель с зеттаобразными лопастями загружали пектин, этамбутола гидрохлорид и изониазид и перемешивали 5-8 минут. Затем из емкости для приготовления увлажнителя частями добавляли увлажнитель при постоянном перемешивании. Однородность и увлажненность массы контролировали визуально.

Масса с оптимальной влажностью представляет собой влажную, компактную смесь, не прилипающую к руке, но рассыпающуюся при сдавливании на отдельные комочки. Далее осуществляли влажное гранулирование в грануляторе методом продавливания через сетку с диаметром отверстия 4 мм. Гранулят выгружали в лотки из нержавеющей стали тонким слоем 1-2 см. Сушку гранул производили в вакуум-сушильном шкафу при периодическом перемешивании при температуре 30-40°С и вакууме 0,7-0,8 кгс/см². Продолжительность сушки 30 минут до остаточной влажности 2,5-3,0%.

Затем проводили сухое гранулирование на универсальном грануляторе через сетку с диаметром отверстий 2 мм.

Гранулы представляли собой светло-желтые частички неправильной формы, обладающие необходимой механической прочностью, масса полученных гранул составляла 2,14 кг.

Установление сроков годности гранул проводили методом «ускоренного старения» в двух температурных режимах при 40 и 60°С, а также в естественных условиях («Инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре И 42-2-82»). В качестве опытных образцов использовали 3 серии гранул, таблетки этамбутола гидрохлорида и таблетки изониазида, таблетки «Фтизоэтама». О стабильности ингредиентов заявляемого фармацевтического состава и прототипов судили по содержанию посторонних примесей и количественному содержанию лекарственных веществ в испытуемых образцах. Контроль качества проводили через равные промежутки времени, эквивалентные 6 месяцам хранения. Для гранул срок хранения составил три года, для таблеток изониазида - три года, для таблеток этамбутола гидрохлорида - два года и восемь месяцев, для таблеток «Фтизоэтама» - два года и пять месяцев.

Для изучения специфической антимикробной активности гранул, содержащих этамбутола гидрохлорид и изониазид по отношению к изониазид-резистенным штаммам M.tuberculosis, использовали метод абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Йенсена (приказ МЗ РФ №109 от 21.03.2003 г). Опыты проводили на трех сериях гранул в трехкратной повторности. Определение проводили на 10-ти штаммах M.tuberculosis, выделенных от больных.

Результаты представлены в табл.1.

Из данных, представленных в табл.1, следует, что по отношению к изониазид-чувствительным штаммам 4273 и 3946 проявляют активность все образцы патентуемого фармацевтического состава в виде гранул. Показано, что таблетки этамбутола гидрохлорида подавляют рост четырех штаммов микобактерий туберкулеза. Изониазид-резистентные штаммы 4251 и 3860 чувствительны к этамбутола гидрохлориду. Предлагаемый фармацевтический состав, содержащий оба противотуберкулезных лекарственных вещества, подавляет рост 8 штаммов микобактерий. Подавление роста штаммов 4251 и 3860 обусловлено присутствием этамбутола гидрохлорида в фармацевтическом составе. Чувствительность штаммов 3951, 3974, 3850 и 4167 обусловлена совместным действием изониазида и этамбутола гидрохлорида. Патентуемый фармацевтический состав в виде гранул активнее прототипов изониазида и этамбутола гидрохлорида. Следовательно, можно предложить взаимное синергическое влияние ингредиентов фармацевтического состава.

Определение острой токсичности гранул изониазида и этамбутола гидрохлорида и прототипов (таблеток изониазида и таблеток этамбутола гидрохлорида) проводили на белых беспородных мышах обоего пола массой 18±2 г. Первой группе животных перорально вводили суспензию таблеток изониазида, диспергированных в 0,9% растворе натрия хлорида; второй группе - суспензию таблеток этамбутола гидрохлорида в 0,9% растворе натрия хлорида; третьей - суспензию таблеток «Фтизоэтама» в 0,9% растворе натрия хлорида, четвертой - суспензию патентуемого фармацевтического состава гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом. Наблюдение за поведением и состоянием животных проводили в течение 10 дней. Далее рассчитывали величину ЛД₅₀ по методике Беренса (М.Л.Беленький. Элементы количественного учета фармакологического эффекта. СПб.: Мед. лит., 1963. - 250 с.). Результаты эксперимента представлены в табл.2.

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что токсичность изониазида с этамбутола гидрохлоридом, введенных животным в виде гранул патентуемого фармацевтического состава, ниже в 2,1 раза по сравнению с токсичностью прототипов, а именно изониазида и этамбутола гидрохлорида в таблетках, а также в 2 раза ниже по сравнению с токсичностью таблеток «Фтизоэтама».

Для объективной оценки биодоступности и фармакологического действия предлагаемого фармацевтического состава в соответствии с требованиями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2000. МЗ РФ, 680 с.) Было проведено сравнительное изучение фармакокинетики гранул изониазида и этамбутола гидрохлорида и прототипов (таблеток изониазида и таблеток этамбутола гидрохлорида). Определение проводили на белых крысах обоего пола с массой тела 200-300 г. Перед опытом животных не кормили в течение суток. Испытуемые вещества вводили перорально в виде суспензии в 0,9% растворе натрия хлорида, в дозах 40 мг/кг таблеток изониазида в пересчете на изониазид (первая группа), 40 мг/кг таблеток этамбутола гидрохлорида в пересчете на действующее вещество (вторая группа), 147 мг/кг таблеток «Фтизоэтама», содержащих по 40 мг/кг изониазида и этамбутола гидрохлорида (третья группа), 120 мг/кг гранул, содержащих по 40 мг/кг изониазида и этамбутола гидрохлорида (четвертая группа). Через 0,5; 1; 2; 3; 6; 9; 12; 24 часов после введения животных декапитировали, кровь собирали, центрифугировали и в полученной сыворотке определяли содержание изониазида и этамбутола гидрохлорида. Количество изониазида определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Содержание этамбутола гидрохлорида определяли методом экстракционной фотометрии по реакции с бромкрезоловым зеленым. В табл.3 представлены результаты количественного определения содержания изониазида и этамбутола гидрохлорида в крови крыс (средние результаты из шести параллельных определений).

По полученным данным построили фармакокинетические кривые и рассчитали следующие фармакокинетические характеристики: кажущийся объем распределения (V, мл), константа элиминации (K_el, ч^-1 ), общий клиренс (Cl, мл/ч), период полувыведения (Т1/2, ч), площадь под фармакокинетической кривой (AUC , мг·ч/мл), относительная биологическая доступность. Расчеты проводили по формулам, приведенным в литературе (Соколов В.И., Фирсов А.А.. Филов В.А. Фармакокинетика. - М.: Медицина, 1980. - 422 с.). Результаты представлены в табл.4. Анализ полученных данных свидетельствует о том, что из гранул в системном кровотоке как изониазид, так и этамбутол находятся в бактериостатической концентрации на 19 и 12 часов дольше, чем прототипы (соответственно).

Константы элиминации изониазида и этамбутола из гранул в 4,75; 3,75; 2,6 и 2,0 раза меньше, чем у прототипов (соответственно). Период полувыведения изониазида и этамбутола гидрохлорида из гранул в 45,75; 2,44 (изониазид из таблеток изониазида и «Фтизоэтама») и 3,8; 1,57 (этамбутола гидрохлорид из таблеток этамбутола и «Фтизоэтама») раза больше, чем прототипов (соответственно). Следовательно, заявляемый фармацевтический состав обеспечивает пролонгированное нахождение изониазида и этамбутола в крови.

Увеличение площадей под фармакокинетическими кривыми изониазида и этамбутола гидрохлорида в гранулах в 5,3 и 1,6 раза (соответственно) по сравнению с прототипами может свидетельствовать о повышении терапевтической эффективности как изониазида, так и этамбутола гидрохлорида в заявляемом фармацевтическом составе.

Применение предлагаемого фармацевтического состава, обладающего высокой туберкулостатической активностью, позволит уменьшить токсичность, а следовательно, и побочные эффекты входящих в него ингредиентов: изониазида и этамбутола гидрохлорида. Кроме того, применение предлагаемого фармацевтического состава обеспечит пролонгирование действия изониазида и этамбутола гидрохлорида в организме.

Таблица 1 Сравнительная оценка антимикробной активности таблеток изониазида, таблеток этамбутола гидрохлорида, таблеток «Фтизоэтам», гранул изониазида с этамбутола гидрохлоридом
Номер штамма	Определяемое вещество, концентрация				Контроль
	Таблетки изониазида, 1 мкг/мл	Таблетки этамбутола, гидрохлорида 1 мкг/мл	Таблетки «Фтизоэтам», 1 мкг/мл	Гранулы изониазида, 1 мкг/мл, этамбутола гидрохлорида, 1 мкг/мл
4273	-	-	-	-	+
3946	-	-	-	-	+
3951	+	+	+	-	+
4251	+	-	+	-	+
4106	+	+	+	+	+
3860	+	-	+	-	+
3974	+	+	-	-	+
3850	+	+	-	-	+
4167	+	+	+	-	+
4054	+	+	+	+	+
«-» - отсутствие роста свидетельствует о чувствительности к лекарственному препарату; «+» - роста на среде свидетельствует об устойчивости к лекарственному препарату.

Таблица 2 Определение острой токсичности известных прототипов (изониазида в таблетках, этамбутола гидрохлорида в таблетках, таблеток «Фтизоэтам») и предлагаемого фармацевтического состава в виде гранул изониазида и этамбутола гидрохлорида
Дозы мг/кг*	Число павших/Число выживших	Накопительные частоты	Смертность, в %
Таблетки изониазида
300	0/10	0/20	-	d=50
350	6/4	6/10	37,5	A=350 мг/кг
400	8/2	14/6	70,0	В=400 мг/кг
450	8/2	22/4	-	а-37,5%
500	8/2	30/2	-	b=70,0%
Таблетки этамбутола гидрохлорида
3000	0/10		0
4000	0/10		0
5000	0/10		0
Таблетки «Фтизоэтам»
362	3/7	6/14	-	d=40
385	6/4	12/8	39,1	A=385 мг/кг
400	8/2	14/6	70,2	В=400 мг/кг
				а=39,1%
				b=70,2%
Гранулы изониазида 0,15 и этамбутола гидрохлорида 0,15
725	2/8	2/16	-	d=40
767	4/6	6/8	42,9	А=767 мг/кг
800	8/2	14/2	87,5	В=800 мг/кг
				а=42,9%
				b=87,5%
* - в таблице приведены дозы лекарственных препаратов в пересчете на действующее вещество

Таблица 3 Результаты определения содержания лекарственных веществ в крови крыс
Определяемое лекарственное вещество	Содержание действующих веществ в крови (мкг/кг) через, (час)
	0,5	1	2	3	6	9	12	24
Изониазид в таблетках	190,4±0,17	139,7±0,14	121,7±0,19	109,5±0,23	0,60±0,05	-	-	-
Этамбутола гидрохлорид в таблетках	81,5±0,66	130,5±0,53	140,92±0,68	154,1±0,40	128,0±0,62	116,6±0,51	38,4±0,56	-
Изониазид в таблетках «Фтизоэтам»	120,3±0,15	140,8±0,10	110,8±0,20	85,9±0,90	0,52±0,14	-	-	-
Этамбутола гидрохлорид в таблетках «Фтизоэтам»	70,8±0,30	110,2±0,14	135,9±0,40	120,4±0,53	108,0±0,70	80,9±0,45	44,5±0,30	-
Изониазид в гранулах	100,8±0,28	123,7±0,30	156,1±0,41	131,3±0,32	114,2±0,29	80,6±0,17	66,7±0,14	1,78±0,21
Этамбутола гидрохлорид в гранулах	75,4±0,49	88,3±0,65	109,4±0,69	118,9±0,37	124,7±0,66	130,9±0,51	77,5±0,32	58,1±0,54

Таблица 4 Фармакокинетические характеристики лекарственных веществ после однократного перорального введения
Определяемое лекарственное вещество	Фармакокинетические параметры
	V, мл	Kel, ч-1	Cl, мл/ч	Т1/2, ч	AUC , мг·ч/мл	F, %
Изониазид в таблетках	637,5	0,95	605,6	0,73	38,86	100,0
Изониазид в таблетках «Фтизоэтам»	630,9	0,75	428,8	1,42	88,52	102,0
Изониазид в гранулах	628,4	0,20	125,7	3,47	206,10	105,0
Этамбутола гидрохлорид в таблетках	254,0	0,13	33,02	5,33	91,12	100,0
Этамбутола гидрохлорид в таблетках «Фтизоэтам»	390,4	0,10	29,7	12,8	105,14	101,4
Этамбутола гидрохлорид в гранулах	402,4	0,05	18,27	20,12	146,45	104,6