пиримидопиридазиновые производные, пригодные в качестве р38 марк

Формула изобретения

1. Соединение формулы (IA) или (IB) или его фармацевтически приемлемая соль



где

R^2a, R^2b , R^2c независимо выбирают из H, галогена и C₁ -C₆алкила;

Y представляет собой -O- или -S(O) _p-, где p равно 0, 1 или 2; и

R¹ представляет собой радикал формулы (IIC)



где

T представляет собой -N или -CH;

R³ представляет собой H или F.

2. Соединение по п.1, в котором R¹ представляет собой радикал формулы (IIC), где R³ представляет собой фтор.

3. Соединение по п.1 или 2, в котором R¹ представляет собой радикал формулы (IIC), где T представляет собой -CH.

4. Соединение по п.1 или 2, в котором Y представляет собой -S-.

5. Соединение по п.3, в котором Y представляет собой -S-.

6. Соединение по п.1 или 2, в котором R^2a, R^2b и R ^2c независимо выбирают из H, F и Cl.

7. Соединение по п.3, в котором R^2a, R^2b и R^2c независимо выбирают из H, F и Cl.

8. Соединение по п.4, в котором R^2a, R^2b и R^2c независимо выбирают из H, F и Cl.

9. Соединение по п.1 или 2, в котором R^2a представляет собой H, R^2b представляет собой 2-хлор или 2-фтор и R^2c представляет собой 6-хлор или 6-фтор.

10. Соединение по п.3, в котором R^2a представляет собой H, R^2b представляет собой 2-хлор или 2-фтор и R^2c представляет собой 6-хлор или 6-фтор.

11. Соединение по п.4, в котором R^2a представляет собой H, R^2b представляет собой 2-хлор или 2-фтор и R^2c представляет собой 6-хлор или 6-фтор.

12. Соединение по п.5, в котором R^2a представляет собой H, R^2b представляет собой 2-хлор или 2-фтор и R^2c представляет собой 6-хлор или 6-фтор.

13. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью, ингибирующей p38 MAP киназу, содержащая соединение по любому из предшествующих пунктов вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями.

14. Композиция по п.13, которая приспособлена для ингаляции для легочного введения.

15. Применение соединения формулы (IA) или (IB) по одному из пп.1-12 для лечения хронической эозинофильной пневмонии, астмы, COPD, синдрома расстройства дыхания у взрослых (ARDS), обострения гиперактивности дыхательных путей как следствие другой лекарственной терапии или заболевания дыхательных путей, которое связано с легочной гипертензией.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к соединениям и композициям, которые являются p38 MAPK ингибиторами, пригодными в качестве противовоспалительных агентов для лечения, в частности, заболеваний дыхательных путей.

Уровень техники настоящего изобретения

Митоген-активируемые протеинкиназы (MAPK) составляют семейство пролин-направленных серин/треониновых киназ, которые активируют свои субстраты двойным фосфорилированием. Существует четыре известных человеческих изоформы p38 MAP киназы, p38 , p38 , p38 и p38 . p38 киназы, которые также известны как белки, связывающие цитокинподавляющие противовоспалительные средства (CSBP), стресс-активированные протеинкиназы (SAPK) и RK, являются ответственными за фосфорилирование (Stein et al., Ann. Rep. Med. Chem., 1996, 31, 289-298) и активацию транскрипционных факторов (таких как ATF-2, MAX, CHOP и C/ERPb), а также другие киназы (такие как MAPKAP-K2/3 или MK2/3), и они сами активируются физическим или химическим стрессом (например, УФ, осмотическим стрессом), провоспалительными цитокинами и бактериальными липополисахаридами (LPS) (Herlaar E. & Brown Z., Molecular Medicine Today, 1999, 5, 439-447). Показано, что продукты p38 фосфорилирования опосредуют синтез воспалительных цитокинов, включая фактор некроза опухолей альфа (TNF ), интерлейкин-(IL-)-1 и циклооксигеназу-2 (COX-2). Также известно, что IL-1 и TNF стимулируют синтез других провоспалительных цитокинов, таких как IL-6 и IL-8.

IL-1 и TNF являются биологическими веществами, синтезируемыми рядом клеток, такими как моноциты или макрофаги. Было показано, что IL-1 опосредует биологические активности, которые, как считается, являются важными в иммунорегуляции и других физиологических состояниях, таких как воспаление (например, Dinarello et al., Rev. Infect. Disease, 1984, 6, 51). Избыточный или нерегулируемый TNF синтез (в частности, TNF ) вовлечен в опосредование или ухудшение ряда заболеваний, и считают, что в общем TNF может вызывать или способствовать эффектам воспаления. IL-8 представляет собой хемотаксический фактор, синтезируемый несколькими типами клеток, включая мононуклеарные клетки, фибробласты, эндотелиальные клетки и кератиноциты. Его синтез эндотелиальными клетками индуцируется IL-1, TNF или липополисахаридом (LPS). IL-8 стимулирует ряд функций in vitro. Было показано, что он обладает свойствами хемоаттрактанта по отношению к нейтрофилам, T-лимфоцитам и базофилам. Усиление синтеза IL-8 также является ответственным за хемотаксис нейтрофилов в области воспаления in vivo.

Ожидают, что ингибирование передачи сигнала с помощью p38, которое в добавление к IL-1, TNF и IL-8, описанным выше, также требуется для синтеза и/или действия нескольких дополнительных провоспалительных белков (например, IL-6, GM-CSF, COX-2, коллагеназы и стромелизина), будет представлять собой очень эффективный механизм регуляции избыточной и разрушительной активности иммунной системы. Данное ожидание поддерживается мощными и разнообразными противовоспалительными активностями, описанными для ингибиторов p38 киназы (Badger et al., J. Pharm. Exp. Thera., 1996, 279, 1453-1461; Griswold et al., Pharmacol. Comm., 1996, 7, 323-229). В частности, ингибиторы p38 киназы описаны в качестве потенциальных агентов для лечения ревматоидного артрита. В добавление к взаимосвязям между p38 активацией и хроническим воспалением и артритом, также имеются данные, подразумевающие участие p38 в патогенезе заболеваний дыхательных путей, в частности COPD и астмы. Стрессовые стимулы (включая курение табака, инфекции или продукты окисления) могут вызывать воспаление в районе легких. Показано, что ингибиторы p38 ингибируют индуцированные LPS и овальбумином в дыхательных путях TNF-q IL-1 , IL-6, IL-4, IL-5 и IL-13 (Haddad et al., Br. J. Pharmacol., 2001, 132 (8), 1715-1724; Underwood et al., Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. 2000, 279, 895-902; Duan et al., 2005 Am. J. Respir. Crit. Care Med., 171, 571-578; Escott et al. Br. J. Pharmacol., 2000, 131, 173-176; Underwood et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000, 293, 281-288). Кроме того, они значительно ингибируют нейтрофилез и высвобождение MMP-9 в моделях животных с применением LPS, озона или при курении сигарет. Имеется также значительный комплекс данных доклинических исследований, указывающий на потенциальные преимущества ингибирования p38 киназы, которое может быть применимо в легком (Lee et al., Immunopharmacology, 2000, 47, 185-200). Таким образом, терапевтическое ингибирование активации p38 может быть важным для регуляции воспаления дыхательных путей.

Причастность p38MAPK пути к различным заболеваниям рассматривалась P. Chopra et al. (Expert Opinion on Investigational Drugs, 2008, 17(10), 1411-1425). Считают, что соединения настоящего изобретения можно применять для лечения заболеваний, опосредованных p38, таких как астма, хронический или острый бронхостеноз, бронхит, острое повреждение легких и бронхоэктаз, легочная артериальная гипертензия, туберкулез, рак легкого, воспаление в общем (например, воспалительное заболевание кишечника), артрит, нейровоспаление, боль, лихорадка, фиброзные заболевания, легочные заболевания и заболевания (например, гипероксическое альвеолярное повреждение), сердечно-сосудистые заболевания, реперфузионное повреждение после ишемии и застойная сердечная недостаточность, кардиомиопатия, инсульт, ишемия, реперфузионное повреждение, почечное реперфузионное повреждение, отек головного мозга, травма нервной системы и травма головного мозга, нейродегенеративные заболевания, заболевания центральной нервной системы, болезни печени и нефриты, желудочно-кишечные заболевания, язвенные болезни, болезнь Крона, болезни глаз, офтальмологические заболевания, глаукома, сильное повреждение глазной ткани и глазные травмы, диабет, диабетическая нефропатия, заболевания кожи, миалгия в результате инфекции, грипп, эндотоксиновый бактериально-токсический шок, синдром токсического шока, аутоиммунное заболевание, отторжение трансплантата, заболевания, связанные с атрофией костной ткани, множественный склероз, псориаз, экзема, заболевания женской репродуктивной системы, патологические (но не злокачественные) состояния, такие как гемангиомы, ангиофиброма носоглотки и бессосудистый некроз костей, доброкачественные и злокачественные опухоли/неоплазия, включая рак, лейкемию, лимфому, системную красную волчанку (SLE), ангиогенез, включая неоплазию, кровотечение, коагуляцию, радиационное повреждение и/или метастаз. Постоянное высвобождение активного TNF может вызывать кахексию и анорексию, и TNF может приводить к смерти. TNF также вовлечен в инфекционные заболевания. Они включают, например, малярию, микобактериальную инфекцию и менингит. Они также включают вирусные инфекции, такие как ВИЧ, вирус гриппа и вирус герпеса, включая вирус простого герпеса 1-го типа (HSV-1), вирус простого герпеса 2-го типа (HSV-2), цитомегаловирус (CMV), вирус ветряной оспы (VZV), вирус Эпштейна-Барр, человеческий вирус герпеса-6 (HHV-6), человеческий вирус герпеса-7 (HHV-7), человеческий вирус герпеса-8 (HHV-8), псевдобешенство и ринотрахеит, среди других.

Известные ингибиторы P38 киназы рассматриваются G.J. Hanson (Expert Opinions on Therapeutic Patents, 1997, 7, 729-733) J. Hynes et al. (Current Topics in Medicinal Chemistry, 2005, 5, 967-985), C. Dominguez et al. (Expert Opinions on Therapeutics Patents, 2005, 15, 801-816) и L.H. Pettus & R.P. Wurtz (Current Topics in Medicinal Chemistry, 2008, 8, 1452-1467). P38 ингибиторы, содержащие триазанафталиноновую кольцевую систему, являются известными в данной области техники, например, WO 1998/027098.

Сущность настоящего изобретения

Соединения настоящего изобретения представляют собой ингибиторы p38 митоген-активируемой протеинкиназы ("p38 MAPK", "p38 киназы" или "p38"), включая p38 киназу, и представляют собой ингибиторы синтеза цитокинов и хемокинов, включая синтез TNF и IL-8. Они имеют ряд терапевтических применений, для лечения воспалительных заболеваний, в частности аллергических и неаллергических заболеваний дыхательных путей, более конкретно обструктивной болезни дыхательных путей или воспалительного заболевания дыхательных путей, таких как хроническое обструктивное заболевание легких ("COPD") и астма. Следовательно, они особенно подходят для доставки в легкие ингаляцией через нос или глотку.

Согласно настоящему изобретению обеспечивают соединением формулы (IA) или (IB), или его фармацевтически приемлемой солью

где

R^2a, R^2b, R^2c независимо выбирают из H, галогена и C₁-C₆алкила;

Y представляет собой -O- или -S(O)_p-, где p равно 0, 1 или 2; и

R¹ представляет собой радикал формулы (IIA), (IIB), (IIC) или (IID)

где

m равно 0 или 1;

T представляет собой -N или -CH;

R ³ представляет собой H или F;

R⁴ представляет собой -CH₃; -C₂H₅ ; -CH₂OH, CH₂SCH₃; -SCH ₃ или -SC₂H₅;

R ⁵ представляет собой -CH₃ или -C₂ H₅;

R⁶ представляет собой H или представляет собой один или более заместителей, причем каждый независимо выбирают из C₁-C₆алкила, гидрокси, галогена и радикалов формул (IIIA), (IIIB) и (IIIC):

где

R^61a и R^61b независимо представляют собой H или C₁ -C₆алкил, или R^61a и R^61b, взятые вместе с атомом азота, с которым они соединены, образуют 6-членное гетероциклическое кольцо, необязательно содержащее дополнительный гетероатом, выбранный из N и O;

p равно 1 или 2.

В данный момент предпочтительный подкласс соединений настоящего изобретения включает соединения, в которых, в любой совместимой комбинации:

Y представляет собой -S-;

R^2a, R^2b и R^2c независимо выбирают из H, F и Cl, например, когда R^2a представляет собой H, R^2b представляет собой 2-хлор или 2-фтор, и R^2c представляет собой 6-хлор или 6-фтор;

R¹ представляет собой радикал формулы (IIC), в котором R³ представляет собой фтор;

R¹ представляет собой радикал формулы (IIC), в котором T представляет собой -C.

В другом аспекте настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие соединение настоящего изобретения вместе с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями. Особенно предпочтительными являются композиции, приспособленные для ингаляции для легочного введения.

В другом аспекте настоящее изобретение включает применение соединения настоящего изобретения для лечения заболеваний или состояний, для которых полезно ингибирование активности p38 MAP киназы. Лечение обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей является предпочтительным применением. Все формы обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей можно потенциально лечить соединениями настоящего изобретения, в частности обструктивные или воспалительные заболевания дыхательных путей, которые являются членами, выбранными из группы, состоящей из хронической эозинофильной пневмонии, астмы, COPD, COPD, которая включает хронический бронхит, эмфиземы легких или одышки, связанной или не связанной с COPD, COPD, которая характеризуется необратимой, прогрессивной обструкцией дыхательных путей, синдрома расстройства дыхания у взрослых (ARDS), обострения гиперреактивности дыхательных путей вследствие другой фармакотерапии и заболеваний дыхательных путей, которые связаны с легочной гипертензией, хронических воспалительных заболеваний, включая кистозный фиброз, бронхоэктаз и легочный фиброз (идиопатический). Предполагается эффективность при введении ингибиторов p38 киназы или местно в легкое (например, ингаляцией и интраназальной доставкой) или посредством системного пути (например, пероральная, внутривенная и подкожная доставка).

Соединения настоящего изобретения могут существовать в одной или более геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных и таутомерных формах, включая, но не ограничиваясь, цис- и транс-формы, E- и Z-формы, R-, S- и мезоформы, кето- и енол-формы. Если не указано особо, ссылка на конкретное соединение включает все данные изомерные формы, включая их рацемические и другие смеси. В случае необходимости данные изомеры можно выделять из их смесей, применяя или приспосабливая известные способы (например, хроматографические способы и способы перекристаллизации). В случае необходимости данные изомеры можно получить, используя модификации известных способов (например, асимметрический синтез).

Описание настоящего изобретения

Как применяют в настоящем изобретении, термин "соль" включает соли присоединения основания, соли присоединения кислоты и аммониевые соли. Как вкратце упоминалось выше, соединения настоящего изобретения, которые являются кислыми, могут образовывать соли, включая фармацевтически приемлемые соли, с основаниями, такими как гидроксиды щелочных металлов, например, гидроксидами натрия и калия; гидроксидами щелочноземельных металлов, например, гидроксидами кальция, бария и магния; с органическими основаниями, например, N-метил-D-глюкамином, холин трис(гидроксиметил)аминометаном, L-аргинином, L-лизином, N-этилпиперидином, дибензиламином и подобными. Те соединения настоящего изобретения, которые являются основными, могут образовывать соли, включая фармацевтически приемлемые соли, с неорганическими кислотами, например, с галогенводородными кислотами, такими как хлористоводородная и бромистоводородная кислота, серной кислотой, азотной кислотой или фосфорной кислотой и подобными, и с органическими кислотами, например, уксусной, трифторуксусной, винной, янтарной, фумаровой, малеиновой, яблочной, салициловой, лимонной, метансульфоновой, п-толуолсульфоновой, бензойной, бензолсульфоновой, глютаминовой, молочной и миндальной кислотой и подобными. Те соединения (I), которые содержат основный атом азота, могут также образовывать четвертичные соли аммония с фармацевтически приемлемым противоионом, таким как аммоний, хлорид, бромид, ацетат, формиат, п-толуолсульфонат, сукцинат, гемисукцинат, нафталин-биссульфонат, метансульфонат, трифторацетат, ксинафоат и подобными. Для обзора кислот см. Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties. Selection, and Use, Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).

Ожидается, что соединения настоящего изобретения можно получить в виде гидратов и сольватов. Любая ссылка в настоящем изобретении, включая формулу изобретения настоящего изобретения, на "соединения, относящиеся к настоящему изобретению", или "соединения настоящего изобретения", или "настоящие соединения" и подобные включает ссылку на соли, гидраты и сольваты данных соединений. Термин 'сольват' применяют в настоящем изобретении для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение настоящего изобретения и стехиометрическое количество одной или более молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например, этанола. Термин 'гидрат' применяют, когда упомянутым растворителем является вода.

Отдельные соединения настоящего изобретения могут существовать в нескольких полиморфных формах, и их можно получить с различными кристаллическими структурами.

Соединения можно также вводить в форме их пролекарств. Таким образом, некоторые производные соединений, которые могут быть активными в своей собственной форме или которые сами могут обладать небольшой или не обладать фармакологической активностью, могут, при введении в или на тело, превращаться в соединения настоящего изобретения, обладающие требуемой активностью, например, гидролитическим расщеплением. Данные производные называют 'пролекарствами'. Дополнительную информацию о применении пролекарств можно найти в Prodrugs as Novel Delivery Systems. Vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi and V.J. Stella) и Bioreversible Carriers in Drug Design. Pergamon Press, 1987 (ed. E.B. Roche, American Pharmaceutical Association; C.S. Larsen и J. Østergaard, Design and application of prodrugs, In Textbook of Drug Design and Discovery, 3 ^rd Edition, 2002, Taylor and Francis).

Пролекарства согласно настоящему изобретению можно, например, получать заменой подходящих функциональных групп, присутствующих в соединениях формулы (I), определенными группировками, известными специалистам в данной области техники как 'прогруппировки', как описано, например, в Design of Prodrugs H. Bundgaard (Elsevier, 1985). Данные примеры могли представлять собой пролекарства карбоксильной группы (такие как -CO-O-CH₂-O-CO-трет-Bu, как применяют в пивампициллиновом пролекарстве ампициллина), амида (-CO-NH-CH₂-NAlk₂) или амидина (-C(=N-O-CH ₃)-NH₂).

Применение

Как упоминалось выше, соединения настоящего изобретения являются p38MAPK ингибиторами и, таким образом, их можно применять для лечения заболеваний или состояний, для которых полезно ингибирование p38 фермента. Данные заболевания и состояния являются известными из литературы, и несколько из них упоминалось выше. Однако соединения обычно применяют в качестве противовоспалительных агентов, в частности для применения в лечении респираторных заболеваний. В частности, соединения можно применять для лечения хронической обструктивной болезни легких (COPD), хронического бронхита, фиброза легкого, пневмонии, острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), легочной эмфиземы или вызванной курением эмфиземы, внутренней (неаллергической) астмы и внешней (аллергической) астмы, мягкой астмы, умеренной астмы, тяжелой астмы, устойчивой к стероидам астмы, нейтрофильной астмы, бронхиальной астмы, астмы, вызванной упражнениями, профессиональной астмы и астмы, вызванной постбактериальной инфекцией, кистозного фиброза, легочного фиброза и бронхоэктаза.

Композиции

Как упоминалось выше, соединения, относящиеся к настоящему изобретению, являются ингибиторами p38 киназы и являются пригодными для лечения нескольких заболеваний, например, воспалительных заболеваний дыхательных путей. Примеры данных заболеваний приводятся выше, и они включают астму, ринит, аллергический синдром дыхательных путей, бронхит и хроническую обструктивную болезнь легких.

Ясно, что конкретные количества доз для конкретного пациента будут зависеть от ряда факторов, включая активность конкретного применяемого соединения, возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола, диеты, времени введения, пути введения, скорости выведения, комбинации лекарственных средств и тяжести конкретного заболевания, подвергаемого лечению. Оптимальные количества дозы и частота дозирования будут определяться клиническими испытаниями, как требуется в фармацевтической области техники. В общем, диапазон дневных доз для перорального введения будет лежать в пределах диапазона от приблизительно от 0,001 мг до приблизительно 100 мг на килограмм веса тела человека, часто от 0,01 мг до приблизительно 50 мг на килограмм, например, от 0,1 до 10 мг на килограмм, в единичных или разделенных дозах. В общем, диапазон дневных доз для ингаляционного введения будет лежать в диапазоне от приблизительно 0,1 мкг до приблизительно 1 мг на килограмм веса тела человека, предпочтительно от 0,1 мкг до 50 мкг на кг, в единичных или разделенных дозах. С другой стороны, в некоторых случаях может быть необходимо применять дозы, находящиеся вне данных пределов. Для целей настоящего изобретения ингаляционное введение является предпочтительным.

Соединения, относящиеся к настоящему изобретению, можно получить для введения любым способом, соответствующим их фармакокинетическим свойствам. Перорально вводимые композиции могут быть в форме таблеток, капсул, порошков, гранул, пастилок, жидких или гелеобразных препаратов, таких как пероральные, местные или стерильные парентеральные растворы или суспензии. Таблетки и капсулы для перорального введения могут представлять собой единичную лекарственную форму и могут содержать общепринятые вспомогательные вещества, такие как связующие агенты, например, патока, камедь, желатин, сорбит, трагакант, или поливинилпирролидон; наполнители, например, лактоза, сахар, кукурузный крахмал, фосфат кальция, сорбит или глицин; смазывающее вещество для изготовления таблеток, например, стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль или оксид кремния; разрыхлители, например, картофельный крахмал, или приемлемые смачивающие агенты, такие как лаурилсульфат натрия. Таблетки можно покрывать согласно способам, хорошо известным в стандартной фармацевтической практике. Пероральные жидкие препараты могут быть в форме, например, водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, или могут быть представлены в виде сухого продукта для разведения в воде или другой подходящей среде перед применением. Данные жидкие препараты могут содержать общепринятые добавки, такие как суспендирующие агенты, например, сорбит, патоку, метилцеллюлозу, сироп глюкозы, желатин, гидрированные пищевые жиры; эмульгаторы, например, лецитин, моноолеат сорбитана или аравийскую камедь; неводные среды (которые могут содержать пищевые масла), например, миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, жирные сложные эфиры, такие как глицерин, пропиленгликоль или этиловый спирт; консерванты, например, метил или пропил п-гидроксибензоат или сорбиновую кислоту, и, по желанию, общепринятые ароматизаторы или красители.

Для местного нанесения на кожу лекарственное средство можно изготавливать в виде крема, лосьона или мази. Кремовые или мазевые рецептуры, которые можно применять для лекарственного средства, представляют собой общепринятые рецептуры, хорошо известные в данной области техники, например, как описано в стандартных руководствах по фармацевтике, таких как британская фармакопея.

Активный ингредиент можно также вводить парентерально в стерильной среде. В зависимости от применяемой среды и концентрации лекарственное средство можно или суспендировать, или растворять в среде. Предпочтительно, вспомогательные вещества, такие как местный анестетик, консервант и буферное вещество, можно растворять в среде.

Однако для лечения воспалительного заболевания дыхательных путей соединения настоящего изобретения можно также формулировать для ингаляции, например, в виде назального спрея, или сухого порошка, или аэрозольных ингаляторов. Для доставки ингаляцией активное соединение находится предпочтительно в форме микрочастиц. Их можно получить рядом способов, включая распылительную сушку, лиофилизацию и микронизацию. Аэрозоль можно получать, применяя, например, распылитель под давлением или ультразвуковой распылитель, предпочтительно применяя дозированные аэрозоли, распыляющиеся под действием пропеллента, или введение без применения пропеллента микронизированного активного соединения из, например, ингаляционных капсул или других систем доставки на основе "сухого порошка".

Как пример, композицию настоящего изобретения можно получить в виде суспензии для доставки из ингалятора или в виде аэрозоля в жидком пропелленте, например, для применения в ингаляторе отмеренных доз с распылением сжатым воздухом (PMDI). Пропелленты, пригодные для применения в PMDI, являются известными специалистам и включают CFC-12, HFA-134a, HFA-227, HCFC-22 (CCl₂ F₂) и HFA-152 (CH₄F₂ и изобутан).

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция настоящего изобретения находится в форме сухого порошка, для доставки, применяя порошковый ингалятор (DPI). Многие типы DPI являются известными.

Микрочастицы для доставки введением можно формулировать со вспомогательными веществами, которые способствуют доставке и высвобождению. Например, в порошковой рецептуре микрочастицы можно формулировать с большими частицами носителя, которые способствуют протеканию из DPI в легкое. Подходящие частицы носителей являются известными и включают частицы лактозы; они могут обладать масс-медианным аэродинамическим диаметром, большим чем 90 мкм.

В случае рецептуры на основе аэрозоля примером является

Соединение настоящего изобретения	24 мг/емкость
Лецитин, NF жидк. конц.	1,2 мг/емкость
Трихлорфторметан, NF	4,025 г/емкость
Дихлордифторметан, NF	12,15 г/емкость

Активные соединения можно дозировать, как описано, в зависимости от применяемой системы для ингаляции. В добавление к активным соединениям формы для введения могут дополнительно содержать вспомогательные вещества, такие как, например, пропелленты (например, фриген в случае дозированных аэрозолей), поверхностно-активные вещества, эмульгаторы, стабилизаторы, консерванты, ароматизаторы, наполнители (например, лактозу в случае порошковых ингаляторов) или, при необходимости, дополнительные активные соединения.

Для целей ингаляции доступен большой ряд систем, с помощью которых можно генерировать или вводить аэрозоли с оптимальным размером частиц, применяя способы ингаляции, которые являются пригодными для пациента. В добавление к применению вспомогательных устройств (спейсерные устройства, расширительные устройства) и грушевидных емкостей (например, Nebulator®, Volumatic®) и автоматических устройств, испускающих распыляемый спрей (Autohaler®), для дозированных аэрозолей, в частности в случае порошковых ингаляторов, имеется ряд технических решений (например, Diskhaler®, Rotadisk®, Turbohaler® или ингаляторы, например, как описано в EP-A-0505321). Дополнительно, соединения настоящего изобретения можно доставлять в многокамерных устройствах, таким образом, обеспечивая доставку комбинации агентов.

Комбинации

Другие соединения можно комбинировать с соединениями, относящимися к настоящему изобретению, для предотвращения и лечения воспалительных заболеваний, в частности респираторных заболеваний. Таким образом, настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим терапевтически эффективное количество соединения настоящего изобретения и один или более других терапевтических агентов. Подходящие терапевтические агенты для комбинационной терапии с соединениями настоящего изобретения включают, но не ограничиваются, (1) кортикостероиды, такие как пропионат флутиказон, флутиказон фуроат, мометазон фуроат, беклометазон дипропионат, циклезонид, будезонид, GSK 685698, GSK 870086, QAE 397, QMF 149, TPI-1020; (2) агонисты 2-адренорецепторов, такие как сальбутамол, альбутерол, тербуталин, фенотерол и долгодействующие агонисты 2-адренорецепторов, такие как сальметерол, индакатерол, формотерол (включая формотерол фумарат), арформотерол, кармотерол, GSK 642444, GSK 159797, GSK 159802, GSK 597501, GSK 678007, AZD3199; (3) комбинационные продукты, состоящие из кортикостероида/долгодействующего 2 агониста, такие как сальметерол/флутиказонпропионат (Advair/Seretide), формотерол/будезонид (Symbicort), формотерол/флутиказонпропионат (Flutiform), формотерол/циклезонид, формотерол/мометазонфуроат, индакатерол/мометазонфуроат, индакатерол/QAE 397, GSK 159797/GSK 685698, GSK 159802/GSK 685698, GSK 642444/GSK 685698, GSK 159797/GSK 870086, GSK 159802/GSK 870086, GSK 642444/GSK 870086, арформотерол/циклезонид; (4) антихолинергические средства, например, антагонисты мускариновых-3 (M3) рецепторов, такие как ипратропия бромид, тиотропия бромид, аклидиний (LAS-34273), NVA-237, GSK 233705, даротропий, GSK 573719, GSK 961081, QAT 370, QAX 028; (5) M3-антихолиноэргические/ 2-адренорецепторные агонисты с двойным фармакологическим действием, такие как GSK961081; (6) модуляторы лейкотриенов, например, антагонисты лейкотриенов, такие как монтелукаст, зафируласт или пранлукаст, или ингибиторы биосинтеза лейкотриенов, такие как зилетуон или BAY-1005, или LTB4 антагонисты, такие как амелубант, или FLAP ингибиторы, такие как GSK 2190914, AM-103; (7) ингибиторы фосфодиэстеразы-IV (PDE-IV) (пероральные или ингаляционные), такие как рофлумиласт, циломиласт, оглемиласт, ONO-6126, тетомиласт, тофимиласт, UK 500,001, GSK 256066; (8) антигистаминовые препараты, например, селективные антагонисты гистамин-1 (H1) рецептора, такие как фексофенадин, цитиризин, лоратидин или астемизол или двойные антагонисты H1/H3 рецепторов, такие как GSK 835726, GSK 1004723; (9) антитуссивные вещества, такие как кодеин или декстраморфан; (10) муколитик, например, N-ацетилцистеин или фудостеин; (11) отхаркивающее средство/мукокинетический модулятор, например, амброксол, гипертонические растворы (например, солевой раствор или маннит) или поверхностно-активное вещество; (12) пептидный миколитик, например, рекомбинантную человеческую дезоксирибонуклеазу I (дорназа-альфа и rhDNase) или хелицидин; (13) антибиотики, например, азитромицин, тобрамицин и азтреонам; (14) неселективные COX-1/COX-2 ингибиторы, такие как ибупрофен или кетопрофен; (15) COX-2 ингибиторы, такие как целекоксиб и рофекоксиб; (16) VLA-4 антагонисты, такие как те, что описаны в WO97/03094 и WO97/02289; (17) TACE ингибиторы и TNF- ингибиторы, например, анти-TNF моноклональные антитела, такие как ремикейд и CDP-870 и TNF рецепторные иммуноглобулиновые молекулы, такие как энбрел; (18) ингибиторы матриксной металлопротеиназы, например, MMP-12; (19) ингибиторы человеческой нейтрофил-эластазы, такие как ONO-6818 или те, что описаны в WO2005/026124, WO2003/053930 и WO06/082412; (20) A2b антагонисты, такие как те, что описаны в WO2002/42298; (21) модуляторы функции хемокиновых рецепторов, например, антагонисты CCR3 и CCR8; (22) соединения, которые модулируют действие других простаноидных рецепторов, например, антагонист тромбоксан A₂; DP1 антагонисты, такие как MK-0524, CRTH2 антагонисты, такие как ODC9101 и AZD1981 и смешанные DP1/CRTH2 антагонисты, такие как AMG 009; (23) PPAR агонисты, включая агонисты PPAR альфа (такие как фенофибрат), агонисты PPAR дельта, агонисты PPAR гамма, такие как пиоглитазон, розиглитазон и балаглитазон; (24) метилксантины, такие как теофиллин или аминофиллин и комбинации метилксантин/кортикостероид, такие как теофиллин/будезонид, теофиллин/флутиказон пропионат, теофиллин/циклезонид, теофиллин/мометазон фуроат и теофиллин/беклометазон дипропионат; (25) A2a агонисты, такие как те, что описаны в EP1052264 и EP1241176; (26) CXCR2 или IL-8 антагонисты, такие как SCH 527123 или GSK 656933; (27) модуляторы IL-R передачи сигнала, такие как кинерет и ACZ 885; (28) MCP-1 антагонисты, такие как ABN-912.

Способы получения

Соединения формулы (I) можно получить согласно следующей общей схеме.

Схема 1

Общая экспериментальная информация

Сокращения, применяемые в экспериментальной части:

DCM = дихлорметан;

DEAD = диэтил азодикарбоксилат;

DIPEA = диизопропилэтиламин;

DMF = N,N-диметилформамид;

DMF-DMA = диметилацеталь N,N-диметилформамида;

DMSO = диметилсульфоксид;

EtOAc = этилацетат;

EtOH = этанол;

HATU = (2-(7-аза-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат);

ВЭЖХ = высокоэффективная жидкостная хроматография;

LCMS = жидкостная хроматография - масс-спектрометрия;

MeOH = метанол;

min = минуты;

RT = комнатная температура;

Rt = время удерживания;

SCX = «сильная» катионообменная хроматография;

TFA = трифторуксусная кислота;

THF = тетрагидрофуран

Название структур определяли, применяя ACD/Labs версию 12.0.

ЯМР спектры получали на Varian Unity Inova 400 спектрометре с 5 мм датчиком тройного резонанса с инверсным детектированием, функционирующим при 400 МГц, или на Bruker Avance DRX 400 спектрометре с 5 мм датчиком TXI тройного резонанса с инверсным детектированием, функционирующим при 400 МГц, или на Bruker Avance DPX 300 спектрометре со стандартным 5 мм двухчастотным датчиком, функционирующим при 300 МГц. Сдвиги даны в ppm относительно тетраметилсилана.

Когда соединения очищали колоночной флэш-хроматографией, «флэш-диоксид кремния» относится к силикагелю для хроматографии, 0,035-0,070 мм (220-440 меш) (например, Fluka силикагель 60), и применяемое давление азота вплоть до 10 пси ускоряло элюирование с колонки или применение CombiFlash ® Companion системы очистки или применение Biotage SP1 системы очистки. При применении тонкослойной хроматографии (ТСХ), она относится к ТСХ на силикагеле, применяя пластинки, обычно 3×6 см пластинки силикагеля на алюминиевой фольге с флуоресцентным индикатором (254 нм), (например, Fluka 60778). Все растворители и покупные реагенты применяли в том виде, в каком они были получены.

Соединения, очищенные препаративной ВЭЖХ, очищали, применяя Phenomenex Luna Phenyl C6-обращенно-фазовую колонку (250×21,20 мм, размер частиц 5 мкм), элюирование A: вода + 0,1% муравьиная кислота; B: ацетонитрил + 0,1% муравьиная кислота. Обнаружение - линейный УФ-детектор, установленный на длину волны 220 нМ.

Фракции, содержащие требуемый продукт (идентифицированный ТСХ и/или LCMS анализом), объединяли, органическую часть удаляли упариванием, и оставшуюся водную часть лиофилизовали для получения конечного продукта.

Применяемые системы жидкостная хроматография - масс-спектрометрия (LCMS) и ВЭЖХ:

Способ 1

Waters Platform LC квадрупольный масс-спектрометр с C18-обращенно-фазовой колонкой (30×4,6 мм Phenomenex Luna размер частиц 3 мкм), элюирование A: вода + 0,1% муравьиная кислота; B: ацетонитрил + 0,1% муравьиная кислота.

Градиент-Время	Поток мл/мин	%A	%B
0,00	2,0	95	5
0,50	2,0	95	5
4,50	2,0	5	95
5,50	2,0	5	95
6,00	2,0	95	5

Обнаружение - MS, ELS, УФ (200 мкл отделяли в MS с линейным УФ-детектором). MS способ ионизации - электроспрей (положительные и отрицательные ионы).

Способ 2

Waters ZMD квадрупольный масс-спектрометр с C18-обращенно-фазовой колонкой (30×4,6 мм Phenomenex Luna размер частиц 3 мкм), элюирование A: вода + 0,1% муравьиная кислота; B: ацетонитрил + 0,1% муравьиная кислота.

Градиент-Время	Поток мл/мин	%A	%B
0,00	2,0	95	5
0,50	2,0	95	5
4,50	2,0	5	95
5,50	2,0	5	95
6,00	2,0	95	5

Обнаружение - MS, ELS, УФ (200 мкл отделяли в MS с линейным УФ-детектором). MS способ ионизации - электроспрей (положительные и отрицательные ионы).

Способ 3

Waters Micromass ZQ2000 c C18-обращенно-фазовой колонкой (100×3,0 мм Higgins Clipeus с размером частиц 5 мкм), элюирование A: вода + 0,1% муравьиная кислота; B: ацетонитрил + 0,1% муравьиная кислота.

Градиент-Время	Поток мл/мин	%A	%B
0,00	1,0	95	5
1,00	1,0	95	5
15,00	1,0	5	95
20,00	1,0	5	95
22,00	1,0	95	5
25,00	1,0	95	5

Обнаружение - MS, ELS, УФ (100 мкл отделяли в MS с линейным УФ-детектором). MS способ ионизации - электроспрей (положительные ионы).

Пример 1

N-[2-({6-[2-Амино-1-(2,6-дихлорфенил)-2-оксоэтил]пиридазин-3-ил}сульфанил)бензил]-3-фтор-5-(морфолин-4-ил)бензамид

a. 2-[2-(Тритилсульфанил)бензил]-1H-изоиндол-1,3(2H)-дион

К раствору (2-тритилсульфанилфенил)метанола (4,7 г, 12,3 ммоль), диамида фталевой кислоты (2,29 г, 15,6 ммоль) и трифенилфосфина (4,09 г, 15,6 ммоль) в THF (70 мл) при 0°C в атмосфере аргона медленно добавляли DEAD (2,4 мл, 15 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, затем распределяли между водным насыщенным NaHCO ₃ и EtOAc. Органический слой отделяли, сушили над MgSO ₄, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме для получения заявленного в заголовке соединения (4,7 г, 75%) в виде желтой пены. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,82 (2H, м), 7,70 (2H, м), 7,38-7,33 (5H, м), 7,27-7,22 (10H, м), 7,12 (1H, дд, J=1,4 Гц, 0,5), 7,08 (1H, дт, J=1,4, 0,5 Гц), 6,96 (1H, дд, J=7,6, 1,5 Гц), 6,88 (1H, дт, J=7,6, 1,5 Гц), 4,47 (2H, с).

b. 1-[2-(Тритилсульфанил)фенил]метанамин

2-[2-(Тритилсульфанил)бензил]-1H-изоиндол-1,3(2H)-дион (4,7 г, 9,19 ммоль) суспендировали в EtOH (150 мл) и обрабатывали моногидратом гидразина 65% (4,66 мл, 62 ммоль). Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1,5 часов, охлаждали до комнатной температуры и осадок фильтровали. Фильтрат концентрировали, растирали с EtOAc и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении для получения заявленного в заголовке соединения (3,0 г, 86%) в виде бесцветного масла. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,34-7,28 (6H, м), 7,26-7,18 (9H, м), 7,15 (2H, м), 7,10 (1H, м), 6,93-6,85 (1H, м), 3,40 (2H, с).

c. 3-Фтор-5-(морфолин-4-ил)-N-[2-(тритилсульфанил)бензил]бензамид

Суспензию 1-[2-(тритилсульфанил)фенил]метанамина (335 мг, 0,88 ммоль), 3-фтор-5-морфолин-4-илбензойной кислоты (WO2004/089929) (237 мг, 1,05 ммоль) и DIPEA (0,38 мл, 2,19 ммоль) в DMF (15 мл) обрабатывали HATU (400 мг, 1,05 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 45 мин, затем распределяли между водным насыщенным NaHCO₃ и EtOAc. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме для получения заявленного в заголовке соединения (количественно) в виде грязно-белого твердого остатка. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,35-7,29 (6H, м), 7,27-7,19 (10H, м), 7,17 (2H, м), 7,10 (1H, т, J=1,7 Гц), 6,98-6,92 (1H, м), 6,73-6,64 (2H, м), 5,98 (1H, уш.т, J=6 Гц), 4,21 (2H, д, J=6 Гц), 3,84 (4H, т, J=4,8 Гц), 3,19 (4H, т, J=4,8 Гц).

d. 3-Фтор-5-(морфолин-4-ил)-N-(2-сульфанилбензил)бензамид

3-Фтор-5-(морфолин-4-ил)-N-[2-(тритилсульфанил)бензил]бензамид (517 мг, 0,88 ммоль) обрабатывали раствором триэтилсилан/TFA/DCM (10 мл, 1/9/10). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 мин и концентрировали при пониженном давлении. Очистка остатка колоночной флэш-хроматографией (DCM:MeOH 98:2) давала заявленное в заголовке соединение (219 мг, 72%) в виде желтого масла. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃ ): 7,36-7,31 (2H, м), 7,21-7,15 (3H, м), 6,85 (1H, ддд, J=8,5, 2,2, 1,4 Гц), 6,69 (1H, дт, J=11,6, 2,3 Гц), 6,57 (1H, уш.т, J=5,7 Гц), 5,39 (1H, уш.с), 4,66 (2H, д, J=5,7 Гц), 3,84 (4H, т, J=4,9 Гц), 3,20 (4H, т, J=4,9 Гц).

e. N-[2-({6-[Циано(2,6-дихлорфенил)метил]пиридазин-3-ил}сульфанил)бензил]-3-фтор-5-(морфолин-4-ил)бензамид

Раствор 3-фтор-5-(морфолин-4-ил)-N-(2-сульфанилбензил)бензамида (80 мг, 0,23 ммоль) в DMF (3 мл) обрабатывали гидридом натрия (60% в минеральном масле, 8,8 мг, 0,22 ммоль). Смесь перемешивали в течение 5 мин и обрабатывали раствором (6-хлорпиридазин-3-ил)-(2,6-дихлорфенил)ацетонитрила (63 мг, 0,21 ммоль) в DMF (1 мл). Реакционную смесь грели при 100°C в течение 45 мин, охлаждали до комнатной температуры и распределяли между водным насыщенным NaHCO₃ и EtOAc. Водный слой экстрагировали EtOAc, объединенные органические слои сушили над MgSO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Очистка обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (вода/ацетонитрил + 0,1% HCO₂H 50% изократический), давала заявленного в заголовке соединения (32 мг, 25%) в виде желтого масла. LCMS (способ 3): Rt 11,77 мин, m/z 608 [MH⁺] ¹ H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 7,67-7,58 (2H, м), 7,53-7,47 (1H, м), 7,45-7,32 (4H, м), 7,31-7,20 (2H, м), 7,09 (1H, т, J=1,7 Гц), 6,75 (1H, уш.т, J=5,6 Гц), 6,71-6,61 (2H, м), 6,33 (1H, с), 4,76 (2H, м), 3,86 (4H, т, J=4,8 Гц), 3,21 (4H, т, J=4,8 Гц).

f. N-[2-({6-[2-Амино-1-(2,6-дихлорфенил)-2-оксоэтил]пиридазин-3-ил}сульфанил)бензил]-3-фтор-5-(морфолин-4-ил)бензамид

N-[2-({6-[Циано(2,6-дихлорфенил)метил]пиридазин-3-ил}сульфанил)бензил]-3-фтор-5-(морфолин-4-ил)бензамид (92 мг, 0,15 ммоль) обрабатывали концентрированной серной кислотой (2 мл) и смесь перемешивали при 70°C в течение 30 мин. Раствор охлаждали до комнатной температуры, гасили смесью лед-вода и экстрагировали в DCM. Органический слой промывали водным насыщенным NaHCO₃, сушили над MgSO₄, фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Очистка колоночной флэш-хроматографией (DCM:MeOH от 97,3:2,7 до 95:5) давала заявленного в заголовке соединения (63 мг, 67%), которое существовало в растворе в виде смеси амида и еноламина. LCMS (способ 3): Rt 10,15 и 11,27 мин, m/z 626 [MH^-]. ¹H ЯМР (400 МГц, CD ₃OD) (отношение амид/еноламин 1:0,8): 7,65 (1H, дд, J=7,6, 1,2 Гц), 7,57-7,43 (5,4H, м), 7,42-7,37 (3,6H, м), 7,36-7,29 (3,6H, м), 7,21 (0,8H, т, J=1,8 Гц), 7,17-7,13 (2H, м), 6,99 (0,8H, ддд, J=9, 2,3, 1,4 Гц), 6,95-6,93 (1H, м), 6,85-6,80 (1,8H, м), 6,58 (0,8H, д, J=9,9 Гц), 6,15 (0,8H, д, J=9,9 Гц), 5,98 (1H, с), 4,73 (1,6H, с), 4,71 (2H, д, J=1,8 Гц), 3,82 (7,2H, т, J=4,8 Гц), 3,22-3,17 (7,2H, м).

Пример 2

N-(2-{[5-(2,6-дихлорфенил)-6-оксо-6H-пиримидо[1,6-b]пиридазин-2- ил]сульфанил}бензил)-3-фтор-5-(морфолин-4-ил)бензамид

Раствор N-[2-({6-[2-амино-1-(2,6-дихлорфенил)-2-оксоэтил]пиридазин-3-ил}сульфанил)бензил]-3-фтор-5-(морфолин-4-ил)бензамида (91 мг, 0,145 ммоль) в толуоле (4 мл) в атмосфере аргона обрабатывали DMF-DMA (0,042 мл, 0,315 ммоль). Смесь грели при 100°C в течение 1,75 часов, затем охлаждали до комнатной температуры и осадок отделяли фильтрацией для получения заявленного в заголовке соединения (77 мг, 84%) в виде желтого порошка. LCMS (способ 3): Rt 9,8 мин, m/z 636 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): 9,01 (1H, т, J=5,7 Гц), 8,82 (1H, д, J=0,7 Гц), 7,70 (1H, дд, J=7,7, 1,2 Гц), 7,60 (2H, м), 7,58-7,52 (2H, м), 7,49 (1H, дд, J=8,9, 7,3 Гц), 7,42 (1H, тд, J=7,3, 2 Гц), 7,23 (1H, уш.т, J=1,6 Гц), 7,04-6,98 (2H, м), 6,93-6,86 (2H, м), 4,66 (2H, д, J=5,6 Гц), 3,73 (4H, т, J=4,7 Гц), 3,17 (4H, т, J=4,7 Гц).

Биологические анализы

Анализ на p38 киназу

Человеческий рекомбинантный p38 фермент, экспрессированный в E. coli и активированный выдерживанием с MKK6 ферментом (Calbiochem #559324), применяли в качестве источника активности.

Анализ осуществляли в прозрачных плоскодонных 96-луночных аналитических планшетах с высокой степенью связывания, которые были покрыты рекомбинантным ATF-2 (Biosource #PHF0043). Испытуемые соединения выдерживали с p38 киназой в течение 2 часов перед началом киназного анализа добавлением АТФ для получения концентрации для анализа 250 мкМ. Фосфорилирование ATF-2 детектировали и количественно определяли, применяя ELISA. Это включало последовательное выдерживание в присутствии анти-фосфо-ATF2, биотинилированного анти-IgG и стрептавидин-HRP. Выдерживание с HRP хромогенным субстратом (TMB) приводило в результате к поглощению, которое является пропорциональным количеству полученного фосфорилированного субстрата. Поглощение детектировали, применяя ридер для многолуночного планшета.

Соединения разбавляли DMSO перед добавлением буфера для анализа, причем конечная DMSO концентрация в анализе составляла 1%.

IC₅₀ определяли как концентрацию, при который данное соединение достигает 50% ингибирования контроля.

Пример	р38 ингибирование
1	++++
2	+++

В таблице выше p38 связывающая способность (IC₅₀ величины) показана следующим образом: <100 нМ '+++'; <10 нМ '++++'. Все испытуемые соединения обладали IC₅₀ величинами <100 н. NT = не испытывали.