индазолы, бензизоксазолы и бензизотиазолы, способ их получения, фармацевтические композиции и применение в качестве эстрогенных средств

Формула изобретения

1. Соединение формулы (I)



или его фармацевтически приемлемая соль,

где R₁ означает атом водорода или (С₁-С ₆)алкил, -SO₂NR₇R₈, фенил (С₁-С₃)алкил или (C₁-С₃ )алкил, замещенный 5-8-членным насыщенным гетероциклическим радикалом, содержащим атом азота;

R₂ и R₃ каждый независимо означает атом водорода или гидроксил, атом галогена или (С₁-С₆)алкокси;

Х означает О, S, SO, SO₂ или NR₄;

R₄ означает атом водорода или (С₁-С ₆)алкил, фенил, фенил(С₁-С₃)алкил, (С₁-С₃)алкил, замещенный 5-8-членным насыщенным гетероциклическим радикалом, содержащим один атом азота, или группу -COR₇, -CO₂R₇ или -SO ₂NR₇R₈, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена и фенил(С₁ -С₃)алкокси;

Y обозначает прямую связь, -(CR ₁₀R₁₁)_n- или -R₁₀C=CR ₁₁-;

R₇ и R₈ каждый независимо обозначают атом водорода или (С₁-С₆)алкильную группу;

R₁₀ и R₁₁ каждый независимо обозначают атом водорода или циано, или группу -CONR₇ R₈;

n равно 1 или 2;

А означает (С ₃-С₁₂)циклоалкил или фенил, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена, (С₁ -С₃)алкил, (С₁-С₃)алкокси;

когда Х означает NR₄, то Y и R₂ вместе с содержащим их индазольным циклом могут также образовать 1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол;

при условии, что:

1) когда Х означает О, S или NR ₄, R₁ обозначает атом водорода или (С₁ -С₆)алкил, a Y означает прямую связь, то А не является необязательно замещенным фенилом;

2) когда Х означает О, R₁O означает 6-ОН или 6-ОСН₃, Y означает прямую связь, а А означает циклопентил, то (R₂, R ₃) или (R₃, R₂) отличны от (Н, Cl) в позиции 4, 5;

3) когда X означает О, R₁O означает 6-ОН, R₂ и R₃ означают Н, а Y означает СН=СН, то А не является фенилом или 4-метоксифенилом;

4) когда Х означает SO₂, А означает фенил и R ₁O означает 5-или 6-ОСН₃, то (R₂, R₃) или (R₃, R₂) отличны от (Н, ОСН₃) в позиции 6- или 5-, причем соединение не является одним из следующих:

3-фенил-5-(фенилметокси)-1Н-индазол;

6-гидрокси-3-фенилметил-7-(н-пропил)-бенз[4,5]изоксазол;

3-(4-хлорфенилметил)-6-гидрокси-7-(н-пропил)-бенз[4,5]изоксазол;

6-гидрокси-3-(2-фенилэтил)-7-(н-пропил)-бенз[4,5]изоксазол;

3-циклопропил-6-гидрокси-3-фенилметил-7-(н-пропил)-бенз[4,5]изоксазол;

3-циклогексилметил-6-гидрокси-3-фенилметил-7-пропил-бенз[4,5]изоксазол.

2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где R₃ означает атом водорода.

3. Соединение по любому из пп.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, где Y означает прямую связь.

4. Соединение по любому из пп.1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, где А означает (С₃-С₁₂)циклоалкил.

5. Соединение по любому из пп.1-2 или его фармацевтически приемлемая соль, где R₁₀ находится в позиции 6-кольца.

6. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где

R ₁ означает атом водорода или -SO₂NR₇ R₈, в которых R₇ и R₈ независимо представляют водород или (С₁-С₆)алкил;

R₂ означает атом водорода;

А означает (С₃-С₁₂)циклоалкил.

7. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль:

3-Циклопентил-1Н-индазол-6-ол;

3-Циклогексил-1Н-индазол-6-ол;

1-(Аминосульфонил)-3-циклогексил-1Н-индазол-6-илсульфамат;

3-Циклогексил-6-гидрокси-1Н-индазол-1-сульфонамид;

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-гидроксифенил)пропаннитрил;

2-(б-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(3-фтор-4-гидроксифенил)пропаннитрил;

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-фторфенил)пропаннитрил;

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(3,4-дигидроксифенил)пропаннитрил.

8. Соединение по любому одному из пп.1 и 2, 6 или 7 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве активного терапевтического вещества, модулирующего рецепторы эстрогена, для изготовления лекарственного средства.

9. Соединение по любому из одному из пп.1 и 2, 6 или 7 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве активного вещества, модулирующего рецепторы эстрогена.

10. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами модулятора рецепторов эстрогена, содержащая (i) эффективное количество соединения по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль и (11) фармацевтически приемлемый наполнитель.

11. Применение соединения формулы (I) по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемой соли для приготовления лекарственного средства для лечения заболеваний, где требуется модуляция рецепторов эстрогена.

12. Применение соединения формулы (I) по п.11 для приготовления лекарственного средства для лечения когнитивной дисфункции.

13. Применение соединения формулы (I) по п.11 для приготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения эстрогензависимых заболеваний.

14. Применение соединения формулы (I) по п.11 для приготовления лекарственного средства для контролирования или регулирования репродуктивных функций.

15. Применение соединения формулы (I) по п.11 для приготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения доброкачественных или злокачественных заболеваний молочных желез, матки, или яичника, или синдрома поликистоза яичников.

16. Применение соединения формулы (I) по п.11 для приготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения доброкачественных или злокачественных заболеваний предстательной железы или яичек.

17. Способ предупреждения или лечения заболевания, где требуется модуляция рецепторов эстрогена, который включает введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), по любому из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемой соли.

18. Соединение формулы (I),

где R₃ означает атом водорода;

Y означает прямую связь;

А означает (С₃-С₁₂)циклоалкил;

R₁O находится в позиции 6-кольца для изготовления лекарственного средства, как указано в пп.11-16, или для предупреждения или лечения, как указано в п.17.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к нестероидным соединениям, обладающим сродством к рецепторам эстрогена. В частности, настоящее изобретение относится к производным индазола, бензизоксазола и бензизотиазола в качестве модуляторов субтипов рецептора эстрогена и/или селективных модуляторов рецептора эстрогена (SERM). Настоящее изобретение относится также к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения и к применению указанных соединений при лечении заболеваний, обусловленных эстрогеном.

Уровень техники

Окончание репродуктивного периода жизни человека часто может сопровождаться причиняющими неудобства и деструктивными симптомами, и одними из наиболее распространенных являются приливы . Перименопауза или предклимакс представляет собой продолжающийся в течение нескольких лет период, в течение которого нормальный цикл овуляции сменяется прекращением менструаций. Этот период характеризуется нерегулярностью менструальных циклов. Длительность циклов начинает увеличиваться, а овуляция и фертильность снижаются. Климакс обычно определяют как момент времени, после потери активности яичников, когда менструация полностью прекращается. Кроме того, эстрогены вовлекаются в различные другие физиологические процессы, такие как модуляция иммунного ответа и развитие рака (рака груди, эндометрия, толстой кишки, предстательной железы). Было показано, что ER принимает участие в ряде заболеваний, таких как рак груди и остеопороз.

Достоверно установлено, что эстрогены играют важную роль в развитии и гомеостазе репродуктивной, центральной нервной, скелетной и сердечно-сосудистой систем как у мужчин, так и у женщин. В настоящее время в мозге обнаружено множество рецепторов эстрогена, которые вовлекаются в различные процессы, такие как регуляция настроения и температуры, сон, подверженность приступам эпилепсии, механизмы распространения боли и когнитивные функции (Toran-Allerand, Endocrinology, 2004, 145, 1069-1074).

В настоящее время известно, что рецептор эстрогена (ER) представляет собой ядерный рецептор с двумя известными различными субтипами. Недавно был обнаружен (Mosselman et al., FEBS Letters, 1996, 392, 49-53) новый субтип ER , отличный от известного субтипа ER (Green, Nature, 1986, 320, 134-139). Указанные субтипы играют разную биологическую роль и могут найти избирательное и эффективное клиническое применение (Harris H.A., Endocrinology, 2002, 143, 11, 4172-4177). Лиганд-связывающие области субтипов ER приблизительно на 50% идентичны (Kuiper et al., Endocrinology, 1998, 139(10), 4252-4263), они обладают похожим сродством связывания к эстрадиолу (Е₂) и способны к гетеро- и гомодимеризации (Cowley, J. Biol. Chem., 1997, 272, 19858-19862) с образованием сигнального комплекса (Kuiper et al., Endocrinology, 1997, 138(10), 863-870; Kuiper, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93, 5925-5930). ER с высокими уровнями экспрессируется в ряде тканей, включая эпителий предстательной железы (Weihua Z., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2001, 98, 6330-635), симпатетические ганглии (Zoubina E.V., J. Urol., 2003, 169, 382-385), толстую кишку (Witte D., Hum. Pathol., 2001, 32, 940-944), мочевой пузырь, зернистые клетки яичника (Nilsson S., Physiol. Rev., 2001, 81, 1535-1565), костный мозг (Shim G.J., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 6694-6699), строму молочной железы (Cunha G.R., J. Mammary Gland Biol. Neoplasia, 1997, 2, 393-402), легкое, кишечник, эндотелий сосудов, спинную линию сращивания, части мозга (Mitra S.W., Endocrinology, 2003, 144, 2055-2067, Krel W., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2001, 98, 12278-12282). ER экспрессируется в эпителии груди (Palmieri C., Endocr. Relat. Cancer, 2002, 9, 1-13), кости, тека клеток (Couse J., Endocr. Rev., 1999, 20, 358-417), строме предстательной железы (Chu S., Mol. Cell Endocrinol., 1997, 132, 195-199), печени, яичках. Тот факт, что обнаружены соединения, обладающие специфической активностью к одному или другому субтипу, может обеспечить избирательное лечение эстрогензависимых заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера, жалобы в климактерический период (в частности, приливы , вагинальная сухость, атрофия), нарушение когнитивных функций (в частности, страх, депрессия, деменция), остеопороз, эстрогензависимые опухоли (рак матки, груди, толстой кишки или предстательной железы), доброкачественная гиперплазия предстательной железы, функции мочевого пузыря, расстройства слуха, удар, лейкемия, гипертензия, ожирение, синдром разраженного кишечника или репродуктивные аспекты, такие как контрацепция или фертильность. ER -селективные лиганды могут оказаться терапевтически полезными средствами при лечении хронических воспалений кишечника и суставов (Harris et coll., Endocrinology, 2003, 144, 4241-4249).

Согласно Warembourg M. and Leroy D. (Brain Res., 2004, 26; 55-56) ER обнаружен лишь в спинных клетках линии сращивания у крыс. Напротив, лишь иммунноактивность ER обнаружена в перегородке и в магноцеллюлярных супраоптических, паравентрикулярных, дугообразных и премаммиллярных ядрах. Указанные наблюдения доказывают наличие различной нейроанатомической картины для двух указанных субтипов рецепторов эстрогена. Локализация ER в серотониновых клетках доказывает связь между ER и серотонинергическим метаболическим путем. Наконец, Cyr M. et al. сообщают (J. Psychiatry Neurosci., 2002, 27, 12-27) о влиянии селективных модуляторов рецептора эстрогена (SERM), таких как ралоксифен, на рецептор 5-НТ2а.

Таким образом, целесообразно разработать модуляторы ER в качестве соединений, представляющих интерес для лечения шизофрении, нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона. По тем же самым причинам модуляторы ER должны представлять интерес в качестве нейрозащитных, антидепрессантных или антифобических седативных средств.

Тем не менее два рецептора, которые играют роль активируемых лигандами факторов транскрипции, были обнаружены в различных тканях, и их связывающий карман отличается лишь двумя аминокислотами: Leu и Met в ER , Met и Ile в ER . Указанные сходства могут объяснить тот факт, что регулирование субтипа альфа или бета приводит к одному и тому же фармакологическому эффекту, как это происходит в случае предклинической модели феномена приливов . В то время как модулятор ER снижает возникновение приливов в предклинической модели у крыс (Harris et al., Endocrinology, 2002, 143, 4172-4177), селективные модуляторы рецептора эстрогена, такие как производные спироиндена, которые обладают сродством к обоим субтипам, оказывают тот же самый эффект на приливы (Watanabe et al., J. Med. Chem., 2003, 46, 3961-3964).

Было также показано, что рецепторы эстрогена способны подавлять NFKB-опосредованную транскрипцию как лиганд-зависимым, так и лиганд-независимым образом (Quaedackers et al., Endocrinology 2001, 142: 1156-1166; Bhat et al., Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology 1998, 67: 233-240; Pelzer et al., Biochemical & Biophysical Research Communications 2001, 286: 1153-7). Указанные данные показывают связь между селективными модуляторами рецептора эстрогена и NFKB, который принимает участие в апоптозе и иммунном/воспалительном ответе.

Множество соединений описано в качестве агонистов или антагонистов рецептора эстрогена, поскольку они соответственно обладают схожей активностью или блокируют активность эстрадиола. Подобные соединения-агонисты могут применяться в качестве контрацептивных средств для женщин в предклимактерический период. Антагонисты широко применяются в качестве терапевтических средств при лечении рака груди (Vogel, Anticancer Drugs, 2003, 14, 265-273), в то время как агонисты применяются при проведении HRT (гормонозаместительной терапии) у женщин в послеклимактерический период (Burkman, Minerva Ginecol, 2003, 55, 107-116) для лечения приливов , вагинальной атрофии. SERMs представляют собой соединения, которые, в зависимости от тканей, обладают смешанной активностью (McDonnell, J. Soc. Gynecol. Invest., 2000, 7, S10-S15). SERMs могут быть полезны при лечении остеопороза, сердечно-сосудистых заболеваний и заболеваний, связанных с рецептором эстрогена.

При связывании с лигандами рецепторы эстрогена принимают различные конформации. Расшифровка трехмерных структур ER и ER проведена путем совместной кристаллизации с различными лигандами (Pike A. C. W., EMBO J., 1999, 18, 4608-4618; Shiau A. K., Cell, 1998, 95, 927-937). Каждый из лигандов оказывает влияние на конформации рецептора ER или ER и приводит к проявлению различной биологической активности.

Различные соединения, представленные как эстрогенные средства, описаны в US 2003/0207927 A1 и US 2003/0171412 A1. Производные индазола, представленные как блокаторы калиевых каналов, описаны в WO 2004/043354 и WO 2004/043933. Синтез различных изоксазолов описан в Ind. J. Chem. 1980, 19B: 571-575. Промежуточные бензизоксазоловые соединения, используемые при получении мочегонных средств, описаны в Chem. Pharm. Bull. 1991, 39(7): 1760-1772. Синтез различных бензизотиазолов описан в Tetrahedron 1988, 44(10): 2985-2992.

Сущность изобретения

Один аспект настоящего изобретения касается производных индазола, бензизоксазола и бензизотиазола, которые обладают сродством к рецепторам эстрогена.

Другой аспект изобретения касается фармацевтической композиции, содержащей указанное выше производное индазола, бензизоксазола и бензизотиазола.

Еще один аспект изобретения касается применения производного индазола, бензизоксазола и бензизотиазола для приготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения различных заболеваний, опосредованных рецепторами эстрогена.

Производные индазола, бензизоксазола и бензизотиазола по настоящему изобретению могут быть представлены следующей общей формулой (I):

где:

- R₁ означает атом водорода или (С₁-С₆)алкил, (С₃-С₆)циклоалкил, трифторметил, группу -N=CR₅R₆, -SO₂NR₇ R₈, фенил, фенил(С₁-С₃)алкил или (С₁-С₃)алкил, замещенный насыщенным гетероциклическим радикалом, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена, нитро, циано, (С₁ -С₃)алкил, (С₁-С₃)алкокси и трифторметил; R₁ может также быть солью;

- R₂ и R₃ каждый независимо означает атом водорода или гидроксил, атом галогена, нитро, циано, (С₁ -С₆)алкил, (С₃-С₆)циклоалкил, (С₁-С₆)алкокси, трифторметил, группу -NR ₇R₈, -CONR₇R₈, -COR ₉ или -CO₂R₉; R₂ может также быть фенилом или насыщенным или ненасыщенным гетероциклом, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена, нитро, циано, (С₁-С₃)алкил, (С₁ -С₃)алкокси, трифторметил и насыщенный гетероциклический радикал;

- Х означает O, S, SO, SO₂ или NR₄;

- R₄ означает атом водорода или (С₁-С₆)алкил, (С ₃-С₆)циклоалкил, фенил, фенил(С₁-С ₃)алкил, (С₁-С₃)алкил, замещенный насыщенным гетероциклическим радикалом, группу -COR₇ , -CO₂R₇ или -SO₂NR₇ R₈, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена, нитро, циано, (С₁-С₃)алкил, (С₁-С₃)алкокси, трифторметил, фенил(С ₁-С₃)алкил или фенил(С₁-С₃ )алкокси;

Y обозначает прямую связь, O, S, SO, SO₂, NR₄, СО, -(CR₁₀R₁₁ )_n- или -R₁₀C=CR₁₁-;

- R₅, R₆, R₇ и R₈ каждый независимо обозначают атом водорода или (С₁ -С₆)алкильную или (С₃-С₆)циклоалкильную группу;

- R₉ означает атом водорода, (С₁-С₆)алкил, фенил или насыщенный, или ненасыщенный гетероциклический радикал, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена, нитро, циано, (С₁-С₃)алкил, (С₁-С₃ )алкокси, трифторметил и насыщенный гетероциклический радикал;

- R₁₀ и R₁₁ каждый независимо обозначают атом водорода или циано, (С₁-С₆ )алкил, -СО-фенил, -СО (ненасыщенный гетероциклический радикал) или группу -СONR₇R₈, где фенил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена, нитро, циано, (С₁-С₃)алкил, (С₁-С₃ )алкокси и трифторметил;

- n равно 1 или 2;

- А означает (С₃-С₁₅)циклоалкил, (С₃-С₁₅)циклоалкен, фенил или нафтил, где циклоалкил или циклоалкен не замещен или замещен, по меньшей мере, одним (С₁-С₆)алкилом и где фенил или нафтил не замещен или замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена, нитро, циано, (С₁-С₃)алкил, (С₁ -С₃)алкокси и трифторметил;

- когда Х означает NR₄, то Y и R₂ вместе с содержащим их индазольным циклом могут также образовать 1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол.

Заявляются соединения формулы (I), за исключением случаев:

1) когда X означает O, S или NR₄ , R₁ обозначает атом водорода или (С₁-С ₆)алкил, (С₃-С₆)циклоалкил или трифторметил, а Y означает прямую связь, то А не является необязательно замещенным фенилом или необязательно замещенным нафтилом;

2) когда X означает NR₄, где R₄ является атомом водорода или (С₁-С₆)алкилом, а R ₁О означает 6-ОСН₃, то Y не обозначает СО;

3) когда X означает O, R₁О означает 6-ОН или 6-ОСН₃, Y означает прямую связь, а А означает циклопентил, то (R₂,R₃) или (R₃ ,R₂) отличны от (H, Cl) в позиции 4,5;

4) когда X означает O, R₁О означает 6-ОН, R₂ и R₃ означают атом водорода, а Y означает СН=СН, то А не является фенилом или 4-метоксифенилом;

5) когда X означает SO₂, А означает фенил и R ₁О означает 5- или 6-ОСН₃, то (R₂ ,R₃) или (R₃,R₂) отличны от (H, ОСН₃) в позиции 6- или 5-.

В описании и в формуле изобретения следует понимать, что термин (С₁-С₆)алкил означает линейную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую от 1 до 6 атомов углерода. Например, (С₁ -С₆)алкильный радикал означает метильный, этильный, пропильный, изопропильный, бутильный, изобутильный, трет-бутильный, пентильный, изопентильный или гексильный радикалы. Предпочтительными алкильными радикалами являются такие радикалы, которые содержат 1, 2 или 3 атома углерода.

Следует понимать, что термин галоген означает атом хлора, брома, иода или фтора.

Следует понимать, что термин (С₃-С₁₅)циклоалкил означает насыщенный, конденсированный или мостиковый, моно-, би- или трициклический углеводород, содержащий от 3 до 15 атомов углерода. Моноциклическим радикалом является, например, циклопропильный, циклопентильный, циклогексильный, циклогептильный, циклооктильный или циклододецильный радикалы. Конденсированным, мостиковым или спирановым бициклическим или трициклическим радикалом, например, является норборнильный, борнильный, изоборнильный, норадамантильный, адамантильный или спиро[5,5]ундеканильный радикал. Предпочтительными циклоалкилами являются циклоалкилы, содержащие от 5 до 12 атомов углерода, при этом наиболее предпочтительными являются циклопентильный, циклогексильный, циклогептильный и адамантильный радикалы. Примерами (С₃-С₆ )циклоалкильного радикала являются циклопропильный, циклобутильный, циклопентильный или циклогексильный радикалы.

Следует понимать, что термин (С₃-С₁₅)циклоалкен означает ненасыщенный (С₃-С₁₅)циклоалкил, а значение этого термина приведено выше.

Следует понимать, что термин (С₁-С₆)алкокси означает группу OR, в которой R означает (С₁ -С₆)алкил, значение которого указано выше. Примером (С₁-С₆)алкоксильного радикала является метоксильный, этоксильный, пропоксильный, изопропоксильный, бутоксильный, изобутоксильный, трет-бутоксильный, п-пентилоксильный, изопентилоксильный радикалы. Предпочтительными алкоксильными радикалами являются такие радикалы, которые содержат 1, 2 или 3 атома углерода.

В определении R₁ следует понимать, что соль означает соль щелочного металла или соль щелочно-земельного металла, такую как соль натрия, калия, магния или кальция, или соль с аммонием или с органическим амином, таким как триэтиламин, этаноламин или трис-(2-гидроксиэтил)амин.

Следует понимать, что термин гетероцикл или гетероциклический означает насыщенный или ненасыщенный от 5- до 8-членный моноциклический радикал, содержащий один или два гетероатома, выбранных из O, N или S.

Примеры ненасыщенных гетероциклических радикалов включают, однако этим не ограничиваясь, фурильный, имидазолинильный, имидазолильный, пиридильный, пиразинильный, пиразолильный, пиридазинильный, пиримидинильный, пирролильный, хинолинильный, изохинолинильный, тиазолильный, тиенильный, бензимидазолильный, бензоксазолильный, бензотиазолильный, индолильный и индазолильный радикалы.

Примеры насыщенных гетероциклических радикалов включают, однако этим не ограничиваясь, имидазолидинильный, морфолинильный, тиоморфолинильный, пиперидильный, пиперазинильный, пирролидинильный, пиразолидинильный, тетрагидрофурильный, 2-оксопиперазинильный, 2-оксо-пиперидильный и 2-оксопирролидинильный радикалы, при этом морфолинильный и пиперидильный радикалы являются предпочтительными.

Нет необходимости указывать, что в том случае, когда Х означает NR₄, а Y и R₂ вместе с содержащим их индазольным циклом образуют 1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол, то один из атомов углерода пиранового фрагмента содержит заместитель А, значение которого указано выше.

Соединения формулы (I) могут образовывать аддитивные соли с кислотами. Указанные соли, в особенности соли, являющиеся фармацевтически приемлемыми, охватываются настоящим изобретением. Примеры солей включают соли, которые образованы, например, с неорганическими кислотами, такими как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота, или с органическими карбоновыми кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, яблочная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота.

Настоящее изобретение охватывает также стереоизомерные формы соединений формулы (I).

Предпочтительные соединения формулы (I) включают такие соединения, которые удовлетворяют, по крайней мере, одному из следующих условий:

- R₁ означает атом водорода, (С₁-С ₆)алкил, фенил(С₁-С₃)алкил, (С ₁-С₃)алкил, замещенный насыщенным гетероциклическим радикалом, или группу -SO₂NR₇R₈ ;

- R₂ означает атом водорода, гидроксил, (С₁-С₆)алкил или атом галогена;

- R₃ означает атом водорода;

- Y означает прямую связь;

- А означает (С₃-С ₁₅)циклоалкил, необязательно замещенный, по меньшей мере, одним (С₁-С₆)алкилом;

- R₁О находится в позиции 6- кольца.

Наиболее предпочтительными соединениями являются такие соединения, в которых:

- R₁ означает атом водорода или группу -SO₂NR₇R₈, где R ₇ и R₈ каждый независимо означают атом водорода или (С₁-С₆)алкил;

- R ₂ означает атом водорода;

- А означает (С ₃-С₁₂)циклоалкил, необязательно замещенный от 1 до 4 (С₁-С₆)алкилами.

Предпочтительными также являются следующие соединения:

а) Соединения, где Х означает NR₄ и

- R₁ означает атом водорода или (С₁-С ₆)алкил, фенил(С₁-С₃)алкил или группу -SO₂NR₇R₈;

- R₂ и R₃ каждый означают атом водорода;

- R₄ означает атом водорода или (С ₁-С₆)алкил, фенил, фенил(С₁-С ₃)алкил, (С₁-С₃)алкил, замещенный насыщенным гетероциклическим радикалом, группу -SO₂ NR₇R₈ или -COR₉, где фенил необязательно замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из группы, которая включает гидроксил, атом галогена и фенил(С₁ -С₃)алкокси;

- Y означает прямую связь, -(CR₁₀R₁₁)_n- или -R₁₀ C=CR₁₁-;

- R₇ и R₈ каждый независимо обозначают атом водорода или (С₁ -С₆)алкил;

- R₉ означает атом водорода или (С₁-С₆)алкил;

- R₁₀ и R₁₁ каждый независимо обозначают атом водорода, циано или группу -СONR₇R₈ ;

- n равно 1 или 2;

- А означает (С₃-С₁₅)циклоалкил, необязательно замещенный, по меньшей мере, одним (С₁-С₆)алкилом, или фенил необязательно замещенный гидроксилом или (С₁ -С₃)алкоксильной группой;

- Y и R ₂ вместе с содержащим их индазольным циклом могут также образовать 1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол;

при условии, что когда R₁ означает Н или (С₁-С₆ )алкил, а Y означает прямую связь, то А не является необязательно замещенным фенилом.

b) Соединения, где Х означает О и

- R₁ означает атом водорода или (С₁-С₆)алкил, фенил(С₁-С ₃)алкил, (С₁-С₃)алкил, замещенный насыщенным гетероциклическим радикалом, или группу -SO₂ NR₇R₈;

- R₂ означает атом водорода, атом галогена, гидроксил или (С₁-С ₆)алкокси;

- R₃ означает атом водорода;

- Y означает прямую связь, -(CR ₁₀R₁₁)_n- или -R₁₀C=CR ₁₁-;

- R₇ и R₈ каждый независимо обозначают атом водорода или (С₁-С ₆)алкил;

- R₁₀ и R₁₁ каждый независимо обозначают атом водорода или циано;

- n равно 1 или 2;

- А означает (С₃ -С₁₅)циклоалкил, необязательно замещенный, по меньшей мере, одним (С₁-С₆)алкилом, или фенил, необязательно замещенный, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из (С₁-С₃)алкокси, гидроксила, (С₁-С₃)алкила и атома галогена;

при условии, что

b1) когда R₁ означает Н или (С₁-С₆)алкил, а Y означает прямую связь, то А не является необязательно замещенным фенилом;

b2) когда R₁О означает 6-ОН или 6-ОСН ₃, Y означает прямую связь, а А означает циклопентил, то (R₂, R₃) отличны от (Cl, H) в позиции 4, 5;

b3) когда Х означает О, R₁О означает 6-ОН, R₂ и R₃ означают Н, а Y означает СН=СН, то А не является фенилом или 4-метоксифенилом.

с) Соединения, где Х означает S(О)_m и

- R₁ означает атом водорода или фенил(С₁ -С₃)алкил или группу -SO₂NR₇ R₈;

- R₂ и R₃ каждый означает атом водорода, гидроксил или атом галогена;

- Y означает прямую связь, -(CR₁₀R ₁₁)_n- или -R₁₀C=CR₁₁-;

- R₇ и R₈ каждый независимо обозначают атом водорода или (С₁-С₆)алкил;

- R₁₀ и R₁₁ каждый независимо обозначают атом водорода или циано;

- А означает (С₃-С₁₅)циклоалкил, необязательно замещенный, по меньшей мере, одним (С₁-С₆)алкилом;

- m равно 0, 1 или 2.

Поскольку они способны действовать как агонисты или антагонисты для рецепторов эстрогена (другими словами, как SERMs), то соединения по настоящему изобретению могут применяться индивидуально или в комбинации с другими активными ингредиентами для лечения или предупреждения любого обусловленного эстрогеном заболевания или для управления регулируемыми эстрогеном функциями у человека (Njar V.C. and Brodie A.M., Drugs, 1999, 58: 233-255), а также у диких и домашних животных.

Поскольку молочные железы являются чувствительными мишенями для стимулированной эстрогеном пролиферации и/или дифференциации, то SERMs наиболее пригодны для лечения или предупреждения протекающих в легкой форме заболеваний молочной железы у женщин, гинекомастии у мужчин или доброкачественных или злокачественных опухолей груди с метастазами и без метастаз как у мужчин, так и у женщин (A. M. Brodie and V. C. Njar, Steroids, 2000, 65: 171-179; K.I. Pritchard, Cancer, 2000, 85, suppl. 12: 3065-3072) или у самцов и самок домашних животных.

Благодаря вовлечению эстрогенов в механизмы овуляции, имплантации и беременности SERMs по настоящему изобретению могут применяться соответственно в контрацептивных, противозачаточных или абортивных целях у женщин (A. M. Brodie and V. C. Njar, Drugs, 1999, 58: 233-255), а также у самок диких и домашних животных.

Матка является еще одним репродуктивным органом, чувствительным к эстрогенной активации. Поэтому SERMs пригодны для лечения или предупреждения эндометриоза, протекающих в легкой форме заболеваний матки или доброкачественных или злокачественных опухолей матки с метастазами и без метастаз у женщин (A. M. Brodie and V. C. Njar, Drugs, 1999, 58: 233-255) или у самок домашних животных.

Поскольку яичник является физиологическим источником эстрогена, то SERMs могут применяться для лечения аномальной или преждевременной продукции эстрогена в яичнике, такой как синдром поликистоза яичников, или преждевременного полового созревания соответственно (Bulun et al., J. Steroid. Biochem. Mol. Biol., 1997, 61: 133-139). Благотворное влияние на относящиеся и не относящиеся к яичникам, но продуцирующие эстроген доброкачественные или злокачественные опухоли с метастазами и без метастаз (Sasano H. and Harada N., Endocrine Reviews, 1998, 19: 593-607) может оказать также лечение с применением SERMs по настоящему изобретению.

У мужчин к действию эстрогенной стимуляции чувствительны также ткани предстательной железы и яичек (Abney T.O., Steroids, 1999, 64: 610-617; Carreau S. et al., Int. J. Androl., 1999, 22: 133-138). Поэтому SERMs могут применяться для лечения или предупреждения доброкачественных (Sciarra F. and Toscano V., Archiv Androl., 2000, 44: 213-220) и злокачественных опухолей предстательной железы с метастазами и без метастаз (Auclerc G. et al., Oncologist, 2000, 5: 36-44) или для лечения, предупреждения или контролирования функций или нарушения функций сперматогенеза у мужчин, а также у мужских особей диких или домашних животных.

Известно также, что эстрогены вовлекаются в регуляцию оборота костной ткани; поэтому SERMs могут быть пригодны как индивидуально, так и в сочетании с другими антирезорбтивными и проостеогенными средствами, при лечении или предупреждении заболеваний костей с использованием соответствующих последовательностей и режимов введения терапевтических средств.

Кроме того, эстрогены вовлекаются в регулирование баланса между доминирующими Th₁ и Th₂ функциями иммунной системы, а потому могут быть пригодны при лечении или предупреждении зависимых от пола аутоиммунных заболеваний, таких как волчанка, рассеянный склероз, ревматоидный артрит.

Таким образом, другой аспект настоящего изобретения касается способа лечения или предупреждения вышеуказанных заболеваний и расстройств, в котором пациенту или животному, нуждающемуся в подобном лечении или предупреждении, вводят терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или терапевтически эффективное количество его соли. Настоящее изобретение охватывает также совместное введение соединений по изобретению вместе с одним или несколькими веществами, которые активны при лечении или предупреждении указанных заболеваний или расстройств.

В частности, соединения по настоящему изобретению могут применяться при следующих показаниях:

- лечение когнитивных расстройств, например, в качестве нейрозащитных, антидепрессантных или антифобических седативных средств;

- лечение шизофрении и нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона;

- предупреждение или лечение эстрогензависимых заболеваний, например приливов , остеопороза, настроения в период перименопаузы, перименструальных синдромов, вазомоторных синдромов, вагинальной атрофии или сухости, сексуальных расстройств, таких как снижение полового влечения, недержания мочи, зуда, местных инфекции половых путей. В этом случае указанные соединения могут объединяться с сексуально-эндокринным терапевтическим средством;

- контролирование или регулирование репродуктивных функций, таких как фертильность мужчин и женщин, беременность, прерывание беременности, контрацепция, роды или регулируемые эстрогеном заболевания кожи. В этом случае указанные соединения могут быть объединены с агонистом или антагонистом LH-RH, эстропрогестативным контрацептивом, прогестином, антипрогестином или простагландином;

- предупреждение или лечение доброкачественных или злокачественных заболеваний молочной железы, матки или яичника или синдрома поликистоза яичников. В этом случае указанные соединения можно объединять с антиэстрогеном, прогестином или агонистом, или антагонистом LH-RH;

- предупреждение или лечение доброкачественных или злокачественных заболеваний предстательной железы или яичек. В этом случае указанные соединения можно объединять с антиандрогеном, прогестином, ингибитором лиазы или агонистом LH-RH. В случае необходимости соединения по настоящему изобретению можно также объединять с радиотерапевтическим средством; химиотерапевтическим средством, таким как аналог азотистого иприта, например, таким как циклофосфамид, мелфалан, ифосфамид или трофосфамид; с этиленимином, таким как тиотепа; с нитрозомочевиной, такой как кармустин; с подвергнутым лизису агентом, таким как темозоломид или дакарбазин; с антиметаболитом фолиевой кислоты, таким как метотрексат или ралтитрексед; с аналогом пурина, таким как тиогуанин, кладрибин или флударабин; с аналогом пиримидина, таким как фторурацил, тегафур или гемцитабин; с алкалоидом винка или его аналогом, таким как винбластин, винкристин или винорелбин; с производным подофиллотоксина, таким как этопозид, таксаны, доцетаксель или паклитаксель; с антрациклином или его аналогом, таким как доксорубицин, эпирубицин, идарубицин или митоксантрон; с цитотоксическим антибиотиком, таким как блеомицин или митомицин; с производным соединением платины, таким как цисплатин, карбоплатин или оксалиплатин; с моноклональным антителом, таким как ритуксимаб; с антинеопластическим средством, таким как пентостатин, милтефосин, эстрамустин, топотекан, иннотекан или бикалутамид; или с ингибитором простагландина (ингибитором СОХ2/СОХ1);

- предупреждение или лечение синдрома раздраженного кишечника, болезни Крона, язвенного проктита, колита или артрита;

- предупреждение или лечение сердечно-сосудистых заболеваний, атеросклероза, гипертензии, рестеноза (в частности, для снижения уровня холестерина, триглицеридов, Lp(a) или LDL или для модулирования уровня HDL).

В данном описании термин объединенный или комбинация относится к любому режиму совместного введения соединения формулы (I) и одного или нескольких других фармацевтических соединений, независимо от типа и времени введения и вариаций в дозировке в течение времени для любого из этих соединений. Совместное введение можно, например, осуществлять параллельно, последовательно или в течение длительного периода времени.

Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут вводиться, например, перорально, местно, парентерально в виде разовых лекарственных форм, содержащих обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные лекарственные средства и/или носители. Указанные лекарственные формы приведены в примерах, однако для введения соединений формулы (I) специалисты могут разработать другие лекарственные формы. Термин парентеральный в данном описании включает подкожные инъекции, методы внутривенных, внутримышечных или внутригрудинных инъекций или вливаний. Помимо лечения теплокровных животных, таких как мыши, крысы, лошади, овцы, собаки, кошки и т.д., соединения по настоящему изобретению эффективны для лечения людей.

Фармацевтические композиции, содержащие активный ингредиент, могут быть в форме, удобной для перорального применения, например в виде таблеток, пастилок, лепешек, суспензий на водной или масляной основе, диспергирующихся порошков или гранул, эмульсий, твердых или мягких капсул, или сиропов, или эликсиров. Соединения, предназначенные для перорального применения, могут быть получены любыми известными из области техники способами, которые используют для приготовления фармацевтических композиций, и композиции могут содержать одно или несколько средств, выбранных из группы, которая включает подсластители, ароматизаторы, красители и консерванты с тем, чтобы получить фармацевтически изящные и приятные на вкус препараты. Таблетки содержат активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми наполнителями, которые пригодны для приготовления таблеток. Указанные наполнители могут быть, например, инертными разбавителями, такими как карбонат кальция, карбонат натрия, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующими средствами и разрыхлителями, например кукурузным крахмалом или альгиновой кислотой; связующими, например крахмалом, желатином или камедью, и лубрикантами, например стеаратом магния, стеариновой кислотой или тальком. Таблетки могут быть без оболочек или же на таблетки известными способами могут быть нанесены покрытия, с целью отсрочить их разрушение или абсорбцию в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить пролонгированное действие на более длительный период. Например, может быть использовано вещество пролонгированного действия, такое как моностеарат глицерина или дистеарат глицерина. На таблетки можно также нанести покрытие с помощью способов, приведенных в патентах США № № 4256108, 4166452 и 4265874, и получить осмотические терапевтические таблетки, обеспечивающие контролируемое высвобождение.

Составы для перорального введения могут быть также приготовлены в виде желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с твердым инертным разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция, или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, например с арахисовым маслом, жидким парафином или оливковым маслом.

Водные суспензии содержат активный ингредиент в смеси с наполнителями, которые пригодны для приготовления водных суспензий. Подобными наполнителями являются суспендирующие средства, например натриевое производное карбоксиметилцеллюлозы, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, смола трагаканта и камедь; диспергирующие и смачивающие средства, такие как природные фосфатиды, например лецитин, или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например полиоксиэтиленстеарат, или продукты конденсации оксида этилена с длинноцепочечными алифатическими спиртами, например гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации оксида этилена с неполными сложными эфирами, образованными жирными кислотами и гекситом, такие как моноолеат полиоксиэтиленсорбита, или продукты конденсации оксида этилена с неполными сложными эфирами, образованными жирными кислотами и ангидридами гексита, такие как, например, моноолеат полиэтиленсорбитана. Водные суспензии могут также содержать один или несколько консервантов, например этил, или н-пропил, п-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько ароматизаторов и один или несколько подсластителей, таких как сахароза, сахарин или аспартам.

Суспензии на масляной основе могут быть приготовлены путем диспергирования активного ингредиента в растительном масле, например арахисовом масле, оливковом масле, кунжутном масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Суспензии на масляной основе могут содержать загуститель, например пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Могут добавляться подсластители, такие как указанные выше подсластители, и ароматизаторы с тем, чтобы придать препаратам приятный вкус. В указанные композиции можно добавить консервант в виде антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Диспергирующиеся порошки и гранулы, пригодные для приготовления водных суспензий путем добавления воды, представляют собой активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим средством, суспендирующим средством и одним или несколькими консервантами. В качестве примеров подходящих диспергирующих или смачивающих средств и суспендирующих средств можно привести те, что указаны выше. Могут присутствовать дополнительные наполнители, например подсластители, ароматизаторы и красители. Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут также быть в форме эмульсии типа масло в воде. Масляная фаза может быть растительным маслом, например оливковым маслом или арахисовым маслом, или минеральным маслом, например жидким парафином, или смесью указанных веществ. Подходящие эмульгаторы включают природные фосфатиды, например, соевое масло, лецитин и сложные эфиры или неполные сложные эфиры, получаемые из жирных кислот и ангидридов гексита, например моноолеат сорбитана, и продукты конденсации указанных неполных сложных эфиров с оксидом этилена, например моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Эмульсии могут также содержать подсластители и ароматизаторы.

Фармацевтические композиции могут быть в форме стерильных суспензий для инъекций на водной или масляной основе. Указанные суспензии могут быть составлены в соответствии с известными из области техники способами с использованием диспергирующих или смачивающих средств и суспендирующих средств, которые уже были указаны выше. Пригодные для инъекций стерильные препараты могут представлять собой стерильные растворы или суспензии для инъекций, приготовленные в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, могут представлять собой раствор в 1,3-бутандиоле. Пригодные к использованию приемлемые носители и растворители включают воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспендирующей среды обычно применяют стерильные нелетучие масла. С этой целью могут использоваться любые мягкие нелетучие масла, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, для приготовления составов для инъекций находят применение жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

При лечении или предупреждении вышеуказанных болезней или расстройств уровни дозировки составляют в диапазоне от приблизительно 0,001 мг до приблизительно 10 мг/кг массы тела в день или, альтернативно, в диапазоне от приблизительно 0,1 мг до приблизительно 100 мг на одного пациента в день.

Количество активного ингредиента, которое можно объединять с веществами-носителями для получения единичной дозировочной формы, варьирует в зависимости от пациента и от конкретного пути введения.

Следует однако понимать, что конкретные уровни дозировки для любого конкретного пациента будут зависеть от различных факторов, включая возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, путь введения, скорость выведения из организма, комбинации лекарств и тяжесть конкретного заболевания, терапию которого проводят.

Производные индазола формулы (I) могут быть получены в соответствии с общими схемами Ia, Ib, Ic.

Схема Ia

Согласно схеме Ia производное фторанизола (1) взаимодействует с подходящим хлорангидридом кислоты (2) по реакции Фриделя-Крафтса в соответствии с методикой, приведенной K. L. Kees (J. Med. Chem., 29, 11, 1986, 2329-2334) c образованием кетона (5). Кетон (5) можно также получить конденсацией алкилмагния (4) с производным фторбензонитрила (3) в соответствии с H. Shaffer (J. Am. Chem. Soc., 1939, 61, 2175). Затем кетон (5) кипятят с обратным холодильником в EtOH в присутствии замещенного гидразина или гидразин-гидрата с образованием соответствующего индазольного цикла (6) или (7). Соединение (7) может быть получено также селективным N-алкилированием индазола (6) в условиях, описанных U. Lerch and J. König (Synthesis, 1983, 2, 157-8), или в условиях, описанных J. Chung and all (Tetrahedron Letters, 1992, 33, 4717-20).

Деметилированием соединений (6) и (7) (если R ₁ обозначает метил) либо с помощью трибромборана в условия, приведенных J. F. W. McOmie (Tetrahedron, 1968, 24, 2289-92), или с помощью HBr/AcOH или гидрохлорида пиридиния или дебензилированием соединений (6) и (7) (если R₁ обозначает бензил) с помощью Pd/C в присутствии или в отсутствии PtО₂ в условиях, приведенных W. H. Hartung (Org. React., VII, 1953, 263) получают соответственно производные гидроксииндазола (8) и (12). Индазол (6) можно непосредственно N-сульфамоилировать с образованием соединения (10) путем обработки гидридом натрия и сульфамоилхлоридом, как описано P. Nussbaumer (J. Med. Chem., 2002, 45, 4310-20), или по реакции с сульфамоилхлоридом в диметилацетамиде (DMAc), как описано O. Makoto (Tetrahedron Letters, 2000, 41, 7047-51), а затем защитную группу удаляют и получают производное сульфамата (11). Индазол (8), который освобожден от защитной группы, можно затем превратить в дисульфамоилированное производное (9). Таким же образом индазол (12) можно ввести в реакцию с сульфамоилхлоридом и получить О-сульфаматное производное (13), у которого удаляют защитную группу и получают соединение (14).

Схема Ib

Согласно схеме Ib 3-метилзамещенное производное индазола (15), которое получают в соответствии с условиями, приведенными F. Dennler (Tetrahedron, 22, 1966, 3131), вводят во взаимодействие с ВОС₂О, ТЕА и DMAP (T. Ishizuki, Tetrahedron Lett., 28, 1987, 4185) и получают соединение (16). Соединение (16) бромируют по реакции Воля-Циглера в присутствии с NBS и пероксида бензоила в соответствии с B. R. Henke (J. Med. Chem., 1997, 40, 17, 2706-2725) и получают соединение (17). Соединение (18) получают по реакции соединения (17) с KCN в условиях, описанных Ainsworth (J. Am. Chem. Soc., 1957, 79, 5242-5243). Затем соединение (18) взаимодействует с альдегидом (19) в NaH/ДМФА или KOH/EtOH с получением соединения (20) в соответствии с методикой, описанной M. J. Meyers (J. Med. Chem., 44, 24, 2001, 4230) (в процессе этой реакции проводят удаление защитной группы ВОС). Затем соединение (20) взаимодействует с NaBH₄ в EtOH с образованием соединения (21). Деметилированием соединений (21) (если R ₁ обозначает метил) либо с помощью трибромборана в условия, приведенных J. F. W.McOmie (Tetrahedron, 1968, 24, 2289-92), или с помощью HBr/AcOH или гидрохлорида пиридиния или дебензилированием соединения (21) (если R₁ обозначает бензил) с помощью Pd/C в присутствии или в отсутствие PtО₂ в условиях, приведенных W.H.Hartung (Org. React., VII, 1953, 263), получают производное нитрила (22). Деметилирование с помощью HBr/AcOH дает производное амида (23).

Схема Iс

Согласно схеме Iс соединение (24), полученное в условиях, которые описаны M. Kitagawa (Chem. Pharm. Bull., 39, 10, 1991, 2681), вводят в реакцию с гидразин-гидратом или алкил- или арилгидразином при кипячении с обратным холодильником с образованием соединения (25). Соединение (25) деметилируют в присутствии BBr₃ в CH₂Cl₂ в условиях, приведенных J. F. W.McOmie (Tetrahedron, 1968, 24, 2289-92), и получают соединения (26) и (27).

Производные бензизоксазола формулы (I) могут быть получены в соответствии с общими схемами IIa, IIb, IIc.

Схема IIa

Согласно схеме IIa уже описанный кетон (5) или кетон (29), получаемый по реакции Фриделя-Крафтса и приведенный в K. L. Kees (J. Med. Chem., 29, 11, 1986, 2329-2334), кипятят с обратным холодильником с гидрохлоридом гидроксиламина в условиях, описанных Y. Yamanaka (Pestic. Sci., 1998, 54, 3, 223-229), и получают соответствующий оксим (28) или (30) без закрытия цикла. Соединение (28) затем циклизуют при кипячении с обратным холодильником в растворе NaOH/EtOH, а соединение (30) циклизуют с помощью внутримолекулярной реакции Мицунобу (Synthesis, 1981, 1) и получают соответствующий бензизоксазол (31).

Деметилированием соединений (31) (если R₁ обозначает метил) либо с помощью трибромборана в условиях, приведенных J. F. W. McOmie (Tetrahedron, 1968, 24, 2289-92), или с помощью HBr/AcOH или гидрохлорида пиридиния или дебензилированием соединения (31) (если R₁ обозначает бензил) с помощью Pd/C в условиях, описанных A. M. Felix (J. Org. Chem., 43, 1978, 4194), получают гидроксипроизводное бензизоксазола (32). Указанное соединение (32) можно превратить в соответствующий сульфамат (33) путем обработки гидридом натрия и сульфамоилхлоридом (P.Nussbaumer, J. Med. Chem., 2002, 45, 4310-20) или по реакции с сульфамоилхлоридом в диметилацетамиде (DMAc) (O.Makoto, Tetrahedron Letters, 2000, 41, 7047-51). Соединение (32) можно также превратить в простой эфир (34) по реакции с 1-(2-хлор-этил)пиперидином в условиях, описанных M. R. Tremblay (Bioorg. Med. Chem., 1999, 7, 6, 1013-1024).

Схема IIb

Согласно схеме IIb бензизоксазол (35), полученный в условиях, которые описаны H. Uno (Chem. Pharm. Bull., 24, 1976, 632), вводят в реакцию с альдегидом (19) в NaH/ДМФА или KOH/EtOH и получают соединение (36). Затем соединение (36) взаимодействует с NaBH₄ в EtOH с образованием соединения (37).

Деметилированием соединений (37) либо с помощью трибромборана в условиях, приведенных J. F. W. McOmie (Tetrahedron, 1968, 24, 2289-92), или с помощью HBr/AcOH или гидрохлорида пиридиния получают гидроксипроизводное бензизоксазола (38).

Схема IIс

Согласно схеме IIс бензизоксазол (39), полученный в условиях, которые описаны M. A. Elkasaby (Indian J. Chem. Sect. B, 1980, 19, 571), защищают с использованием трет-бутилдиметилсилилхлорида в имидазоле/ДМФА (P. M. Kendall, J. Org. Chem., 44, 1979, 1421) и полученное соединение (40) бромируют в присутствии NBS и пероксида бензоила, получая соединение (41). Соединение (41) вводят во взаимодействие с LDA и замещенным производным фенилацетонитрила и получают соединение (42) по методике, приведенной E. Teodori (Bioorg. Med. Chem., 7, 9, 1999, 1873-1880). После удаления гидроксильной группы в присутствии n-Bu₄F в условиях, описанных E. J. Corey (J. Am. Chem. Soc., 94, 1972, 6190), получают соединение (43).

Производные бензизотиазола формулы (I) могут быть получены в соответствии с общей схемой III.

Схема III

Согласно схеме III кетон (5) вступает во взаимодействие с фенилметантиолом с образованием соединения (44). Полученное соединение (44) кипятят с обратным холодильником в сульфурилхлориде с последующей обработкой аммиаком и получают бензизотиазол с закрытием цикла (45) в соответствии с методикой, приведенной D. M. Fink (Tetrahedron Letters, 1993, 34, 41, 6525-6528). Деметилированием соединений (45) либо с помощью трибромборана в условиях, приведенных J. F. W. McOmie (Tetrahedron, 1968, 24, 2289-92), или с помощью HBr/AcOH или гидрохлорида пиридиния получают гидроксипроизводные бензизотиазола (46). Указанные соединения (46) можно превратить в соответствующие сульфаматы (47) путем обработки гидридом натрия и сульфамоилхлоридом (P. Nussbaumer, J. Med. Chem., 2002, 45, 4310-20) или по реакции с сульфамоилхлоридом в диметилацетамиде (DMAc) (O. Makoto, Tetrahedron Letters, 2000, 41, 7047-51).

Окисление указанных соединений (46) и (47) пероксидом водорода в трифторуксусной кислоте в соответствии с условиями, приведенными S. Grivas and E. Ronne (Acta Chemica Scandinavia, 1995, 49, 225-229), дает соответственно моно- и/или диокисленные бензизотиазолы (49) и (48). Соединение (49) можно подвергнуть сульфамоилированию и получить соединение (48).

Общие схемы I, II и III поясняют синтез соединений (I), в которых заместитель R₁О находится в положении 6- гетероцикла. Тем не менее следует понимать, что соединения (I), в которых заместитель R₁О находится в положении 4-, 5- или 7- гетероцикла, также могут быть получены по приведенным выше методикам.

Следующие примеры приведены для иллюстрации, и они не ограничивают настоящее изобретение.

ПОЛУЧЕНИЕ АЦЕТОФЕНОНОВ (5)

Пример 1

4-Бензилокси-2-фторбензонитрил

К смеси 2-фтор-4-гидроксибензонитрила (98 г, 0,68 моль) и К₂СО₃ (94 г, 0,68 моль) в ацетонитриле добавляют бензилхлорид (86,6 г, 0,68 моль). Смесь оставляют перемешиваться на ночь при комнатной температуре и за протеканием реакции следят с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) (толуол/AcOEt 8/2). Смесь отфильтровывают, концентрируют в вакууме и кристаллизуют из пентана, получая 147 г твердого вещества (95%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 5,25 (c, 2H), 7,05 (дд, 1H), 7,25 (дд, 1H), 7,30-7,60 (м, 5H), 7,75 (т, 1H).

По той же методике, но заменив 2-фтор-4-гидроксибензонитрил на

циклогептил(2-фтор-4-гидроксифенил)метанон

1-адамантил(2-фтор-4-гидроксифенил)метанон

получают соответственно следующие соединения:

Пример 2

Циклогептил(4-бензилокси 2-фторфенил)метанон (71%)

¹Н-ЯМР (CDCl₃ ): 1,10-2,00 (м, 12H), 3,50 (м, 1H), 5,17 (c, 2H), 6,85 (дт, 1H), 7,20 (дд, 1H), 7,30-7,60 (м, 6H).

Пример 3

1-Адамантил(4-бензилокси 2-фторфенил)метанон (38%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 1,30-2,30 (м, 15H), 5,20 (c, 2H), 6,85 (дт, 1H), 7,12 (дд, 1H), 7,20-7,60 (м, 6H).

Пример 4

Циклопентил(4-бензилокси 2-фторфенил)метанон

Суспензию магния (19 г, 0,79 моль) и иода (каталитическое количество) в ТГФ (20 мл) кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота. Медленно добавляют раствор циклопентилбромида (110 г, 0,738 моль) в ТГФ (400 мл). Смесь кипятят с обратным холодильником до тех пор, пока весь магний не израсходуется, затем охлаждают до 30°С и добавляют раствор 4-бензилокси-2-фторбензонитрила (129 г, 0,56 моль) в ТГФ (600 мл). Реакционную смесь оставляют перемешиваться на ночь при температуре 50°С, а затем прерывают реакцию добавлением водного раствора NH₄Cl и льда, экстрагируют этилацетатом и промывают насыщенным раствором соли. Смесь сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (гептан/EtOAc 9/1) дает 60 г продукта (35% в виде твердого вещества).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,40-2,00 (м, 8H), 3,58 (м, 1H), 5,20 (c, 2H), 6,85-7,20 (м, 2H), 7,25-7,55 (м, 5H), 7,80 (т, 1H).

Используя ту же методику, но заменив циклопентилбромид на циклогексилхлорид, получают следующее соединение:

Пример 5

Циклогексил(4-бензилокси 2-фторфенил)метанон (35%), т.пл. 78°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,00-2,00 (м, 10H), 3,05 (м, 1H), 5,20 (c, 2H), 6,90-7,10 (м, 2H), 7,20-7,60 (м, 5H), 7,75 (т, 1H).

Пример 6

1-Адамантил(2-фтор-4-гидроксифенил)метанон

К смеси AlCl₃ (45 г, 0,337 моль) в 1,2-дихлорэтане (DCE, 250 мл) при 0°С добавляют 1-адамантилкарбонилхлорид (36,6 г, 0,228 моль) в DCE (150 мл). При температуре 0°С медленно добавляют 3-фторфенол (21 г, 0,183 моль) в DCE (100 мл). За протеканием реакции следят с помощью ТСХ (гептан/толуол 50/50). Смесь выливают в 2 н. раствор HCl, экстрагируют с помощью AcOEt, промывают раствором NaHCO₃ и насыщенным раствором соли, сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (гептан/толуол 8/2) дает 27 г 1-адамантил(2-фтор-4-гидроксифенил)метанона (48% в виде твердого вещества).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,30 (м, 15H), 5,97 (c, 1H), 6,70 (д, 1H), 6,94 (дд, 1H), 7,64 (д, 1H).

По той же самой методике, заменив 1-адамантилкарбонилхлорид на циклогептанкарбонилхлорид, получают следующее соединение:

Пример 7

Циклогептил(2-фтор-4-гидроксифенил)метанон (60%)

¹Н-ЯМР (СDCl₃ ): 1,20-2,00 (м, 12H), 3,58 (м, 1H), 6,70-6,90 (м, 2H), 7,90-8,10 (м, 1H), 12,45 (с, 1H).

По той же самой методике, заменив 1-адамантилкарбонилхлорид на циклогептанкарбонилхлорид и заменив 3-фторфенол на 3-фторанизол, получают следующее соединение:

Пример 8

Циклогептил(4-метокси-2-фторфенил)метанон (45%)

¹Н-ЯМР (CDCl₃ ): 1,40-2,00 (м, 12H), 1,9 (3, 2H), 3,25 (м, 1H), 3,80 (c, 3H), 6,50 (дд, 1H), 6,65 (дд, 1H), 7,75 (т, 1H).

Используя ту же самую методику, но заменив 3-фторфенол на:

3-фторанизол

3,5-диметоксихлорбензол

получают соответственно следующие соединения:

Пример 9

1-Адамантил(4-метокси-2-фторфенил)метанон (15%)

¹Н-ЯМР (CDCl₃ ): 1,50-2,30 (м, 15H), 3,85 (c, 3H), 6,60 (2д, 1H), 6,70 (2д, 1H), 7,70 (т, 1H).

Пример 10

1-Адамантил(2-хлор-4,6-диметоксифенил)метанон (22%)

¹Н-ЯМР (CDCl₃-d₁ ): 1,60-2,10 (м, 15H), 3,75 (c, 3H), 3,80 (c, 3H), 6,35 (c, 1H), 6,50 (c, 1H).

По той же самой методике, заменив 3-фторфенол на 3,4-диметоксифторбензол и заменив 1-адамантилкарбонилхлорид на циклогексанкарбонилхлорид, получают следующее соединение:

Пример 11

Циклогексил(2-фтор-4-гидрокси-5-метоксифенил)метанон

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,00-2,00 (м, 10H), 3,05 (м, 1H), 3,80 (c, 3H), 6,65 (д, 1H), 7,23 (д, 1H), 10,50 (c, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ ИНДАЗОЛОВ (6), (7), (8) И (12)

Пример 12

6-Бензилокси-3-циклопентил-1Н-индазол

Смесь циклопентил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанона (40 г, 0,13 моль) в гидразин-гидрате (50 мл) кипятят с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры твердое вещество отфильтровывают, растворяют в EtOAc, а затем промывают водным раствором NH₄Cl и насыщенным раствором соли. Раствор сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (толуол/EtOAc 9/1) дает ожидаемый продукт (13 г, 45% в виде твердого вещества).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 1,40-2,20 (м, 8H), 3,34 (м, 1H), 5,13 (c, 2H), 6,75 (дд, 1H), 6,90 (д, 1H), 7,20-7,53 (м, 5H), 7,57 (д, 1H), 9,40 (c, 1H).

По той же методике, но заменив циклопентил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон на

циклогексил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон

циклогептил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон

1-адамантил(4-метокси-2-фторфенил)метанон

циклогептил (4-метокси-2-фторфенил)метанон

получают соответственно следующие соединения:

Пример 13

6-Бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол (58%)

¹Н-ЯМР (CDCl₃ ): 1,10-2,10 (м, 10Н), 2,95 (м, 1H), 5,15 (c, 2H), 6,75 (дд, 1H), 6,90 (д, 1H), 7,20-7,55 (м, 5H), 7,65 (д, 1H), 12,32 (c, 1H).

Пример 14

6-Бензилокси-3-циклогептил-1Н-индазол (85%)

¹Н-ЯМР (CDCl₃ ): 1,20-2,10 (м, 12H), 2,55 (м, 1H), 5,07 (c, 2H), 6,45 (дд, 1H), 6,55 (д, 1H), 6,95 (д, 1H), 7,20-7,50 (м, 5H).

Пример 15

3-(1-Адамантил)-6-метокси-1Н-индазол (30%)

¹Н-ЯМР (CDCl₃ ): 1,50-2,70 (м, 15H), 3,85 (c, 3Н), 6,78 (дд, 1H), 6,88 (д, 1H), 7,57 (д, 1H).

Пример 16

3-Циклогептил-6-метокси-1Н-индазол (45%)

¹Н-ЯМР (CDCl₃): 1,40-2,30 (м, 12H), 3,22 (м, 1H), 3,83 (c, 3H), 6,35 (c, 1H), 6,65-6,90 (м, 2H), 7,58 (д, 1H).

По той же методике, но заменив гидразин-гидрат на 1-(4-бензилоксифенил)гидразин (синтезируют в соответствии с K.J.Duffy, J. Med. Chem., 2001, 44, 22, 3730-3745), получают следующее соединение:

Пример 17

6-Бензилокси-3-циклопентил-1-(4-бензилоксифенил)-1Н-индаз ол (66%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 1,15-2,05 (м, 10Н), 2,95 (дт, 1H), 3,88 (c, 3H), 5,15 (c, 2H), 6,75 (дд, 1H), 7,12 (д, 1H), 7,25-7,58 (м, 5H), 7,65 (д, 1H).

По той же методике, но заменив циклопентил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон на циклогексил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон и заменив гидразин-гидрат на метилгидразин или бензилгидразин, получают соответственно следующие соединения:

Пример 18

6-Бензилокси-3-циклогексил-1-метил-1Н-индазол (66%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,15-2,05 (м, 10H), 2,95 (дт, 1H), 3,88 (c, 3H), 5,15 (c, 2H), 6,75 (дд, 1H), 7,12 (д, 1H), 7,25-7,58 (м, 5H), 7,65 (д, 1H).

Пример 19

1-Бензил-6-бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол (76%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 1,15-2,05 (м, 10H), 2,95 (дт, 1H), 5,10 (c, 2H), 5,15 (c, 2H), 6,75 (дд, 1H), 7,12 (д, 1H), 7,15-7,65 (м, 10H), 7,65 (д, 1H).

Пример 20

трет-Бутил-6-бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол-1-карбоксилат

При температуре 0°С ди-трет-бутилдикарбонат (36,38 г, 0,166 моль) в ацетонитриле (340 мл) добавляют к смеси 6-бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазола (42,50 г, 0,138 моль), ТЕА (22 мл, 0,152 моль), ацетонитрила (460 мл) и DMAP (3,40 г, 0,027 моль).

Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем концентрируют в вакууме, разбавляют этилацетатом и промывают водой, подкисленной 2 н. раствором HCl до значения рН 2. Смесь сушат над Na₂SO₄ , отфильтровывают и разбавляют диизопропиловым эфиром, а затем кристаллизуют ожидаемый продукт (44,50 г, выход 79%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,15-2,05 (м, 19H), 3,00 (м, 1H), 5,19 (c, 2H), 7,03 (дд, 1H), 7,25-7,45 (м, 5H), 7,69 (д, 1H), 7,78 (д, 2H).

Пример 21

6-Бензилокси-3-циклопентил-1-(2-пиперидин-1-илэтил)-1Н-индазол

6-Бензилокси-3-циклопентил-1Н-индазол нагревают в течение 1 часа вместе с NaOH (1,64 г, 41 ммоль) и 1-(2-хлорэтил)пиперидином в EtOH (60 мл) до 40°С. За протеканием реакции следят с помощью ТСХ (толуол/диоксан: 7/3) и после ее завершения смесь охлаждают до комнатной температуры. Прерывают реакцию, добавив NH₄Cl, экстрагируют с помощью AcOEt, сушат над Na ₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (толуол/1,4-диоксан 7/3) дает ожидаемый продукт (600 мг, 8% в виде твердого вещества).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,40-2,40 (м, 14H), 2,50-2,80 (м, 2H), 3,10-3,60 (м, 5H), 4,30 (т, 2H), 5,15 (c, 2H), 6,70 (дд, 1H), 7,10 (д, 1H), 7,40 (м, 5H), 7,60 (д, 1H).

По той же методике, но заменив 1-(2-хлорэтил)пиперидин на 4-бромбензилбромид, получают следующее соединение:

Пример 22

6-Бензилокси-1-(4-бромбензил)-3-циклопентил-1Н-индазол

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,50-2,20 (м, 8H), 3,38 (м, 1H), 5,15 (c, 2H), 5,50 (c, 2H), 6,78 (дд, 1H), 7,05-7,55 (м, 10H), 7,60 (д, 1H).

Пример 23

3-Циклопентил-1Н-индазол-6-ол

Смесь 6-бензилокси-3-циклопентил-1Н-индазола (13 г, 0,102 моль), Pd/C (5%, 0,65 г) и Pt₂О (каталитическое количество) в этаноле (130 мл) перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода. За протеканием реакции следят с помощью ТСХ (гептан/EtOAc 50/50). После окончания реакции смесь отфильтровывают через целит и концентрируют в вакууме. Кристаллизуют из смеси CH₂Cl₂/пентан и получают 7,2 г кристаллов белого цвета (85%), т.пл. 175°С.

¹ Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,40-2,20 (м, 8H), 3,35 (м, 1H), 6,55 (дд, 1H), 6,68 (д, 1H), 7,50 (д, 1H), 9,45 (c, 1H), 12,05 (c, 1H).

По той же методике, но заменив 6-бензилокси-3-циклопентил-1Н-индазол на:

6-бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол

6-бензилокси-3-циклогексил-1-метил-1Н-индазол

6-бензилокси-3-циклопентил-1-(4-бензилоксифенил)-1Н-индазол

6-бензилокси-3-циклопентил-1-(2-пиперидин-1-илэтил)-1Н-индазол

6-бензилокси-1-(4-бромбензил)-3-циклопентил-1Н-индазол

1-бензил-6-бензилокси-3-циклопентил-1Н-индазол

трет-бутил-6-бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол-1-карбоксилат

получают соответственно следующие соединения:

Пример 24

3-Циклогексил-1Н-индазол-6-ол (85%), т.пл. 147°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,10-2,10 (м, 10H), 2,90 (м, 1H), 6,55 (дд, 1H), 6,65 (c, 1H), 7,50 (д, 1H), 9,45 (c, 1H), 12,05 (c, 1H).

Пример 25

3-Циклогексил-1-метил-1Н-индазол-6-ол (75%), т.пл. 205°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,00 (м, 10H), 2,92 (дт, 1H), 3,80 (c, 3H), 6,60 (дд, 1H), 6,68 (д, 1H), 7,55 (д, 1H), 9,58 (c, 1H).

Пример 26

3-Циклопентил-1-(4-гидроксифенил)-1Н-индазол-6-ол (54%), т.пл. 178°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,50-2,20 (м, 8H), 3,40 (т, 1H), 6,68 (дд, 1H), 6,83 (д, 1H), 6,90 (д, 2H), 7,38 (д, 2H), 7,59 (д, 1H), 9,60 (c, 1H), 9,68 (c, 1H).

Пример 27

3-Циклопентил-1-(2-пиперидин-1-илэтил)-1Н-индазол-6-ол, гидрохлорид (90%), т.пл. 120°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,15-2,30 (м, 14H), 2,90 (м, 2H), 3,20-3,60 (м, 5H), 4,68 (т, 2H), 6,70 (дд, 1H), 6,88 (д, 1H), 7,52 (д, 1H), 10,80 (c, 1H).

Пример 28

1-(4-Бромбензил)-3-циклопентил-1Н-индазол-6-ол (90%), т.пл. 147°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,45-2,30 (м, 8H), 3,35 (м, 1H), 5,40 (c, 2H), 6,60 (д, 1H), 7,00-7,40 (м, 4H), 7,50 (д, 1H), 7,70 (c, 1H).

Пример 29

1-Бензил-3-циклогексил-1Н-индазол-6-ол (40%), т.пл. 154°С

¹Н-ЯМР (CDCl₃): 1,10-2,40 (м, 10H), 3,03 (м, 1H), 5,40 (c, 2H), 5,70 (c, 1H), 6,53 (д, 1H), 6,76 (дд, 1H), 7,00-7,35 (м, 5H), 7,60 (д, 1H).

Пример 30

1-трет-Бутил-3-циклогексил-6-гидрокси-1Н-индазол-1-карбоксилат (87%), т.пл. 124°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,05 (м, 19H), 2,95 (м, 1H), 6,80 (дд, 1H), 7,40 (д, 1H), 7,65 (д, 1H).

Пример 31

3-(1-Адамантил)-1Н-индазол-6-ол, гидрохлорид

Смесь 3-(1-адамантил)-6-метокси-1Н-индазола (210 мг, 0,75 ммоль) в 40%-ном растворе HBr в уксусной кислоте (10 мл) нагревают в течение ночи до температуры 70°С. Смесь выливают на лед и нейтрализуют раствором NaHCO₃, а затем экстрагируют с помощью AcOEt, сушат над Na₂SO ₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии (гептан/EtOAc 50/50) дает 200 мг продукта. Твердое вещество кристаллизуют из Et₂О в виде соли с HCl. Кристаллы отфильтровывают, промывают эфиром и сушат, получая 160 мг соли (80%), т.пл. 140°С.

¹ Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,00-2,60 (м, 15H), 6,65 (д, 1H), 6,75 (c, 1H), 7,55 (д, 1H).

Используя ту же методику, но заменив 3-(1-адамантил)-6-метокси-1Н-индазол на 3-циклогептил-6-метокси-1Н-индазол, получают следующее соединение:

Пример 32

3-Циклогептил-1Н-индазол-6-ол, гидрохлорид (60%), т.пл. 95°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,00 (м, 12H), 3,1 (м, 1H), 6,62 (д, 1H), 6,64 (c, 1H), 7,60 (д, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ 1Н-ИНДАЗОЛСУЛЬФОНАМИДОВ (9), (10), (11), (13) И (14)

Пример 33

6-Бензилокси-3-циклогептил-1Н-индазол-1-сульфонамид

Сульфамоилхлорид (2,9 г, 25 ммоль) добавляют к раствору 6-бензилокси-3-циклогептил-1Н-индазола (6) (4 г, 1,75 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (40 мл) при температуре 0°С. Смесь перемешивают при 0°С в течение 3 ч. После экстракции с помощью EtOAc органический слой промывают раствором NH ₄Cl и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме. Очистка методом флэш-хроматографии с последующей кристаллизацией из EtOH дает 1,2 г кристаллов желтого цвета (24%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,00 (м, 12H), 2,58 (м, 1H), 5,05 (c, 2H), 6,65-7,00 (м, 1H), 7,20-7,50 (м, 6H), 7,92 (c, 1H), 8,55 (c, 2H).

По той же методике, но заменив 6-бензилокси-3-циклогептил-1Н-индазол на:

6-бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол

3-циклогексил-1Н-индазол-6-ол

3-циклогексил-1-метил-1Н-индазол-6-ол

1-бензил-3-циклогексил-1Н-индазол-6-ол

трет-бутил-6-бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол-1-карбоксилат

получают соответственно следующие соединения:

Пример 34

6-Бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол-1-сульфонамид (100%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 1,10-2,10 (м, 10H), 3,05 (м, 1H), 5,15 (c, 2H), 7,00 (дд, 1H), 7,25-7,60 (м, 6H), 7,80 (д, 1H), 8,35 (c, 2H).

Пример 35

1-(Аминосульфонил)-3-циклогексил-1Н-индазол-6-илсульфамат (40%), т.пл. 213°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,10 (м, 10H), 3,13 (д, 1H), 7,25 (дд, 1H), 7,80 (д, 1H), 8,00 (д, 1H), 8,10 (c, 2H), 8,50 (c, 2H).

Пример 36

3-Циклогексил-1-метил-1Н-индазол-6-сульфонамид (84%), т.пл. 188°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,10 (м, 10H), 3,03 (м, 1H), 3,95 (c, 3H), 6,98 (д, 1H), 7,45 (c, 1H), 7,85 (д, 1H), 8,00 (c, 2H).

Пример 37

1-Бензил-3-циклогексил-1Н-индазол-6-илсульфамат (85%), т.пл. 188°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,10-2,10 (м, 10H), 3,04 (м, 1H), 5,55 (c, 2H), 7,05 (д, 1H), 7,10 (м, 5H), 5,53 (c, 1H), 7,88 (д, 1H), 8,00 (c, 2H).

Пример 38

трет-Бутил-6-[(аминосульфонил)окси]-3-циклогексил-1Н-индазол-1-карбоксилат (46%), т.пл. 128°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,10 (м, 19H), 3,10 (м, 1H), 7,23 (дд, 1H), 7,90-8,05 (м, 2H), 8,11 (c, 2H).

По той же методике, что и в примере 21, но заменив 6-бензилокси-3-циклопентил-1Н-индазол на:

6-бензилокси-3-циклогептил-1Н-индазол-1-сульфонамид

6-бензилокси-3-циклогексил-1Н-индазол-1-сульфонамид

получают соответственно следующие соединения:

Пример 39

3-Циклогептил-6-гидрокси-1Н-индазол-1-сульфонамид, т.пл. 155°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 1,20-2,00 (м, 12H), 2,60 (м, 1H), 6,70 (м, 2H), 6,90 (c, 2H), 7,05 (м, 1H), 7,80 (c, 1H).

Пример 40

3-Циклогексил-6-гидрокси-1Н-индазол-1-сульфонамид, т.пл. 162°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 1,10-2,10 (м, 10H), 3,00 (м, 1H), 6,78 (дд, 1H), 7,25 (д, 1H), 7,68 (д, 1H), 8,22 (c, 2H), 10,05 (c, 1H).

Пример 41

3-Циклогексил-1Н-индазол-6-илсульфамат

Смесь трет-бутил-6-[(аминосульфонил)окси]-3-циклогексил-1Н-индазол-1-карбоксилата (4,00 г, 10,12 ммоль), воды (10 мл), диоксана (30 мл) и нескольких капель концентрированного (30%) раствора HCl перемешивают в течение ночи и выливают в воду. Осадок собирают фильтрованием и получают ожидаемый продукт. Кристаллизацией из толуола получают кристаллы белого цвета (1,25 г, 48%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,10-2,10 (м, 10H), 3,04 (м, 1H), 6,95 (дд, 1H), 7,35 (д, 1H), 7,83 (д, 1H), 7,96 (c, 2H).

ПОЛУЧЕНИЕ 3-БРОММЕТИЛ-1Н-ИНДАЗОЛОВ (16), (17) И (18)

Пример 42

1-[(трет-Бутоксикарбонил)окси]-6-метокси-3-метил-1Н-индазол

Ди-трет-бутилдикарбонат в ацетонитриле смешивают при температуре 0°С с 6-метокси-3-метил-1Н-индазолом (получают по методике, описанной F. Dennler, Tetrahedron, 22, 1966, 3131-3139) (26,27 г, 0,162 моль), ацетонитрилом (200 мл), триэтиламином (25 мл, 0,178 моль), DMAP (3,96 г, 0,0324 моль). Смесь оставляют перемешиваться на ночь при комнатной температуре. Ацетонитрил концентрируют в вакууме. Смесь экстрагируют этилацетатом и подкисляют до рН=2 концентрированным раствором HCl, сушат над Na₂ SO₄, отфильтровывают и переносят в диизопропиловый эфир. Получают 23,9 г ожидаемого продукта (в виде соли, 59%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,60 (c, 9H), 2,44 (c, 3H), 3,85 (c, 3H), 6,95 (дд, 1H), 7,50 (д, 1H), 7,65 (д, 1H).

Пример 43

1-[(трет-Бутоксикарбонил)окси]-6-метокси-3-бромметил-1Н-индазол

1-[(трет-Бутоксикарбонил)окси]-6-метокси-3-метил-1Н-индазол (25,2 г, 0,096 моль) растворяют в CCl₄ и смешивают с пероксидом бензоила (2,33 г, 9,6 ммоль). К полученной смеси медленно добавляют N-бромсукцинимид (NBS, 18,8 г, 0,109 моль) и кипятят с обратным холодильником в течение ночи. Смесь охлаждают до комнатной температуры, фильтруют через целит, фильтрат концентрируют в вакууме и очищают методом флэш-хроматографии, используя толуол в качестве элюента. Получают 10,5 г ожидаемого продукта (32%, в виде масла).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 1,65 (c, 9H), 3,85 (c, 3H), 4,95 (c, 2H), 7,05 (дд, 1H), 7,55,(c, 1H), 7,80 (д, 1H).

Пример 44

{1-[(трет-Бутоксикарбонил)окси]-6-метокси-1Н-индазол-3-ил}ацетонитрил

KCN (5,73 г, 88 ммоль) в 23 мл H₂ О добавляют по каплям при температуре 0°С к 1-[(трет-бутоксикарбонил)окси]-6-метокси-3-бромметил-1Н-индазолу (10,5 г, 30,08 ммоль) в 80 мл этанола и перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа 30 мин. Смесь выливают в воду и экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат над Na ₂SO₄. После концентрирования и осаждения с помощью диизопропилового эфира получают ожидаемый продукт (4,42 г, 50% в виде твердого вещества).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,65 (c, 9H), 3,85 (c, 3H), 4,42 (c, 2H), 7,00 (д, 1H), 7,50 (д, 1H), 7,75 (д, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ (1Н-ИНДАЗОЛ-3-ИЛ)АЦЕТОНИТРИЛОВ (20), (21) и (22)

Пример 45

2-(Z/E)-2-(6-Метокси-1Н-индазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-еннитрил

40%-ный раствор КОН в воде в количестве 3,5 мл и 7,1 мл этанола добавляют по каплям к п-анисовому альдегиду (2,06 мл, 16,9 ммоль) и {1-[(трет-бутоксикарбонил)окси]-6-метокси-1Н-индазол-3-ил}ацетонитрилу в этаноле. После завершения реакции смесь отфильтровывают и получают 3,53 г ожидаемого продукта (77% в виде твердого вещества).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 3,35 (c, 1H), 3,85 (c, 3H), 3,90 (c, 3H), 6,70-7,20 (м, 4H), 7,85-8,15 (м, 4H).

Используя ту же методику, но заменив п-анисовый альдегид на циклогексанкарбоксальдегид, получают следующее соединение:

Пример 46

2-(Z/E)-3-Циклогексил-2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)проп-2-еннитрил (55,4%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 1,20-1,80 (м, 10H), 2,60-2,75 (м, 1H), 3,80 (c, 3H), 6,85 (дд, 1H), 6,95 (д, 1H), 7,15 (д, 1H), 7,85 (д, 1H), 13,20 (c, 1H).

Пример 47

2-(6-Метокси-1Н-индазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)пропаннитрил

К 2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-еннитрилу (3,53 г, 11,56 ммоль), растворенному в этаноле, порциями добавляют NaBH₄ (0,66 г, 17 ммоль). Смесь перемешивают при температуре 70°С в течение ночи, а затем выливают в воду, подкисленную концентрированной соляной кислотой, и экстрагируют этилацетатом. Органический слой сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют. Масло осаждают из этанола и диизопропилового эфира и получают ожидаемый продукт (3,18 г, в виде порошка белого цвета, 85,3%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 3,56 (c, 3H), 3,60-3,80 (м, 2H), 3,85 (c, 3H), 4,26 (т, 1H), 6,90-7,30 (м, 6H), 7,97 (д, 1H), 11,13 (c, 1H).

Используя ту же методику, но заменив 2-(Z/E)-2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-еннитрил на 2-(Z/E)-3-циклогексил-2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)проп-2-еннитрил, получают следующее соединение:

Пример 48

3-Циклогексил-2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)пропаннитрил (97,5%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 0,85-2,45 (м, 13H), 3,80 (c, 3H), 4,65 (т, 11-1), 6,75 (дд, 1H), 6,90 (д, 1H), 7,65 (д, 1H), 12,85 (c, 1H).

Пример 49

3-Циклогексил-2-(6-гидрокси-1Н-индазол-3-ил)пропаннитрил

3-Циклогексил-2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)пропаннитрил (1,61 г, 5,68 ммоль) растворяют в CH₂Cl₂ и охлаждают на бане со льдом. К полученной смеси добавляют 1М раствор BBr₃/CH₂Cl₂ (8,6 мл, 8,52 ммоль), а затем перемешивают смесь при температуре 50°С, после чего выливают в насыщенный раствор NaHCO₃, экстрагируют этилацетатом, сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают, концентрируют в вакууме и очищают методом флэш-хроматографии (CH₂Cl₂/МеОН 98/2). После кристаллизации из EtOH получают 780 мг кристаллов белого цвета (51%), т.пл. 175°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 0,80-2,05 (м, 13H), 4,65 (т, 1H), 6,70 (дд, 1H), 6,78 (д, 1H), 7,60 (д, 1H), 9,70 (c, 1H), 12,60 (c, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ ПРОПАНАМИДОВ (23)

По той же методике, что и в примере 27, но заменив 3-(1-адамантил)-6-метокси-1Н-индазол на:

2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)пропаннитрил

3-циклогексил-2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)пропаннитрил

получают соответственно следующие соединения:

Пример 50

2-(1-Ацетил-6-гидрокси-1Н-индазол-3-ил)-3-(4-метокси-фенил)пропанамид (7,7%), т.пл. 152°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 2,22 (c, 3H), 3,15 (кв, 2H), 3,80 (c, 3H), 4,15 (м, 1H), 6,68 (дд, 1H), 6,80 (д, 1H), 6,85-7,05 (м, 3H), 7,20 (д, 2H), 7,52 (c, 1H), 7,80 (д, 1H), 12,53 (c, 1H).

Пример 51

3-Циклогексил-2-(6-гидрокси-1Н-индазол-3-ил)пропанамид (34%), т.пл. 199°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 0,70-2,10 (м, 13H), 3,90 (т, 1H), 6,55 (д, 1H), 6,75 (c, 1H), 6,83 (c, 1H), 7,45 (c, 1H), 7,65 (д, 1H), 9,50 (c, 1H), 12,20 (c, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ 1Н-ПИРАНО[4,3,2-cd]ИНДАЗОЛОВ (25), (26) и (27)

Пример 52

7-Метокси-3-(4-метоксифенил)-1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол

По той же методике, что и в примере 12, но заменив циклопентил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон на 5-хлор-7-метокси-3-(4-метоксифенил)-4Н-хромен-4-он (синтезируют в соответствии с Kitagawa Chem. Pharm. Bull. , 39, 1991, 2681), получают ожидаемый продукт (в виде твердого вещества, 84%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 3,60 (c, 3H), 3,80 (c, 3H), 6,60 (д, 2H), 6,80 (д, 2H), 7,10 (д, 1H), 7,30 (д, 1H), 7,80 (c, 1H).

По той же методике, что и в примере 49, но заменив 3-циклогексил-2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)пропаннитрил на 7-метокси-3-(4-метоксифенил)-1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол, получают следующие соединения:

Пример 53

3-(4-Метоксифенил)-1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол-7-ол, гидрохлорид (26%), т.пл. 255°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 3,55 (c, 3H), 6,63 (м, 4H), 7,05 (д, 2H), 8,05 (c, 1H), 10,00 (c, 1H).

Пример 54

3-(4-Гидроксифенил)-1Н-пирано[4,3,2-cd]индазол-7-ол, гидрохлорид (15%), т.пл. 111°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 6,45 (c, 2H), 6,65 (д, 2H), 7,10 (д, 2H), 8,00 (c, 1H), 10,00 (c, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ ОКСИМОВ (28) и (30)

Пример 55

1-Адамантил(2-хлор-4,6-дигидроксифенил)метанон

1М Раствор трибромида бора в CH₂Cl ₂ добавляют к раствору 1-адамантил(2-хлор-4,6-дигиметоксифенил)метанона (7 г, 21,0 ммоль) и CH₂Cl₂ (30 мл). Смесь нагревают в течение ночи, а затем выливают в воду, экстрагируют этилацетатом, сушат над Na₂SO₄ и концентрируют в вакууме, получая ожидаемый продукт (1,9 г, 30%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,00-1,90 (м, 15H), 6,25 (c, 1H), 6,30 (c, 1H), 10,00 (c, 2H).

Пример 56

Оксим 1-адамантил(2-хлор-4,6-дигидроксифенил)метанона

1-Адамантил(2-хлор-4,6-дигидроксифенил)метанон (1,9 г, 6,2 ммоль), гидрохлорид гидроксиламина (100 г) и пиридин (50 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 4 ч. Смесь концентрируют в вакууме, выливают в воду, экстрагируют этилацетатом, промывают 1 н. раствором HCl, сушат над Na₂SO ₄ и концентрируют в вакууме, получая сырой продукт. Очистка методом флэш-хроматографии (AcOEt/толуол 3/7) дает чистый оксим (1 г в виде твердого вещества, 50%).

¹ Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,50-2,00 (м, 15H), 6,24 (c, 1H), 6,28 (c, 1H).

Используя ту же методику, но заменив 1-адамантил(2-хлор-4,6-дигидроксифенил)метанон на

1-адамантил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон

циклогептил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон

получают соответственно следующие соединения:

Пример 57

Оксим 1-адамантил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанона (32%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 1,20-2,20 (м, 15H), 5,10 (c, 2H), 6,80 (дт, 1H), 6,90-7,17 (м, 2H), 7,20-7,60 (м, 5H), 10,55 (c, 1H).

Пример 58

Оксим циклогептил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанона (60%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 1,10-2,00 (м, 12H), 2,10-2,20 (м, 1H), 5,10 (c, 2H), 6,67-6,85 (м, 1H), 6,90-7,15 (м, 2H), 7,25-7,50 (м, 5H), 10,47 (c, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ БЕНЗИЗОКСАЗОЛОВ (31), (32) и (34)

Пример 59

6-Бензилокси-3-циклогексил-1,2-бензизоксазол

Раствор гидрохлорида гидроксиламина (11,7 г) в теплой воде (100 мл) выливают в смесь циклогексил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанона (20,22 г, 64,7 ммоль) и EtOH (54 мл). Быстро добавляют раствор гидроксида натрия (11,13 г, 0,278 моль) в воде (54 мл) и нагревают до кипения. Реакционную смесь нагревают в течение 12 ч и затем бульшую часть EtOH удаляют дистилляцией. К остатку добавляют раствор гидроксида калия (8,7 г, 0,155 моль) в воде (54 мл). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение 2 дней, затем охлаждают приблизительно до 6°С при энергичном перемешивании. Получают твердое вещество белого цвета, которое тщательно промывают водой и растирают с диизопропиловым эфиром. Бензизоксазол получают после фильтрования в виде порошка белого цвета (12,26 г, 62%), т.пл. 110°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 1,00-2,10 (м, 10H), 3,05 (м, 1H), 5,20 (c, 2H), 7,00 (дд, 1H), 7,25-7,55 (м, 6H), 7,75 (д, 1H).

Используя ту же методику, но заменив циклогексил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон на циклогексил-(2-фтор-4-гидрокси-5-метоксифенил)метанон, получают следующее соединение:

Пример 60

3-Циклогексил-6-гидрокси-5-метоксибензизоксазол (50,5%)

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,10 (м, 10H), 3,05 (м, 1H), 3,85 (c, 3H), 6,95 (c, 1H), 7,23 (c, 1H), 9,94 (c, 1H).

Пример 61

3-(1-Адамантил)-4-хлор-1,2-бензизоксазол-6-ол

Диэтилазодикарбоксилат (0,92 г, 1,7 экв.) в ТГФ (20 мл) добавляют к смеси оксима 1-адамантил(2-хлор-4,6-дигидроксифенил)метанона (1 г, 3,1 ммоль), трифенилфосфина (1,4 г, 1,7 экв.) в ТГФ (20 мл) при 0°С. Смесь перемешивают 2 ч при 0°С, выливают в воду, экстрагируют этилацетатом, сушат над Na₂SO ₄ и концентрируют в вакууме, получая ожидаемый продукт. После очистки методом флэш-хроматографии (AcOEt/толуол 1/9) и кристаллизации из EtOH получают ожидаемый продукт (230 мг, 23%), т.пл. 215°С.

¹Н-ЯМР (CDCl ₃): 1,50-2,10 (м, 15H), 6,23 (д, 1H), 6,32 (д, 1H).

Пример 62

3-(1-Адамантил)-6-бензилокси-1,2-бензизоксазол

Оксим 1-адамантил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанона (2,3 мг, 6 мМ) в ДМФА (30 мл) при температуре 0°С в атмосфере азота добавляют по каплям к перемешиваемой суспензии NaH (0,61 г, 18 мМ, 60%-ная дисперсия в масле) в ДМФА (10 мл). После завершения добавления реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и выливают в Н₂О. Осадок собирают фильтрованием и получают ожидаемый продукт (2,06 мг, 95%), т.пл. 132°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,45 (м, 15H), 5,22 (c, 2H), 7,00 (д, 1H), 7,30-7,60 (м, 6H), 7,72 (д, 1H).

Используя ту же методику, но заменив оксим 1-адамантил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанона на оксим циклогептил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанона, получают следующее соединение:

Пример 63

6-Бензилокси-3-циклогептил-1,2-бензизоксазол (90%), т. пл. 80°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 1,30-2,20 (м, 12H), 3,25 (м, 1H), 5,21 (c, 2H), 7,00 (дд, 1H), 7,25-7,60 (м, 6H), 7,75 (д, 1H).

По той же методике, что и в примере 23, но заменив 6-бензилокси-3-циклопентил-1Н-индазол на:

3-(1-адамантил)-6-бензилокси-1,2-бензизоксазол

6-бензилокси-3-циклогептил-1,2-бензизоксазол

6-бензилокси-3-циклогексил-1,2-бензизоксазол

получают соответственно следующие соединения:

Пример 64

3-(1-Адамантил)-1,2-бензизоксазол-6-ол (47,5%), т.пл. 215°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,40-2,20 (м, 13H), 2,35 (c, 2H), 6,80 (дд, 1H), 6,92 (д, 1H), 7,58 (д, 1H), 10,28 (c, 1H).

Пример 65

3-Циклогептил-1,2-бензизоксазол-6-ол (48%), т.пл. 156°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,20 (м, 12H), 3,18 (м, 1H), 6,80 (д, 1H), 6,90 (c, 1H), 7,65 (д, 1H), 10,25 (c, 1H).

Пример 66

3-Циклогексил-1,2-бензизоксазол-6-ол (37%), т.пл. 181°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,10-2,10 (м, 10H), 3,02 (дт, 1H), 6,80 (дд, 1H), 6,90 (c, 1H), 7,68 (д, 1H), 10,25 (c, 1H).

Пример 67

3-Циклогексил-1,2-бензизоксазол-5,6-диол

По той же методике, что и в примере 49, но заменив 3-циклогексил-2-(6-метокси-1Н-индазол-3-ил)пропаннитрил на 3-циклогексил-6-гидрокси-5-метоксибензизоксазол, получают ожидаемый продукт (48,4%), т.пл. 177°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,05 (м, 10H), 3,05 (дт, 1H), 6,92 (c, 1H), 7,05 (c, 1H), 9,55 (ушир.c, 2H).

Пример 68

3-Циклогексил-6-(2-пиперидин-1-илэтокси)-1,2-бензизоксазол

Смесь 3-циклогексил-1,2-бензизоксазол-6-ола (2,69 г, 12 ммоль), гидрохлорида 1-(2-хлорэтил)пиперидина (2,39 г, 13 ммоль) и К₂СО₃ (3,59 г, 26 ммоль) в CH₃CN (30 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч, а затем оставляют перемешиваться на ночь при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в Н₂О и экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат (над Na₂SO₄) и концентрируют, получая остаток (3,78 г). Остаток очищают методом флэш-хроматографии (толуол/1,4-диоксан 8/2). Кристаллизуют из EtOH и получают кристаллы белого цвета (0,53 г, 13,4%), т.пл. 69°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,10 (м, 16H), 2,30-2,50 (м, 4H), 2,70 (т, 2H), 2,95-3,05 (дт, 1H), 4,15 (т, 2H), 6,95 (дд, 1H), 7,25 (д, 1H), 7,75 (д, 1H).

Пример 69

Тригидроксибензоин

Резорцин (100 г, 0,91 моль) и 4-гидроксифенилуксусную кислоту (138,4 г, 0,91 моль) растворяют в BF₃·Et ₂O (346 мл, 2,73 моль) в атмосфере азота. Смесь перемешивают и нагревают до температуры 50-60°С. После завершения реакции смесь охлаждают до комнатной температуры и выливают в большой объем ледяной воды. Сырой продукт отфильтровывают и сушат, получая тригидроксибензоин (70%), т.пл. 211°С.

¹Н-ЯМР (ацетон-d₆): 4,12 (c, 2H), 6,78 (д, 2H), 6,91 (д, 1H), 7,13 (д, 2H), 7,54-7,6 (м, 2H), 8,21 (c, 1H), 8,35 (c, 1H), 8,70 (c, 1H).

Пример 70

1-[2-Гидрокси-4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)фенил]-2-[4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)фенил]этанон

К охлажденной (0-5°С) суспензии тригидроксибензоина (100 г, 0,41 моль) и TsOH (0,062 г), в качестве катализатора, в толуоле (350 мл) медленно добавляют раствор дигидропирана (DHP) (150 мл, 1,64 моль). Реакционная смесь становится гомогенной, и ее перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляют триэтиламин и растворитель упаривают при пониженном давлении. Масло коричневого цвета после растирания в горячем изопропаноле (1,2 л) кристаллизуется, и таким образом выделяют образовавшееся твердое вещество белого цвета (182 г, 90%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃): 1,40-2,05 (м, 12H), 3,40-3,60 (м, 2H), 3,65-3,90 (м, 2H), 4,05 (c, 2H), 5,30 (т, 1H), 5,40 (т, 1H), 6,46 (дд, 1H), 6,54 (д, 1H), 6,94 (д, 2H), 7,10 (д, 2H), 7,68 (д, 1H), 12,52 (c, 1H).

Пример 71

Оксим 1-[2-гидрокси-4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)фенил]-2-[4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)фенил]этанона

Смесь 1-[2-гидрокси-4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)]-2-[4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)фенил]этанона (5 г, 12 ммоль) и H₂NOH, HCl (8,59 г, 12,3 ммоль) перемешивают в течение 24 ч в пиридине (65 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь выливают в большой объем смеси 99/1 Н₂О/триэтиламин, а затем экстрагируют с помощью EtOAc. Органический слой промывают насыщенным раствором соли. После сушки над сульфатом натрия EtOAс упаривают. Остаток очищают методом колоночной флэш-хроматографии (толуол/1,4-диоксан 90/1 + ТЕА 1%) и получают бесцветное масло (5,05 г, 97%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,30-2,00 (м, 12H), 3,40-3,60 (м, 2H), 3,60-3,80 (м, 2H), 4,12 (c, 2H), 5,38 (т, 1H), 5,45 (т, 1H), 6,48 (д, 1H), 6,50 (c, 1H), 6,93 (д, 2H), 7,05-7,30 (м, 3H), 7,40 (д, 1H), 11,63 (c, 1H), 11,85 (c, 1H).

Пример 72

6-(Тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)-3-[4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)бензил]-1,2-бензизоксазол

По той же методике, что и в примере 61, но заменив оксим 1-адамантил(2-хлор-4,6-дигидроксифенил)метанона на оксим 1-[2-гидрокси-4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)фенил]-2-[4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)фенил]этанона, получают ожидаемый продукт (25%).

¹ Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,40-2,10 (м, 12H), 3,40-3,85 (м, 4H), 4,25 (c, 2H), 5,39 (c, 1H), 5,61 (c, 1H), 6,90-7,10 (м, 3H), 7,20-7,35 (м, 3H), 7,55 (д, 1H).

Пример 73

3-(4-Гидроксибензил)-1,2-бензизоксазол-6-ол

В метаноле (20 мл) растворяют 6-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)-3-[4-(тетрагидро-2Н-пиран-2-илокси)бензил]-1,2-бензизоксазол (3,85 ммоль) и пара-толуолсульфоновую кислоту (APTS, каталитическое количество). Проводят реакцию при температуре 60-70°С в течение 3 ч, затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, выливают в насыщенный раствор NaHCO₃ и экстрагируют с помощью EtOAc. После промывки (Н₂О) и сушки (MgSO ₄) экстракт концентрируют. Сырой продукт очищают методом флэш-хроматографии (толуол/1,4-диоксан 8/2) и кристаллизуют, получая кристаллы беловатого цвета (0,58 г, 31%), т.пл. 178°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 4,11 (c, 2H), 6,69 (д, 2H), 6,75 (дд, 1H), 6,90 (д, 1H), 7,13 (д, 2H), 7,48 (д, 1H), 9,80 (c, 2H).

ПОЛУЧЕНИЕ СУЛЬФАМАТОВ БЕНЗИЗОКСАЗОЛА (33)

По той же методике, что и в примере 33, но заменив 6-бензилокси-3-циклогептил-1Н-индазол на:

3-(1-адамантил)-1,2-бензизоксазол-6-ол

3-циклогептил-1,2-бензизоксазол-6-ол

3-циклогексил-1,2-бензизоксазол-6-ол

получают соответственно следующие соединения:

Пример 74

3-(1-Адамантил)-1,2-бензизоксазол-6-илсульфамат (82%), т.пл. 87°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,50-2,45 (м, 15H), 7,28 (дд, 1H), 7,63 (д, 1H), 7,96 (д, 1H), 8,15 (c, 2H).

Пример 75

3-Циклогептил-1,2-бензизоксазол-6-илсульфамат (54%), т.пл. 82°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,40-2,10 (м, 12H), 3,32 (м, 1H), 7,30 (д, 1H), 7,60 (д, 1H), 8,05 (д, 1H), 8,15 (c, 2H).

Пример 76

3-Циклогексил-1,2-бензизоксазол-6-илсульфамат (46%), т.пл. 145°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,20 (м, 10H), 3,15 (дт, 1H), 7,25 (дд, 1H), 7,62 (д, 1H), 8,05 (д, 1H), 8,15 (c, 2H).

ПОЛУЧЕНИЕ БЕНЗИЗОКСАЗОЛОВ (36), (37) и (38)

Пример 77

2-(Z/E)-(6-Метокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-еннитрил

40%-ный раствор КОН/Н₂О (3 мл) и EtOH (4,8 мл) при комнатной температуре медленно добавляют к гетерогенной смеси (6-метокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)ацетонитрила (2,4 г, 12,7 ммоль), полученного в соответствии с H. Uno (Chem. Pharm. Bull., 24 (4), 632-643, 1976), 4-метоксибензальдегида (1,1 экв., 14 ммоль, 1,8 г) и EtOH (24 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, осадок отфильтровывают под вакуумом, промывают водой и с помощью EtOH и получают чистый 2-(Z/E)-(6-метокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-еннитрил (3,15 г, 81%).

¹Н-ЯМР (ацетон-d ₆): 3,94 (c, 3H), 3,97 (c, 3H), 7,08 (дд, 1H), 7,15 (д, 2H), 8,05-8,30 (м, 4H).

Используя ту же методику, но заменив 4-метоксибензальдегид на 4-гидроксибензальдегид, получают следующее соединение:

Пример 78

2-(Z/E)-3-(4-Гидроксифенил)-2-(6-метокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)проп-2-еннитрил (86%), т.пл. >380°С.

¹ Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 3,85 (c, 3Н), 6,15 (д, 2H), 7,00 (д, 1H), 7,25 (c, 1H), 7,70 (c, 3Н), 8,00 (д, 1H).

Пример 79

2-(6-Метокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-метокси-фенил)пропаннитрил

NaBH₄ (1,05 экв., 0,2 г, 5,15 ммоль) добавляют к гетерогенному раствору 2-(Z/E)-(6-метокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)проп-2-еннитрила (1,5 г, 4,9 ммоль) и EtOH (20 мл). Смесь нагревают до 50°С в течение 1 ч, подкисляют до рН 1 с помощью 1 н. раствора HCl, экстрагируют с помощью AcOEt, сушат над Na₂SO ₄ и концентрируют в вакууме, получая чистый 2-(6-метокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)пропаннитрил (1,5 г, 100%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃ ): 3,35 (д, 2H), 3,80 (c, 3H), 3,90 (c, 3H), 4,45 (т, 1H), 6,84 (д, 2H), 6,93 (дд, 1H), 7,02 (д, 1H), 7,04 (д, 2H), 7,50 (д, 1H).

Пример 80

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-гидроксифенил)пропаннитрил

К раствору 2-(6-метокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-метоксифенил)пропаннитрила (1,5 г, 4,9 ммоль) в CH₂Cl₂ (100 мл) в атмосфере азота добавляют 1М раствор BBr₃ в CH ₂Cl₂ (4 экв., 20 мл). Смесь кипятят в течение 2 ч, выливают в воду и экстрагируют с помощью EtOAc, затем сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме, получая сырой продукт. После очистки методом флэш-хроматографии (CH₂Cl₂/МеОН 98/2) и кристаллизации из EtOH получают ожидаемые кристаллы (850 мг, 62%), т.пл. 214°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 3,25 (м, 2H), 5,10 (т, 1H), 6,65 (д, 2H), 6,90 (д, 1H), 7,00 (д, 2H), 7,06 (c, 1H), 7,70 (д, 1H), 9,35 (c, 1H), 10,50 (c, 1H).

По той же методике, что и в примере 77, но заменив 4-метоксибензальдегид на:

3-фтор-4-метоксибензальдегид

4-метокси-2-метилбензальдегид

3-метоксибензальдегид

4-фторбензальдегид

циклогексаналь

3,4-диметоксибензальдегид

и используя те же самые методики, которые приведены в примерах 79 и 80, получают соответственно следующие соединения:

Пример 81

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(3-фтор-4-гидроксифенил)пропаннитрил (56%), т.пл. 201°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 3,25 (м, 2H), 5,15 (т, 1H), 6,70-7,20 (м, 5H), 7,72 (д, 1H), 9,82 (c, 1H), 10,55 (c, 1H).

Пример 82

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-гидрокси-2-метилфенил)пропаннитрил (15%), т.пл. 131°С

¹Н-ЯМР (ацетон-d₆): 2,11 (c, 3H), 3,28 (д, 2H), 3,80 (c, 3H), 4,72 (т, 1H), 6,40-6,60 (м, 2H), 6,85 (дд, 1H), 7,00 (д, 1H), 7,10 (д, 1H), 8,09 (c, 1H).

Пример 83

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(3-гидроксифенил)пропаннитрил (20%)

¹Н-ЯМР (ацетон-d₆ ): 3,25-3,60 (м, 2H), 4,90 (т, 1H), 6,60-7,25 (м, 6H), 7,70 (д, 1H), 8,80 (ушир.c, 1H).

Пример 84

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(4-фторфенил)пропаннитрил (35%), т.пл. 152°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 2,40-2,70 (м, 2H), 3,95 (т, 1H), 4,25 (c, 1H), 5,90-6,50 (м, 6H), 6,70 (д, 1H).

Пример 85

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-циклогексилпропаннитрил (63%), т.пл. 111°С

¹Н-ЯМР (ацетон-d₆): 0,80-2,10 (м, 13H), 4,56 (дд, 1H), 6,90 (дд, 2H), 7,02 (д, 1H), 7,67 (д, 1H), 9,38 (c, 1H).

Пример 86

2-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-3-(3,4-дигидроксифенил)пропаннитрил (56%), т.пл. 154°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 3,00-3,35 (м, 2H), 5,06 (т, 1H), 6,50 (дд, 1H), 6,55-6,75 (м, 2H), 6,90 (дд, 1H), 7,00 (дд, 1H), 7,70 (д, 1H), 8,90 (ушир.c, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ БЕНЗИЗОКСАЗОЛОВ (40), (41), (42) и (43)

Пример 87

3-Метил-6-[(трет-бутил(диметил)силил)окси]-1,2-бензизоксазол

3-Метил-1,2-бензизоксазол-6-ол (10 г, 67 ммоль) (синтезируют в соответствии с M.A.Elkasaby, Indian. J. Chem., 1987, 26, 620) и ДМФА (50 мл) добавляют к смеси трет-бутилдиметилсилилхлорида (1,05 экв., 10,6 г), имидазола (2,5 экв., 11,4 г) и ДМФА (100 мл) в атмосфере азота. Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, выливают в воду и экстрагируют этилацетатом, затем сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме, получая сырой продукт. После очистки методом флэш-хроматографии (AcOEt/толуол 18/85 с 0,1% ТЕА) получают 6-[(трет-бутил(диметил)силил)окси]-3-метил-1,2-бензизоксазол (17,1 г, 97%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃ -d₁): 0,20 (c, 6H), 1,00 (c, 9H), 2,60 (c, 3H), 6,80 (дд, 1H), 6,95 (д, 1H), 7,45 (д, 1H).

Пример 88

3-(Бромметил)-6-[(трет-бутил(диметил)силил)окси]-1,2-бензизоксазол

NBS (12,7 г, 71,5 ммоль) и пероксид бензоила (1,6 г, 6,5 ммоль) добавляют к смеси 3-метил-6-[(трет-бутил(диметил)силил)окси]-1,2-бензизоксазола (17,1 г, 65 ммоль) и CCl₄ (200 мл). Смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи и осадок отфильтровывают, промывают с помощью CCl₄ и очищают методом флэш-хроматографии (AcOEt/толуол 1/9 с 0,1% ТЕА), получая 3-(бромметил)-6-[(трет-бутил(диметил)силил)окси]-1,2-бензизоксазол (15,1 г, 68%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃ -d₁): 0,25 (c, 6H), 1,00 (c, 9H), 4,57 (c, 2H), 6,88 (дд, 1H), 7,02 (д, 1H), 7,55 (д, 1H).

Пример 89

3-(6-[(трет-Бутил(диметил)силил)окси]-1,2-бензизоксазол-3-ил)-2-(4-метоксифенил)пропаннитрил

В атмосфере азота 2,0 М раствор н-BuLi в ТГФ (9,7 ммоль) медленно добавляют к раствору диизопропиламина (1,3 мл, 1,05 экв.) в сухом ТГФ (10 мл) при температуре минус 20°С. Смесь перемешивают при минус 20°С в течение 30 мин, затем при температуре минус 78°С медленно добавляют 4-метоксибензонитрил (1,3 г, 8,8 ммоль). Смесь перемешивают при минус 78°С в течение 30 мин, затем медленно добавляют 3-(бромметил)-6-[(трет-бутил(диметил)силил)окси]-1,2-бензизоксазол (3,0 г, 8,8 ммоль) и сухой ТГФ (10 мл). Смесь перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, выливают в воду, экстрагируют с помощью AcOEt, сушат над Na₂SO₄ и очищают методом флэш-хроматографии (AcOEt/гептан 2/8 с 0,1% ТЕА), получая 3-(6-[(трет-бутил)диметилсилил)окси]-1,2-бензизоксазол-3-ил)-2-(4-метоксифенил)пропаннитрил (1 г, 28%).

¹Н-ЯМР (CDCl₃ -d₁): 0,20 (c, 6H), 1,00 (c, 9H), 3,25-3,65 (м, 2H), 3,70-4,48 (т, 1H), 6,80-7,60 (м, 7H).

Пример 90

3-(6-Гидрокси-1,2-бензизоксазол-3-ил)-2-(4-метоксифенил)пропаннитрил

1 н. Раствор н-Bu₄F в ТГФ добавляют к смеси 3-(6-[(трет-бутил)силил)окси]-1,2-бензизоксазол-3-ил)-2-(4-метоксифенил)пропаннитрила (1,0 г, 2,45 ммоль) в сухом ТГФ (20 мл) при комнатной температуре. Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего выливают в воду и экстрагируют этилацетатом, затем сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают методом флэш-хроматографии (AcOEt/толуол 2/8) и кристаллизуют из смеси МеОН/циклогексан, получая ожидаемый продукт (210 мг, 30%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 3,00-3,50 (м, 2H), 5,05 (т, 1H), 6,60 (д, 2H), 6,90 (дд, 1H), 7,00 (д, 2H), 7,05 (c, 1H), 7,70 (д, 1H), 9,40 (c, 1H), 10,50 (c, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ БЕНЗИЗОТИАЗОЛОВ (45) и (46)

Пример 91

Циклогексил(4-бензилокси-2-бензилтиофенил)метанон

Раствор фенилметантиола (2,35 мл, 20 ммоль) в ТГФ (10 мл) при комнатной температуре в атмосфере азота медленно добавляют к смеси трет-бутоксида калия (2,24 г, 20 ммоль) в ТГФ (80 мл). Смесь перемешивают в течение 15 мин при комнатной температуре и медленно добавляют циклогексил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон (6,5 г, 20 ммоль) в ТГФ (10 мл). Смесь в течение 2 ч нагревают до температуры 50°С, выливают в водный раствор NH₄ Cl, экстрагируют этилацетатом, сушат над Na₂SO ₄, и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают методом флэш-хроматографии (гептан/ AcOEt 90/10 с 0,1% ТЕА) и получают циклогексил(4-бензилокси-2-бензилтиофенил)метанон (8,3 г, 100%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,00-1,85 (м, 10H), 3,10-3,30 (м, 1H), 4,15 (c, 2H), 5,19 (c, 1H), 6,85 (дд, 1H), 7,05 (д, 1H), 7,15-7,60 (м, 10H), 7,90 (д, 1H).

Пример 92

6-Бензилокси-3-циклогексил-1,2-бензизотиазол

Сульфурилхлорид (1,77 мл, 2,2 ммоль) медленно добавляют к раствору циклогексил(4-бензилокси-2-бензилтиофенил)метанона (8,77 г, 21 ммоль) в CH₂Cl₂ (80 мл) при температуре 0°С. Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем концентрируют в вакууме. К смеси добавляют ТГФ (80 мл), а затем при температуре 0°С медленно добавляют EtOH (80 мл), насыщенный аммиаком. Оставляют смесь перемешиваться на ночь при комнатной температуре, выливают в воду, экстрагируют этилацетатом, сушат над Na₂SO₄, отфильтровывают и концентрируют в вакууме, получая сырой продукт. После очистки методом флэш-хроматографии (гептан/AcOEt 98/2) получают 6-бензилокси-3-циклогексил-1,2-бензизотиазол (3,55 г, 52%).

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 1,10-2,00 (м, 10H), 3,25 (дт, 1H), 5,20 (c, 2H), 7,12 (дд, 1H), 7,25-7,55 (м, 5H), 7,75 (д, 1H), 8,02 (д, 1H).

Пример 93

3-Циклогексил-1,2-бензизотиазол-6-ол

1 М раствор трибромида бора в CH₂ Cl₂ (11,9 мл, 11,9 ммоль) при температуре 0°С медленно добавляют к раствору 6-бензилокси-3-циклогексил-1,2-бензизотиазола (3,5 г, 10 ммоль) в CH₂Cl₂ (50 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин и выливают в воду. Осадок отфильтровывают, сушат и кристаллизуют из EtOH, получая чистый 3-циклогексил-1,2-бензизотиазол-6-ол (940 мг, 40,3%), т.пл. 190°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 1,10-2,10 (м, 10H), 3,20 (дт, 1H), 6,95 (дд, 1H), 7,40 (д, 1H), 7,93 (д, 1H), 10,18 (c, 1H).

По той же самой методике, что и примерах с 91 по 93, но заменив циклогексил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон на циклопентил(4-бензилокси-2-фторфенил)метанон, получают следующее соединение:

Пример 94

3-Циклопентил-1,2-бензизотиазол-6-ол, т.пл. 130°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,50-2,20 (м, 8H), 3,62 (м, 1H), 6,95 (дд, 1H), 7,35 (д, 1H), 7,92 (д, 1H), 10,18 (c, 1H).

ПОЛУЧЕНИЕ СУЛЬФАМАТОВ БЕНЗИЗОТИАЗОЛОВ (47) и (48)

Пример 95

3-Циклогексил-1,2-бензизотиазол-6-илсульфамат

Сульфамоилхлорид (780 мг, 6,76 ммоль) при температуре 0°С добавляют порциями к смеси 3-циклогексил-1,2-бензизотиазол-6-ола (790 мг, 3,38 ммоль) и диметилацетамида (15 мл). Смесь перемешивают при 0°С в течение 30 мин, а затем оставляют перемешиваться на ночь при комнатной температуре, выливают в воду, экстрагируют этилацетатом, сушат над Na₂SO₄ и концентрируют в вакууме.

Сырой продукт очищают методом флэш-хроматографии (толуол/1,4-диоксан 9/1) и кристаллизуют из смеси EtOH/пентан, получая ожидаемый продукт (620 мг, 59%), т.пл. 150°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,20-2,05 (м, 10H), 3,30 (м, 1H), 7,40 (дд, 1H), 8,10 (д, 1H), 8,15 (c, 2H), 8,25 (д, 1H).

Используя ту же самую методику, но заменив 3-циклогексил-1,2-бензизотиазол-6-ол на 3-циклопентил-1,2-бензизотиазол-6-ол, получают следующее соединение:

Пример 96

3-Циклопентил-1,2-бензизотиазол-6-илсульфамат, т.пл. 132°С

¹Н-ЯМР (ДМСО-d ₆): 1,55-2,25 (м, 8H), 3,65-3,85 (м, 1H), 7,4 (дд, 1H), 8,10 (c, 1H), 8,15 (c, 2H), 8,23 (д, 1H).

Пример 97

3-циклогексил-1,1-диоксо-1,2-бензизотиазол-6-илсульфамат

Пероксид водорода (0,6 мл) медленно добавляют при комнатной температуре к смеси 3-циклогексил-1,2-бензизотиазол-6-илового эфира сульфамовой кислоты (1 г, 3,2 ммоль), трифторуксусной кислоты (2 мл) и дихлорметана (20 мл). Затем смесь перемешивают в течение 2 ч и выливают в воду. Осадок отфильтровывают и очищают методом флэш-хроматографии (толуол/1,4-диоксан 85/15) и после кристаллизации получают твердое вещество (70 мг, 6%), т.пл. 170°С.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): 1,10-2,20 (м, 10H), 7,25 (дд, 1H), 8,07 (д, 1H), 8,25 (c, 1H), 8,43 (c, 1H).

РЕЗУЛЬТАТЫ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ ТЕСТОВ

In vitro связывание субтипа рецептора эстрогена

Данный способ разработан на основе способа, описанного для рецепторов эстрогена из маток крыс (Botella J. et al., J. Endocrinol. Invest., 1990, 13: 905-910) и клеток Исикавы человека (Botella J., J. Steroid. Biochem. Molec. Biol., 1995, 55: 77-84). Величины относительного сродства связывания (RBA) определяют с помощью анализа на конкурентное связывание с использованием полноразмерных рекомбинантных ER и ER человека (PanVera, Мэдисон, Висконсин). Рецепторы инкубируют в буфере Tris (10 мМ Tris, 2 мМ DTT, 1 мг/BSA, 10% глицерина, доводят до рН 7,5 с помощью HCl) при температуре 4°С в течение 18-20 ч вместе с 2 нМ [³H]-E₂ в присутствии или в отсутствии возрастающих концентраций тестируемого соединения в диапазоне от 1 нМ до 10 мкМ. Неспецифическое связывание определяют в присутствии 500-кратного избытка не содержащего метку Е ₂. Разделение связанных и свободных фракций ³ H-E₂ проводят с помощью активированного угля (2,5%), покрытого декстраном (0,25%) в буфере Tрис-ЭДТК. После встряхивания в течение нескольких секунд и центрифугирования с ускорением 1500·g при температуре 4°С в течение 10 мин, 150 мкл на лунку сцинтилляционной жидкости Optiphase Super Mix смешивают с 50 мкл супернатанта каждого образца и определяют радиоактивность с помощью счетчика частиц MicroBeta (Wallac, Турку, Финляндия). Для оценки концентрации конкурента при половинном от максимального значения специфического связывания (IC₅₀ ) проводят оценку данных с использованием сигмовидной кривой зависимости от дозы (Prism, GraphPad Software Inc.). Значение RBA каждого конкурента рассчитывают в виде отношения величин IC₅₀ и Е₂ для конкурента, при этом значения RBA для Е₂ произвольно принимают равным 100%. Селективность по отношению к ER и ER определяют из отношения R значения IC₅₀ для ER к значению для ER для каждого тестируемого соединения.

Таблица 1 Анализ на связывание рецептора эстрогена и
Соединение	ER	IC50 (нМ)	RBA (%)	n	R (IC50 )
E2	Среднее значение	±	Стандартное отклонение	Среднее значение	±	Стандартное отклонение
	1,6	±	0,1	100,0	±		59	0,8
	2,1	±	0,1	100,0	±		59
Пример 23		1332,0	±	267,8	0,2	±	0,05	4	31,9
	41,8	±	7,1	10,4	±	4,0	4
Пример 24		159,1	±	23,7	1,2	±	0,2	9	15,6
	10,2	±	0,9	24,6	±	4,3	9
Пример 31		119,0	±	45,2	3,1	±	0,8	4	3,3
	36,2	±	18,7	17,7	±	5,1	4
Пример 35		2686,0	±	593,0	0,1	±	0,02	4	10,8
	248,0	±	48,7	0,9	±	0,1	4
Пример 40		1483,0	±	1177,6	0,1	±	0,02	5	7,9
	187,6	±	34,0	1,0	±	0,2	5
Пример 65		75,3	±	5,4	2,5	±	0,6	4	3,7
	20,2	±	4,2	13,2	±	3,1	4
Пример 66		260,0	±	40,1	1,1	±	0,2	4	5,8
	44,6	±	7,7	9,4	±	3,1	4
Пример 73		2912,3	±	317,8	0,1	±	0,0	3	6,0
	484,8	±	157,7	1,0	±	0,3	4
Пример 80		67,5	±	5,0	3,4	±	0,4	8	9,0
	7,5	±	0,7	43,0	±	7,8	8
Пример 81		139,3	±	33,9	2,4	±	0,7	4	9,7
	14,4	±	5,3	35,9	±	14,0	4
Пример 84		2300,8	±	445,6	0,1	±	0,03	4	18,7
	122,9	±	25,9	2,5	±	0,4	4
Пример 86		1894,0	±	364,8	0,2	±	0,03	4	14,1
	134,8	±	31,0	2,4	±	0,4	4
Пример 93		88,6	±	11,7	1,3	±	0,2	4	2,3
	37,8	±	5,4	5,1	±	0,8	4
n = количество анализов

Эстрогенные и антиэстрогенные активности in vitro

Потенциальную эстрогенную и антиэстрогенную активность новых соединений оценивают по инициированию активности щелочной фосфатазы (APase), специфической эстрогенной ответной реакции внутриматочных клеток Исикавы аденокарциномы человека (Botella J., J. Steroid. Biochem. Molec. Biol., 1995, 55: 77-84; Littlefield et al., Endocrinology, 1990, 127: 2757-2762).

Клетки Исикавы выращивают обычным образом в виде монослоев в модифицированной по методу Дульбекко среде Игла (DMEM), содержащей 4 мМ Glutamax I и дополненной 10% сывороткой плода коровы с удаленным комплементом (dFCS) и антибиотиками. Их держат во влажной атмосфере, содержащей 5% СО₂ и 95% воздуха, при температуре 37±0,1°С. Запасы пополняют раз в неделю, чтобы поддержать непрерывный экспоненциальный рост.

Для проведения исследований клетки Исикавы помещают на 96-луночные микропланшеты. На следующий день среду меняют на не содержащую феноловый красный среду DMEM, которая включает 5% dFCS и избавлена от эндогенных эстрогенов путем обработки активированным углем, покрытым декстраном. Еще через 24 часа среду обновляют и к нанесенным на планшет клеткам добавляют соответствующие контроли и тестируемые соединения, разбавленные соответствующим образом с помощью не содержащей эстрогена среды DMEM, либо индивидуально (эстрогенный эффект), либо вместе с 10^-8 М Е₂ (антиэстрогенный эффект) и инкубируют в течение четырех дней. Для каждого соединения диапазон тестируемых концентраций составляет от 10^-12 М до 10^-5 М, а конечная концентрация носителя не превышает 0,1%.

По окончании инкубационного периода активность APase определяют по методу, который включает гидролиз п-нитрофенилфосфата с образованием п-нитрофенола при величине рН 9,8 и спектрофотометрическое определение продукта на длине волны 405 нм.

Если коротко, то микропланшеты вначале дважды споласкивают холодным раствором фосфатного буфера, а затем на 15 мин помещают в условия с температурой минус 80°С. После оттаивания при комнатной температуре в течение 5-10 мин планшеты помещают на лед и в каждую лунку добавляют по 50 мкл охлажденного льдом раствора, содержащего 5 мМ п-нитрофенилфосфата. Планшетам дают нагреться до комнатной температуры, чтобы стимулировать ферментативный процесс (t₀). По прошествии инкубационного периода, составляющего от 15 до 60 мин, в каждой лунке на длине волны 405 нм измеряют интенсивность желтого цвета, возникающего в результате образования п-нитрофенола, с помощью микропланшет-ридера (Wallac, модель 1420 Victor²). Для каждой тестируемой концентрации активность APase, которая проявляется в виде поглощения, вначале выражают в виде кратности увеличения по сравнению с контролем (FI), а затем в виде процента от активности Е₂ (10 ^-8), которую принимают за 100%. Строят сигмовидные кривые зависимости ответной реакции от дозы и для каждого соединения рассчитывают значения ЕС₅₀ (эстрогенный эффект) и IC₅₀ (антиэстрогенный эффект).

Таблица 2 Эстрогенные и антиэстрогенные активности in vitro
Соедине ние	Эстрогенная активность	Антиэстрогенная активность
ЕC50 (нМ)	±	Стандартное отклонение	n	IC50 (нМ)	±	Стандартное отклонение	n
E 2	0,1	±	0,05	3		±
Пример 23	1695	±	168	4	ND	±		1
Пример 24	136,3	±	1,2	4	ND	±		1
Пример 31	30,8	±	0,5	4	ND	±		1
Пример 35	373,8	±	43,0	3	ND	±		1
Пример 40	131,9	±	4,7	4	ND	±		1
Пример 65	51,7	±	6,2	4	ND	±		1
Пример 66	220,6	±	14,0	4	ND	±		1
Пример 73	ND	±		4	ND	±		1
Пример 80	147,3	±	39,9	4	ND	±		4
Пример 81	ND	±		4	ND	±		1
Пример 84	322,5	±	20	4	ND	±		2
Пример 86	ND	±		4	ND	±		1
Пример 93	123,8	±	8,9	4	-	±		1
n = количество анализов; ND = не обнаружено; - значение не определялось

Пролиферативная активность in vitro

Пролиферативный эффект соединений по настоящему изобретению оценивают по клеточной линии MCF-7 рака молочных желез человека путем измерения количества жизнеспособных клеток после обработки в течение 6 дней.

Клетки MCF-7 выращивают обычным образом в виде монослоев в модифицированной по методу Дульбекко среде Игла (DMEM), содержащей 4 мМ Glutamax и 4,5 г/л глюкозы и дополненной 5% (об./об.) сывороткой плода коровы с удаленным комплементом (dFCS) и антибиотиками.

Клетки помещают в колбы в количестве 2,10⁶ клеток на 75 см² и инкубируют при 37°С во влажной атмосфере, содержащей 5% СО₂. Клетки пересевают еженедельно, чтобы поддержать постоянный экспоненциальный рост. За сорок восемь часов до начала эксперимента среду над практически достигшими состояния слияния клетками меняют на не содержащую феноловый красный среду DMEM, которая содержит 5% dFCS и избавлена от стероидов путем обработки активированным углем, покрытым декстраном (DCC-DMEM). В день проведения эксперимента клетки собирают кратковременной обработкой трипсином и помещают в среде DCC-DMEM на 96-луночные планшеты с плотностью 4,10³ клеток на лунку. На следующий день среду обновляют, добавляют тестируемые соединения, разбавленные соответствующим образом не содержащей эстроген средой DMEM, и инкубируют в течение шести дней. Для каждого соединения диапазон тестируемых концентраций составляет от 10^-12 М до 10^-5 М, а конечная концентрация носителя не превышает 0,1% (об./об.). По окончании инкубационного периода пролиферацию клеток количественно оценивают по содержанию клеточной АТФ, которое сигнализирует о присутствии метаболически активных клеток.

Анализ АТФ

Анализ, основанный на АТФ-зависимой реакции люциферазы, позволяет генерировать люминесцентный сигнал, который пропорционален присутствующему количеству АТФ. Поскольку существует линейная зависимость между количеством АТФ и количеством присутствующих в культуре жизнеспособных клеток, то люминесцентный сигнал позволяет точно оценить пролиферацию клеток (Crouch, S.P.M. et al., J. Immunol. Meth., 1993, 160, 81; Kangas, L. et al., Med. Biol., 1984, 62, 338; Petty, R.D. et al., J. Biolum. Chemilum., 1995, 10, 29).

Если коротко, то микропланшеты опрокидывают, чтобы декантировать культуральную среду, и в каждую лунку добавляют по 100 мкл свежей среды. Микропланшеты приводят в равновесное состояние при комнатной температуре в течение приблизительно 30 мин. В каждую лунку добавляют по 100 мкл люциферазного реагента и содержимое перемешивают в течение 2 мин, чтобы стимулировать лизис клеток. Чтобы стабилизировать люминесцентный сигнал, планшеты инкубируют при комнатной температуре в течение 10 мин.

Люминесценцию регистрируют с помощью микропланшет-ридера (Wallac, модель 1420 Victor ²) и результаты выражают как процент от люминесценции контрольного образца. Для оценки их потенциальной пролиферативной способности строят сигмовидные кривые зависимости ответной реакции от дозы и для каждого соединения рассчитывают значения ЕС₅₀ .

Таблица 3 Пролиферативная активность в клетках МСF-7
Соедине ние	Пролиферация клеток
ЕС50 (нМ)	±	Стандартное отклонение	n	Эффект при 10-8 М (% от контроля)	Эффект при 10-6 М (% от контроля)
Е2	0,01	±	0	4	211,6	204,7
Пример 23	376,5	±	70,1	3	81,7	175,7
Пример 24	18,5	±	1,8	3	89,9	142,8
Пример 31	3,7	±	0,7	4	138,8	146,3
Пример 35	58,2	±	15,0	4	94,4	162,6
Пример 40	11,5	±	2,8	4	106,9	151,7
Пример 65	27,6	±	2,0	4	123,1	259,5
Пример 66	25,4	±	4,0	4	100,3	148,7
Пример 73	365,1	±	126,1	4	94,2	133,7
Пример 80	45,2	±	25,6	4	109,5	147,2
Пример 81	634,8	±	284,9	4	86,8	117,3
Пример 84	77,9	±	4,1	4	97,0	285,8
Пример 86	465,7	±	34,0	4	85,6	139,4
Пример 93	16,1	±	2,6	4	115,8	155,8

Эстрогенная активность in vivo

Самкам крыс в препубертатном возрасте в течение 3 дней вводят лекарство в количестве 3 мг в день на одну крысу. На следующий день после введения последней порции лекарства удаляют матки и определяют их массу.

Результаты выражают в виде % стимулирования массы матки в сравнении с введением носителя.

Соединения по примерам 23, 31, 35, 66, 73, 84, 86 и 93 демонстрируют заметную селективность для рекомбинантного рецептора человека и проявляют слабый эстрогенный эффект для активности щелочной фосфатазы в модели клеток Исикавы. По этой причине указанные соединения были отобраны для определения их эстрогенности in vitro. Целью исследования является тестирование указанных соединений в сравнении с тамоксифеном (ТАМ), со стандартным селективным агонистом ER : DPN или 2,3-бис-(4-гидроксифенил)пропионитрилом (Meyers M. J., J. Med. Chem., 2001, 44; 24, 4230-4251) и со стандартным селективным агонистом ER : РРТ или 1,3,5-трис-(4-гидроксифенил)-4-пропил-1Н-пиразолом (Stauffer S. R., J. Med. Chem., 2000, 43; 4934-4947), когда в качестве стандарта для сравнения используют 17 -эстрадиол (Е2) с пероральной дозой 3 мг в день на крысу.

Таблица 4 Эстрогенная активность in vitro выбранных соединений
Соединение	% стимулирования по сравнению с носителем	Количество животных
DPN	358	8
E2	526	8
Пример 23	12	8
Пример 24	101	8
Пример 31	468	6
Пример 35	38	8
Пример 40	41	8
Пример 65	84	8
Пример 66	31	8
Пример 73	52	8
Пример 80	70	8
Пример 81	49	8
Пример 84	24	8
Пример 86	25	8
Пример 93	88	8
РРТ	96	6
ТАМ	206	8

Полученные результаты показывают, что соединение по примеру 23 является потенциальным лигандом для бета рецептора эстрогена, который обладает слабой in vivo эстрогенной активностью после перорального введения.

Дозозависимая утеротрофическая активность in vivo

Самкам крыс в препубертатном возрасте в течение 3 дней перорально вводят лекарство в количестве 0,3; 1; 3 или 10 мг в день на одну крысу. На следующий день после введения последней порции лекарства удаляют матки и определяют их массу.

Результаты выражают в виде % стимулирования массы матки в сравнении с носителями. В качестве стандарта для сравнения используют 17 -эстрадиол (Е2) с пероральной дозой 3 мг в день на крысу.

Таблица 5 Дозозависимая утеротрофическая активность in vivo
Соединение	Дозировка (мг в день на крысу)	% стимулирования по сравнению с носителем	Количество животных
Е2	3	333	8
Пример 23	0,3	-13	8
Пример 23	1	-5	8
Пример 23	3	-4	8
Пример 23	10	20	8

Соединение по примеру 23 было выбрано в качестве потенциально хорошего кандидата для лечения эстрогензависимых заболеваний, поскольку оно после перорального введения не обладает утеротрофической активностью вплоть до дозы 3 мг в день на животное.

Эффект соединений на модель приливов in vivo

Согласно Berendsen et al. (Eur. J. Pharmacol., 2003, 482; 329-33) температура кожи на хвосте у крыс с удаленными яичниками может служить в качестве инструмента для селекции соединений, которые потенциально пригодны для лечения приливов у женщин в послеклимактерический период. Целью данного исследования является оценка эффекта соединения по примеру 23 в течение 4 дней на температуру кожи на хвосте у крыс с удаленными яичниками. 17 -эстрадиол, который используют в качестве стандарта для сравнения, вводят перорально в течение 13 дней с дозой 1 мг в день на крысу (Watanabe N. et al., 2003). Для проведения исследований используют двадцать самок крыс IOPS Wistar от компании Charles River (Франция), масса которых по прибытии составляет в диапазоне от 176 до 200 г. Крыс размещают группами по четыре крысы в клетки из стальной проволоки. После имплантации телеметрических передатчиков (TA10TA-F40, Data Science International) до конца исследований их размещают группами по две крысы в макролоновые клетки и поддерживают для них режим 14-10 часового светлого времени/темного времени. Регулярно контролируют стандартные условия содержания указанных особей. Животным обеспечивают свободный доступ к специальной не содержащей эстроген диете в виде гранул Harlan Teklad 2016 от компании HARLAN. Им не ограничивают доступ к фильтрованной и умягченной водопроводной воде. Вода в достатке поступает через автоматические поилки в металлических клетках и в пластиковых бутылках в макролоновых клетках. Затем у крыс удаляют яичники и не беспокоят животных в течение, по меньшей мере, 2 недель. После окончания указанного периода гормонального покоя в течение того же самого периода времени проводят контроль температуры кожи на хвосте и затем животных случайным образом делят на 3 группы в зависимости от средней температуры. Первую группу составляет контрольная группа с удаленными яичниками , вторую группу составляет группа эстрадиола для подтверждения активности эстрогена на температуру хвоста, а третью группу составляет группа примера 23 для тестирования воздействия указанного соединения на температуру. Массу тела определяют в первый день обработки и в конце исследования.

Результаты выражают в виде % стимулирования массы маток в сравнении с действием носителя. В качестве стандарта для сравнения используют 17 -эстрадиол (Е2) с дозой 3 мг в день на крысу.

Таблица 6 Эффект соединения по примеру 23 на температуру кожи на хвосте (TST) у крыс с удаленными яичниками
Соединение	Дозировка (мг в день на крысу)	TST Изменение в день 1 по сравнению с днем 0 (°С)	TST Изменение в день 4 по сравнению с днем 0 (°С)	TST Изменение в день 7 по сравнению с днем 0 (°С)	n
Носитель	-	-0,6	-0,6	-0,7	4
Е2	3	-4,8	-3,5	-5,6	4
Пример 23	0,3	-0,8	-2,1	-1,9	10

Соединение по примеру 23 понижает температуру кожи у крыс с удаленными яичниками, не оказывая вредного побочного действия на матки, в отличие от активности эстрадиола по отношению к массе тела или матки (как указано ниже).

Таблица 7 Эффект соединения по примеру 23 на массу тела и маток через одну неделю после обработки
Соединение	Дозировка (мг в день на крысу)	Масса маток (% увеличения по сравнению с носителем)	Масса тела (% увеличения по сравнению с носителем)	n
Носитель	-	-	-	4
Е2	3	273	-10	4
Пример 23	0,3	-2,6	+4,4	10

Влияние соединений на кости и параметры сердечно-сосудистой системы in vivo.

Крысы с удаленными яичниками являются предпочтительно моделью для преклинической оценки новых соединений, которые применяют для предотвращения потери костной массы (остеопороза). У самок крыс полученной от Wistar линии OFA от компании IFFA CREDO (Франция) удаляют яичники или имитируют проведение операции для получения контрольной группы. При поступлении крыс размещают в подвесных металлических клетках группами по 3-4 животных на клетку и дают им в достатке пищу и воду в течение одной недели. Через неделю акклиматизации начинают поводить дневные дозировки представляющим интерес соединением или 17 -эстрадиолом.

В процессе исследования берут образцы плазмы для проведения анализа липидных параметров: триглицеридов, свободного холестерина, полного холестерина, HDL, LDL, VLDL, аполипопротеина А и В100; параметров метаболизма костей, таких как: DPD,

Ca²⁺, коллаген типа I и II, фрагментов С-телопептида; и маркеров почечных камней, таких как Ca²⁺ и неорганический фосфат. Все анализы осуществляют в соответствии с рекомендациями производителя.

Для определения минеральной плотности индивидуальных поясничных сегментов проводят высококонтрастное исследование поясницы или всего тела методом двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии; при проведении измерений животных анестезируют с помощью изофлурана.

Антидепрессантная активность соединений

Антидепрессантное действие эстрадиола было недавно установлено при проведении исследований с использованием модели мышей ER КО. Кроме того, описана локализация ER в ядрах клеток спинной линии сращивания у крыс. Тест золотого стандарта на потенциальное антидепрессантное действие какого-либо соединения заключается в проведении теста принудительного плавания, и в этом эксперименте антидепрессанты можно отделить от психостимуляторов, которые снижают неподвижность в дозировках, которые усиливают общую активность. Для изучения предполагаемой антидепрессантной активности приведенных в данном описании соединений тест принудительного плавания проводят в соответствии со следующей процедурой. Животных размещают по шесть особей на клетку в стандартных условиях содержания колонии с 12-часовым циклом светлого/темного времени и дают в достатке корм и воду. Перед проведением экспериментов им дают акклиматизироваться в колонии, по меньшей мере, в течение 7 дней. Для подкожного введения соединение по примеру 23 растворяют в оливковом масле и разбавляют до требуемой концентрации дневной дозы. В качестве положительного контроля внутрибрюшинно вводят дезипрамин. Дезипрамин растворяют в бидистиллированной воде (10 мг/кг). Эксперименты проводят через 30 мин после введения лекарства, используемого в качестве положительного контроля (только для дезипрамина). Другие соединения, а именно: эстрадиол и соединение по примеру 23 - ежедневно вводят крысам подкожно в течение 7 дней. Сбор данных осуществляют на 8-й день (через 24 ч после введения последней инъекции) и на 9-й день (через 48 ч после введения эстрадиола или соединения по примеру 23) соответственно. Данные, полученные через 24 час после последнего введения, составляют группу не подвергавшихся воздействию животных , и эти животные никогда ранее не проходили тестирование в устройстве. Данные, полученные через 48 ч после последнего введения соединений, составляют группу тренированных животных .

Таблица 8 Эффект соединения по примеру 23 на продолжительность состояния неподвижности в условиях стресса
Соединение	Дозировка (мг в день на крысу)	Не подвергавшиеся воздействию животные (с)	Тренированные животные (с)	n
Носитель	-	133,7±28,6	178,1±25,5	11
Дезипрамин	30	Не исследовали	2,6±1,5***	11
Е2	0,007	22,5%±7,1***	79,2±23,0*	11
Пример 23	2,8	45,2±15,6*	160,7±44,1	11
(данные получают в течение 10 мин, исследуемые соединения или дезипрамин в сравнении с носителем, p<0,05, p<0,001)

На 8-й день проводят тест на принудительное плавание. Указанное исследование проводят на крысах в соответствии с методиками, приведенными Porsolt (Eur. J. Pharm., 1978). Если коротко, то крыс по одиночке помещают в стеклянные цилиндры (высота: 40 см, диаметр: 18 см), содержащие 25 мл воды при 25°С. По прошествии 10 мин крыс извлекают, высушивают и возвращают в свои клетки. Животных вновь помещают в цилиндры через 24 ч, процедуру повторяют и проводят наблюдение в течение 10 мин.

Модель оценивают по активности дезипрамина, обнаруженной в процессе исследований. Результаты подтверждают антидепрессантную действенность эстрадиола, через 24 ч и через 48 ч после введения. Соединение по примеру 23 демонстрирует антидепрессантную активность, когда животных впервые тестировали через 24 ч после введения, в то время как у тренированных животных через 48 ч после введения антидепрессантное действие соединения по примеру 23 исчезает.