антибактериальные хинолиновые производные

Формула изобретения

1. Соединение формулы (Ia)



включая их любые стереохимические изомерные формы,

где р представляет целое число, равное 1;

q представляет целое число, равное 0, 1, 2, 3 или 4;

R¹ представляет водород, галоген, арил или Het;

R² представляет водород или алкилокси;

R³ представляет арилалкил или арил;

каждый R⁴ и R⁵ независимо представляет водород, алкил;

R⁷ представляет водород, алкил или арил;

арил представляет моноцикл, выбранный из фенила или нафтила, причем каждый необязательно замещают 1, 2 или 3 заместителями, причем каждый заместитель независимо выбирают из гидрокси, галогена, циано, нитро, амино, моно- или диалкиламино, алкила, С_2-6алкенила, необязательно замещенного фенилом, галогеналкилом, алкилокси, галогеналкилокси, карбоксилом, алкилоксикарбонилом, аминокарбонилом, морфолинилом или моно- или диалкиламинокарбонилом;

Het представляет моноциклический гетероцикл, выбранный из фуранила, тиенила, пиридинила; или бициклический гетероцикл, представляющий собой бензофуранил; причем каждый моноциклический и бициклический гетероцикл необязательно замещают 1, 2 или 3 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из галогена, гидрокси, алкила или алкилокси;

алкил содержит от 1 до 6 атомов углерода;

его N-оксид, его фармацевтически приемлемая соль или сольваты.

2. Соединение по п.1, в котором алкил представляет C_1-6алкил.

3. Соединение по п.1 или 2, в котором R¹ представляет галоген, Het или арил.

4. Соединение по п.3, в котором R¹ представляет галоген.

5. Соединение по любому из пп.1-4, в котором р равно 1.

6. Соединение по пп.1, 2 или 4, в котором R ² представляет С_1-6алкилокси.

7. Соединение по пп.1, 2 или 4, в котором R³ представляет арил.

8. Соединение по пп.1, 2 или 4, в котором q равно 2, 3 или 4.

9. Соединение по пп.1, 2 или 4, в котором R⁴ и R⁵ представляют С_1-6алкил.

10. Соединение по пп.1, 2 или 4, в котором R⁷ представляет водород.

11. Соединение по п.1, в котором R¹ представляет галоген; R² представляет С_1-6 алкилокси; R³ представляет арил; R⁴ и R ⁵ представляют С_1-6алкил; R⁷ представляет водород; q равно 2, 3 или 4; и р равно 1.

12. Соединение по пп.1, 2, 4 или 11 для применения в качестве лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции.

13. Соединение по пп.1, 2, 4 или 11 для применения в качестве лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции, включая микобактериальную инфекцию.

14. Фармацевтическая композиция, обладающая антибактериальной активностью, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и, в качестве активного ингредиента, терапевтически эффективное количество соединения по любому одному из пп.1-11.

15. Применение соединения по любому одному из пп.1-11 для получения лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции.

16. Применение по п.15, в котором бактериальной инфекцией является инфекция, вызванная грамположительными бактериями.

17. Применение по п.16, в котором грамположительной бактерией является Streptococcus pneumoniae.

18. Применение по п.16, в котором грамположительной бактерией является Staphylococcus aureus.

19. Способ получения соединения по п.1, характеризующийся реакцией промежуточного соединения формулы (IIa) с промежуточным соединением формулы (III) согласно следующей схеме реакции



используя nBuLi в смеси пригодного основания и пригодного растворителя, в котором все переменные определены в п.1;

и, при желании, получением его стереохимически изомерных форм, четвертичных аминов или N-оксидных форм.

20. Применение по п.18, в котором Staphylococcus aureus является метициллин-устойчивым Staphylococcus aureus.

21. Применение по п.15, в котором бактериальная инфекция представляет собой Mycobacterium tuberculosis.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к новым замещенным хинолиновым производным, пригодным для лечения бактериальных заболеваний, включающих, но не ограничивающихся ими, заболевания, вызванные патогенными микобактериями, такими как Mycobacterium tuberculosis, M.bovis, M.leprae, M.avium и M.marinum, или патогенными стафилококками или стрептококками.

Уровень техники

Mycobacterium tuberculosis является возбудителем туберкулеза (TB), опасной и потенциально смертельной инфекции, распространенной по всему миру. Исследования, проведенные всемирной организацией здравоохранения, свидетельствуют, что каждый год более 8 миллионов людей заражаются TB и ежегодно от туберкулеза умирают 2 миллиона людей. За последнее десятилетие число случаев заражения TB выросло на 20% по всему миру с наибольшей нагрузкой у самых бедных групп населения. Если эта тенденция сохранится, за следующие двадцать лет число случаев заражения TB увеличится до 41%. Через пятьдесят лет после введения эффективной химиотерапии TB остается, после СПИДа, главной инфекционной причиной смертности взрослого населения в мире. Осложнением TB эпидемии является распространение штаммов с множественной лекарственной устойчивостью и смертоносный симбиоз с ВИЧ. В 30 раз более вероятно, что у людей, которые являются ВИЧ- и TB-инфицированными, разовьется активный TB, чем у людей, которые не инфицированы ВИЧ, и TB ответственен за смерть одного из каждых трех человек с ВИЧ/СПИДом по всему миру.

Все существующие подходы к лечению туберкулеза включают комбинацию многочисленных агентов. Например, схемой, рекомендованной министерством здравоохранения США, является комбинация изониазида, рифампицина и пиразинамида в течение двух месяцев с последующим отдельным приемом изониазида и рифампицина в течение дополнительных четырех месяцев. Больные, инфицированные ВИЧ, продолжают прием этих лекарственных средств в течение дополнительных семи месяцев. Что касается пациентов, инфицированных штаммами с множественной лекарственной устойчивостью M.tuberculosis , к комбинационной терапии добавляют агенты, такие как этамбутол, стрептомицин, канамицин, амикацин, капреомицин, этионамид, циклосерин, ципрофоксацин и офлоксацин. Не существует отдельного агента, который является эффективным в клиническом лечении туберкулеза, равно как и любой комбинации агентов, которая дает возможность проведения терапии в течение периода, продолжительность которого меньше 6 месяцев.

В медицине существует большая потребность в новых лекарственных средствах, которые улучшат общепринятое лечение, обеспечивая режимы приема лекарственных средств, которые облегчат соблюдение режима терапии пациентом и врачом. Более короткие режимы приема лекарственных средств и те из них, что требуют меньшего наблюдения врача, являются лучшим способом достигнуть этого. Самая большая польза от лечения будет получена в течение первых 2 месяцев, в течение интенсивной или бактерицидной фазы, когда даются вместе четыре лекарственных средства; бактериальная нагрузка значительно снижается, и пациенты становятся незаразными. 4-6-месячный курс или стерилизация является фазой, требуемой для того, чтобы уничтожить оставшиеся бациллы и предельно снизить риск рецидива. Сильнодействующее стерилизующее лекарственное средство, которое уменьшает продолжительность лечения до 2 месяцев или менее, было бы чрезвычайно полезно. Также необходимы лекарственные средства, которые облегчат соблюдение режима терапии за счет того, что они требуют меньшего тщательного наблюдения врача. Очевидно, что соединение, которое уменьшает как общую продолжительность лечения, так и частоту приема лекарственного средства, принесло бы наибольшую пользу.

TB эпидемия осложняется все возрастающим числом случаев заражения штаммами с множественной лекарственной устойчивостью или MDR-TB. Вплоть до 4 процентов всех случаев заражения по всему миру рассматриваются как заражение MDR-TB, TB, устойчивым к самым эффективным лекарственным средствам стандарта из четырех лекарственных средств, изониазида и рифампина. MDR-TB является летальным при отсутствии лечения и не может лечиться надлежащим образом с помощью стандартной терапии, поэтому лечение требует приема лекарственных средств «второй линии» вплоть до 2 лет. Эти лекарственные средства часто являются токсичными, дорогими и в малой степени эффективными. В отсутствие эффективной терапии инфицированные MDR-TB пациенты продолжают распространять заболевание, продуцируя новые инфекционные болезни с MDR-TB штаммами. В медицине существует большая потребность в новом лекарственном средстве с новым механизмом действия, которое, вероятно, проявит активность в отношении устойчивых к лекарственным средствам штаммов, в частности MDR штаммов.

Термин "устойчивый к лекарственным средствам", как используется выше и ниже в настоящем изобретении, является термином, понятным специалистам в микробиологии. Микобактерии, устойчивые к лекарственным средствам, являются микобактериями, которые являются больше не чувствительными, по меньшей мере, к одному ранее эффективному лекарственному средству; которые развили способность переносить действие, по меньшей мере, одного ранее эффективного лекарственного средства. Штамм, устойчивый к лекарственным средствам, может передавать эту способность переносить действие лекарственного средства своему потомству. Упомянутая устойчивость может быть результатом случайных генетических мутаций в бактериальных клетках, которая изменяет чувствительность к одному лекарственному средству или различным лекарственным средствам.

MDR туберкулез является особой формой туберкулеза, устойчивого к лекарственным средствам, благодаря бактериальной устойчивости к, по меньшей мере, изониазиду и рифампицину (с или без устойчивости к другим лекарственным средствам), которые являются в настоящее время двумя самыми мощными анти-TB лекарственными средствами. Таким образом, при применении выше и ниже в настоящем изобретении "устойчивый к лекарственным средствам" включает мультирезистентность.

Другим фактором в контроле TB эпидемии является проблема латентного TB. Несмотря на десятилетия проведения программ по борьбе с туберкулезом (TB) около 2 миллиардов людей инфицированы M.tuberculosis, хотя и бессимптомно. Около 10% из этих отдельных лиц подвержены риску развития активного TB в течение их жизни. Всемирной эпидемии TB способствует заражение ВИЧ пациентов TB и появление TB штаммов с множественной лекарственной устойчивостью (MDR-TB). Реактивация латентного TB является фактором с высокой степенью риска развития заболевания и обуславливает 32% смертей ВИЧ-инфицированных индивидов. Чтобы бороться с TB эпидемией, необходимо открыть новые лекарственные средства, которые могут уничтожать «дремлющие» или латентные бациллы. «Дремлющие» TB могут становиться реактивированными, вызывая заболевание, несколькими факторами, например подавлением иммунитета хозяина при применении иммунодепрессивных лекарственных средств, подобных антителам против фактора некроза опухолей или интерферона- . В случае пациентов, зараженных ВИЧ, единственным профилактическим лечением, пригодным для латентного TB, являются 2-3-месячные режимы приема рифампицина, пиразинамида. Эффективность режима лечения еще не установлена, и, кроме того, продолжительность лечения является важным ограничивающим фактором в среде с ограниченными ресурсами. Следовательно, существует большая необходимость в разработке новых лекарственных средств, которые могут действовать в качестве химиопрофилактических агентов для индивидов, зараженных латентными TB бациллами.

Туберкулезные бациллы проникают в тела здоровых людей при вдыхании; они подвергаются фагоцитозу альвеолярными макрофагами легких. Это приводит к мощному иммунному ответу и образованию гранулем, которые состоят из макрофагов, инфицированных M.Tuberculosis, окруженных T-клетками. После 6-8-недельного периода иммунный ответ хозяина вызывает смерть инфицированных клеток некрозом и накопление казеозного материала с определенными внеклеточными бациллами, окруженными макрофагами, эпителиоидными клетками и слоями лимфоидной ткани на периферии. В случае здоровых индивидов большая часть микобактерий убивается в таком окружении, но небольшая часть бацилл все же выживает, и полагают, что они существуют в нереплицируемом состоянии пониженного метаболизма и являются устойчивыми к уничтожению анти-TB лекарственными средствами, подобными изониазиду. Эти бациллы могут сохраняться в измененной физиологической среде даже в течение жизни отдельного человека без проявления каких бы то ни было клинических симптомов заболевания. Однако в 10% из этих случаев эти латентные бациллы могут реактивироваться, вызывая заболевание. Одной из гипотез о развитии этих устойчивых бактерий является гипотеза о патофизиологической среде при патологических изменениях у человека, а именно пониженном давлении кислорода, ограничении в питательных веществах и кислом pH. Допускают, что эти факторы приводят к тому, что эти бактерии становятся фенотипически толерантными к основным антимикобактериальным лекарственным средствам.

Кроме контроля TB эпидемии, возникла проблема устойчивости к антибиотикам «первой линии». Некоторые важные примеры включают пенициллин-устойчивый Streptococcus pneumoniae , ванкомицин-устойчивые энтерококки, метицилин-устойчивый стафилококк золотистый, полирезистентную сальмонеллу.

Последствия устойчивости к антибиотикам являются серьезными. Инфекции, вызванные устойчивыми микробами, не поддаются лечению, приводя в результате к увеличению продолжительности заболевания и большему риску смерти. Неудачные результаты лечения также приводят к более длительным периодам инфективности, которая увеличивает число инфицированных людей, взаимодействующих в обществе, и, таким образом, подвергает все слои населения риску заражения устойчивыми штаммами.

Больницы являются крайне важным компонентом проблемы антимикробной резистентности по всему миру. Комбинация крайне восприимчивых пациентов, интенсивного и продолжительного антимикробного лечения и перекрестной инфекции привела в результате к инфекциям с чрезвычайно устойчивыми бактериальными патогенными микроорганизмами.

Самолечение противомикробными лекарственными средствами является другим важным фактором, делающим вклад в приобретение устойчивости. Противомикробные лекарственные средства при самолечении могут быть ненужными, часто неадекватно дозируемыми или могут не содержать достаточных количеств активных лекарственных средств.

Приверженность пациента к рекомендованному лечению является другой важной проблемой. Пациенты забывают принять лекарственное средство, прерывают свое лечение, когда начинают чувствовать себя лучше, или могут быть не способны провести полный курс, посредствам чего создается идеальная среда для микробов, скорее для приспособления, чем для уничтожения.

Из-за возникновения резистентности к множеству антибиотиков лечащие врачи борются с инфекциями, для которых не существует эффективной терапии. Распространенность болезни, летальность и финансовые расходы на такие инфекции накладывают на системы медицинского обслуживания по всему миру все возрастающую нагрузку.

Следовательно, существует большая необходимость в новых соединениях для лечения бактериальных инфекций, особенно микобактериальных инфекций, включая латентные микобактериальные инфекции, устойчивые к лекарственным средствам, и также других бактериальных инфекций, особенно инфекций, вызванных устойчивыми бактериальными штаммами.

WO 2004/011436, WO 2005/070924, WO 2005/070430 и WO 2005/075428 описывают определенные замещенные хинолиновые производные, обладающие активностью против микобактерий, в частности против Mycobacterium tuberculosis. WO 2005/117875 описывает замещенные хинолиновые производные, обладающие активностью против устойчивых микобактериальных штаммов.

WO 2006/067048 описывает замещенные хинолиновые производные, обладающие активностью против латентного туберкулеза. Одно конкретное соединение из этих замещенных хинолиновых производных описывается в Science (2005), 307, 223-227, и его способ действия описывается в WO 2006/035051.

Другие замещенные хинолины описываются в US-5965572 (Соединенные Штаты Америки) для лечения устойчивых к антибиотикам инфекций и в WO 00/34265, чтобы ингибировать рост бактериальных микроорганизмов.

Цель настоящего изобретения заключается в обеспечении новыми соединениями, в частности замещенными хинолиновыми производными, обладающими способностью ингибировать бактериальный рост, особенно стрептококков, стафилококков или микобактерий, и, следовательно, пригодными для лечения бактериальных заболеваний, особенно тех заболеваний, которые вызванны патогенными бактериями, такими как Streptococcus pneumonia, Staphylococcus aureus или Mycobacterium Tuberculosis (включая латентное заболевание и включая M.tuberculosis штаммы, устойчивые к лекарственным средствам), M.bovis, M.leprae, M.avium и M.marinum .

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к новым замещенным хинолиновым производным формулы (Ia) или (Ib):

включая их любые стереохимические изомерные формы, где

p представляет целое число, равное 1, 2, 3 или 4;

q представляет целое число, равное 0, 1, 2, 3 или 4;

R¹ представляет водород, циано, формил, карбоксил, галоген, алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, галогеналкил, гидрокси, алкилокси, алкилтио, алкилтиоалкил, -C=N-OR¹¹, амино, моно- или ди(алкил)амино, аминоалкил, моно- или ди(алкил)аминоалкил, алкилкарбониламиноалкил, аминокарбонил, моно- или ди(алкил)аминокарбонил, арилалкил, арилкарбонил, R^5aR^4aNалкил, ди(арил)алкил, арил, R ^5aR^4aN-, R^5aR^4aN-C(=O)- или Het;

R² представляет водород, алкилокси, арил, арилокси, гидрокси, меркапто, алкилоксиалкилокси, алкилтио, моно- или ди(алкил)амино, пирролидино или радикал формулы , в которой Y представляет CH₂, O, S, NH или N-алкил;

R³ представляет алкил, арилалкил, арил-O-алкил, арилалкил-O-алкил, арил, ариларил, Het, Het-алкил, Het-O-алкил, Het-алкил-O-алкил или .

Каждый R⁴ и R⁵ независимо представляет водород; алкил; алкилоксиалкил; арилалкил; Het-алкил; моно- или диалкиламиноалкил; бицикло[2.2.1]гептил; Het; арил; или -C(=NH)-NH₂; или

R ⁴ и R⁵ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, 4-тиоморфолино, 1,1-диоксидтиоморфолинила, азетидинила, 2,3-дигидроизоиндол-1-ила, тиазолидин-3-ил, 1,2,3,6-тетрагидропиридинила, гексагидро-1Н-азепинила, гексагидро-1Н-1,4-диазепинила, гексагидро-1,4-оксазепинила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, пирролинила, пирролила, имидазолинила, пиразолидинила, 2-имидазолидинила, 2-пиразолинила, имидазолила, пиразолила, триазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила и триазинила, каждый радикал, необязательно, замещен 1, 2, 3 или 4 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из алкила, галогеналкила, алкилкарбонила, галогена, арилалкила, гидрокси, алкилокси, амино, моно- или диалкиламино, аминоалкила, моно- или диалкиламиноалкила, алкилтио, алкилтиоалкила, арила, пиридила, пиримидинила, пиперидинила, необязательно, замещенного алкилом или пирролидинилом, необязательно, замещенного арилалкилом;

R^4a и R^5a вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, 4-тиоморфолино, 2,3-дигидроизоиндол-1-ила, тиазолидин-3-ила, 1,2,3,6-тетрагидропиридила, гексагидро-1Н-азепинила, гексагидро-1Н-1,4-диазепинила, гексагидро-1,4-оксазепинила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, пирролинила, пирролила, имидазолидинила, пиразолидинила, 2-имидазолинила, 2-пиразолинила, имидазолила, пиразолила, триазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила и триазинила, каждый радикал необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из алкила, галогеналкила, галогена, арилалкила, гидрокси, алкилокси, амино, моно- или диалкиламино, алкилтио, алкилтиоалкила, арила, пиридила или пиримидинила;

R⁷ представляет водород, галоген, алкил, арил или Het;

R⁸ представляет водород или алкил;

R⁹ представляет оксо; или

R⁸ и R⁹ вместе образуют радикал -CH=CH-N=;

R¹¹ представляет водород или алкил;

арил представляет моноцикл, выбранный из фенила, нафтила, аценафтила или тетрагидронафтила, причем каждый, необязательно, замещают 1, 2 или 3 заместителями, причем каждый заместитель независимо выбирают из гидрокси, галогена, циано, нитро, амино, моно- или диалкиламино, алкила, C_2-6алкенила, необязательно, замещенного фенилом, галогеналкилом, алкилокси, галогеналкилокси, карбоксилом, алкилоксикарбонилом, аминокарбонилом, морфолинилом или моно- или диалкиламинокарбонилом;

Het представляет моноциклический гетероцикл, выбранный из N-феноксипиперидинила, пиперидинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, фуранила, тиенила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, изотиазолила, пиридинила, пиримидинила, пиразинила или пиридазинила; или бициклический гетероцикл, выбранный из хинолинила, хиноксалинила, индолила, бензимидазолила, бензоксазолила, бензизоксазолила, бензотиазолила, бензизотиазолила, бензофуранила, бензотиенила, 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинила или бензо[1,3]диоксолила; причем каждый моноциклический и бициклический гетероцикл необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из галогена, гидрокси, алкила или алкилокси;

их N-оксидам, их фармацевтически приемлемым солям или сольватам.

При применении в настоящем изобретении подразумевается, что термин "соединения формулы (Ia) или (Ib)" или "соединения согласно настоящему изобретению" также включает их фармацевтически приемлемые соли или их N-оксидные формы или сольваты.

Соединения формулы (Ia) и (Ib) взаимосвязаны в том, например, что соединение согласно формуле (Ib), с R⁹, представляющим оксо, R⁸, представляющим водород, представляет таутомерный эквивалент соединения формулы (Ia) с R², представляющим гидрокси (кето-енольный таутомеризм).

В определении Het подразумевается, что он включает все возможные изомерные формы гетероциклов, например пирролил включает 1H-пирролил и 2H-пирролил.

Арил или Het, перечисленные в определениях заместителей соединений формулы (Ia) или (Ib) (см., например, R³), как упомянуто выше или ниже в настоящем изобретении, может быть присоединен к остатку молекулы формулы (Ia) или (Ib) через любой кольцевой атом углерода или гетероатом, при необходимости, если не указано обратное. Таким образом, например, когда Het является имидазолилом, он может быть 1-имидазолилом, 2-имидазолилом, 4-имидазолилом и подобным.

Линии, нарисованные от заместителей к кольцевым системам, показывают, что заместитель может быть присоединен к любому подходящему кольцевому атому.

Подразумевается, что фармацевтически приемлемые соли, как упоминается выше и ниже в настоящем изобретении, включают терапевтически активную нетоксичную соль присоединения кислоты, которую соединения формулы (Ia) или формулы (Ib) способны образовывать. Упомянутые соли присоединения кислоты можно получить обработкой основной формы соединений формулы (Ia) или формулы (Ib) подходящими кислотами, например неорганическими кислотами, например галогенводородными кислотами, в частности хлористоводородной кислотой, бромистоводородной кислотой, серной кислотой, азотной кислотой и фосфорной кислотой; органическими кислотами, например уксусной кислотой, гидроксиуксусной кислотой, пропановой кислотой, молочной кислотой, пировиноградной кислотой, щавелевой кислотой, малоновой кислотой, янтарной кислотой, малеиновой кислотой, фумаровой кислотой, яблочной кислотой, винной кислотой, лимонной кислотой, метансульфокислотой, этансульфокислотой, бензолсульфокислотой, п-толуолсульфокислотой, цикламиновой кислотой, салициловой кислотой, п-аминосалициловой кислотой и памовой кислотой.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), содержащие кислые протоны, можно превратить в их терапевтически активные нетоксичные формы солей присоединения металла или амина обработкой подходящими органическими и неорганическими основаниями. Подразумевают, что фармацевтически приемлемые соли, как упоминается выше и ниже в настоящем изобретении, также включают терапевтически активные нетоксичные формы солей присоединения металла или амина (соли присоединения основания), которые соединения формулы (Ia) или (Ib) способны образовывать. Подходящие формы солей присоединения основания включают, например, аммониевые соли, соли щелочных и щелочноземельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и подобные, соли с органическими основаниями, например первичные, вторичные и третичные алифатические и ароматические соли, такие как метиламин, этиламин, пропиламин, изопропиламин, четыре изомера бутиламина, диметиламин, диэтиламин, диэтаноламин, дипропиламин, диизопропиламин, ди-н-бутиламин, пирролидин, пиперидин, морфолин, триметиламин, триэтиламин, трипропиламин, хинуклидин, пиридин, хинолин и изохинолин, бензатин, N-метил-D-глюкамин, 2-амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиол, гидрабаминовые соли, и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и подобные.

И наоборот, упомянутые формы солей присоединения кислоты и основания можно превратить в свободные формы обработкой подходящим основанием или кислотой.

Термин фармацевтически приемлемая соль также включает четвертичные аммониевые соли (четвертичные амины), которые соединения формулы (Ia) или (Ib) способны образовывать при реакции между основным азотом соединения формулы (Ia) или (Ib) и подходящим кватернизующим агентом, такими как, например, необязательно, замещенный C _1-6алкилгалогенид, арилC_1-6алкилгалогенид, C _1-6алкилкарбонилгалогенид, арилкарбонилгалогенид, Het-C _1-6алкилгалогенид или Het-карбонилгалогенид, например метилйодид или бензилйодид. Предпочтительно, Het представляет моноциклический гетероцикл, выбранный из фуранила или тиенила; или бициклический гетероцикл, выбранный из бензофуранила или бензотиенила; каждый моноциклический и бициклический гетероцикл можно, необязательно, заместить 1, 2 или 3 заместителями, каждый заместитель независимо выбирают из группы галогена, алкила и арила. Предпочтительно, кватернизующий агент является C_1-6алкилгалогенидом. Можно также использовать другие реагенты с лекго уходящими группами, такими как C_1-6алкилтрифторметансульфонаты, C _1-6алкилметансульфонаты и C_1-6алкил-п -толуолсульфонаты. Четвертичные амины имеют положительно заряженный атом азота. Фармацевтически приемлемые противоионы включают хлор, бром, йод, трифторацетат, ацетат, трифлат, сульфат, сульфонат. Предпочтительно, противоионом является йод. Необходимый противоион можно ввести, используя ионообменные смолы.

Термин сольваты включает гидраты и формы присоединения растворителя, которые соединения формулы (Ia) или (Ib) способны образовывать, также как их соли. Примерами таких солей являются, например, гидраты, алкоголяты и подобные.

В рамках данной заявки заведомо предполагается, что соединение согласно настоящему изобретению включает все свои стереохимически изомерные формы. Термин "стереохимически изомерные формы", как используется выше и ниже в настоящем изобретении, обозначает все возможные стереоизомерные формы, которыми соединения формулы (Ia) и (Ib) и их N-оксиды, фармацевтически приемлемые соли, сольваты или физиологически активные производные могут обладать. Если не указано особо, химическая формула соединений обозначает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм.

В частности, стереогенные центры могут иметь R- или S-конфигурацию; заместители в двухвалентных циклических (частично) насыщенных радикалах могут иметь как цис-, так и транс-конфигурацию. Соединения, содержащие двойные связи, могут обладать E (entgegen) или Z (zusammen) стереохимией при упомянутых двойных связях. Термины цис, транс, R, S, E и Z хорошо известны специалистам в данной области техники.

Очевидно, предполагается, что стереохимически изомерные формы соединений формулы (Ia) и (Ib) включены в объем настоящего изобретения. Особенно интересными являются соединения формулы (Ia) или (Ib), которые являются стереохимически чистыми.

Используя условные обозначения CAS номенклатуры, когда в молекуле присутствует два стереогенных центра известной абсолютной конфигурации, присваивается R или S обозначение (на основании правила последовательности Канна-Ингольда-Прелога) хиральному центру с наименьшим номером, базовый центр. Конфигурацию второго стереогенного центра определяют, используя относительные обозначения [R*,R*] или [R*,S*], где R* всегда определяется как базовый центр и [R*,R*] показывает центры с одинаковой хиральностью и [R*,S*] показывает центры с различной хиральностью. Например, если хиральный центр с наименьшим номером в молекуле имеет S-конфигурацию и второй центр имеет R-конфигурацию, стереохимическое обозначение было бы обозначено как S-[R*, S*]. Если используется " " и " ": положение самого старшего заместителя при асимметричном атоме углерода в кольцевой системе, имеющей наименьшее кольцевое число, всегда произвольно в " " положении средней плоскости, определенной кольцевой системой. Положение самого старшего заместителя при другом асимметричном атоме углерода в кольцевой системе относительно положения самого старшего заместителя при реперном атоме обозначается " ", если он на той же самой стороне средней плоскости, определенной кольцевой системой, или " ", если он на противоположной стороне средней плоскости, определенной кольцевой системой.

Когда показана конкретная стереоизомерная форма, это значит, что упомянутая форма практически не содержит, т.е. содержит меньше чем 50%, предпочтительно, меньше чем 20%, более предпочтительно, меньше чем 10%, даже более предпочтительно, меньше чем 5%, более предпочтительно, меньше чем 2% и, самое предпочтительное, меньше чем 1% другого изомера (изомеров). Таким образом, когда соединение формулы (Ia) или (Ib) обозначается, например, как (S), это значит, что соединение практически свободно от (R) изомера.

Соединения обоих формул (Ia) и (Ib) можно синтезировать в виде смесей, в частности рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделить друг от друга, используя известные в данной области техники методики разделения. Рацемические соединения обоих формул (Ia) и (Ib) можно превратить в соответствующие диастереомерные солевые формы реакцией с подходящими хиральными кислотами. Затем упомянутые диастереомерные солевые формы разделяют, например, избирательной или фракционной кристаллизацией и энантиомеры высвобождают из этих солей обработкой щелочью. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений обеих формул (Ia) и (Ib) включает жидкую хроматографию, используя хиральную неподвижную фазу. Упомянутые стереохимически чистые изомерные формы можно также получить из соответствующих стереохимически чистых изомерных форм подходящих исходных соединений при условии, что реакция протекает стереоспецифически. Предпочтительно, если требуется конкретный стереоизомер, синтезировать упомянутое соединение стереоспецифическими способами получения. В этих способах предпочтительно применяются исходные соединения в виде чистых энантиомеров.

Предполагается, что таутомерные формы соединений формулы (Ia) или (Ib) включают те соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых, например, енольная группа превращается в кето-группу (кето-енольный таутомеризм). Предполагается, что таутомерные формы соединений формулы (Ia) и (Ib) или промежуточных соединений настоящего изобретения включены в объем настоящего изобретения.

Предполагается, что N-оксидные формы настоящих соединений включают соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых один или несколько третичных атомов углерода окислены до так называемого N-оксида.

Соединения формулы (Ia) и (Ib) можно превратить в соответствующие N-оксидные формы, используя хорошо известные в данной области техники методики превращения трехвалентного азота в их N-оксидную форму. Упомянутую реакцию N -окисления можно обычно проводить реакцией исходного соединения формулы (Ia) или (Ib) с подходящим органическим или неорганическим пероксидом. Подходящие неорганические пероксиды включают, например, перекись водорода, пероксиды щелочных и щелочноземельных металлов, например пероксид натрия, пероксид калия; подходящие органические пероксиды могут включать пероксикислоты, такие как, например, бензолкарбопероксикислоты или галогензамещенные бензолкарбопероксикислоты, например 3-хлорбензолкарбопероксикислота, пероксиалкановые кислоты, например пероксиуксусная кислота, алкилгидропероксиды, например трет-бутилгидропероксид. Подходящими растворителями являются, например, вода, низшие спирты, например этанол и подобные, углеводороды, например толуол, кетоны, например 2-бутанон, галогенированные углеводороды, например дихлорметан, и смеси этих растворителей.

В рамках данной заявки заведомо предполагается, что соединение согласно настоящему изобретению включает все изотопные комбинации его химических элементов. В рамках данной заявки, химический элемент, в частности при упоминании относительно соединений формул (Ia) или (Ib), включает все изотопы и смеси изотопов данного элемента, как встречающиеся в природе, так и искусственно полученные, как в распространенной в природе форме, так и в изотопно-обогащенной форме. В частности, при упоминании водорода также подразумеваются ¹H, ²H, ³H и их смеси; при упоминании углерода также подразумеваются ¹¹C, ¹²C, ¹³C, ¹⁴C и их смеси; при упоминании азота также подразумеваются ¹³N, ¹⁴N, ¹⁵ N и их смеси; при упоминании кислорода также подразумеваются ¹⁴О, ¹⁵O, ¹⁶O, ¹⁷ O, ¹⁸O и их смеси; и при упоминании фтора также подразумеваются ¹⁸F, ¹⁹F и их смеси.

Следовательно, соединение согласно настоящему изобретению заведомо включает соединения с одним или более изотопами одного или более элементов и их смеси, включая радиоактивное соединение, также называемое радиомеченным соединением, в котором один или более нерадиоактивных атомов замещают одним из его радиоактивных изотопов. Термин "радиомеченное соединение" относится к любому соединению формулы (Ia) или (Ib), его фармацевтически приемлемой соли, или его N-оксидной форме, или его сольвату, которое содержит, по меньшей мере, один радиоактивный атом. Например, соединение можно метить позитроном или гамма-излучающими радиоактивными изотопами. Для методик радиолигандного связывания (анализ на связывание с мембранными рецепторами) ³H-атом или ¹²⁵I-атом являются предпочтительными атомами для замещения. Для визуализации чаще всего используемыми позитронно-активными (PET) радиоактивными изотопами являются ¹¹C, ¹⁸F, ¹⁵O и ¹³ N, все из которых получают с помощью ускорителя, и они имеют период полураспада 20, 100, 2 и 10 минут соответственно. Т.к. период полураспада этих радиоактивных изотопов является столь коротким, их применение возможно только в институтах, которые имеют ускоритель на месте для их получения, таким образом, ограничивая их применение. Наиболее широко используемыми из них являются ¹⁸F, ^99mTc, ²⁰¹Tl и ¹²³ I. Методы работы с этими радиоактивными изотопами, их производство, выделение и введение в молекулу хорошо известны специалистам.

В частности, радиоактивный атом выбирают из группы водорода, углерода, азота, серы, кислорода и галогена. Предпочтительно, радиоактивный атом выбирают из группы водорода, углерода и галогена.

В частности, радиоактивный изотоп выбирают из группы ³H, ¹¹C, ¹⁸F, ¹²² I, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁷⁵ Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br и ⁸²Br. Предпочтительно, радиоактивный изотоп выбирают из группы ³H, ¹¹ C и ¹⁸F.

В рамках данной заявки алкил представляет нормальный или разветвленный насыщенный углеводородный радикал, имеющий 1-6 атомов углерода; или представляет циклический насыщенный углеводородный радикал, имеющий 3-6 атомов углерода; или представляет циклический насыщенный углеводородный радикал, имеющий 3-6 атомов углерода, присоединенный к нормальному или разветвленному насыщенному углеводородному радикалу, имеющему 1-6 атомов углерода; в котором каждый атом углерода может быть, необязательно, замещен циано, гидрокси, C_1-6алкилокси или оксо.

Предпочтительно, алкил представляет нормальный или разветвленный насыщенный углеводородный радикал, имеющий 1-6 атомов углерода; или представляет циклический насыщенный углеводородный радикал, имеющий 3-6 атомов углерода; в котором каждый атом углерода может быть, необязательно, замещен гидроксилом или C_1-6алкилокси.

Предпочтительно, алкил представляет метил, этил или циклогексилметил, более предпочтительно, метил или этил. Интересным примером осуществления алкила во всех определениях, используемых выше и ниже в настоящем изобретении, является C_1-6алкил, который представляет нормальный или разветвленный насыщенный углеводородный радикал, имеющий 1-6 атомов углерода, такой как, например, метил, этил, пропил, 2-метилэтил, пентил, гексил и подобный. Предпочтительной подгруппой C_1-6алкила является C_1-4алкил, который представляет нормальный или разветвленный насыщенный углеводородный радикал, имеющий 1-4 атомов углерода, такой как, например, метил, этил, пропил, 2-метилэтил и подобный.

В рамках данной заявки C_2-6алкенил представляет нормальный или разветвленный углеводородный радикал, имеющий 2-6 атомов углерода, содержащий двойную связь, такой как, этенил, пропенил, бутенил, пентенил, гексенил и подобные; C_2-6алкинил представляет нормальный или разветвленный углеводородный радикал, имеющий 2-6 атомов углерода, содержащий тройную связь, такой как, этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил и подобные; C_3-6циклоалкил представляет циклический насыщенный углеводородный радикал, имеющий 3-6 атомов углерода, и является характерным для циклопропила, циклобутила, циклопентила, циклогексила.

В рамках данной заявки галоген представляет заместитель, выбранный из группы фтора, хлора, брома и йода и галогеналкил представляет нормальный или разветвленный насыщенный углеводородный радикал, имеющий 1-6 атомов углерода, или циклический насыщенный углеводородный радикал, имеющий 3-6 атомов углерода, или циклический насыщенный углеводородный радикал, имеющий 3-6 атомов углерода, присоединенный к нормальному или разветвленному насыщенному углеводородному радикалу, имеющему 1-6 атомов углерода; в котором один или более атомов углерода замещают одним или более атомом галогена. Предпочтительно, галоген представляет бром, фтор или хлор, в частности хлор или бром. Предпочтительно, галогеналкил представляет полигалогенC _1-6алкил, который определяют, как моно- или полигалогензамещенный C_1-6алкил, например метил с одним или более атомами фтора, например дифторметил или трифторметил, 1,1-дифторэтил и подобные. В случае когда к алкильной или C_1-6алкильной группе в определении галогеналкила или полигалогенC_1-6 алкила присоединяют более одного атома галогена, они могут быть одинаковыми или различными.

Первый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib)

включая его любые стереохимически изомерные формы, в которых

p представляет целое число, равное 1, 2, 3 или 4;

q представляет целое число, равное 0, 1, 2, 3 или 4;

R¹ представляет водород, циано, формил, карбоксил, галоген, алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, галогеналкил, гидрокси, алкилокси, алкилтио, алкилтиоалкил, -C=N-OR¹¹, амино, моно- или ди(алкил)амино, аминоалкил, моно- или ди(алкил)аминоалкил, алкилкарбониламиноалкил, аминокарбонил, моно- или ди(алкил)аминокарбонил, арилалкил, арилкарбонил, R^5aR^4aNалкил, ди(арил)алкил, арил, R ^5aR^4aN-, R^5aR^4aN-C(=O)- или Het;

R² представляет водород, алкилокси, арил, арилокси, гидрокси, меркапто, алкилоксиалкилокси, алкилтио, моно- или ди(алкил)амино, пирролидино или радикал формулы , в которой Y представляет CH₂, O, S, NH или N-алкил;

R³ представляет алкил, арилалкил, арил-O-алкил, арилалкил-O-алкил, арил, Het, Het-алкил, Het-O-алкил, Het-алкил-O-алкил или ;

каждый R⁴ и R⁵ независимо представляет водород; алкил; алкилоксиалкил; арилалкил; Het-алкил; моно- или диалкиламиноалкил; Het; арил; или -C(=NH)-NH ₂; или

R⁴ и R⁵ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, 4-тиоморфолино, 2,3-дигидроизоиндол-1-ила, тиазолидин-3-ила, 1,2,3,6-тетрагидропиридила, гексагидро-1Н-азепинила, гексагидро-1Н-1,4-диазепинила, гексагидро-1,4-оксазепинила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, пирролинила, пирролила, имидазолидинила, пиразолидинила, 2-имидазолинила, 2-пиразолинила, имидазолила, пиразолила, триазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила и триазинила, каждый радикал необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из алкила, галогеналкила, алкилкарбонила, галогена, арилалкила, гидрокси, алкилокси, амино, моно- или диалкиламино, алкилтио, алкилтиоалкила, арила, пиридила, пиримидинила, пиперидинила или пирролидинила, необязательно, замещенный арилалкилом;

R^4a и R^5a вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, 4-тиоморфолино, 2,3-дигидроизоиндол-1-ила, тиазолидин-3-ила, 1,2,3,6-тетрагидропиридила, гексагидро-1Н-азепинила, гексагидро-1Н-1,4-диазепинила, гексагидро-1,4-оксазепинила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, пирролинила, пирролила, имидазолидинила, пиразолидинила, 2-имидазолинила, 2-пиразолинила, имидазолила, пиразолила, триазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила и триазинила, каждый радикал необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из алкила, галогеналкила, галогена, арилалкила, гидрокси, алкилокси, амино, моно- или диалкиламино, алкилтио, алкилтиоалкила, арила, пиридила или пиримидинила;

R⁷ представляет водород, галоген, алкил, арил или Het;

R⁸ представляет водород или алкил;

R⁹ представляет оксо; или

R⁸ и R ⁹ вместе образуют радикал -CH=CH-N=;

R ¹¹ представляет водород или алкил;

арил представляет моноцикл, выбранный из фенила, нафтила, аценафтила или тетрагидронафтила, причем каждый необязательно замещают 1, 2 или 3 заместителями, причем каждый заместитель независимо выбирают из гидрокси, галогена, циано, нитро, амино, моно- или диалкиламино, алкила, галогеналкила, алкилокси, галогеналкилокси, карбоксила, алкилоксикарбонила, аминокарбонила, морфолинила или моно- или диалкиламинокарбонила;

Het представляет моноциклический гетероцикл, выбранный из N-феноксипиперидинила, пиперидинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, фуранила, тиенила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, изотиазолила, пиридинила, пиримидинила, пиразинила или пиридазинила; или бициклический гетероцикл, выбранный из хинолинила, хиноксалинила, индолила, бензимидазолила, бензоксазолила, бензизоксазолила, бензотиазолила, бензизотиазолила, бензофуранила, бензотиенила, 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинила или бензо[1,3]диоксолила; причем каждый моноциклический и бициклический гетероцикл необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, причем каждый заместитель независимо выбирают из галогена, гидрокси, алкила или алкилокси;

его фармацевтически приемлемой соли, его N-оксидной форме и его сольвату.

Второй вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib), в котором

p представляет целое число, равное 1, 2, 3 или 4;

q представляет целое число, равное 0, 1, 2, 3 или 4;

R¹ представляет водород, циано, формил, карбоксил, галоген, C _1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, полигалогенC_1-6алкил, гидрокси, C_1-6алкилокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилоксиC_1-6 алкил, C_1-6алкилтиоC_1-6алкил, гидроксиC _1-6алкил, -C=N-OR¹¹, амино, моно- или ди(C _1-6алкил)амино, аминоC_1-6алкил, моно- или ди(C _1-6алкил)аминоC_1-6алкил, C_1-6алкилкарбониламиноC _1-6алкил, аминокарбонил, моно- или ди(C_1-6алкил)аминокарбонил, арилC_1-6алкил, арилкарбонил, R^5aR^4a NC_1-6алкил, ди(арил)C_1-6алкил, арил, R ^5aR^4aN-, R^5aR^4aN-C(=O)- или Het;

R² представляет водород, C _1-6алкилокси, арил, арилокси, гидрокси, меркапто, C _1-6алкилоксиC_1-6алкилокси, C_1-6алкилтио, моно- или ди(C_1-6алкил)амино, пирролидино или радикал формулы , в которой Y представляет CH₂, O, S, NH или N-C_1-6алкил;

R³ представляет C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил, арилC_1-6 алкил, арил-O-C_1-6алкил, арилC_1-6алкил-O-C _1-6алкил, арил, ариларил, Het, Het-C_1-6алкил, Het-O-C_1-6алкил или Het-C_1-6алкил-O-C _1-6алкил или ;

каждый R⁴ и R⁵ независимо представляет водород; C_1-6алкил; C _1-6алкилоксиC_1-6алкил; арилC_1-6алкил; Het-C_1-6алкил; моно- или диC_1-6алкиламиноC _1-6алкил; бицикло[2.2.1]гептил; Het; арил; или -C(=NH)-NH ₂; или

R⁴ и R⁵ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, 4-тиоморфолино, 1,1-диоксид-тиоморфолинила, азетидинила, 2,3-дигидроизоиндол-1-ила, тиазолидин-3-ила, 1,2,3,6-тетрагидропиридила, гексагидро-1Н-азепинила, гексагидро-1Н-1,4-диазепинила, гексагидро-1,4-оксазепинила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, пирролинила, пирролила, имидазолидинила, пиразолидинила, 2-имидазолинила, 2-пиразолинила, имидазолила, пиразолила, триазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила и триазинила, каждый радикал необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из C_1-6алкила, галогенC_1-6 алкила, C_1-6алкилкарбонила, галогена, арилC_1-6 алкила, гидрокси, C_1-6алкилокси, амино, моно- или диC_1-6алкиламино, аминоC_1-6алкила, моно- или диC_1-6алкиламиноC_1-6алкила, C_1-6 алкилтио, C_1-6алкилтиоC_1-6алкила, арила, пиридила, пиримидинила, пиперидинила, необязательно, замещенного C_1-6алкилом или пирролидинилом, необязательно, замещенного арилC_1-6алкилом;

R^4a и R ^5a вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, 4-тиоморфолино, 2,3-дигидроизоиндол-1-ила, тиазолидин-3-ила, 1,2,3,6-тетрагидропиридила, гексагидро-1Н-азепинила, гексагидро-1Н-1,4-диазепинила, гексагидро-1,4-оксазепинила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, пирролинила, пирролила, имидазолидинила, пиразолидинила, 2-имидазолинила, 2-пиразолинила, имидазолила, пиразолила, триазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила и триазинила, каждый радикал необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из C_1-6алкила, полигалогенC _1-6алкила, галогена, арилC_1-6алкила, гидрокси, C_1-6алкилокси, C_1-6алкилоксиC_1-6 алкила, амино, моно- или ди(C_1-6алкил)амино, C _1-6алкилтио, C_1-6алкилоксиC_1-6алкила, C_1-6алкилтиоC_1-6алкила, арила, пиридила или пиримидинила;

R⁷ представляет водород, галоген, C_1-6алкил, арил или Het;

R ⁸ представляет водород или C_1-6алкил;

R⁹ представляет оксо; или

R⁸ и R⁹ вместе образуют радикал -CH=CH-N=;

R¹¹ представляет водород или алкил;

арил представляет моноцикл, выбранный из фенила, нафтила, аценафтила или тетрагидронафтила, причем каждый, необязательно, замещают 1, 2 или 3 заместителями, причем каждый заместитель независимо выбирают из гидрокси, галогена, циано, нитро, амино, моно- или ди(C_1-6алкил)амино, C_1-6алкила, C_2-6 алкенила, необязательно, замещенного фенилом, полигалогенC _1-6алкилом, C_1-6алкилокси, галогенС_1-6 алкилокси, карбоксилом, C_1-6алкилоксикарбонилом, аминокарбонилом, морфолинилом или моно- или ди(C_1-6алкил)аминокарбонилом;

Het представляет моноциклический гетероцикл, выбранный из N-феноксипиперидинила, пиперидинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, фуранила, тиенила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, изотиазолила, пиридинила, пиримидинила, пиразинила или пиридазинила; или бициклический гетероцикл, выбранный из хинолинила, хиноксалинила, индолила, бензимидазолила, бензоксазолила, бензизоксазолила, бензотиазолила, бензизотиазолила, бензофуранила, бензотиенила, 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинила или бензо[1,3]диоксолила; причем каждый моноциклический и бициклический гетероцикл необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из галогена, гидрокси, C_1-6алкила или C _1-6алкилокси.

Третий вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib), в котором

p представляет целое число, равное 1, 2, 3 или 4;

q представляет целое число, равное 0, 1, 2, 3 или 4;

R¹ представляет водород, циано, формил, карбоксил, галоген, C _1-6алкил, C_2-6алкенил, C_2-6алкинил, галогенC_1-6алкил, гидрокси, C_1-6алкилокси, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилтиоC_1-6 алкил, -C=N-OR¹¹, амино, моно- или ди(C_1-6 алкил)амино, аминоC_1-6алкил, моно- или ди(C_1-6 алкил)аминоC_1-6алкил, C_1-6алкилкарбониламиноC _1-6алкил, аминокарбонил, моно- или ди(C_1-6алкил)аминокарбонил, арилC_1-6алкил, арилкарбонил, R^5aR^4a NC_1-6алкил, ди(арил)C_1-6алкил, арил, R ^5aR^4aN-, R^5aR^4aN-C(=O)-, или Het;

R² представляет водород, C_1-6алкилокси, арил, арилокси, гидрокси, меркапто, C_1-6алкилоксиC_1-6алкилокси, C_1-6 алкилтио, моно- или ди(C_1-6алкил)амино, пирролидино или радикал формулы , в которой Y представляет CH₂, O, S, NH или N-C_1-6алкил;

R³ представляет C_1-6алкил, арилC_1-6алкил, арил-O-C_1-6алкил, арил-C_1-6алкил-O-C _1-6алкил арил, Het, Het-C_1-6алкил, Het-O-C _1-6алкил, Het-C_1-6алкил-O-C_1-6алкил или ;

каждый R⁴ и R⁵ независимо представляет водород; C_1-6алкил; C _1-6алкилоксиC_1-6алкил; арилC_1-6алкил; Het-C_1-6алкил; моно- или диC_1-6алкиламиноC _1-6алкил; Het; арил; или -C(=NH)-NH₂; или

R⁴ и R⁵ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, 4-тиоморфолино, 2,3-дигидроизоиндол-1-ила, тиазолидин-3-ила, 1,2,3,6-тетрагидропиридила, гексагидро-1Н-азепинила, гексагидро-1Н-1,4-диазепинила, гексагидро-1,4-оксазепинила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, пирролинила, пирролила, имидазолидинила, пиразолидинила, 2-имидазолинила, 2-пиразолинила, имидазолила, пиразолила, триазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила и триазинила, каждый радикал необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из C_1-6алкила, галогенC_1-6алкила, C _1-6алкилкарбонила, галогена, арилC_1-6алкила, гидрокси, C_1-6алкилокси, амино, моно- или диC _1-6алкиламино, C_1-6алкилтио, C_1-6 алкилтиоC_1-6алкила, арила, пиридила, пиримидинила, пиперидинила или пирролидинила, необязательно, замещенного арилC _1-6алкилом;

R^4a и R^5a вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пирролидино, пиперидино, пиперазино, морфолино, 4-тиоморфолино, 2,3-дигидроизоиндол-1-ила, тиазолидин-3-ила, 1,2,3,6-тетрагидропиридила, гексагидро-1Н-азепинила, гексагидро-1Н-1,4-диазепинила, гексагидро-1,4-оксазепинила, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ила, пирролинила, пирролила, имидазолидинила, пиразолидинила, 2-имидазолинила, 2-пиразолинила, имидазолила, пиразолила, триазолила, пиридинила, пиридазинила, пиримидинила, пиразинила и триазинила, каждый радикал необязательно замещен 1, 2, 3 или 4 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из C_1-6алкила, галогенC_1-6 алкила, галогена, арилC_1-6алкила, гидрокси, C _1-6алкилокси, амино, моно- или диC_1-6алкиламино, C_1-6алкилтио, C_1-6алкилтиоC_1-6 алкила, арила, пиридила или пиримидинила;

R ⁷ представляет водород, галоген, C_1-6алкил, арил или Het;

R⁸ представляет водород или C_1-6алкил;

R₉ представляет оксо; или

R⁸ и R⁹ вместе образуют радикал -CH=CH-N=;

R¹¹ представляет водород или C_1-6алкил;

арил представляет моноцикл, выбранный из фенила, нафтила, аценафтила или тетрагидронафтила, причем каждый, необязательно, замещают 1, 2 или 3 заместителями, причем каждый заместитель независимо выбирают из гидрокси, галогена, циано, нитро, амино, моно- или диC_1-6алкиламино, C _1-6алкила, галогенC_1-6алкила, C_1-6 алкилокси, галогенC_1-6алкилокси, карбоксила, C _1-6алкилоксикарбонила, аминокарбонила, морфолинила или моно- или диC_1-6алкиламинокарбонила;

Het представляет моноциклический гетероцикл, выбранный из N-феноксипиперидинила, пиперидинила, пирролила, пиразолила, имидазолила, фуранила, тиенила, оксазолила, изоксазолила, тиазолила, изотиазолила, пиридинила, пиримидинила, пиразинила или пиридазинила; или бициклический гетероцикл, выбранный из хинолинила, хиноксалинила, индолила, бензимидазолила, бензоксазолила, бензизоксазолила, бензотиазолила, бензизотиазолила, бензофуранила, бензотиенила, 2,3-дигидробензо[1,4]диоксинила или бензо[1,3]диоксолила; причем каждый моноциклический и бициклический гетероцикл необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из галогена, гидрокси, C_1-6алкила или C _1-6алкилокси.

Четвертый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором R¹ представляет водород, циано, галоген, алкил, галогеналкил, гидрокси, алкилокси, алкилтио, алкилоксиалкил, алкилтиоалкил, арилалкил, ди(арил)алкил, арил или Het; в частности R¹ представляет галоген, арил или Het; более в частности R¹ представляет галоген. Самое предпочтительное, R¹ представляет бром. Или R¹ представляет формил, карбоксил, C_2-6 алкенил, C_2-6алкинил, -C=N-OR¹¹, амино, моно- или ди(алкил)амино, аминоалкил, моно- или ди(алкил)аминоалкил, алкилкарбониламиноалкил, аминокарбонил, моно- или ди(алкил)аминокарбонил, арилкарбонил, R^5aR^4aNалкил, R^5a R^4aN-, R^5aR^4aN-C(=O)-.

Пятый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором p равно 1.

Шестой вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором R² представляет водород, алкилокси или алкилтио, в частности водород, C_1-6алкилокси или C_1-6алкилтио. Более в частности, R² представляет C_1-6алкилокси, предпочтительно метилокси.

Седьмой вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором R ³ представляет C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил, арилC_1-6алкил, арил, Het, Het-C_1-6алкил; в частности арил или арилC_1-6алкил; более в частности арил, такой как, необязательно, замещенный фенил или, необязательно, замещенный нафтил; даже более в частности нафтил. Или R³ представляет арил-O-C_1-6алкил, арилC_1-6 алкил-O-C_1-6алкил, ариларил, Het-O-C_1-6 алкил, Het-C_1-6алкил-O-C_1-6алкил, или ; или R³ представляет арил-O-C_1-6 алкил, арилC_1-6алкил-O-C_1-6алкил, Het-O-C _1-6алкил, Het-C_1-6алкил-O-C_1-6алкил или .

Восьмой вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором q равно 2, 3 или 4.

Девятый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором каждый R⁴ и R⁵ независимо представляет водород или C_1-6алкил, в частности C_1-6алкил, более в частности метил или этил. Предпочтительно R⁴ и R ⁵ представляют метил.

Десятый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором R⁴ и R⁵ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют радикал, выбранный из группы, состоящей из пиперидино, пиперазино, морфолино, имидазолила, триазолила, каждое из упомянутых колец необязательно замещено C_1-6алкилом; более в частности пиперидино или пиперазино, каждое из упомянутых колец необязательно замещено C_1-4алкилом; даже более в частности пиперидино или пиперазино, необязательно, замещенное C_1-4алкилом.

Одиннадцатый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором R⁷ представляет водород.

Двенадцатый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором соединение представляет соединение формулы (Ia).

Тринадцатый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором соединение представляет соединение формулы (Ib) и в котором R⁸ представляет водород и R⁹ представляет оксо.

Четырнадцатый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором соединение представляет соединение формулы (Ib), в частности, в котором R⁸ представляет алкил, более предпочтительно С _1-6алкил, например метил.

Пятнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения, представляющим интерес, является соединение формулы (Ia) или (Ib) любая его подгруппа, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором арил представляет нафтил или фенил, более предпочтительно фенил, каждый необязательно замещен одним или двумя заместителями, выбранными из галогена, например хлора; циано; алкила, например метила; или алкилокси, например метилокси.

Шестнадцатый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором R¹ помещают в 6 положение хинолинового кольца.

В рамках данной заявки атомы хинолинового кольца соединений формулы (Ia) или (Ib) нумеруются следующим образом:

Семнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения, представляющим интерес, является применение соединения формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппы, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, для получения лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции, вызванной грамположительными и/или грамотрицательными бактериями, предпочтительно бактериальной инфекции, вызванной грамположительными бактериями.

Восемнадцатым вариантом осуществления настоящего изобретения, представляющим интерес, является применение соединения формулы (Ia) или (Ib) или любой его подгруппы, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, для получения лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции, в котором соединение формулы (Ia) или (Ib) имеет IC ₉₀<15 мкл/мл против, по меньшей мере, одного вида бактерий, в частности грамположительных бактерий; предпочтительно IC ₉₀<10 мкл/мл; более предпочтительно IC₉₀<5 мкл/мл; причем величина IC₉₀ определяется, как описано ниже в настоящем изобретении.

Девятнадцатый вариант осуществления настоящего изобретения, представляющий интерес, относится к соединению формулы (Ia) или любой его подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, в котором применяют один или более, предпочтительно все из следующих определений:

R¹ представляет галоген, предпочтительно бром;

R² представляет C_1-6алкилокси, предпочтительно метилокси;

R³ представляет арил, в частности нафтил;

R⁴ и R ⁵ представляют C_1-6алкил; в частности метил;

R⁷ представляет водород;

q равно 2, 3 или 4;

p равно 1.

Предпочтительно, в соединениях формулы (Ia) и (Ib) или любой их подгруппе, как упоминается выше в качестве варианта осуществления настоящего изобретения, представляющего интерес, термин "алкил" относится к C_1-6алкилу, более предпочтительно C _1-4алкилу, и термин галогеналкил относится к полигалогенC _1-6алкилу.

Фармакология

Неожиданно было показано, что соединения согласно настоящему изобретению являются пригодными для лечения бактериальной инфекции, включая микобактериальную инфекцию, в частности заболеваний, вызванных патогенными микобактериями, такими как Mycobacterium tuberculosis (включая их латентную и устойчивую к лекарственным средствам форму), M.bovis, M.avium, M.leprae и M.marinum. Таким образом, настоящее изобретение также относится к соединениям формулы (Ia) или (Ib), как определено выше в настоящем изобретении, их фармацевтически приемлемым солям или их N-оксидным формам или их сольватам, для применения в качестве лекарственного средства, в частности для применения в качестве лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции, включая микобактериальную инфекцию.

Кроме того, настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (Ia) или (Ib), его фармацевтически приемлемых солей или его N-оксидных форм или его сольватов, также как любых его фармацевтических композиций, как описано выше в настоящем изобретении, для получения лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции, включая микобактериальную инфекцию.

Соответственно, в другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения пациента, страдающего от или подверженного риску заражения бактериальной инфекцией, включая микобактериальную инфекцию, который включает прием пациентом терапевтически эффективного количества соединения или фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.

Кроме их активности против микобактерий соединения согласно настоящему изобретению являются также активными против других бактерий. В общем, бактериальные патогенные микроорганизмы можно классифицировать как грамположительные или грамотрицательные патогенные микроорганизмы. Соединения-антибиотики с активностью против как грамположительных, так и грамотрицательных патогенных микроорганизмов обычно рассматриваются в качестве имеющих широкий спектр активности. Соединения по настоящему изобретению считаются активными против грамположительных и/или грамотрицательных бактериальных патогенных микроорганизмов, в частности против грамположительных бактериальных патогенных микроорганизмов. В частности, настоящие соединения являются активными против, по меньшей мере, одного вида грамположительных бактерий, предпочтительно против нескольких видов грамположительных бактерий, более предпочтительно против одного или более вида грамположительных бактерий и/или одного или более видов грамотрицательных бактерий.

Настоящие соединения обладают бактерицидной или бактериостатической активностью.

Примеры грамположительных и грамотрицательных аэробных и анаэробных бактерий включают Staphylococci, например S.aureus; Enterococci, например E.faecalis ; Streptococci, например S.pneumoniae, S.mutans , S.pyogens; Bacilli, например Bacillus subtilis ; Listeria, например Listeria monocytogenes; Haemophilus, например H.influenza; Moraxella , например M.catarrhalis; Pseudomonas, например Pseudomonas aeruginosa; и Escherichia, например E.coli. Грамположительные патогенные микроорганизмы, например, Staphylococci, Enterococci и Streptococci являются особенно важными из-за развития устойчивых штаммов, которые как трудно поддаются лечению, так и трудно удаляются, например, из больничной среды после их попадания. Примерами таких штаммов являются метициллин-устойчивый Staphylococcus aureus (MRSA), метициллин-устойчивый коагуляза-отрицательный стафилококк (MRCNS), пенициллин-устойчивый Streptococcus pneumoniae и Enterococcus faecium с множественной устойчивостью.

Соединения по настоящему изобретению также проявляют активность против устойчивых бактериальных штаммов.

Соединения по настоящему изобретению особенно активны против Streptococcus pneumoniae и Staphylococcus aureus , включая устойчивый Staphylococcus aureus, такой как, например, метициллин-устойчивый Staphylococcus aureus (MRSA).

Следовательно, настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (Ia) или (Ib), его фармацевтически приемлемых солей или его N-оксидных форм или его сольватов, так же как любого из его фармацевтических композиций, как описано выше в настоящем изобретении, для получения лекарственного средства для лечения бактериальной инфекции, включая инфекцию, вызванную стафилококками и/или стрептококками.

Соответственно, в другом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения пациента, страдающего от или подверженного риску заражения бактериальной инфекцией, включая инфекцию, вызванную стафилококками и/или стрептококками, который включает прием пациентом терапевтически эффективного количества соединения или фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.

Не будучи связанными какой-либо теорией, считают, что активность настоящих соединений основывается на ингибировании F1F0 ATP синтазы, в частности на ингибировании F0 комплекса F1F0 ATP синтазы, более в частности на ингибировании субъединицы c F0 комплекса F1F0 ATP синтазы, приводящем к уничтожению бактерий уменьшением клеточной концентрации ATP бактерий. Следовательно, в частности, соединения по настоящему изобретению являются активными по отношению к тем бактериям, жизнеспособность которых зависит от функционирования F1F0 ATP синтазы.

Бактериальные инфекции, которые можно лечить настоящими соединениями, включают, например, инфекции центральной нервной системы, инфекции наружнего уха, инфекции среднего уха, такие как острый отит среднего уха, инфекции черепных полостей, глазные инфекции, инфекции полости рта, такие как инфекции зубов, десен и слизистой оболочки, инфекции верхних дыхательных путей, инфекции нижних дыхательных путей, мочеполовые инфекции, желудочно-кишечные инфекции, гинекологические инфекции, септицемии, инфекции костей и суставов, инфекции кожи и структуры кожи, бактериальный эндокардит, ожоги, антибактериальную профилактику хирургической операции и антибактериальную профилактику пациентов с подавленной иммунной системой, таких как пациенты, прошедшие противораковую химиотерапию, или пациенты с пересаженными органами.

При применении выше и ниже в настоящем изобретении то, что соединения могут вылечивать бактериальную инфекцию, значит то, что соединения могут вылечивать инфекцию одного или более бактериальных штаммов.

Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель и в качестве активного ингредиента терапевтически эффективное количество соединения согласно настоящему изобретению. Соединения согласно настоящему изобретению могут формулироваться в различные фармацевтические формы для целей приема. Что касается подходящих композиций, можно упомянуть все композиции, обычно применяемые для общего приема лекарственного средства. Чтобы получить фармацевтические композиции по настоящему изобретению, эффективное количество конкретного соединения, необязательно, в виде соли присоединения в качестве активного ингредиента смешивают до однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, и носитель может охватывать широкий спектр форм в зависимости от формы получения, требуемой для приема. Эти фармацевтические композиции являются пригодными в единичной лекарственной форме, пригодной, в частности, для перорального приема или для парентеральной инъекции. Например, при получении композиций в виде пероральной лекарственной формы можно применять любую из обычных фармацевтических сред, такую как, например, вода, гликоли, масла, спирты и подобные в случае пероральных жидких средств, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердые носители, такие как крахмал, сахара, каолин, разбавители, смазывающие вещества, связующие, дезинтегрирующие агенты и подобные в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Из-за легкости их приема таблетки и капсулы представляют наиболее удобные стандартные лекарственные формы для перорального приема, и в этом случае, очевидно, применяют твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель будет обычно содержать стерильную воду, по меньшей мере, в значительной степени, хотя могут быть включены другие ингредиенты, например, чтобы облегчить растворимость. Например, можно приготовить инъецируемые растворы, в которых носитель содержит физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Можно также приготовить инъецируемые суспензии, в этом случае можно применять подходящие жидкие носители, суспендирующие агенты и подобные. Также включены твердые лекарственные средства, и предполагается, что их превращают незадолго до применения в жидкие лекарственные средства.

В зависимости от способа приема фармацевтическая композиция будет, предпочтительно, содержать от 0,05 до 99% по весу, более предпочтительно, от 0,1 до 70% по весу, даже более предпочтительно от 0,1 до 50% по весу активного ингредиента(в) и от 1 до 99,95% по весу, более предпочтительно от 30 до 99,9% по весу, даже более предпочтительно от 50 до 99,9% по весу фармацевтически приемлемого носителя, причем все проценты основываются на суммарном весе композиции.

Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать различные другие ингредиенты, известные в данной области техники, например смазывающее вещество, стабилизирующий агент, буферное вещество, эмульгатор; агент, регулирующий вязкость, поверхностно-активное вещество, консервант, ароматизирующее вещество или красящее вещество.

Особенно полезно формулировать вышеупомянутые фармацевтические композиции в единичной лекарственной форме для простоты приема и постоянства дозы. Единичная лекарственная форма, как используется в настоящем изобретении, относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных доз, каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для того, чтобы произвести требуемый терапевтический эффект, вместе с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных лекарственных форм являются таблетки (включая таблетки с риской или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошком, пластинки, суппозитории, инъецируемые растворы или суспензии и подобные и отдельные их смеси. Дневная доза соединения согласно настоящему изобретению будет, конечно, варьироваться в зависимости от применяемого соединения, способа приема, требуемого лечения и обнаруженного микобактериального расстройства. Однако обычно удовлетворительные результаты бывают получены, когда соединение согласно настоящему изобретению принимают при дневной дозе, не превышающей 1 грамма, например в диапазоне от 10 до 50 мг/кг веса тела.

Если соединения формулы (Ia) или формулы (Ib) являются активными против бактериальных инфекций, настоящие соединения можно смешивать с другими антибактериальными агентами, для того чтобы эффективно бороться с бактериальными инфекциями.

Следовательно, настоящее изобретение также относится к комбинации (a) соединения согласно настоящему изобретению и (b) одного или более других антибактериальных агентов.

Настоящее изобретение также относится к комбинации (a) соединения согласно настоящему изобретению и (b) одного или более других антибактериальных агентов для использования в качестве лекарственного средства.

Настоящее изобретение также относится к применению комбинации или фармацевтической композиции, как непосредственно определено выше, для лечения бактериальной инфекции.

Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и в качестве активного ингредиента терапевтически эффективное количество (a) соединения согласно настоящему изобретению и (b) одного или более других антибактериальных агентов, также включена в настоящее изобретение.

Весовое отношение (a) соединения согласно настоящему изобретению и (b) другого антибактериального агента (агентов) при применении их в комбинации может определяться специалистом в данной области техники. Упомянутое отношение, точная доза и частота приема зависят от используемых конкретного соединения согласно настоящему изобретению и другого антибактериального агента(в), от конкретного вылечиваемого состояния, тяжести вылечиваемого состояния, возраста, веса, пола, питания, времени приема и общего физического состояния конкретного пациента, способа приема, так же как от других назначенных лекарственных средств, которые индивид может принимать, как известно специалистам в данной области техники. Кроме того, очевидно, что эффективное дневное количество можно уменьшить или увеличить в зависимости от реакции вылечиваемого субъекта и/или в зависимости от оценки лечащего врача, прописывающего соединения настоящего изобретения. Конкретное весовое отношение для настоящего соединения формулы (Ia) или (Ib) и другого антибактериального агента может варьироваться от 1/10 до 10/1, более в частности от 1/5 до 5/1, даже более в частности от 1/3 до 3/1.

Соединения согласно настоящему изобретению и один или более других антибактериальных агентов можно смешивать в единой лекарственной форме или их можно смешивать в отдельных лекарственных формах, так что их можно принимать одновременно, раздельно или последовательно. Таким образом, настоящее изобретение также относится к лекарственной форме, содержащей (a) соединение согласно настоящему изобретению и (b) один или более других антибактериальных агентов в виде смешанной лекарственной формы для одновременного, раздельного и последовательного применения для лечения бактериальной инфекции.

Другими антибактериальными агентами, которые можно смешивать с соединениями формулы (Ia) или (Ib), являются, например, антибактериальные агенты, известные в данной области техники. Другие антибактериальные агенты включают антибиотики -лактамной группы, такие как природные пенициллины, полусинтетические пенициллины, природные цефалоспорины, полусинтетические цефалоспорины, цефамицины, 1-оксацефемы, клавулановые кислоты, пенемы, карбапенемы, нокардицины, монобактамы; тетрациклины, ангидротетрациклины, антрациклины; аминогликозиды; нуклеозиды, такие как N-нуклеозиды, C-нуклеозиды, карбоциклические нуклеозиды, бластицидин S; макролиды, такие как макролиды с 12-членным кольцом, макролиды с 14-членным кольцом, макролиды с 16-членным кольцом; ансамицины; пептиды, такие как блеомицины, грамицидины, полимиксины, бацитрацины, пептидные антибиотики с большим кольцом, содержащие лактонные связи, актиномицины, амфомицин, капреомицин, дистамицин, ендурацидины, микамицин, неокарциностатин, стендомицин, виомицин, виргиниамицин; циклогексимид; циклосерин; вариотин; саркомицин A; новобиоцин; гризеофульвин; хлорамфеникол; митомицины; фумагиллин; моненсины; пирролнитрин; фосфомицин; фусидовая кислота; D-(п-гидроксифенил)глицин; D-фенилглицин; энедиины.

Конкретными антибиотиками, которые можно смешивать с настоящими соединениями формулы (Ia) или (Ib), являются, например, бензилпенициллин (калия, прокаина, бензатина), феноксиметилпенициллин (калия), фенетициллин калия, пропициллин, карбенициллин (динатрия, фенилнатрия, инданилнатрия), сулбенициллин, тикарциллин динатрия, метициллин натрия, оксациллин натрия, клоксациллин натрия, диклоксациллин, флюклоксациллин, ампициллин, мезлоциллин, пиперациллин натрия, амоксициллин, циклациллин, гектациллин, сульбактам натрий, талампициллин гидрохлорид, бакампициллин гидрохлорид, пивмециллинам, цефалексин, цефаклор, цефалоглицин, цефадроксил, цефрадин, цефроксадин, цефапирин натрий, цефалотин натрия, цефацетрил натрия, цефсулодин натрия, цефалоридин, цефатризин, цефоперазон натрия, цефамандол, вефотиам гидрохлорид, цефазолин натрия, цефтизоксим натрия, цефотаксим натрия, цефменоксим гидрохлорид, цефуроксим, цефтриаксон натрия, цефтазидим, цефокситин, цефметазол, цефотетан, латамоксеф, клавулановая кислота, имипенем, азтреонам, тетрациклин, хлортетрациклин гидрохлорид, деметилхлортетрациклин, окситетрациклин, метациклин, доксициклин, ролитетрациклин, миноциклин, даунорубицин гидрохлорид, доксорубицин, акларубицин, канамицин сульфат, беканамицин, тобрамицин, гентамицин сульфат, дибекацин, амикацин, микрономицин, рибостамицин, неомицин сульфат, паромомицин сульфат, стрептомицин сульфат, дигидрострептомицин, дестомицин A, гидромицин B, апрамицин, сисомицин, нетилмицин сульфат, спектиномицин гидрохлорид, астромицин сульфат, валидамицин, касугамицин, полиоксин, бластицидин S, эритромицин, эритромицин эстолат, олеандомицин фосфат, трацетилолеандомицин, китасамицин, йозамицин, спирамицин, тилозин, ивермектин, мидекамицин, блеомицин сульфат, пепломицин сульфат, грамицидин S, полимиксин B, бацитрацин, колистин сульфат, колистинметансульфонат натрия, енрамицин, микамицин, виргиниамицин, капреомицин сульфат, виомицин, енвиомицин, ванкомицин, актиномицин D, неокарциностатин, бестатин, пепстатин, моненсин, ласалоцид, салиномицин, амфотерицин B, нистатин, натамицин, трикомицин, митрамицин, линкомицин, клиндамицин, клиндамицин пальмитат гидрохлорид, флавофосфолипол, циклосерин, пецилоцин, гризеофульвин, хлорамфеникол, хлорамфеникол пальмитат, митомицин C, пирролнитрин, фосфомицин, фузидовая кислота, бикозамицин, тиамулин, сикканин.

Другими микобактериальными агентами, которые можно смешивать с соединениями формулы (Ia) или (Ib), являются, например, рифампицин (=рифампин); изониазид; пиразинамид; амикацин; этионамид; этамбутол; стрептомицин; пара-аминосалициловая кислота; циклосерин; капреомицин; канамицин; тиоацетазон; PA-824; хинолоны/фторхинолоны, такие как, например, моксифлоксацин, гатифлоксацин, офлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин; макролиды, такие как, например, кларитромицин, клофазимин, амоксициллин с клавулановой кислотой; рифамицины; рифабутин; рифапентин; соединения, описанные в WO 2004/011436.

Общие методики получения

Обычно соединения согласно настоящему изобретению можно получить осуществлением последовательности стадий, каждая из которых является известной специалистам в данной области техники.

В частности, соединения формулы (Ia) или (Ib) можно получить реакцией промежуточного соединения формулы (IIa) или (IIb) с промежуточным соединением формулы (III) согласно следующей схеме реакции (1):

Схема 1

используя nBuLi в смеси пригодного основания, такого как, например, 2,2,6,6-тетраметилпиперидин или диизопропиламин, и пригодного растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран, в которой все переменные определяют, как в формуле (Ia) или (Ib). Перемешивание может увеличивать скорость реакции. Реакцию удобно проводить при температуре, варьирующейся от -20 до -70°C.

Соединения формулы (Ia) или (Ib) можно также получить реакцией промежуточного соединения формулы (IV-a) или (IV-b), в котором W₂ представляет пригодную уходящую группу, такую как, например, галоген, например хлор или бром, с пригодным первичным или вторичным амином HNR ⁴R⁵.

Считается, что специалист способен подобрать подходящие температуры, разбавители и время реакции для того, чтобы оптимизировать вышеупомянутые реакции для того, чтобы получить требуемое соединение.

Кроме того, соединения формулы (Ia) или (Ib) можно получить превращением соединений формулы (Ia) или (Ib) друг в друга согласно известным в данной области техники реакциям превращения.

Соединения формулы (Ia) или (Ib) можно превратить в соответствующие N-оксидные формы, используя известные в данной области техники методики превращения трехвалентного азота в его N -оксидную форму. Упомянутую реакцию N-окисления можно обычно проводить реакцией исходного соединения формулы (Ia) или (Ib) с подходящим органическим или неорганическим пероксидом. Подходящие неорганические пероксиды включают, например, пероксид водорода, пероксиды щелочных и щелочноземельных металлов, например пероксид натрия, пероксид калия; подходящие органические пероксиды могут включать пероксикислоты, такие как, например, бензолкарбопероксикислота или галогензамещенная бензолкарбопероксикислота, например 3-хлорбензолкарбопероксикислота, пероксоалкановые кислоты, например пероксиуксусная кислота, алкилгидропероксиды, например трет-бутилгидропероксид. Пригодными растворителями являются, например, вода, низшие спирты, например этанол и подобные, углеводороды, например толуол, кетоны, например 2-бутанон, галогенированные углеводороды, например дихлорметан, и смеси таких растворителей.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ¹ представляет галоген, например бром, можно превратить в соединение формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет арил или Het, реакцией с арил-B(OH)₂, Het-B(OH) ₂ соответственно, в присутствии пригодного катализатора, такого как, например, Pd(OAc)₂ или Pd(PPh₃ )₄, в присутствии пригодного основания, такого как, например, K₃PO₄ или Na₂CO ₃, и пригодного растворителя, такого как, например, толуол, спирт, например метанол, или 1,2-диметоксиэтан (DME).

Аналогично, соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ¹ представляет галоген, например бром, можно превратить в соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R¹ представляет алкил, например метил, обработкой подходящим алкилирующим агентом, таким как CH₃B(OH)₂ или (CH₃ )₄Sn в присутствии пригодного катализатора, такого как, например, Pd(PPh₃)₄, в пригодном растворителе, таком как, например, толуол или 1,2-диметоксиэтан (DME).

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R¹ представляет галоген, в частности бром, можно превратить в соединение формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет водород, реакцией с HCOONH₄ в присутствии пригодного катализатора, такого как, например, палладий на угле, и в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, спирт, например метанол. Те же самые условия реакции можно использовать, чтобы превратить соединение формулы (Ia) или (Ib), в котором R⁴ представляет бензил, в соединение формулы (Ia) или (Ib), в котором R⁴ представляет водород.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R¹ представляет галоген, в частности бром, можно также превратить в соединение, в котором R¹ представляет формил, реакцией с N,N-диметилформамидом в присутствии nBuLi и пригодного растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран. Затем соединения можно, кроме того, превратить в соединение формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет -CH₂-OH, реакцией с пригодным восстанавливающим агентом, таким как, например, NaBH₄ и в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, спирт, например метанол и тетрагидрофуран.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R¹ представляет C_2-6алкенил, можно получить реакцией соединения формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет галоген, например бром и подобный, с трибутил(C_2-6алкенил)оловом, таким как, например, трибутил(винил)олово, в присутствии пригодного катализатора, такого как, например, Pd(PPh₃)₄, в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, N,N-диметилформамид. Эту реакцию предпочтительно проводят при повышенной температуре.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ¹ представляет R^5aR^4aN-, можно получить из соединения формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет галоген, например бром и подобный, реакцией с R ^5aR^4aNH, в присутствии пригодного катализатора, такого как, например, трис(дибензилиденацетон)палладий, пригодного лиганда, такого как, например, 2-(ди-трет-бутилфосфино)бифенила, пригодного основания, такого как, например, натрий трет -бутоксид и пригодного растворителя, такого как, например, толуол.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ¹ представляет -C=N-OR¹¹, можно получить из соединения формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет формил, реакцией с гидроксиламин гидрохлоридом или C_1-6 алкоксиламин гидрохлоридом в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, пиридин.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R¹ представляет -CH₂ -NH₂, можно получить из соединения формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет формил, восстановлением в присутствии H₂, пригодного катализатора, такого как, например, палладий на угле, и пригодного растворителя, такого как, например, NH₃/спирт, например NH₃/метанол. Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R¹ представляет -CH₂-NH₂, можно превратить в соединение формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет -CH ₂-N(C_1-6алкил)₂, реакцией с пригодным альдегидным или кетонным реагентом, таким как, например, параформальдегид или формальдегид, в присутствии цианоборгидрида натрия, уксусной кислоты и пригодного растворителя, такого как, например, ацетонитрил.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ¹ представляет R^5aR^4aN-CH₂ -, можно получить реакцией соединения формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет формил, с пригодным реагентом формулы R^5aR^4aN-H в присутствии пригодного восстанавливающего агента, такого как, например, BH₃ CN, пригодного растворителя, такого как, например, ацетонитрил и тетрагидрофуран, и пригодной кислоты, такой как, например, уксусная кислота.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R¹ представляет амин, можно получить реакцией соединения формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет карбоксил, с пригодным азидом, таким как, например, дифенилфосфорилазид (DPPA), и пригодным основанием, таким как, например, триэтиламин, в пригодном растворителе, таком как, например, толуол. Полученный продукт подвергают реакции Карциуса, и при добавлении триметилсилилэтанола образуется карбаматное промежуточное соединение. На следующей стадии данное промежуточное соединение реагирует с тетрабутиламмоний бромидом (TBAB) в пригодном растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, чтобы получить аминопроизводное.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ¹ представляет аминокарбонил, моно- или ди(алкил)аминокарбонил или R^5aR^4aN-C(=O)-, можно получить реакцией соединения формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет карбоксил, с пригодным амином, пригодным конденсирующим реагентом, таким как, например, гидроксибензотриазол, пригодным активирующим реагентом, таким как, например, 1,1'-карбонилдиимидазол, или N,N'-дициклогексилкарбодиимид, или 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид, пригодным основанием, таким как, например, триэтиламин, пригодным растворителем, таким как, например, тетрагидрофуран и дихлорметан.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ¹ представляет арилкарбонил, можно получить реакцией: на первой стадии (a) соединения формулы (Ia) или (Ib), в котором R¹ представляет галоген, например бром и подобный, с пригодным арилальдегидом в присутствии nBuLi и пригодным растворителем, таким как, например, тетрагидрофуран. Данную реакцию предпочтительно проводить при пониженной температуре, такой как, например, -70°C. На следующей стадии (b) продукт, полученный на стадии (a), окисляют пригодными окислителями, такими как, например, оксид марганца, в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, дихлорметан.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R⁴ и R⁵ представляют кольцевую группу, замещенную алкилкарбонилом, можно получить из соответствующего соединения, в котором кольцевая группа является незамещенной, реакцией с подходящим ацилхлоридом, например ацетилхлоридом, в присутствии пригодного основания, такого как, например, триэтиламин, и пригодного растворителя, такого как, например, дихлорметан.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ⁴ и R⁵ представляют незамещенное кольцо, можно получить из соответствующего соединения, в котором кольцо является замещенным арилалкилом, реакцией с формиатом аммония в присутствии пригодного катализатора, такого как, например, палладий на угле, и пригодного растворителя, такого как, например, спирт, например метанол.

Соединение формулы (Ia), в котором R ² представляет метокси, можно превратить в соответствующее соединение формулы (Ib), в котором R⁸ представляет водород и R⁹ представляет оксо, гидролизом в присутствии пригодной кислоты, такой как, например, хлористоводородная кислота, и пригодного растворителя, такого как, например, диоксан.

Соединения формулы (Ia) или (Ib), в которых R ⁴ и R⁵ берутся вместе с азотом, к которому они присоединены, чтобы образовать 1,1-диоксидтиоморфолинил, можно получить из соответствующего тиоморфолинового производного реакцией с подходящим органическим или неорганическим пероксидом. Подходящие неорганические пероксиды включают, например, пероксид водорода, пероксиды щелочных и щелочноземельных металлов, например пероксид натрия, пероксид калия; подходящие органические пероксиды могут включать пероксикислоты, такие как, например, бензолкарбопероксикислота или галогензамещенная бензолкарбопероксикислота, например 3-хлорбензолкарбопероксикислота, пероксиалкановые кислоты, например пероксиуксусная кислота, алкилгидропероксиды, например трет-бутилгидропероксид. Пригодными растворителями являются, например, вода, низшие спирты, например этанол и подобные, углеводороды, например толуол, кетоны, например 2-бутанон, галогенированные углеводороды, например дихлорметан, и смеси этих растворителей.

Соединения формулы (Ia) или (Ib) также можно превратить в четвертичный амин реакцией с пригодным кватернизующим агентом, таким как, например, необязательно, замещенный C_1-6 алкилгалогенид, арилC_1-6алкилгалогенид, C_1-6 алкилкарбонилгалогенид, арилкарбонилгалогенид, Het¹ C_1-6алкилгалогенид или Het¹карбонилгалогенид, например метилйодид или бензилйодид, в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, ацетон, в которых Het ¹ представляет фуранил или тиенил; или бициклический гетероцикл, выбранный из бензофуранила или бензотиенила; каждый моноциклический и бициклический гетероцикл можно, необязательно, заместить 1, 2 или 3 заместителями, каждый заместитель независимо выбран из группы галогена, C_1-6алкила и арила. Упомянутые четвертичные амины представлены нижеследующей формулой, в которой R¹⁰ представляет C_1-6алкил, C_1-6алкилкарбонил, арилC_1-6алкил, арилкарбонил, Het¹C _1-6алкил или Het¹карбонил и в которых A ^- представляет фармацевтически приемлемый противоион, такой как, например, йодид.

Очевидно, что в вышеуказанных и следующих реакциях продукты реакций можно выделить из реакционной среды и, в случае необходимости, кроме того, очистить согласно методикам обычно известным в данной области техники, таким как экстракция, кристаллизация и хроматография. Кроме того, очевидно, что продукты реакций, которые существуют в более чем одной энантиомерной форме, можно выделить из их смеси известными методиками, в частности препаративной хроматографией, такой как препаративная ВЭЖХ, хиральная хроматография. Отдельные диастереомеры или отдельные энантиомеры можно также получить хроматографией со сверхкритической средой (SCF).

Промежуточные соединения формулы (IIa) или промежуточные соединения формулы (IIb), в которых R⁸ представляет водород, причем упомянутые промежуточные соединения представлены формулами (IIa-1), (IIa-2), (IIa-3), (IIa-4) или (IIb-1), можно получить согласно следующей схеме реакции (2):

Схема 2

в которой все переменные определяют, как в формуле (Ia). Схема реакций (2) включает стадию (a), в которой соответствующим образом замещенный анилин реагирует с 3-фенил-2-пропеноилхлоридом в присутствии пригодного основания, такого как пиридин или триэтиламин, и пригодного растворителя, инертного по отношению к этой реакции, такого как хлористый метилен или этилендихлорид. Реакцию удобно проводить при низкой температуре, например при 5°C. На следующей стадии (b) аддукт, полученный на стадии (a), циклизуют в присутствии AlCl₃ и хлорбензола. На следующей стадии (c) продукт, полученный в (b), реагирует с фосфорилхлоридом (POCl₃). Реакцию удобно проводить при температуре, варьирующейся между комнатной температурой и температурой кипения. В следующей стадии (d-1) конкретная R ²-группа, в которой R² представляет, например, C_1-6алкилокси радикал, вводится реакцией промежуточного соединения, полученного на стадии (c), с ^-O-C _1-6алкилом в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, HO-C_1-6алкил. Промежуточное соединение, полученное на стадии (c), можно также превратить в промежуточное соединение, в котором R² представляет, например, C _1-6алкилтио радикал, реакцией с S=C(NH₂) ₂ в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, спирт, например этанол, или смеси спирт/вода, необязательно, в присутствии пригодного основания, такого как, например, KOH, (см. стадию (d-2)), с последующей реакцией с C_1-6алкил-I в присутствии пригодного основания, такого как, например, K ₂CO₃ и пригодного растворителя, такого как, например, 2-пропанон (см. стадию (e)). Промежуточное соединение, полученное на стадии (c), можно также превратить в промежуточное соединение, в котором R² представляет -N(R^2a )(алкил), в котором R^2a представляет водород или алкил, реакцией с пригодной солью NH(R^2a)(алкила) в присутствии пригодного основания, такого как, например, карбонат калия, и пригодного растворителя, такого как, например, ацетонитрил (стадия (d-3)). Промежуточное соединение, полученное на стадии (c), можно также превратить в промежуточное соединение, в котором R ² представляет C_1-6алкилоксиC_1-6алкилокси, необязательно, замещенный C_1-6алкилокси, причем упомянутый R² представлен R^2b, реакцией с C_1-6 алкилоксиC_1-6алкилOH, необязательно, замещенным C _1-6алкилокси, в присутствии NaH и пригодного растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран (стадия (d-4)).

Промежуточные соединения формулы (IIb), в частности (IIb-1) или (IIb-2), можно получить согласно следующей схеме реакции (3).

Схема 3

Схема реакций (3) включает стадию (a), в которой хинолиновую частицу (см. стадию (c) схемы 2) превращают в хинолиноновую частицу реакцией с пригодной кислотой, такой как, например, хлористоводородная кислота. В следующей стадии (b) R⁸ заместитель вводится реакцией промежуточного соединения, полученного на стадии (a), с пригодным алкилирующим агентом, таким как, например, алкилйодид, например метилйодид, в присутствии пригодного основания, такого как, например, NaOH или бензилтриэтиламмонийхлорида, в пригодном растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран.

Промежуточные соединения формулы (IIb), в которых R⁸ и R⁹ берутся вместе, чтобы образовать радикал -CH=CH-N=, причем упомянутые промежуточные соединения представлены формулой (IIb-3), можно получить согласно следующей схеме реакции (4).

Схема 4

Схема реакций (4) включает стадию (a), на которой промежуточное соединение реагирует с NH₂ -CH₂-CH(OCH₃)₂. В следующей стадии (b) образуется конденсированная имидазолильная группа реакцией с уксусной кислотой в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, ксилол.

Промежуточные соединения формулы (III) являются соединениями, которые являются имеющимися в продаже, но их также можно получить общепринятыми методиками, обычно известными в данной области техники. Например, промежуточные соединения формулы (III) можно получить согласно следующей схеме реакции (5):

Схема 5

Схема реакций (5) включает стадию (a), на которой R³, в частности соответствующим образом замещенный арил, более в частности нафтил, или соответствующим образом замещенный фенил, реагирует по реакции Фриделя-Крафтса с подходящим ацилхлоридом, таким как 3-хлорпропионилхлорид или 4-хлорбутирилхлорид, в присутствии пригодной кислоты Льюиса, такой как, например, AlCl₃, FeCl₃, SnCl ₄, TiCl₄ или ZnCl₂, и пригодного растворителя, инертного по отношению к этой реакции, такого как хлористый метилен или этилендихлорид. Реакцию удобно проводить при температуре, варьирующейся между комнатной температурой и температурой кипения. В следующей стадии (b) аминогруппа (-NR ⁴R⁵) вводится реакцией промежуточного соединения, полученного на стадии (a), с первичным или вторичным амином (HNR ⁴R⁵).

Промежуточные соединения формулы (III) можно также получить согласно следующей схеме реакции (6):

Схема 6

Схема реакций (6) включает (a), на которой R₃-C(=O)-H, например соответствующим образом замещенный арилкарбоксальдегид, более в частности соответствующим образом замещенный фенил или нафтилкарбоксальдегид, реагирует с подходящим промежуточным соединением, таким как, например, 1-бром-4-хлорбутан, в присутствии реагента Гриньяра, и пригодным растворителем, таким как, например, диэтиловый эфир, тетрагидрофуран. Реакцию удобно проводить при низкой температуре, например 5°C. В следующей стадии (b) проводят окисления в присутствии реагента Джонса в пригодном растворителе, таком как, например, ацетон. В следующей стадии (c) аминогруппа (-NR⁴R⁵ ) вводится реакцией промежуточного соединения, полученного на стадии (b), с первичным или вторичным амином HNR⁴R ⁵ в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, ацетонитрил, и пригодного основания, такого как, например, K ₂CO₃.

Альтернативно, промежуточные соединения формулы (III) можно получить согласно следующей схеме реакции (7):

Схема 7

Схема реакций (7) включает стадию (a), в которой, например, пригодная кислота реагирует с NH(CH ₃)(OCH₃) в присутствии 1,1'-карбонилдиимидазола и пригодного растворителя, такого как, например, CH₂ Cl₂. В следующей стадии (b) продукт, полученный на стадии (a), реагирует с пригодными реагентами Гриньяра, например 4-хлорбутилмагнийбромидом, в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран. В следующей стадии (c) аминогруппа (-NR⁴R⁵) вводится реакцией промежуточного соединения, полученного на стадии (b), с первичным или вторичным амином HNR⁴R⁵ в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, ацетонитрил, и пригодного основания, такого как, например, K₂CO ₃.

Альтернативно, промежуточные соединения формулы (III), в которых q равно 1, причем упомянутые промежуточные соединения представлены формулой (III-a), можно получить согласно следующей схеме реакции (8):

Схема 8

Схема реакций (8) включает стадию, на которой пригодное ацетильное производное R³, такое как, например, ацетилциклогексан, реагирует с параформальдегидом и пригодным первичным или вторичным амином HNR⁴R ⁵, предпочтительно в его солевой форме, в присутствии пригодной кислоты, такой как, например, хлористоводородная кислота и подобные, и пригодного растворителя, такого как, например, спирт, например этанол.

Промежуточные соединения формулы (III), в которых R³ представляет R^3a'-CH ₂-CH₂- (которая является возможной для тех промежуточных соединений формулы (III), в которых R³ представляет алкил, арилалкил, арил-O-алкил, арил-алкил-O-алкил, Het-алкил, Het-O-алкил или Het-алкил-O-алкил и R^3a' является таким же, как R³, но на 2 атома углерода меньше, чем в алкильной цепи, присоединенной к остатку молекулы, и в которых q представляет 1, причем упомянутые промежуточные соединения представлены формулой (III-b), можно получить согласно следующей схеме реакции (9):

Схема 9

Схема реакций (9) включает стадию (a), в которой пригодный альдегид реагирует с ацетоном в присутствии пригодного основания, такого как, например, гидроксид натрия. В следующей стадии (b) продукт, полученный на стадии (a), реагирует с первичным или вторичным амином HNR⁴R⁵ в присутствии CH₂(=O), пригодной кислоты, такой как, например, хлористоводородная кислота и подобной, и пригодного растворителя, такого как, например, спирт, например этанол. В следующей стадии (c), продукт, полученный на стадии (b), гидрируют (H₂) в присутствии пригодного катализатора, такого как, например, палладий на угле, и пригодного растворителя, такого как, например, вода и спирт, например этанол.

Промежуточные соединения формулы (III), в которых R³ представляет галогензамещенный фенил, можно превратить в промежуточное соединение формулы (III), в котором R³ представляет фенил, замещенный арилом, реакцией с арилбороновой кислотой в присутствии пригодного основания, такого как, например, фосфат калия, пригодного катализатора, такого как, например, ацетат палладия, и пригодного лиганда, такого как, например, 2-дициклогексилфосфино-2',6'-диметоксибифенил, в подходящем растворителе, таком как, например, толуол.

Промежуточные соединения формулы (III), в которых R³ представляет галогензамещенный фенил, можно также превратить в промежуточное соединение формулы (III), в котором R³ представляет фенил, замещенный C_2-6алкенилом, необязательно, замещенным фенилом, реакцией с подходящим C_2-6алкеном, таким как, например, стирол, в присутствии пригодного основания, такого как, например, триэтиламин, пригодного катализатора, такого как, например, ацетат палладия, и пригодного лиганда, такого как, например, три-o-толилфосфин, в подходящем растворителе, таком как, например, DMF.

В случае упомянутых выше схем реакций пригодный амин HNR⁴R⁵ представляет замещенный 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептил, упомянутый амин можно получить по следующей схеме реакции (10):

Схема 10

Схема реакций (10) включает стадию реагирования соответствующим образом защищенного 2,5-диазабицикло[2.2.1]гептила, в котором P представляет, например, трет-бутилоксикарбонил, с подходящими реагентами формулы W-R', в которых W представляет пригодную уходящую группу, такую как, например, галоген, например бром и подобные, и в которых R' представляет заместитель, который нужно ввести, в присутствии пригодного основания, такого как, например, K₂CO₃, NaHCO₃ или триэтиламина, пригодного катализатора межфазного переноса, такого как, например, тетра-н-бутиламмонийхлорид, пригодного растворителя, такого как, например, ацетонитрил, и, необязательно, KI, чтобы увеличить скорость реакции. В следующей стадии (b) защитная группа удаляется реакцией с пригодными кислотами, такими как, например, трифторуксусная кислота, в присутствии пригодного растворителя, такого как, например, хлористый метилен.

Промежуточные соединения формулы (IV-a) можно получить согласно следующей схеме реакции (11):

Схема 11

В схеме реакции (11) промежуточное соединение формулы (II-a) реагирует с промежуточным соединением формулы (V), относительно его синтеза ссылаются на схемы 5, 6 и 7, в присутствии n-BuLi в пригодном растворителе, таком как, например, тетрагидрофуран, и в присутствии пригодного основания, такого как, например, диизопропиламин. Перемешивание может увеличить скорость реакции. Реакцию удобно проводить при температуре, варьирующейся от -20 до -70°C.

Промежуточные соединения формулы (IV-b) можно получить аналогично.

Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение, не ограничивая его.

Экспериментальная часть

Абсолютная стереохимическая конфигурация стереогенного атома(в) углерода в настоящем изобретении или конфигурация при двойной связи некоторых из соединений или промежуточных соединений экспериментально не определена. В этих случаях стереохимически изомерная форма, которая была выделена первой, обозначена как "A", и вторая как "B", без дальнейшей ссылки на действительную стереохимическую конфигурацию. Однако упомянутые "A" и "B" изомерные формы могут быть однозначно охарактеризованы специалистом в данной области техники, используя известные в данной области техники способы, такие как, например, дифракция рентгеновских лучей. В некоторых случаях, когда конечное соединение или промежуточное соединение, обозначенное как конкретный стереоизомер (например, энантиомер), превращают в другое конечное соединение/промежуточное соединение, последний может сохранять стереохимическую конфигурацию (A, B) первого.

В настоящем изобретении "ТГФ" обозначает тетрагидрофуран.

A. Получение промежуточных соединений

Пример A1

a. Получение промежуточного соединения 1

Раствор 6-бром-2-хлорхинолина (11,56 г, 0,048 моль) и метоксида натрия 30% в CH₃OH (45,4 мл, 0,238 моль) в CH₃OH (159 мл) перемешивали при 80°C в течение 16 часов. Смесь охлаждали и выливали в ледяную воду. Органический слой экстрагировали EtOAc, промывали соляным раствором, сушили над MgSO₄, фильтровали и растворитель упаривали. Выход: 11,38 г промежуточного соединения 1 (99%).

Пример A2

a-1. Получение промежуточного соединения 2a и 2b

5-Хлорпентаноилхлорид (0,156 моль) добавляли по каплям при 0°C к раствору AlCl₃ (0,172 моль) в CH₂Cl₂ (100 мл). Добавляли по каплям раствор нафталина (0,156 моль) в CH₂Cl ₂ (100 мл). Смесь нагревали до комнатной температуры, перемешивали в течение 2 часов, выливали на лед и экстрагировали CH₂ Cl₂. Органический слой промывали H₂O, сушили (MgSO₄), фильтровали и растворитель упаривали. Остаток (39,2 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: CH₂Cl₂/циклогексан 40/60; 20-45 мкм). Две фракции собирали и растворитель упаривали. Выход: 20 г промежуточного соединения 2a (5-хлор-1-(1-нафтил)пентан-1-она) и 12 г промежуточного соединения 2b (5-хлор-1-(2-нафтил)пентан-1-она).

a-2. Получение промежуточного соединения 4

Промежуточное соединение 4 [77972-86-2] получали согласно той же самой методике, как для промежуточного соединения 2a (A2.a-1).

a-3. Получение промежуточного соединения 5

Промежуточное соединение 5 получали согласно той же самой методике, как для промежуточного соединения 2 (A2.a-1).

b-1. Получение промежуточного соединения 3

Смесь промежуточного соединения 2a (0,0203 моль), N-метилметанамина (0,0243 моль) и K ₂CO₃ (0,0486 моль) в CH₃CN (100 мл) перемешивали при 80°C в течение 2 часов. Затем добавляли дополнительное количество N-метилметанамина (1,2 эквивалента) и K₂CO₃ (3,4 г). Смесь перемешивали при 80°C в течение ночи, выливали на лед и экстрагировали CH ₂Cl₂. Органический слой отделяли, сушили (MgSO ₄), фильтровали и растворитель упаривали. Остаток (5,31 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: CH ₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH 95/5/0,1; 35-70 мкм). Чистые фракции собирали и растворитель упаривали. Выход: 3,16 г промежуточного соединения 3. (Общая методика синтеза этого вида промежуточных соединений также описана в WO 2004/011436.)

b-2. Получение промежуточного соединения 6

Промежуточное соединение 6 [77252-96-1] получали согласно той же самой методике, как для промежуточного соединения 3 (A2.b-1), но исходя из промежуточного соединения 4.

b-3. Получение промежуточного соединения 7

Промежуточное соединение 7 получали согласно той же самой методике, как для промежуточного соединения 3 (A2.b-1), но исходя из промежуточного соединения 5.

B. Получение конечных соединений

Пример B1

Получение соединения 1

К раствору 2,2,6,6-тетраметилпиперидина (1,16 мл, 0,0068 моль) в ТГФ (25 мл) медленно добавляли при -20°C в атмосфере N₂ 2,5 M nBuLi в гексане (3 мл, 0,0074 моль). Смесь перемешивали при -20°C в течение 30 минут и затем охлаждали до -70°C. Медленно добавляли раствор промежуточного соединения 1 (1,48 г, 0,0062 моль) в ТГФ (19 мл). Смесь перемешивали при -70°C в течение 2 часов. Медленно добавляли раствор промежуточного соединения 6 (1,5 г, 0,0062 моль) в ТГФ (19 мл). Смесь перемешивали при -70°C в течение 3 часов, гидролизовали при -40°C водой и экстрагировали EtOAc. Органический слой отделяли, промывали соляным раствором, сушили над MgSO₄ , фильтровали и растворитель упаривали. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (SiO₂ 15-40 мкм, элюент: CH₂Cl₂/CH₃OH: от 98/2 до 90/10). Чистые фракции собирали и растворитель упаривали. Выход: 0,61 г соединения 1 (20%).

Соединение 2 получали согласно той же самой методике, как для промежуточного соединения 1, исходя из промежуточного соединения 1 и промежуточного соединения 3. Выход: 21%.

Соединение 3 получали согласно той же самой методике, как для промежуточного соединения 1, исходя из промежуточного соединения 1 и промежуточного соединения 7. Выход: 24%.

Пример B2

Получение соединения 4

Раствор соединения 1 (0,2 г, 0,00040 моль), фенилбороновой кислоты (0,073 г, 0,00063 моль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия (0,046 г, 0,00004 моль) в 1,2-диметоксиэтане (1,5 мл), CH ₃OH (1 мл) и 2 M растворе Na₂CO₃ (0,3 мл) перемешивали в течение 10 минут при 120°C в микроволновой печи. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду и экстрагировали CH₂Cl₂. Объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (SiO₂ 15-40 мкм, элюент: CH₂ Cl₂/CH₃OH: от 98/2 до 90/10). Чистые фракции собирали и растворитель упаривали. Продукт кристаллизовали из диэтилового эфира. Выход: 0,053 г соединения 4 (28%).

Соединение 5 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 2 и фенилбороновой кислоты. Выход: 46%.

Соединение 6 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 3 и фенилбороновой кислоты. Выход: 56%.

Соединение 7 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 1 и 2-метоксифенилбороновой кислоты. Выход: 26%.

Соединение 8 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 2 и 2-метоксифенилбороновой кислоты. Выход: 34%.

Соединение 9 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 3 и 2-метоксифенилбороновой кислоты. Выход: 90%.

Соединение 10 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 1 и 3-фуранилбороновой кислоты. Выход: 45%.

Соединение 11 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 2 и 3-фуранилбороновой кислоты. Выход: 100%.

Соединение 12 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 3 и 3-фуранилбороновой кислоты. Выход: 42%.

Соединение 13 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 1 и 2-тиенилбороновой кислоты. Выход: 43%.

Соединение 14 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 2 и 2-тиенилбороновой кислоты. Выход: 39%.

Соединение 15 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 3 и 2-тиенилбороновой кислоты. Выход: 24%.

Соединение 16 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 1 и (3-пиридинил)бороновой кислоты. Выход: 41%.

Соединение 17 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 2 и (3-пиридинил)бороновой кислоты. Выход: 37%.

Соединение 18 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 3 и (3-пиридинил)бороновой кислоты. Выход: 50%.

Соединение 19 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 1 и 2-бензофуранилбороновой кислоты. Выход: 72%.

Соединение 20 получали согласно той же самой методике, как для соединения 4, исходя из соединения 3 и 2-бензофуранилбороновой кислоты. Выход: 49%.

В таблице 1 перечислены соединения формулы (Ia) согласно настоящему изобретению, и их получали согласно одной из вышеуказанных методик (Ex. nr.).

C. Аналитические методы

LSMS

Масс-спектры некоторых соединений записывали c помощью LCMS (жидкостная хроматомасс-спектрометрия). Используемые методы описаны ниже.

Общая методика

ВЭЖХ измерения проводили, используя систему для жидкостной хроматографии Agilent 1100 серии, включающую двойной насос с дегазатором, автоматический пробоотборник, колоночный термостат, УФ-детектор и колонку, как перечислено в соответствующих способах ниже. Поток из колонки делили и подавали в масс-спектрометр. Масс-детектор оснащали источником электроспрей ионизации. Капиллярное напряжение было 3 кВ, температуру квадруполя поддерживали равной 100°C, и температура десольвации была 300°C. В качестве газа для распыления использовали азот. Сбор данных выполняли при помощи системы обработки данных Agilent Chemstation.

Способ 1

В добавление к основной методике: Обращенно-фазную ВЭЖХ осуществляли на YMC-Pack ODS-AQ C18 колонке (4,6×50 мм) со скоростью потока 2,6 мл/мин. Использовали градиентный цикл от 95% воды и 5% ацетонитрила до 95% ацетонитрила в пределах 7,30 минут и выдерживали в течение 1,20 минуты. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000. Впрыскиваемый объем был 10 мкл. Температура колонки была 35°C.

Способ 2

В добавление к основной методике: Обращенно-фазную ВЭЖХ осуществляли на YMC-Pack ODS-AQ C18 колонке (4,6×50 мм) со скоростью потока 2,6 мл/мин. Использовали градиентный цикл от 88% воды и 12% ацетонитрила до 88% ацетонитрила в пределах 3,40 минут и выдерживали в течение 1,20 минуты. Масс-спектры получали сканированием от 110 до 1000. Впрыскиваемый объем был 10 мкл. Температура колонки была 35°C.

Когда соединение является смесью изомеров, которая дает отличные пики в LCMS способе, в LCMS таблице дается только время удержания основного компонента.

D. Фармакологические примеры

D.1. Способ in vitro для испытания соединений в отношении M.tuberculosis.

Плоскодонные стерильные 96-луночные пластиковые титрационные микропланшеты заполняли 100 мкл бульонной среды Middlebrook (1×). Впоследствии исходные растворы (10× конечную испытуемую концентрацию) соединений добавляли в 25 мкл объемах к серии аналогичных лунок в колонке 2 так, чтобы обеспечить оценку их действия на бактериальный рост. Осуществляли последовательные пятикратные разбавления непосредственно в титрационных микропланшетах из колонки 2 в 11, используя специализированную автоматическую систему (Zymark Corp., Hopkinton, MA). Микродозаторы заменяли после каждых трех разбавлений, чтобы снизить до минимума ошибки дозирования высокогидрофобных соединений. Необработанные контрольные образцы с (колонка 1) и без (колонка 12) инокулята включали в каждый титрационный микропланшет. Приблизительно 5000 КОЕ на лунку Mycobacterium tuberculosis (штамм H37RV), в объеме 100 мкл в бульонной среде Middlebrook (1×), добавляли к рядам A-H за исключением колонки 12. Тот же объем бульонной среды без инокулята добавляли к колонке 12 в ряду A-H. Культуры выдерживали при 37°C в течение 7 дней во влажной атмосфере (инкубатор с открытым воздушным клапаном и непрерывной вентиляцией). За один день до конца инкубирования, 6 дней после инокуляции, добавляли во все лунки ресазурин (1:5) в объеме 20 мкл и планшеты выдерживали в течение других 24 часов при 37°C. На седьмой день измеряли флуорометрически бактериальный рост.

Флуоресценцию измеряли на флуориметре (Spectramax Gemini EM, Molecular Devices), управляемом компьютером, при длине волны возбуждения 530 нм и длине волны испускания 590 нм. Ингибирование роста в процентах, достигнутое при применении соединений, можно рассчитать согласно стандартным способам и выразить в IC ₉₀ (мкг/мл), которая определяет концентрацию для 90% ингибирования бактериального роста.

D.2. Способ in-vitro для испытуемых соединений на противобактериальную активность в отношении штамма M.Smegmatis ATCC607.

Плоскодонные стерильные 96-луночные пластиковые титрационные микропланшеты заполняли 180 мкл стерильной деионизированной воды, дополненной 0,25% BSA. Впоследствии исходные растворы (7,8× конечную испытуемую концентрацию) соединений добавляли в 45 мкл объемах к серии аналогичных лунок в колонке 2 так, чтобы обеспечить оценку их действия на бактериальный рост. Осуществляли последовательные пятикратные разбавления (45 мкл в 180 мкл) непосредственно в титрационных микропланшетах из колонки 2 в 11, используя специализированную автоматическую систему (Zymark Corp., Hopkinton, MA). Микродозаторы заменяли после каждых трех разбавлений, чтобы снизить до минимума ошибки дозирования высокогидрофобных соединений. Необработанные контрольные образцы с (колонка 1) и без (колонка 12) инокулята включали в каждый титрационный микропланшет. Приблизительно 250 КОЕ на лунку бактериального инокулята, в объеме 100 мкл в 2,8× бульонной среде Мюллера-Хинтона, добавляли к рядам A-H за исключением колонки 12. Тот же объем бульонной среды без инокулята добавляли к колонке 12 в ряду A-H. Культуры выдерживали при 37°C в течение 48 часов во влажной 5% CO₂ атмосфере (инкубатор с открытым воздушным клапаном и непрерывной вентиляцией). В конце инкубирования, через два дня после инокуляции, бактериальный рост измеряли флуорометрически. В связи с этим добавляли Alamar Blue (10×) во все лунки в объеме 20 мкл и планшеты выдерживали в течение других 2 часов при 50°C.

Флуоресценцию измеряли на флуориметре (Cytofluor, Biosearch), управляемом компьютером, при длине волны возбуждения 530 нм и длине волны испускания 590 нм (прирост 30). Ингибирование роста в процентах, достигнутое при применении соединений, можно рассчитать согласно стандартным способам и выразить в IC₉₀ (мкг/мл), который определяет концентрацию для 90% ингибирования бактериального роста. См. таблицу 3.

D.3. Способ in-vitro для испытуемых соединений на противобактериальную активность в отношении различных немикобактериальных штаммов.

Получение бактериальной суспензии для испытания на чувствительность:

Бактерии, используемые в данном исследовании, выращивали в течение ночи в колбах, содержащих 100 мл бульона Мюллера-Хинтона (Becton Dickinson - cat. no. 275730) в стерильной деионизированной воде при встряхивании при 37°C. Исходные растворы (0,5 мл на пробирку) хранили при -70°C до применения. Титрование бактерий проводили в титрационных микропланшетах, чтобы определить TCID₅₀, где TCID₅₀ представляет разбавление, которое приводит к бактериальному росту в 50% инокулированных культур.

Обычно для испытания на чувствительность использовали концентрацию инокулята приблизительно 100 TCID ₅₀.

Испытание на противобактериальную чувствительность: определение IC₉₀

Анализ на титрационном микропланшете

Плоскодонные стерильные 96-луночные пластиковые титрационные микропланшеты заполняли 180 мкл стерильной деионизированной воды, дополненной 0,25% BSA. Впоследствии исходные растворы (7,8× конечную испытуемую концентрацию) соединений добавляли в 45 мкл объемах в колонку 2. Осуществляли последовательные пятикратные разбавления (45 мкл в 180 мкл) непосредственно в титрационных микропланшетах из колонки 2, чтобы достигнуть колонки 11. Необработанные контрольные образцы с (колонка 1) и без (колонка 12) инокулята включали в каждый титрационный микропланшет. В зависимости от типа бактерий приблизительно 10-60 КОЕ на лунку бактериального инокулята (100 TCID₅₀), в объеме 100 мкл в 2,8× бульонной среде Мюллера-Хинтона, добавляли к рядам A-H за исключением колонки 12. Тот же объем бульонной среды без инокулята добавляли к колонке 12 в ряду A-H. Культуры выдерживали при 37°C в течение 24 часов в нормальной атмосфере (инкубатор с открытым воздушным клапаном и непрерывной вентиляцией). В конце инкубирования, через день после инокуляции, бактериальный рост измеряли флуорометрически. В связи с этим добавляли ресазурин (0,6 мг/мл) в объеме 20 мкл во все лунки через три часа после инокуляции и планшеты повторно выдерживали в течение ночи. Изменение цвета с голубого на розовый свидетельствовало о росте бактерий.

Флуоресценцию измеряли на флуориметре (Cytofluor Biosearch), управляемом компьютером, при длине волны возбуждения 530 нм и длине волны испускания 590 нм. Ингибирование роста в процентах, достигнутое при применении соединений, рассчитывали согласно стандартным способам. IC ₉₀ (выраженное в мкг/мл) определяли как концентрацию для 90% ингибирования бактериального роста. Результаты представлены в таблице 3.

Метод разведения в агаре.

Величины MIC₉₉ (минимальная концентрация для получения 99% ингибирования бактериального роста) можно определить проведением стандартного метода разбавления в агаре согласно NCCLS стандартам*, в которых используемая среда содержит агар Мюллера-Хинтона.

* Clinical laboratory standard institute. 2005. Methods for dilution Antimicrobial susceptibility tests for bacteria, that grows Aerobically: approved standard-sixth edition.

Испытания на время лизиса бактерий

Бактерицидную или бактериостатическую активность соединений можно определить в методе на время лизиса бактерий, используя метод разбавления в бульоне*. В испытании на время лизиса на Staphylococcus aureus и метициллин-устойчивом S. aureus (MRSA) исходный инокулят S. aurues и MRSA составляет 10⁶ КОЕ/мл в бульоне Мюллера-Хинтона. Антибактериальные соединения использовали при концентрации 0,1-10-кратный MIC (т.е. IC₉₀, как определено в анализе на титрационном микропланшете). Лунки без антибактериального агента составляли группу для контроля роста культуры. Планшеты, содержащие микроорганизмы и испытуемые соединения, выдерживали при 37°C. Через 0, 4, 24 и 48 часов после инкубирования отбирали образцы для определения количества жизнеспособных микроорганизмов последовательным разбавлением (10^-1-10^-6 ) в стерильном PBS и нанесением (200 мкл) на агар Мюллера-Хинтона. Планшеты выдерживали при 37°C в течение 24 часов и определяли число колоний. Кривые лизиса можно провести, строя график log ₁₀CFU на мл от времени. Бактерицидный эффект обычно определяют как 3-log₁₀ убывание в единицах CFU на мл в сравнении с необработанным инокулятом. Возможный остаточный эффект лекарственного средства устраняют последовательными разбавлениями и подсчетом колоний при самом большом разбавлении, используемом для построения графика.

* Zurenko G.E. et al. In vitro activities of U-100592 and U-100766, novel oxazolidinone antibacterial agents. Antimicrob. Agents Chemother. 40, 839-845 (1996).

Определение концентраций клеточного ATP

Для того чтобы анализировать изменение в общей концентрации ATP (используя ATP bioluminescence Kit, Roche), испытания проводили выращиванием культуры S. aureus (ATCC29213) в 100 мл колбах с бульоном Мюллера-Хинтона и их выдерживали в шейкере-инкубаторе в течение 24 часов при 37°C (300 об/мин). Измеряли OD ₄₀₅ нм и вычисляли CFU/мл. Разбавляли культуры до 1×10 ⁶ CFU/мл (конечная концентрация для ATP измерения: 1×10 ⁵ CFU/100 мкл на лунку) и добавляли испытуемое соединение при 0,1-10 кратном MIC (т.е. IC₉₀, как определено в анализе на титрационном микропланшете). Выдерживали эти колбы в течение 0, 30 и 60 минут при 300 об/мин и 37°C. Использовали 0,6 мл бактериальной суспензии из колб с защелкивающимся колпачком и добавляли в новые 2 мл пробирки Эппендорфа. Добавляли 0,6 мл реагента для лизиса клеток (Roche kit), встряхивали при максимальной скорости и выдерживали в течение 5 минут при комнатной температуре. Охлаждали на льду. Позволяли люминометру нагреться до 30°C (Luminoskan Ascent Labsystems с инжектором). Наполняли одну колонку (=6 лунок) 100 мкл того же образца. Добавляли 100 мкл люциферазного реагента в каждую лунку, используя системы впрыскивания. Измеряли люминесценцию в течение 1 секунды.

STA 29213 обозначает Staphylococcus aureus (ATCC29213); SPN 6305 обозначает Streptococcus pneumoniae (ATCC6305); MSM 607 обозначает M.Smegmatis (ATCC607); ATCC обозначает американская коллекция типовых культур.