конъюгированные липидные производные

Формула изобретения

1. Липидное соединение формулы:



где

n=0;

R₁ и R ₂ являются одинаковыми или различными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, С₁ -С₇алкильной группы, атома галогена и С₁ -С₇алкоксигруппы;

Х представляет собой COR ₃ или CH₂OR₄, где

R₃ выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси, C₁ -С₇алкокси и амино; и

R₄ выбран из группы, состоящей из водорода, С₁-С₇ алкила или С₁-С₇ацила,

Y представляет собой С₉-С₂₁алкен с одной или несколькими двойными связями в Е- или Z-конфигурации, при этом цепь Y является незамещенной и содержит двойную связь в -3 положении;

при условии, что R₁ и R₂ не могут одновременно представлять собой атом водорода.

2. Липидное соединение по п.1, имеющее Е-конфигурацию, представленное следующей формулой:

3. Липидное соединение по п.1, где R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, C₁-С₇алкильной группы, C₁-С ₇алкоксигруппы и атома галогена.

4. Липидное соединение по п.1, где R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, C₁-С₃алкильной группы, C₁-С₃алкоксигруппы и атома галогена.

5. Липидное соединение по п.1, где R₃ представляет собой C₁-С₇алкоксигруппу.

6. Липидное соединение по п.5, где R₃ представляет собой C ₁-С₃алкоксигруппу.

7. Липидное соединение по п.1, где R₃ представляет собой гироксигруппу.

8. Липидное соединение по п.1, где R₄ представляет собой C₁-С₇алкильную группу.

9. Липидное соединение по п.1 или 8, где R₄ представляет собой C₁-С₃алкильную группу.

10. Липидное соединение по п.1, где R₄ представляет собой C ₁-С₇ацильную группу.

11. Липидное соединение по п.10, где R₄ представляет собой C₁-С ₃ацильную группу.

12. Липидное соединение по п.1, где двойная связь между атомами углерода 2 и 3 находится в Е-конфигурации.

13. Липидное соединение по п.1, где R₁ и R ₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из метильной группы, этильной группы и атома водорода.

14. Липидное соединение по п.1, где R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой C₁-С ₃алкокси, а другой представляет собой водород.

15. Липидное соединение по п.14, где двойная связь между атомами углерода 2 и 3 находится в Z-конфигурации.

16. Липидное соединение по п.1, где указанный атом галогена представляет собой фтор.

17. Липидное соединение по п.1, где Y представляет собой C₁₄-С₁₉алкен с 2-6 двойными связями.

18. Липидное соединение по п.17, где Y представляет собой C₁₄-С₁₉алкен с 2-6 двойными связями в Z-конфигурации, чередующимися с метиленовыми группами.

19. Липидное соединение по п.1, где n=0, и Y представляет собой C₁₃-С ₁₉алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

20. Липидное соединение по п.1, где n=0, представленное следующей формулой:



где двойная связь между атомами углерода 2 и 3 находится в Е-конфигурации.

21. Липидное соединение по п.1, где R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой выбран из группы заместителей, состоящей из C₁-С₇ алкильной группы, атома галогена и С₁-С₇ алкоксигруппы.

22. Липидное соединение по п.21, где двойная связь между атомами углерода 2 и 3 находится в Е-конфигурации.

23. Липидное соединение по п.21 или 22, где

- n=0;

- Х=COR₃, где R₃ представляет собой гироксигруппу или C₁-С₃алкоксигруппу;

- R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой представляет собой C₁-С₃алкильную группу, C₁ -С₃алкоксигруппу или атом галогена; и

- Y представляет собой С₁₃-С₁₉алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

24. Липидное соединение по п.21, где

- n=0;

- Х=COR₃, где R₃ представляет собой гироксигруппу или C₁-С₃алкоксигруппу;

- R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой представляет собой C₁-С₂алкильную группу или C₁ -С₂алкоксигруппу; и

- Y представляет собой C₁₃-С₁₉алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

25. Липидное соединение по п.21, где

- n=0;

- Х=COR₃, где R₃ представляет собой гироксигруппу или C₁-С₂алкоксигруппу;

- R ₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой представляет собой C₁ -С₂алкильную группу или C₁-С₂ алкоксигруппу; и

- Y представляет собой C₁₇ -С₁₉алкен, имеющий 3-5 двойных связей.

26. Липидное соединение по п.21, выбранное из следующих липидных соединений 1-4 и 6-8, 26, 33, 41-44:

27. Липидное соединение по п.26, выбранное из следующих липидных соединений 33 и 41-44:

28. Липидное соединение по п.21, где

- n=0;

- X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой водород или C₁-С₃ацильную группу;

- R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой представляет собой C₁-С₃алкильную группу, C₁ -С₃алкоксигруппу и атом галогена; и

- Y представляет собой С₁₄-С₂₀алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

29. Липидное соединение по п.21, где

- n=0;

- X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой водород или C₁-С₃ацильную группу;

- R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой представляет собой C₁-С₂алкильную группу или C₁ -С₂алкоксигруппу; и

- Y представляет собой C₁₄-С₂₀алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

30. Липидное соединение по п.21, где

- n=0;

- X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой водород; и

- R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой представляет собой C₁-С₂алкильную группу или C₁-С₂алкоксигруппу;

- Y представляет собой C₁₇-С₁₉алкен, имеющий 3-5 двойных связей.

31. Липидное соединение по п.21 или 22, выбранное из следующих липидных соединений 5, 9 и 27:

32. Липидное соединение по п.1, где R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из группы заместителей, состоящей из С₁-С₇ алкильной группы, атома галогена и C₁-С₇ алкоксигруппы.

33. Липидное соединение по п.32, где двойная связь между атомами углерода 2 и 3 находится в Е-конфигурации.

34. Липидное соединение по п.32 или 33, где

- n=0;

- Х=COR₃, где R₃ представляет собой гироксигруппу или C₁-С₃алкоксигруппу;

- R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из C₁-С₃алкильной группы, C₁-С₃алкоксигруппы и атома галогена; и

- Y представляет собой С₁₃-С₁₉ алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

35. Липидное соединение по п.32 или 33, где

- n=0;

- X=CH₂ OR₄, где R₄ представляет собой водород или C₁-С₃ацильную группу;

- R ₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из C₁-С₃алкильной группы, C ₁-С₃алкоксигруппы и атома галогена; и

- Y представляет собой C₁₄-С₂₀алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

36. Липидное соединение по п.1 для применения в качестве лекарственного средства для лечения и/или предотвращения состояния, связанного с повышенными функциями NFkB, лечения и/или предотвращения воспалительного заболевания или состояния, понижения уровней инсулина в плазме и/или глюкозы в крови, лечения резистентности к инсулину, и лечения и/или предотвращения резистентности периферических тканей к инсулину и/или диабетического состояния, например, диабета 2 типа.

37. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-35, для лечения и/или предотвращения состояния, связанного с повышенными функциями NFkB, лечения и/или предотвращения воспалительного заболевания или состояния, понижения уровней инсулина в плазме и/или глюкозы в крови, лечения резистентности к инсулину, и лечения и/или предотвращения резистентности периферических тканей к инсулину и/или диабетического состояния, например, диабета 2 типа, предназначенная для предоставления дневной дозы от 5 мг до 10 г.

38. Фармацевтическая композиция по п.37, предназначенная для предоставления дневной дозы от 50 мг до 1 г указанного соединения.

39. Фармацевтическая композиция по п.37, предназначенная для предоставления дневной дозы от 50 мг до 200 мг указанного соединения.

40. Фармацевтическая композиция по п.37, дополнительно содержащая фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или разбавитель или любое их сочетание.

41. Фармацевтическая композиция по п.37 или 40, предназначенная для перорального введения.

42. Способ лечения и/или предотвращения состояния, связанного с повышенными функциями NFkB, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества соединения по любому из пп.1-35.

43. Способ лечения и/или предотвращения воспалительного заболевания или состояния, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества соединения по любому из пп.1-35.

44. Способ понижения уровней инсулина в плазме, глюкозы в крови и лечения резистентности к инсулину, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества соединения по любому из пп.1-35.

45. Способ лечения и/или предотвращения резистентности периферических тканей к инсулину и/или диабетического состояния, например, диабета 2 типа, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества соединения по любому из пп.1-35.

Описание изобретения к патенту

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым , -ненасыщенным производным жирных кислот, к ненасыщенным жирным кислотам, к способам получения таких соединений, фармацевтическим и липидным композициям, содержащим эти соединения, и к применениям этих соединений и композиций в медицине.

Уровень техники

Пищевые полиненасыщенные жирные кислоты (PUFA) оказывают воздействие на различные физиологические процессы, влияющие на нормальное состояние здоровья и хронические заболевания, такие как регуляция уровней липидов в плазме, сердечно-сосудистые и иммунные функции, действие инсулина и развитие нейронов и зрительная функция. Усвоение PUFA (как правило, в сложноэфирной форме, например, в составе глицеридов или фосфолипидов) будет приводить к их распределению по существу в каждой клетке организма, воздействуя на состав и функцию мембран, синтез эйкозаноидов, передачу клеточных сигналов и регуляцию экспрессии генов. Вариации в распределении различных жирных кислот/липидов в различных тканях, в дополнение к специфичному клеточному метаболизму липидов, а также регулируемая жирными кислотами экспрессия факторов транскрипции, вероятно, играют важную роль в определении того, как именно клетки реагируют на изменения композиции PUFA (Benatti, P. et al., J. Am. Coll. Nutr. 2004, 23, 281).

PUFA или их метаболиты, как показано, модулируют транскрипцию генов посредством взаимодействия с несколькими ядерными рецепторами. Они представляют собой активируемые пероксисомальным пролифератором рецепторы (PPAR), ядерный рецептор гепатоцитов (HNF-4), X рецептор печени (LXR) и рецептор 9-цис-ретиноевой кислоты (ретиноевый X рецептор, RXR). Лечение с помощью PUFA может также регулировать множество факторов транскрипции в ядре, включая SREBP, NF B, c/EBP и HIF-1 . Эти эффекты не связаны с прямым связыванием жирной кислоты с фактором транскрипции, но включают механизмы, которые влияют на ядерное содержание факторов транскрипции.

Регуляция транскрипции генов с помощью PUFA оказывает выраженное воздействие на метаболизм клеток и тканей и дает надежное объяснение вовлечения взаимодействий питательное вещество-ген в инициирование и предотвращение или облегчение заболеваний, таких как ожирение, диабет, сердечно-сосудистые расстройства, иммунные воспалительные заболевания и раковые заболевания (Wahle, J., et al., Proceedings of Nutrition Society, 2003, 349).

Рыбий жир, обогащенный -3 полиненасыщенными жирными кислотами, эйкозапентаеновой кислотой (EPA) и докозагексаеновой кислотой (DHA), как показано, уменьшают риск сердечно-сосудистых заболеваний, частично посредством понижения концентрации триглицеридов в крови. Этот благоприятный эффект возникает в основном благодаря объединенным воздействиям ингибирования липогенеза посредством уменьшения содержания SPEBP-1 и стимулирования окисления жирных кислот посредством активирования PPAR- в печени.

-3 Полиненасыщенные жирные кислоты в рыбьем жире, как сообщается, улучшают прогноз нескольких хронических воспалительных заболеваний, характеризуемых аккумуляцией лейкоцитов, и опосредуемых лейкоцитами повреждений тканей, включая атеросклероз, IgA нефропатию, воспалительное заболевание желудка, ревматоидный артрит, псориаз и тому подобное (Mishra, A., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 2004, 1621).

DHA представляет собой наиболее распространенную -3 PUFA в большинстве тканей и содержится в большом количестве в нейронных мембранах, составляя приблизительно 30-40% фосфолипидов серого вещества церебрального кортекса и фоторецепторных клеток в сетчатке. DHA аккумулируется при высоких уровнях в постнатальной CNS млекопитающих, показывая, что DHA вовлечена в созревание CNS. У нескольких различных видов пониженные уровни DHA в мозгу и в сетчатке связываются с ослаблением нейронных и зрительных функций. Добавление DHA может быть полезным при лечении депрессии, шизофрении, гиперактивности, рассеянного склероза, болезни Альцгеймера, дегенеративных заболеваний сетчатки и пероксисомальных расстройств (Horrocks and Farooqui, Prostaglandins, Leukotrienes and Essential Fatty acids, 2004, 70, 361). Пищевые DHA могут также быть полезными при лечении атеросклероза, воспаления и рака (Horrocks et al., Pharmacol. Res. 1999, 40: 211; Rose, et al., 1999, 83, 217).

Хотя -3 PUFA обладают многими положительными биологическими воздействиями, их терапевтическая ценность является ограниченной, и терапевтическая область, где -3 PUFA являются наиболее перспективными, представляет собой сердечно-сосудистую область, в качестве агента, понижающего уровни триглицеридов. Однако для того, чтобы вызвать гиполипидемию, необходимы высокие дозы полиненасыщенных жирных кислот. Одна из причин этого представляет собой деградацию полиненасыщенных жирных кислот в печени посредством окисления.

Ядерные рецепторы (NR) составляют большое и очень консервативное семейство активируемых лигандами факторов транскрипции, которые регулируют разнообразные биологические процессы, такие как развитие, метаболизм и репродукция. Замечено, что лиганды к этим рецепторам могут использоваться при лечении распространенных заболеваний, таких как атеросклероз, диабет, ожирение и воспалительные заболевания. В этом качестве NR становятся важными мишенями для лекарственных средств, и идентификация новых лигандов NR вызывает большой интерес. Активность множества ядерных рецепторов контролируется посредством связывания малых липофильных лигандов, которые включают гормоны, метаболиты, такие как жирные кислоты, желчные кислоты, оксистерины и ксено- и эндобиотики. Ядерные рецепторы могут связываться как мономеры, гомодимеры или гетеродимеры RXR с ДНК. Существует три типа гетеродимерных комплексов: незанятые гетеродимеры, непермиссивные гетеродимеры, которые могут активироваться только лигандами-партнерами, но не одним лишь лигандом RXR, и пермиссивные гетеродимеры, которые могут активироваться с помощью либо лигандов RXR, либо его рецептора-партнера, и активируются синергетически в присутствии обоих лигандов (Aranda and Pascual, Physiological Reviews, 2001, 81, 1269). В качестве обязательного гетеродимерного партнера для множества ядерных рецепторов (включая рецептор витамина D (VDR), рецептор тироидного гормона (TR), рецептор полностью транс-ретиноевой кислоты (RAR), активируемый пероксисомальным пролифератором рецептор (PPAR), X рецептор печени (LXR) и другие) RXR играет роль главного координатора множества путей ядерных рецепторов.

Лиганды, которые регулируют гетеродимерные партнеры RXR, могут грубо разделяться на два подмножества. Одно подмножество содержит обладающие высоким сродством, сильно специфичные лиганды стероидов/гормонов (VDR и TR) и действуют как эндокринные модуляторы. Другое подмножество связывается с имеющимися в избытке липидными лигандами, обладающими более низким сродством (PPAR, LXR), и, видимо, действуют частично как липидные биосенсоры. Гены, регулируемые гетеродимерами RXR, включают гены, вовлеченные в разнообразные клеточные процессы, включая регуляцию клеточного цикла и дифференциацию. Они также регулируют гены, вовлеченные в перенос, биосинтез и метаболизм липидов (Goldstein, J.T. et al., Arch. Biochem. and Biophys., 2003, 420, 185).

Родственный лиганд RXR представляет собой 9-цис-ретиноевую кислоту, молекулу, которая также связывается с RAR и трансактивирует их с очень сходным сродством и эффективностью. С другой стороны, полностью транс-ретиноевая кислота, родственный лиганд RAR, не связывается с рецептором RXR.

Имеются доказательства, что лиганды RXR могут функционировать как сенсибилизаторы инсулина и могут уменьшать гипергликемию, гиперинсулинемию и гипертриглицеридемию у мышей ob/ob и db/db (Mukherjee et al., Nature, 1997, 386, 407). Сообщается также, что хроническое введение агонистов RXR крысам Zucker fa/fa уменьшает потребление пищи и увеличение массы тела, понижает концентрации инсулина в плазме, в то же время поддерживая нормогликемию (Liu, et al., Int. J. Obesity., 2000, 997; Ogilvie, K. et al., Endocrinology, 2004, 145, 565).

В 2000 году сообщалось, что DHA, выделенная из мозга мышей, селективно активирует RXR в анализах на основе клеток (Urquiza et al., Science 2000, 290, 2140, WO 01/73439). В этих исследованиях DHA не активирует RAR. После этого сообщалось, что несколько ненасыщенных жирных кислот, включая DHA, арахидоновую кислоту и олеиновую кислоту, могут специфично связывать и активировать LBD (домен связывания лиганда) RXR и по этой причине действуют как лиганды in vivo этого рецептора (Lengquist J., et. al. Molecular & Cellular Proteomics 3, 2004, 692). В исследованиях, опубликованных Fan et al., показано, что DHA служит в качестве специфичного лиганда для активирования RXR по отношению к n-6 PUFA в колоноцитах (Carcinogenesis, 2003, 24, 1541).

Хотя агонисты RXR известны, и эти соединения исследованы на различных биологических системах, литература не описывает использование модифицированных PUFA в качестве сильнодействующих лигандов для RXR.

Фактор транскрипции NF- B представляет собой индуцируемый эукариотический фактор транскрипции семейства rel. Он представляет собой главный компонент каскада стрессовых реакций, который регулирует активирование генов раннего отклика, вовлеченных в экспрессию воспалительных цитокинов, молекул адгезии, белков теплового шока, циклооксигеназ, липоксигеназ и окислительно-восстановительных ферментов. Zhao, G. et al. (Biochemical and Biophysical Research. Comm., 2005, 909) предполагают, что противовоспалительные воздействия PUFA в клетках моноцитов человека THP-1 частично опосредуются посредством ингибирования активирования NF- B через активирование PPAR- . Другие предполагают, что противовоспалительное воздействие PUFA опосредуется через зависимое от PPAR- ингибирование активирования NF- B.

Рецептор-селективные лиганды являются высокоприоритетными при поиске промежуточных продуктов для лекарственных средств на основе NR, поскольку нативные лиганды NR дают системные побочные воздействия и токсичность из-за отсутствия у них специфичности связывания.

9-цис-ретиноевая кислота регулирует разнообразные биологические функции через механизм, который включает связывание как RXR, так и RAR. Эти рецепторы вовлечены во множество различных функций. Их далеко идущие биологические воздействия мотивируют поиск RAR- или RXR-селективных лигандов. Неселективные ретиноидные лиганды при использовании в качестве лекарственных средств имеют побочные воздействия, такие как тератогенность и токсичность для кожи и слизистых, которые значительно уменьшаются, когда используются специфичные к RXR агонисты. Кроме того, показано, что под действием RXR-селективных агонистов может осуществляться опухолеспецифичный апоптоз. Селективные агонисты RXR могут предложить альтернативный подход для лечения метаболических расстройств. Таким образом, имеется необходимость в легкодоступных RXR-селективных лигандах, которые могут обеспечить рассмотренные выше преимущества без побочных воздействий неселективных лигандов.

Поскольку многие ядерные рецепторы распределяются по-разному в различных тканях, является важным получение лигандов, которые способны in vivo нацеливаться на указанные клетки, чтобы связывать и активировать целевой рецептор.

Сущность изобретения

Одной из целей настоящего изобретения является создание липидных соединений, имеющих фармацевтическую активность.

Эта цель достигается с помощью липидного соединения в соответствии с формулой (I):

где

- R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, алкильной группы, атома галогена и алкокси группы;

- X представляет собой COR₃ или CH₂OR ₄, где

- R₃ выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси, алкокси и амино,

- где Х дополнительно включает производные карбоновой кислоты, когда R₃ представляет собой гидрокси; и

- R₄ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила или ацила,

- Y представляет собой C₉ -C₂₁ алкен с одной или несколькими двойными связями с E- или Z-конфигурацией;

или любого его фармацевтически приемлемого комплекса, сольвата или пролекарства.

В частности, настоящее изобретение относится к липидным соединениям с E-конфигурацией в соответствии с формулой (II):

Когда X представлен формулой COR ₃ и R₃ представляет собой гидрокси, настоящее изобретение также относится к производным карбоновых кислот. Например, такие производные карбоновой кислоты могут быть выбраны из группы, состоящей из фосфолипида или моно-, ди- или триглицерида.

В липидном соединении по настоящему изобретению R ₁ и R₂ в формуле (I) являются одинаковыми или различными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, C₁-C₇ алкильной группы, C₁-C₇ алкокси группы и атома галогена.

Предпочтительно, R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, C₁-C₃ алкильной группы, C₁-C₃ алкокси группы и атома галогена. Более предпочтительно, R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из метильной группы, этильной группы и атома водорода.

Когда R₁ и/или R₂ представляют собой атомы галогена, предпочтительным является атом фтора. В липидном соединении по настоящему изобретению X может быть представлен формулой COR₃. В таких случаях R₃ может представлять собой C₁-C₇ -алкокси группу, или, более конкретно, C₁-C₃ -алкокси группу. Альтернативно, R₃ представляет собой гидрокси группу.

В альтернативных вариантах осуществления X представлен формулой CH₂OR₄. В таких вариантах осуществления R₄ может представлять собой C₁-C₇-алкильную группу или, более конкретно, C₁-C₃-алкильную группу. Альтернативно, R₄ представляет собой C₁-C₇ ацильную группу, в частности C₁-C₃ ацильную группу.

В липидном соединении в соответствии с настоящим изобретением двойная связь между атомами углерода 2 и 3 предпочтительно находится в E-конфигурации.

В вариантах осуществления настоящего изобретения, где R₁ и R₂ являются различными и один из них представляет собой C₁-C₃ алкокси, а другой представляет собой водород, двойная связь между атомами углерода 2 и 3 может находиться в Z-конфигурации.

Как определено в общей формуле (I), Y может представлять собой C₉-C ₂₁ алкен с одной или несколькими двойными связями с E- или Z-конфигурацией. В частности, Y представляет собой C ₁₄-C₁₉ алкен с 2-6 двойными связями. В вариантах осуществления Y представляет собой C₁₄-C₁₉ алкен с 2-6 двойными связями в Z- конфигурации, чередующимися с метиленовыми группами. Альтернативно, Y является незамещенным. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения липидное соединение содержит двойную связь углерод-углерод в -3 положении Y.

Липидные соединения по настоящему изобретению могут разделяться на категории в соответствии с количеством конъюгированных систем, представленных с помощью целого числа n в скобках в формуле (I) или (II). Как определено, n может изменяться в пределах между 0 и 2.

Когда n=0, липидное соединение по настоящему изобретению относится к формуле (III):

Кроме того, липидные соединения, представленные формулой (III) по настоящему изобретению, могут разделяться на подкатегории в виде следующих предпочтительных групп:

IIIa: X=COR₃

X=COR₃, где R₃ представляет собой гидрокси группу или C₁-C₃ алкокси группу;

R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из атома водорода, C₁-C₃ алкильной группы, C₁-C₃ алкокси группы и атома галогена и

Y представляет собой C₁₃-C₁₉ алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

IIIb: X=COR ₃, R₁ R₂

X=COR₃, где R₃ представляет собой гидрокси группу или C₁-C₂ алкокси группу;

R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой C₁ -C₂ алкильную группу или C₁-C₂ алкокси группу; и

Y представляет собой C₁₇-C₁₉ алкен, имеющий 3-5 двойных связей.

Предпочтительные соединения формулы (III) и подгрупп IIIa или IIIb представляют собой следующие липидные соединения 1-4, 6-8 и 26:

IIIc: X=CH₂OR ₄

X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой водород или C₁-C₃ ацильную группу;

R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из атома водорода, C₁-C₃ алкильной группы, C₁-C₃ алкокси группы и атома галогена и

Y представляет собой C₁₃-C₁₉ алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

IIId: X=CH ₂OR₄, R₁ R₂

X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой водород; и

R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой C₁ -C₂ алкильную группу или C₁-C₂ алкокси группу;

Y представляет собой C₁₇-C₁₉ алкен, имеющий 3-5 двойных связей.

Предпочтительные соединения формулы (III) и подгрупп IIIc и IIId представляют собой следующие липидные соединения 5, 9 и 27:

Когда n=1, липидное соединение по настоящему изобретению относится к формуле (IV):

Кроме того, липидные соединения, представленные формулой (IV) по настоящему изобретению, могут разделяться на подкатегории в виде следующих предпочтительных групп:

IVa: X=COR₃

X=COR₃, где R₃ представляет собой гидрокси группу или C₁-C₃ алкокси группу;

R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из атома водорода, C₁-C₃ алкильной группы и атома галогена; и

Y представляет собой C₁₁-C₁₇ алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

IVb: X=COR ₃, R₁ R₂

X=COR₃, где R₃ представляет собой гидрокси группу или C₁-C₂ алкокси группу; и

R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой C₁ -C₂ алкильную группу;

Y представляет собой C₁₅-C₁₇ алкен, имеющий 3-5 двойных связей.

Предпочтительные соединения формулы (IV) и подгрупп IVa и IVb представляют собой следующие липидные соединения 10-11, 17-18, 20 и 22.

IVc: X=COR₃, R₁=R₂

X=COR₃, где R₃ представляет собой гидрокси группу или C₁-C₂ алкокси группу;

R₁ и R₂ представляют собой водород; и

Y представляет собой C₁₁-C₁₇ алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

IVd: X=COR ₃, R₁=R₂

X=COR₃, где R₃ представляет собой гидрокси группу или C₁-C₂ алкокси группу;

R₁ и R₂ представляют собой водород; и

Y представляет собой C₁₅-C₁₇ алкен, имеющий 4-5 двойных связей.

Предпочтительные соединения формулы (IV) и подгрупп IVc и IVd представляют собой следующие липидные соединения 12-15:

IVe: X=CH₂OR ₄

X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой атом водорода или C₁-C₃ ацильную группу;

R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из атома водорода, C₁-C₃ алкильной группы и атома галогена; и

Y представляет собой C₁₁-C₁₇ алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

IVf: X=CH ₂OR₄, R₁ R₂

X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой водород;

R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой C₁ -C₂ алкильную группу; и

Y представляет собой C₁₅-C₁₇ алкен, имеющий 3-5 двойных связей.

Предпочтительные соединения формулы (IV) и подгрупп IVe и IVf представляют собой следующие липидные соединения 19, 21 и 23:

IVg: X=CH₂OR ₄, R₁=R₂

X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой водород;

R₁ и R₂ являются одинаковыми и представляют собой атомы водорода; и

Y представляет собой C₁₁-C₁₇ алкен, имеющий 2-6 двойных связей.

IVh: X=CH ₂OR₄,R₁=R ₂

X=CH₂OR₄, где R₄ представляет собой водород;

R₁ и R₂ являются одинаковыми и представляют собой атомы водорода; и

Y представляет собой C₁₇ алкен, имеющий 5 двойных связей.

Предпочтительное соединение формулы (IV) и подгрупп IVg и IVh представляет собой следующее липидное соединение 16:

Когда n=2, липидное соединение по настоящему изобретению относится к формуле (V)

Кроме того, липидные соединения, представленные формулой (V) по настоящему изобретению, могут разделяться на подкатегории в виде следующих предпочтительных групп:

Va: X=COR₃

X=COR₃, где R₃ представляет собой гидрокси группу или C₁-C₃ алкокси группу;

R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и выбраны из атома водорода, C₁-C₃ алкильной группы и атома галогена; и

Y представляет собой C₉-C₁₆ алкен, имеющий 1-4 двойных связи.

Vb: X-COR ₃, R₁ R₂

X=COR₃, где R₃ представляет собой гидрокси группу или C₁-C₂ алкокси группу;

R₁ и R₂ являются различными, и один из них представляет собой атом водорода, а другой C₁ -C₂ алкильную группу; и

Y представляет собой C₁₅ алкен, имеющий 4 двойных связи.

Предпочтительные соединения формулы (V) и подгрупп Va и Vb представляют собой следующие липидные соединения 24 и 25:

Настоящее изобретение также относится к способу получения липидного соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) настоящего изобретения.

Кроме того, настоящее изобретение относится к липидному соединению в соответствии с любой из формул (I)-(V) для применения в качестве лекарственного средства или для диагностических целей, например, для позитронной эмиссионной томографии (ПЭТ).

Настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей липидное соединение в соответствии с любой из общих формул (I)-(V). Фармацевтическая композиция может содержать фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или разбавитель или любое их сочетание, и соответствующим образом предназначается для перорального введения. Соответствующая ежедневная доза липидного соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) составляет от 5 мг до 10 г указанного липидного соединения; от 50 мг до 1 г указанного липидного соединения или от 50 мг до 200 мг указанного липидного соединения.

Настоящее изобретение также относится к липидной композиции, содержащей липидное соединение в соответствии с любой из формул (I)-(V). Соответственно, по меньшей мере, 80% масс., или, по меньшей мере, 90% масс., или, по меньшей мере, 95% масс. липидной композиции состоит из указанного липидного соединения. Липидная композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый антиоксидант, например токоферол.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению липидного соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) для получения лекарственного средства для

активирования или модулирования, по меньшей мере, одной из изоформ , и/или активируемого пероксисомальным пролифератором рецептора (PPAR) человека;

активирования или модулирования RXR;

ингибирования или регулирования NF- B;

лечения и/или предотвращения воспалительного заболевания или состояния;

понижения уровня инсулина в плазме, глюкозы в крови и/или триглицеридов в сыворотке;

предотвращения и/или лечения повышенных уровней триглицеридов, уровней холестерина LDL (липопротеинов низкой плотности) и/или уровней холестерина VLDL (липопротеинов сверхнизкой плотности);

предотвращения и/или лечения гиперлипидемического состояния, например гипертриглицеридемии (HTG);

лечения и/или предотвращения ожирения или состояния с избыточной массой тела;

лечения и/или предотвращения резистентности периферических тканей к инсулину и/или диабетического состояния;

уменьшения массы тела и/или для предотвращения увеличения массы тела;

лечения и/или предотвращения жирового заболевания печени, например неалкогольного жирового заболевания печени (NAFLD);

лечения резистентности к инсулину, гиперлипидемии и/или ожирения или состояния с избыточной массой тела; и

лечения и/или предотвращения диабета типа 2.

Настоящее изобретение также относится к липидным соединениям в соответствии с любой из формул (I)-(V) для лечения и/или предотвращения состояний, перечисленных выше.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам лечения и/или предотвращения состояний, перечисленных выше, включающих введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества липидного соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V).

Подробное описание настоящего изобретения

Неожиданно обнаружили, что новые полиненасыщенные производные, представленные общими формулами (I)-(V), имеют большее сродство к ядерным рецепторам семейства PPAR по сравнению с DHA и EPA. Производные дают агонисты RXR, более сильнодействующие, чем DHA.

RXR/PPAR представляет собой пермиссивный гетеродимер, который синергически активируются в присутствии обоих лигандов. Поскольку новые соединения по настоящему изобретению являются лигандами как для PPAR, так и для RXR, они могут действовать как агонисты двойного действия. Поскольку различные PUFA аккумулируются по-разному в различных тканях, эти модифицированные PUFA имеют потенциал для того, чтобы быть тканеспецифичными лигандами для ядерных рецепторов.

В дополнение к тому, что они являются лучшими лигандами для рецепторов PPAR и RXR, производные по настоящему изобретению не деградируются легко с помощью путей - и -окисления, как природные PUFA, из-за заместителя в - или -положении.

Новые соединения могут использоваться в терапии либо по одному, либо в сочетании с другими лигандами к PPAR с высоким сродством. В этом случае производное PUFA будет действовать как лиганд для RXR, синергически увеличивая влияние лиганда PPAR на транскрипцию гена.

В дополнение к этому предусматриваются новые соединения, которые приобретают функциональность ретиноидов: ретинола и ретиналя. Эти соединения представляют собой пролекарста, которые активируются in vivo с помощью путей окисления.

Номенклатура и терминология

Липидные соединения по настоящему изобретению являются замещенными по атому углерода 2 и/или 3, отсчитывая от функциональной группы, обозначенной X в формулах (I)-(V). Такие замещения могут называться "альфа-замещение" или "бета-замещение". В липидных соединениях по настоящему изобретению существует двойная связь между атомами углерода 2 и 3, которая предпочтительно находитсяв E-конфигурации.

Как здесь используется, термин "положение -3" означает, что первая двойная связь существует как третья связь углерод-углерод от конца конечной CH₃ ( ) углеродной цепи.

В химии нумерация атомов углерода начинается с -конца. Жирные кислоты представляют собой углеводороды с прямой цепью, имеющие карбоксильную (COOH) группу на одном конце ( ) и (обычно) метильную группу на другом ( ) конце.

Как здесь используется, выражение "двойные связи, чередующиеся с метиленовой группой" относится к случаю, когда метиленовая группа располагается между отдельными двойными связями углеродной цепи в липидном соединении.

В соединении в соответствии с настоящим изобретением указанная алкильная группа может быть выбрана из группы, состоящей из метила, этила, н-пропила, изопропила, н-бутила, изобутила, втор-бутила и н-гексила; указанный атом галогена может представлять собой фтор; указанная алкокси группа может быть выбрана из группы, состоящей из метокси, этокси, пропокси, изопропокси, втор-бутокси, OCH₂CF₃ и OCH₂CH₂ OCH₃;

Здесь, указанная ацильная группа представляет собой соединение формулы:

где A представляет собой C₁ -C₇ алкил.

Основной объект настоящего изобретения представляет собой липидное соединение формулы (I):

где

- R₁ и R₂ являются одинаковыми или различными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, алкильной группы, атома галогена и алкокси группы;

- X представляет собой COR₃ или CH₂OR ₄, где

- R₃ выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси, алкокси и амино,

- где Х дополнительно включает производные карбоновой кислоты, когда R₃ представляет собой гидрокси; и

- R₄ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила или ацила,

- Y представляет собой C₉ -С₂₁алкен с одной или несколькими двойными связями с E- или Z-конфигурацией;

или любой его фармацевтически приемлемый комплекс, сольват или пролекарство.

Предпочтительно, липидное соединение по настоящему изобретению представляет собой E-изомер и представлено формулой (II):

Когда n=0, липидное соединение по настоящему изобретению представлено формулой (III):

Когда n=1, липидное соединение по настоящему изобретению представлено формулой (IV):

Когда n=2, липидное соединение по настоящему изобретению представлено формулой (V):

Соединения, указанные выше, могут разделяться на подкатегории на основе того, представляет ли собой X COR₃ или CH₂OR₄, на основе заместителей R₁ и R₂, и того, являются ли R₁ и R₂ различными или одинаковыми, а также на основе длины и количества двойных связей цепи Y. Особенно предпочтительные соединения представляют собой соединения (1)-(27), перечисленные выше.

Предпочтительные липидные соединения в соответствии с настоящим изобретением могут также разделяться на следующие категории A-1, A-2, B-1 и B-2.

Категория A-Z- и/или E-изомеры

Общая формула (I)

Z- и E-изомеры соединений, описанных общей формулой (I), могут выделяться из смесей с помощью различных технологий разделения. Флэш-хроматография (силикагель) представляет собой распространенную технологию разделения. Z- и E-изомеры соединений, описанных общей формулой, выше, могут выделяться в форме сложных эфиров карбоновых кислот, другие, как карбоновые кислоты или как спирты, с помощью флэш-хроматографии. Карбоновые кислоты могут повторно этерифицироваться посредством использования первичных спиртов и кислотного катализатора (H₂SO₄, HCl, BF₃). Спирты могут окисляться с получением карбоновой кислоты.

Категория A-1, Z- и/или E-изомеры, n=0, X=COR₃

Для всех примеров в этой категории, (30), (32) и (33): n=0

X = этилкарбоксилат

Этил (2Z/E,11E,14E,17E)-2-этил-эйкоза-2,11,14,17-тетраеноат (30)

Этил (2Z/E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеновая кислота (32)

Этил (2Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеновая кислота (33)

Категория A-2, Z- и/или E-изомеры, n=0, X=CH₂OR₄

Для всех примеров в этой категории, (29), (31) и (34):

n=0

R ₄=H

(полностью Z)-2-этил-эйкоза-2,11,14,17-тетраен-1-ол (31)

(полностью Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ол (29)

(полностью Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ол (34)

Категория A-1, n=1, X=COR ₃ и X=CH₂OR₄

Для всех примеров в этой категории, (35), (36), (37), (38), (39) и (40): n=1

Этил (2Z,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаноат (35)

(2Z,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаен-1-ол (36)

Этил (2E/Z,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаеноат (37)

(2Z,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаен-1-ол (38)

(2Z,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,7,10,13,16,19-пентаен-1-ол (39)

Этил (2Z/2E,4E,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,13,16,19-гептаеноат (40)

Категория B: E-изомеры

Общая формула (II), где предпочтительно

Y=C₉-С₂₁алкен с одной или несколькими двойными связями с E- или Z-конфигурацией. X = гидроксиметил (-CH₂OH), карбальдегид (-C(O)H), или карбоновая кислота, или ее производное, карбоксилат, ангидрид карбоновой кислоты или карбоксамид. Каждый из R₁ и R₂, которые могут быть одинаковыми или различными, представляет собой атом водорода, атом фтора, алкокси группу или алкильную группу.

Категория B-1; E-изомеры, n=0-2 и X=COR ₃

Категория B-2; E-изомеры, n=0-2 и X=CH₂OR₄

Категория B-1; n=0, X=COR ₃ и R=OCH₂CH₃

Для всех примеров в этой категории, (1), (3), (6) и (8):

n=0

X = этилкарбоксилат

Этил (2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноат (1)

Этил (2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноат (3)

Этил (2E,11Z,14Z,17Z)-2-метил-эйкоза-2,11,14,17-тетраеноат (6)

Этил (2E,5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-метил-икоза-2,5,8,11,14,17-гексаеноат (8)

Категория B-1: n=0, X=COR ₃ и R₃=OH

Для всех примеров в этой категории, (2), (4), (7) и (26):

n=0

R₃ = гидрокси (OH)

(2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеновая кислота (2)

(2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеновая кислота (4)

(2E,11E,14E,17E)-2-метил-эйкоза-2,11,14,17-тетраеновая кислота (7)

(2Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеновая кислота (26)

Категория В-2, n=0, X=CH ₂OR₄ и R₄=H

Для всех примеров в этой категории; (5), (9) и (27):

n=0

Заместитель представляет собой алкил или этокси.

(2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ол (5)

(2E,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,11,14,17-тетраен-1-ол (9)

2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ол (27)

Категория B-1, E-изомеры, n=1

Формула (IV)

n=1

Категория B-1, n=1 и X=COR₃ и R₃=OCH₂CH₃

Для всех примеров в этой категории, (10), (12), (14), (17) и (22):

n=1

X=COR₃

R₃=OCH₂ CH₃

Этил (2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-метил-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеноат (10)

Этил (2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-икоза-2,4,6,11,14,17-гексаеноат (12)

Этил (2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаеноат (14)

Этил-(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаноат (17)

Этил (2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаеноат (22)

Категория B-1, E-изомеры, n=1 и X=COR₃ и R₃=OH

Для всех примеров в этой категории, (11), (13), (15), (18) и (20):

n=1

X=COOH

(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-метил-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеновая кислота (11)

(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеновая кислота (13)

(2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаеновая кислота (15)

(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеновая кислота (18)

(2E,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаеновая кислота (20)

Категория B-2, E-изомеры, n=1, X-CH₂OR₄ и R₄ =H

Для всех примеров в этой категории, (16), (19), (21) и (23):

n=1

X=CH₂OR₄

R₄ = водород (H)

(2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаен-1-ол (16)

(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-икоза-2,4,11,14,17-гексаен-1-ол (19)

(2E,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаен-1-ол (21)

(2E,4E,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,13,16,19-гептаен-1-ол (23)

Категория B, транс-изомеры, n=2

Формула (V)

n=2

Категория B-1, n=2, X=COR₃ и R₃=OCH₂CH₃

Для примера в этой категории (24):

n=2

X=COR₃

R₃=OCH₂CH₃

Этил (2E,4E,6E,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,6,10,13,16,19-гептаеноат (24)

Категория В-1, n=2, X=COR ₃ и R₃=OH

Для примера в этой категории (25):

n=2

X=COR₃

R₃ = гидроксил (OH)

(2E,4E,6E,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-Метил-докоза-2,4,6,10,13,16,19-гептаеновая кислота

Необходимо понять, что настоящее изобретение охватывает любые возможные фармацевтически приемлемые комплексы, сольваты или пролекарства липидных соединений формул (I)-(V).

"Пролекарства" представляют собой вещества, которые могут иметь или не иметь фармакологическую активность сами по себе, но могут вводиться (например, перорально или парентерально) и после этого подвергаться биологическому активированию (например, метаболизации) в организме с образованием агента по настоящему изобретению, который является фармакологически активным.

Когда X представляет собой карбоновую кислоту, настоящее изобретение также включает производные карбоновых кислот. Например, такие производные карбоновой кислоты могут быть выбраны из группы, состоящей из фосфолипида или моно-, ди- или триглицерида.

Кроме того, соли карбоновых кислот также включены в настоящее изобретение. Соответствующие фармацевтически приемлемые соли карбокси групп включают соли металлов, таких, например, как алюминий, соли щелочных металлов, таких как литий, натрий или калий, соли щелочноземельных металлов, таких как кальций или магний, и соли аммония или замещенного аммония.

"Фармацевтически активное количество" относится к количеству, которое будет приводить к желаемым фармакологическим и/или терапевтическим воздействиям, то есть к количеству липидного соединения, которое является эффективным для достижения предполагаемой цели. Хотя потребности индивидуальных пациентов могут изменяться, определение оптимальных диапазонов эффективных количеств липидного соединения находится в пределах знаний, характерных для данной области. Как правило, режим дозирования для лечения состояния с помощью соединений и/или композиций по настоящему изобретению выбран в соответствии с разнообразными факторами, включая тип, возраст, массу, пол, диету и медицинское состояние пациента.

Под "лекарственным средством" подразумевается липидное соединение в соответствии с любой из формул (I)-(V), в любой форме, пригодной для использования в медицинских целях, например, в форме медицинского продукта, фармацевтической композиции или продукта, диетического продукта, пищевой начинки или пищевой добавки.

"Лечение" включает любое терапевтическое применение, которое может принести пользу человеку или млекопитающему, не являющемуся человеком. Как медицинское, так и ветеринарное лечение находится в рамках настоящего изобретения. Лечение может относиться к существующему состоянию, или оно может быть профилактическим.

Липидные соединения формул (I)-(V) могут использоваться сами по себе, но, как правило, будут вводиться в форме фармацевтической композиции, в которой соединения формул (I)-(V) (активный ингредиент) находятся в ассоциации с фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем или разбавителем (включая их сочетания).

Приемлемые носители, наполнители и разбавители для терапевтического использования хорошо известны в области фармацевтики и могут быть выбраны в связи с предполагаемым способом введения и стандартной фармацевтической практикой. Примеры включают связующие, смазывающие вещества, суспендирующие агенты, агенты для нанесения покрытий, солюбилизирующие агенты, консервирующие агенты, смачивающие агенты, эмульсификаторы, подсластители, красители, ароматизирующие агенты, отдушки, буферы, суспендирующие агенты, стабилизирующие агенты и/или соли.

Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно предназначена для перорального введения человеку или животному. Фармацевтическая композиция может также предназначаться для введения с помощью любого другого способа, в котором активные ингредиенты могут эффективно поглощаться и использоваться, например внутривенно, подкожно, внутримышечно, интраназально, ректально, вагинально или местно.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция формируется в форме капсулы, которая также может представлять собой микрокапсулу, генерирующую порошок, или саше. Капсула может ароматизироваться. Этот вариант осуществления также включает такую капсулу, где как капсула, так и инкапсулированная композиция в соответствии с настоящим изобретением является ароматизированной. Посредством ароматизации капсула становится более привлекательной для потребителя. Для рассмотренных выше терапевтических применений вводимая доза будет, разумеется, изменяться вместе с используемым соединением, со способом введения, желаемым лечением и показанным расстройством.

Фармацевтическая композиция может приготавливаться с получением ежедневной дозы, например, от 5 мг до 10 г от 50 мг до 1 г; или от 50 мг до 200 г липидного соединения. Под ежедневным дозированием подразумевается дозирование в течение 24 часов.

Вводимая доза будет, разумеется, изменяться вместе с используемым соединением, способом введения, желаемым лечением и показанным расстройством. Как правило, врач будет определять реальную дозировку, которая будет наиболее пригодной для индивидуального субъекта. Конкретный уровень дозы и частота дозирования для любого конкретного пациента может изменяться и будет зависеть от разнообразных факторов, включая активность конкретного используемого соединения, метаболическую стабильность и продолжительность действия этого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, способ и время введения, скорость выделения, сочетание лекарственных средств, тяжесть конкретного состояния и индивидуума, подвергающегося терапии. Липидное соединение и/или фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может вводиться в соответствии с режимом от 1 до 10 раз в день, например один или дважды в день. Для перорального и парентерального введения пациентам-людям уровень ежедневной дозировки агента может находиться в одной или в разделенных дозах.

Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к липидной композиции, содержащей липидное соединение любой из формул (I)-(V). Липидная композиция может содержать от 80 до 100% масс. липидного соединения формул (I)-(V), все проценты массовые относятся к общей массе липидной композиции. Например, по меньшей мере, 80%, по меньшей мере, 90%, или, по меньшей мере, 95% масс. липидной композиции состоит из липидных соединений любой из формул (I)-(V).

В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения липидная композиция представляет собой фармацевтическую композицию, пищевую композицию или диетическую композицию.

Липидная композиция может дополнительно содержать эффективное количество фармацевтически приемлемого антиоксиданта, например токоферола или смеси токоферолов, в количестве до 4 мг на г, например от 0,05 до 0,4 мг на г, токоферолов, от общей массы липидной композиции.

Липидные соединения и композиции в соответствии с настоящим изобретением являются пригодными для лечения широкого диапазона заболеваний и состояний, как будет описано более подробно ниже.

Соответственно, липидные соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) могут активировать ядерные рецепторы PPAR (активируемый пероксисомальным пролифератором рецептор), изоформы , и/или , и/или , а также RXR.

Кроме того, липидные соединения в соответствии с настоящим изобретением могут регулировать или ингибировать активность NF B (ядерный фактор каппа B).

Особенно предпочтительные соединения для ингибирования и/или регулирования NF B представляют собой соединения формул (IV) и (V), то есть липидные соединения, представленные с помощью n=1 или n=2. Предпочтительно, R₁ является представленным атомом водорода.

Настоящее изобретение также предусматривает применение липидного соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) для производства лекарственного средства для лечения и/или предотвращения воспалительного заболевания или состояния.

Особенно предпочтительные соединения для лечения и/или предотвращения воспалительного заболевания или состояния представляют собой соединения формул (IV) и (V), то есть липидные соединения, представленные с помощью n=1 или n=2. Предпочтительно, R₁ является представленным атомом водорода.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к применению липидного соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) для производства лекарственного средства, предназначенного для понижения уровня инсулина в плазме, глюкозы в крови и/или триглицеридов в сыворотке.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению липидного соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) для производства лекарственного средства, предназначенного для предотвращения и/или лечения повышенных уровней триглицеридов, уровней LDL холестерина и/или уровней VLDL холестерина, гиперлипидемического состояния, например, гипертриглицеридемии (HTG), ожирения или состояния с избыточной массой тела, увеличения массы тела, заболевания печени, связанного с жирными кислотами, в частности неалкогольного жирового заболевания печени (NAFLD), резистентности к инсулину, гиперлипидемии, резистентности периферических тканей к инсулину и/или диабетического состояния, в частности диабета типа 2.

Настоящее изобретение также относится к липидным соединениям в соответствии с любой из формул (I)-(V) для лечения и/или предотвращения состояний, перечисленных выше.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам для лечения и/или предотвращения состояний, перечисленных выше, включающим введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества липидного соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V).

Кроме того, липидные соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) могут использоваться для борьбы с заболеванием, выбранным из атеросклероза, воспалений и ракового заболевания, и с хроническими воспалительными заболеваниями, подобными псориазу, ревматоидному артриту и тому подобное, и с расстройствами мозга (MS, болезнь Альцгеймера).

В дополнение к фармацевтическим применениям липидные соединения в соответствии с любой из формул (I)-(V) могут использоваться в качестве пищевых добавок. По этой причине в дополнительном аспекте настоящее изобретение предусматривает пищевой продукт, добавку к пище, пищевую добавку или нутрицевтический препарат, содержащий липидное соединение в соответствии с любой из формул (I)-(V).

Косметические композиции или продукты, содержащие липидные соединения любой из формул (I)-(V), образуют дополнительный аспект настоящего изобретения.

Кроме того, еще в одном из его аспектов настоящее изобретение предусматривает радиоактивно меченные аналоги соединений в соответствии с формулой (1). Такие радиоактивно меченные аналоги являются особенно пригодными для использования в диагностических методах, например, при получении изображений ПЭТ.

Многие из промежуточных соединений, сформированных во время получения липидных соединений по настоящему изобретению, сами по себе являются новыми и полезными соединениями, и они образуют дополнительный аспект настоящего изобретения. Конкретные примеры таких промежуточных соединений можно найти в схемах реакций ниже.

Теперь настоящее изобретение будет дополнительно описываться с помощью следующих неограничивающих примеров.

Пример 1

Общий синтез

Липидные соединения общей формулы (I) могут быть получены путем комбинации реакций олефинирования карбонилов, подобных реакциям типа Виттига, реакции Петерсона или реакции Джулиа. Более конкретно: липидные соединения общей формулы (I), где R₁ и R ₂ представляют собой водород и X представляет собой карбоксилат, получают с помощью следующих способов.

Реакция альдегида (i) с фосфорил-стабилизированным карбанионом [(RO)₂P(O)C^-HCO₂ R₁ (ii) дает в основном (E)- , -ненасыщенный сложный эфир (iii) как главный продукт. Фосфорил-стабилизированный карбанион может быть генерирован посредством обработки триэтилфосфоноацетата или триметилфосфоноацетата основанием, например гидридом щелочного металла, таким как гидрид натрия, алкоксидом металла, таким как метоксид натрия, металлоорганическим соединением, таким как бутиллитий, амидом металла, таким как литий диизопропиламид, или другими основаниями в растворителе, таком как DME (диметоксиэтан), тетрагидрофуран, бензол, толуол. Реакция может осуществляться при температуре реакции от -78°C до комнатной температуры. Сложный эфир (iii) может гидролизироваться в растворителе, таком как этанол или метанол, до формы карбоновой кислоты посредством добавления основания, такого как гидроксид лития/натрия/калия, в воде при температурах в переделах между 10-90°C. Затем он, если это желательно, может этерифицироваться или амидироваться. Сложный эфир (iii) может восстанавливаться до спирта или альдегида.

Липидные соединения общей формулы (I), где R ₁ представляет собой алкильную группу, фтор или алкокси группу, R₂ представляет собой водород и X представляет собой карбоксилат, получают с помощью следующих способов.

Способ является аналогичным стадии 1 за исключением того, что фосфонат замещается в положении 2 алкильной группой, фтором или алкокси группой.

Липидные соединения общей формулы (I), где R₂ представляет собой алкильную группу, и R₁ представляет собой водород, и X представляет собой карбоксилат, могут быть получены с помощью следующих способов.

Способ 1, реакция Хорнера-Водсворта-Эммонса:

Способ 2, реакция Петерсона:

Стадия 3 является аналогичной стадиям 1 и 2, за исключением того, что температура реакции должна быть повышена до 0-80°C.

На стадии 4 энолят -триметилсилилацетата используется для синтеза , -ненасыщенного сложного эфира (vii) из кетона (vi).

Липидные соединения общей формулы (I), где R ₂ представляет собой алкильную группу, и R₁ представляет собой водород, и X представляет собой карбоксилат, могут также быть получены с помощью следующих способов.

Ненасыщенные альдегиды, Y-C(O)H, могут быть получены непосредственно из эфиров карбоновых кислот, из существующих в природе ненасыщенных жирных кислот; альфа-линоленовой кислоты, олеиновой кислоты, сопряженной линолевой кислоты, линолевой кислоты, эйкозапентаеновой кислоты и тому подобное посредством восстановления с помощью диизобутилалюминий гидрида при -78°C или с помощью двухстадийной процедуры, включающей восстановление до спирта, а затем окисление до альдегида. Альдегиды могут также быть получены посредством деградации полиненасыщенных жирных кислот EPA и DHA, как описано Holmeide et al. (J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2000, 2271). В этом случае можно начать с очищенной EPA или DHA, но можно также начать с рыбьего жира, содержащего EPA и DHA в смеси. Причина для этого заключается в том, что DHA реагирует быстрее, чем EPA, в реакции йодолактонизации, с образованием йодо -лактона (Corey et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, 3581, Wright et al., J. Org. Chem., 1987, 4399, Kuklev et al., Phytochemistry, 1992, 2401). Альдегиды могут также быть получены из , -ненасыщенных сложных эфиров, охватываемых настоящим изобретением, посредством восстановления с помощью гидрида диизобутилалюминия при -78°C или с помощью двухстадийной процедуры, включающей восстановление до спирта, а затем окисление до альдегида.

Кетоны могут быть получены из существующих в природе ненасыщенных кислот посредством реакции с двумя эквивалентами алкиллития при -78°C в растворителе, подобном диэтиловому эфиру. Они могут также быть получены из альдегидов, подобных тем, которые уже описаны, посредством реакции с анионом -кето фосфоната, подобного диэтил(2-оксо-пропил)фосфонату.

Липидные соединения общей формулы (I), где X представляет собой карбоновую кислоту, и в форме фосфолипида могут быть получены с помощью следующих способов.

Ацилирование sn-глицеро-3-фосфохолина (GPC) с помощью активированной жирной кислоты, например, с помощью имидазолидов жирных кислот представляет собой стандартную процедуру при синтезе фосфатидилхолина. Он обычно осуществляется в присутствии аниона ДМСО, с ДМСО в качестве растворителя (Hermetter; Chemistry and Physics of lipids, 1981, 28, 111). Sn-глицеро-3-фосфохолин, как аддукт кадмия (II), может также взаимодействовать с активированной имидазолидом жирной кислотой в присутствии DBU (1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ена)] с получением фосфатидилхолина соответствующей жирной кислоты (заявка на международный патент номер PCT/GB2003/002582). Ферментативное трансфосфатидилирование может осуществлять преобразование фосфатидилхолина в фосфатидилэтаноламин (Wang et al., J. Am. Chem. Soc., 1993, 115, 10487).

Фосфолипиды, содержащие полиненасыщенные жирные кислоты, могут быть получены различными путями, в основном, посредством химического синтеза фосфолипидов, как описано, посредством ферментативной этерификации и трансэтерификации фосфолипидов или ферментативного трансфосфатидилирования фосфолипидов (Hosokawa, J. Am. Oil Chem. Soc. 1995, 1287, Lilja-Hallberg, Biocatalysis, 1994, 195). Для таких ферментативных применений предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является липидное соединение в соответствии с общей формулой I, где R₁ и R₂ представляют собой водород.

Липидные соединения общей формулы (I), где X представляет собой карбоновую кислоту и находится в форме триглицерида, могут быть получены с помощью следующих способов. Избыток новой жирной кислоты может связываться с глицерином с использованием диметиламинопиридина (DMAP) и 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилуроний гексафторфосфата (HBTU).

Липидные соединения общей формулы (I), где X представляет собой карбоновую кислоту и находится в форме диглицерида, могут быть получены посредством реакции жирной кислоты (2 экв.) с глицерином (1 экв.) в присутствии 1,3-дициклогексилкарбодиимида (DCC) и 4-диметиламинопиридина (DMAP).

Липидные соединения общей формулы (I), где X представляет собой карбоновую кислоту и находится в форме моноглицерида, могут быть получены с помощью следующих способов.

Ацилирование 1,2-O-изопропилиден-sn-глицерина с помощью жирной кислоты с использованием DCC и DMAP в хлороформе дает монодиеноилглицерин. Снятие защиты с изопропилиденовой группы может осуществляться посредством обработки защищенного глицерина кислотой (HCl, уксусной кислотой и тому подобное) (O'Brian, J. Org. Chem., 1996, 5914).

Имеются несколько распространенных способов синтеза для получения моноглицеридов с жирной кислотой в положении 2. Один из способов использует этерификацию жирной кислоты с помощью глицидола в присутствии 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимидгидрохлорида (EDC) и 4-диметиламинопиридина (DMAP) с получением глицидильного производного. Обработка глицидильного производного с помощью трифторуксусного ангидрида (TFAA) перед транс-этерификацией моноглицерида дает (Parkkari et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 2437).

Другие распространенные способы получения моно-, ди- и триглицеридов из производных жирных кислот описываются в заявке на международный патент PCT/FR02/02831.

Также является возможным использование ферментативных способов (реакций липазы) для преобразования жирной кислоты в моно-, ди-, триглицерид. 1,3-Региоспецифичная липаза из грибов Mucor miehei может использоваться для получения триглицеридов или диглицеридов из полиненасыщенных жирных кислот и глицерина. Другая липаза, нерегиоспецифичная липаза дрожжей из Candida antartica является очень эффективной при генерировании триглицеридов из полиненасыщенных жирных кислот (Haraldsson, Pharmazie, 2000, 3). Для этого ферментативного применения предпочтительный вариант осуществления по настоящему изобретению представляет собой липидное соединение в соответствии с общей формулой I, где R₁ и R₂ представляют собой водород.

Синтез/получение липидного соединения в соответствии с настоящим изобретением

Настоящее изобретение будет теперь описано более подробно с помощью следующих примеров, которые не должны рассматриваться как ограничивающие настоящее изобретение.

Кроме того, в следующих далее примерах структуры проверяются с помощью ЯМР. Спектр ЯМР регистрируют в CDCl ₃ с помощью прибора Bruker Avance DPX 200 или с помощью Bruker Avance DPX 300. Значения J даны в Гц. Масс-спектр регистрируют с помощью LC/MS Agilent 1100 series, с масс-спектрометром G 1956 A (электрораспыление, 3000 V). Все реакции, осуществляемые в инертной атмосфере, осуществляют в атмосфере азота.

Аббревиатуры

ТГФ - тетрагидрофуран

EtOAc - этилацетат

DBU - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен

LAH - литий-алюминий гидрид

BuLi - бутиллитий

NaH - гидрид натрия

т - триплет

с - синглет

д - дублет

кв - квартет

м - мультиплет

ушир.с - уширенный синглет

Пример 1

Этил (2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноат (1)

Триэтил 2-фосфонопропионат (414 мкл, 1,9 ммоль) добавляют к суспензии гидрида натрия (81 мг, 60% дисперсия в минеральном масле, 2,0 ммоль) в сухом ТГФ (5 мл) при 0°C. Через 30 минут при комнатной температуре смесь охлаждают до 0°C и добавляют (полностью Z)-икоза-5,8,11,14,17-пентаенал (500 мг, 1,7 ммоль) в ТГФ (1 мл). Смесь перемешивают в течение 40 минут при 0°C. Добавляют насыщенный водный раствор NH₄ Cl и фазы разделяют. Водную фазу экстрагируют смесью гексан:EtOAc (8:2). Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором соли, водой и сушат (MgSO₄). Выпаривание растворителей при пониженном давлении, а затем флэш-хроматография на силикагеле (9:1 гексан-EtOAc) дают сложный эфир 1 (550 мг, 85%), (2E:2Z=7:1 (GC)).

_H(300 МГц): 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 1,25 (т, J=7,1 Гц, 3H), 1,51 (м, 2Н), 1,84 (д, J=1 Гц, CH ₃, 3H), 1,9-2,2 (м, 6Н), 2,7-2,9 (м, 8Н), 4,20 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 5,2-5,5 (м, 10Н), 6,88 (тд, J=7,5 Гц, J=1 Гц, 1H).

Пример 2

(2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеновая кислота (2)

Этил (2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноат (1) гидролизируют и стереоизомеры разделяют с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (8:2 гексан-EtOAc).

Соединение 2: E-изомер:

_Н(300 МГц), 0,96 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 1,53 (м, 2Н), 1,82 (д, J=1 Гц, СН₃, 3Н), 1,9-2,2 (м, 6Н), 2,7-2,9 (м, 8Н), 5,2-5,5 (м, 10Н), 6,91 (тд, J=7,5 Гц, J=1 Гц, 1H); _С(75 МГц), 11,93, 14,23, 20,51, 25,50, 25,60, 26,82, 28,29, 28,39, 126,97, 127,26, 127,83, 128,04, 128,06, 128,20, 128,27, 128,51, 129,29, 131,97, 144,87, 173,80.

Соединение 28: Z-изомер: _H(300 МГц): 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 1,48 (м, 2H), 1,90 (ушир.д, J=1,4 Гц, 3H, CH₃), 2,1-2,3 (м, 4H), 2,53 (м, 2H), 2,7-2,9 (м, 8H), 5,2-5,5 (м, 10H), 6,08 (тд, J=7,4 Гц, J=1,4 Гц, 1H); _C(75 МГц) 14,25, 20,48, 20,54, 25,53, 25,62, 26,92, 29,35, 29,45, 126,83, 127,02, 127,89, 128,01, 128,14, 128,17, 128,20, 128,38, 128,54, 129,69, 132,02, 146,45, 173,21.

Пример 3

Получение этил (2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноата (3)

Триэтилфосфоноацетат (288 мкл, 1,4 ммоль) добавляют к суспензии гидрида натрия (58 мг, 60% дисперсия в минеральном масле, 1,4 ммоль) в сухом бензоле (8 мл) при комнатной температуре. Через 30 минут добавляют раствор (полностью Z)-геникоза-6,9,12,15,18-пентаен-2-она (400 мг, 1,3 ммоль) в бензоле (4 мл). Смесь перемешивают в течение 48 часов при комнатной температуре. Добавляют воду и смесь экстрагируют гексаном. Экстракт промывают водой и сушат (MgSO₄). Выпаривание растворителей при пониженном давлении, а затем флэш-хроматография на силикагеле (95:5, гексан:EtOAc) дают сложный эфир 3 (270 мг, 53%) в виде масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃ ): 0,94 (т, 3H), 1,23 (т, 3H), 1,49-1,57 (м, 2H), 1,99-2,12 (м, 6H), 2,12 (c, 3H), 2,76-2,83 (м, 8H), 4,10 (кв, 2H), 5,30-5,37 (м, 10H), 5,63 (c, 1H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl ₃): 14,18, 14,25, 18,61, 20,48, 25,46, 25,56, 25,59, 26,63, 27,26, 28,06, 40,33, 59,33, 126,93, 127,78, 128,00 (2 сигнала), 128,16, 128,17, 128,42, 128,47 (2 сигнала), 129,29, 131,92, 159,64, 166,68.

Пример 4

Получение (2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеновой кислоты (4)

Этил (2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноат (3) растворяют в метаноле (9 мл) и добавляют LiOH (220 мг, 4,89 ммоль) в воде (3 мл) и смесь нагревают при 50°C в течение 2 часов. Смесь охлаждают и добавляют разбавленную хлористоводородную кислоту до установления рН 2. Экстрагирование диэтиловым эфиром, сушка (MgSO₄) и выпаривание растворителей при пониженном давлении дают кислоту 4. Кислоту очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (8:2, гексан:EtOAc); _H(300 МГц) 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 1,55 (м, 2H), 2,0-2,2 (м, 6H), 2,15 (д, J=1,3 Гц, 3H, CH ₃), 2,7-2,9 (м, 8H), 5,2-5,5 (м, 10H), 5,68 (ушир.c, 1H); _C(75 МГц) 14,24, 19,04, 20,53, 25,51, 25,60, 25,62, 25,64, 26,67, 27,28, 40,67, 115,24, 126,99, 127,84, 128,05, 128,11, 128,19, 128,22, 128,53, 128,57, 129,23, 132,00, 163,05, 172,31.

Пример 5

(2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ол (5)

Этил (2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноат (2E:2Z=9:1), (0,40 г, 1,08 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (5 мл) и добавляют по каплям к холодной суспензии LAH (0,045 г, 1,19 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл). Смесь перемешивают при 0°C в инертной атмосфере в течение 30 минут, а затем 18 часов при температуре окружающей среды. Реакционную смесь гасят посредством добавления 10% NH₄Cl (20 мл) и смесь экстрагируют дважды гептаном (30 мл). Объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (20 мл) и сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 4:1) дает 0,16 г (45%) 3-метил-(2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ола в виде бесцветного масла.

Соединение 3, E-изомер: ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,95 (т, 3H), 1,32-1,50 (м, 2H), 1,64 (c, 3H), 1,97-2,09 (м, 6H), 2,76-2,85 (м, 8H), 4,11 (д, J=6,8 Гц, 2H), 5,27-5,42 (м, 11H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 14,21, 16,12, 20,50, 25,48 (2 сигнала), 25,58 (3 сигнала), 26,79, 27,59, 39,04, 59,28, 123,42, 126,96, 127,83, 127,94, 127,98, 128,08, 128,16, 128,37, 128,50, 130,23, 131,98; MC (электрораспыление): 351,2 [M+Na]⁺.

Соединение 29, Z-изомер:

Кроме того, элюирование дает 0,01 г (28%) (полностью Z)-3-метил-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ола (29) в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,95 (т, 3Н), 1,30-1,50 (м, 2Н), 1,71 (с, 3Н), 2,02-2,09 (м, 6Н), 2,76-2,85 (м, 8Н), 4,09 (д, J=7,1 Гц, 2Н), 5,28 (с, 1Н), 5,31-5,41 (м, 10Н); MC (электрораспыление): 351,2 [M+Na] ⁺.

Пример 6

Этил (2E,11Z,14Z,17Z)-2-метил-эйкоза-2,11,14,17-тетраеноат (6)

Триэтилфосфонопропионат (386 мкл, 1,8 ммоль) добавляют к суспензии гидрида натрия (72 мг, 60% дисперсия в минеральном масле, 1,8 ммоль) в сухом ТГФ (5 мл) при 0°C. Через 30 минут добавляют раствор (полностью Z)-октадека-9,12,15-триенала (300 мг, 1,15 ммоль) в ТГФ (2 мл). Смесь перемешивают в течение 1 часа при 0°C. Добавляют водный раствор NH₄Cl, и смесь экстрагируют EtOAc. Экстракт промывают водой и сушат (MgSO₄). Выпаривание растворителей при пониженном давлении, а затем флэш-хроматография на силикагеле (95:5, гексан:EtOAc) дают сложный эфир 6 (180 мг, 45%). _H(300 МГц) 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 1,2-1,5 (м, 13Н), 1,80 (с, СН₃, 3Н), 2,0-2,2 (м,), 2,78 (т, J=5,8 Гц, 4H), 4,16 (кв, J=7,1 Гц, 2Н, СН₂ ), 5,2-5,4 (м, 6Н), 6,73 (дт, J=7,5 Гц, J=1,3 Гц, 1H); _C(75 МГц) 12,31, 14,25, 20,53, 25,51, 25,60, 27,20, 28,56, 28,66, 29,178, 29,34, 29,60, 60,33, 127,10, 127,70, 128,26, 130,27, 131,94, 142,37, 168,30.

Пример 7

(2E,11E,14E,17E)-2-метил-эйкоза-2,11,14,17-тетраеновая кислота (7)

Этил (2E,11Z,14Z,17Z)-2-метил-эйкоза-2,11,14,17-тетраеноат (6) (160 мг, 0,46 ммоль) растворяют в метаноле (3 мл), и добавляют LiOH (193 мг, 4,6 ммоль) в воде (3 мл), и смесь нагревают при 50°C в течение 2 часов. Смесь охлаждают и добавляют разбавленную хлористоводородную кислоту до установления рН 2. Экстрагирование диэтиловым эфиром, сушка (MgSO₄) и выпаривание растворителей при пониженном давлении дают кислоту 7. Кислоту очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (8:2 гексан-EtOAc); _H(300 МГц) 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 1,2-1,5 (м, 10H), 1,81 (c, 3H, CH₃), 2,0-2,2 (м, 6H), 2,79 (т, J=5,8 Гц, 4H), 5,2-5,4 (м, 6H), 6,90 (дт, J=7,5 Гц, J=1,3 Гц, 1H); _C(75 МГц) 11,93, 14,25, 20,53, 25,51, 25,60, 27,19, 28,40, 28,87, 29,16, 29,31, 29,58, 126,94, 127,10, 127,71, 128,24, 128,25, 130,25, 131,93, 145,41, 173,76.

Пример 8

Этил (2Z/E,11E,14E,17E)-2-этил-эйкоза-2,11,14,17-тетраеноат (30)

NaH (60% в минеральном масле, 0,080 г, 2,00 ммоль) суспендируют в сухом ТГФ (10 мл) в инертной атмосфере. Суспензию охлаждают до 0°C, добавляют по каплям триэтил 2-фосфонобутират (0,47 мл, 2,00 ммоль) и перемешивают при 0°C в течение 20 минут. К этой смеси добавляют раствор (полностью Z)-октадека-9,12,15-триенала (PRB-73, 0,35 г, 1,33 ммоль) в сухом ТГФ (5 мл) и полученную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 30 минут. Смесь разбавляют диэтиловым эфиром (25 мл), промывают водой (20 мл) и сушат (Na₂SO ₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 98:2) дает 0,47 г (99%) указанного в заголовке соединения 30 (2E:2Z=смесь 1:1).

¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃):

E-изомер: 0,91-1,04 (м, 6H), 1,23-1,41 (м, 13H), 2,01-2,26 (м, 8H), 2,76-2,81 (м, 4H), 4,17 (кв, 2H), 5,28-5,41 (м, 6H), 6,86 (т, J=7,53 Гц, 1H).

Z-изомер: 0,91-1,04 (м, 6H), 1,23-1,41 (м, 13H), 2,01-2,26 (м, 8H), 2,76-2,81 (м, 4H), 4,17 (кв, 2H), 5,28-5,41 (м, 6H), 5,80 (т, J=7,39 Гц, 1H).

¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl ₃):

Z- и E-изомер: 13,65, 13,94, 14,26 (два сигнала), 20,01, 20,54, 25,51, 25,60, 27,23 (два сигнала), 27,54, 28,33, 28,87, 29,18, 29,23, 29,30, 29,38, 29,51, 29,63, 59,63, 60,22, 127,10, 127,65, 127,70, 128,25 (два сигнала), 130,27, 130,33, 131,93, 133,63, 133,93, 140,30, 142,01, 168,35 (два сигнала).

MC (электрораспыление): 383,8 [M+Na]⁺.

Пример 9

(2E,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,11,14,17-тетраен-1-ол (9)

Суспензию LAH (0,027 г, 0,70 ммоль) в сухом ТГФ (7 мл) охлаждают до 0°C в инертной атмосфере и добавляют по каплям раствор этил (2E/Z,11Z,14Z,17Z) 2-этил-эйкоза-2,11,14,17-тетраеноата (30) (2E:2Z=1:1), (0,23 г, 0,68 ммоль). Смесь перемешивают при 0°C в течение 30 минут, а затем при температуре окружающей среды в течение 30 минут. Добавляют насыщенный NH₄ Cl (15 мл) и смесь дважды экстрагируют гептаном (20 мл). Объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (20 мл) и сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 8:1) дает 0,050 г (23%) (2E,11Z,14Z,17Z) 2-этил-эйкоза-2,11,14,17-тетраен-1-ола (9) в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,82-1,04 (2×т, 6H), 1,20-1,40 (м, 10H), 1,99-2,17 (м, 8H), 2,78 (м, 4H), 4,12 (c, 2H), 5,24-5,44 (м, 7H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 12,87, 14,24, 20,52, 25,49, 25,58, 27,19, 27,48, 27,78, 29,22 (2 сигнала), 29,39, 29,61, 30,08, 60,30, 127,09, 127,59, 127,64, 128,23 (2 сигнала), 130,29, 131,91, 139,84; MC (электрораспыление): 341,3 [M+Na]⁺.

Кроме того, элюирование (гептан:EtOAc, 6:1) дает 0,020 г (18%) (полностью Z) 2-этил-эйкоза-2,11,14,17-тетраен-1-ола (31) в виде бледно-желтого масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,82-0,99 (2×т, 6H), 1,15-1,40 (м, 10H), 1,95-2,15 (м, 8H), 2,79 (м, 4H), 4,02 (c, 2H), 5,23-5,44 (м, 7H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃); (электрораспыление): 341,3 [M+Na]⁺.

Пример 10

Этил (2E,5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-метил-эйкоза-2,5,8,11,14,17-гексаеноат (8)

Триэтил 2-фосфонопропионат (366 мкл, 1,7 ммоль) добавляют к суспензии гидрида натрия (70 мг, 60% дисперсия в минеральном масле, 1,75 ммоль) в сухом ТГФ (5 мл) при 0°C. Через 50 минут при 0°C смесь охлаждают до -25°C и добавляют (полностью Z)-октадека-3,6,9,12,15-пентаенал (400 мг, 1,55 ммоль) в ТГФ (1 мл). Смесь перемешивают в течение 50 минут при -25°C. Добавляют насыщенный водный раствор NH₄Cl и фазы разделяют. Водную фазу экстрагируют гексаном. Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором соли, водой и сушат (MgSO ₄). Выпаривание растворителей при пониженном давлении, а затем флэш-хроматография на силикагеле (95:5, гексан:EtOAc) дают сложный эфир 8. _H(300 МГц): 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 1,26 (т, J=7,1 Гц, 3H), 1,84 (д, J=1,3 Гц, 3H, CH₃ ), 2,05 (м, 2Н), 2,7-2,9 (м, 8Н), 2,92 (т, J=6,9 Гц, 2H), 4,16 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 5,2-5,5 (м, 11Н); _С(75 МГц) 12,36, 14,22, 20,52, 25,50, 25,59, 25,61, 25,68, 26,95, 60,42, 125,86, 126,95, 127,72, 127,78, 127,92, 128,09, 128,30, 128,41, 128,56, 129,48, 131,99, 139,69, 168,03.

Пример 11

Этил (2E/Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноат (32)

NaH (60% в минеральном масле, 0,28 г, 7,07 ммоль) суспендируют в сухом ТГФ (10 мл) в инертной атмосфере и при 0°C. Добавляют по каплям раствор триэтил-2-этокси-2-фосфоноацетата (3,79 г, 14,1 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл) и полученный бледно-желтый раствор перемешивают при 0°C в течение 20 минут. Затем добавляют октадека-2E,6Z,9Z,12Z,15Z-пентаенал (1,35 г, 4,71 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл), смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2,5 часов и разбавляют диэтиловым эфиром (100 мл). Органический слой промывают водой (50 мл) и сушат (Na₂ SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 98:2) дает 1,36 г (72%) указанного в заголовке соединения 32 как смеси 2E- и 2Z-изомера, 1:1, в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,95 (т, 3H), 1,23-1,34 (м, 6H), 1,35-1,52 (м, 2H), 1,95-2,10 (м, 4H), 2,20-2,50 (2×м, 2H), 2,70-2,90 (м, 8H), 3,60-3,90 (2×кв, 2H), 4,10-4,30 (2×кв, 2H) 5,21-5,45 (м, 10,5H), 6,23 (т, 0,5H); MC (электрораспыление): 423,3 [M+Na]⁺ .

Пример 12

Этил (2Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноат (33)

50 мг указанного в заголовке соединения в виде смеси изомеров, 1:1, нагревают до 100°C как есть в присутствии каталитического количества тиофенола (одна капля) в инертной атмосфере в течение трех часов. Смесь охлаждают и очищают с помощью флэш-хроматографии, с получением 20 мг (40%) чистого этила (2Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноата в виде бледно-желтого масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,95 (т, J=7,50 Гц, 3H), 1,23-1,34 (м, 6Н), 1,40-1,54 (м, 2Н), 1,95-2,10 (м, 4Н), 2,22 (кв, J=7,60 Гц, 2H), 2,70-2,90 (м, 8Н), 3,82 (кв, J=7,05 Гц, 2H), 4,15-4,26 (кв, J=7,11 Гц, 2H), 5,21-5,45 (м, 11Н), 6,23 (т, J=7,60 Гц, 1H); MC (электрораспыление): 423,3 [M+Na]⁺.

Пример 13

2-этокси-докоза-2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-гексаеновая кислота (26)

Смесь этил (2E/Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноата (32) (E:Z=1:1, 0,40 г, 1,00 ммоль) в этаноле (8 мл) в инертной атмосфере добавляют в раствор LiOH×H₂O (0,33 г, 8,00 ммоль) в воде (3 мл). Полученную мутную смесь доводят до 70°C в течение 30 минут, а затем перемешивают при температуре окружающей среды в течение 18 часов. Добавляют 1M HCl до установления pH=1 и смесь дважды экстрагируют гептаном (15 мл). Объединенные органические экстракты сушат (Na₂SO₄) и очищают с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 9:1, затем 4:1). Это дает 0,18 г (48%) указанного в заголовке соединения 26 в виде бесцветного масла. (2E:2Z=1:3).

Z-изомер: 0,91-0,99 (т, J=7,5 Гц, 3Н), 1,28 (т, J=7,0 Гц, 3Н), 1,48 (кв, J=7,4 Гц, 2Н), 1,98-2,09 (м, 4Н), 2,24 (кв, J=7,5 Гц, 2H), 2,70-2,90 (м, 8Н), 3,85 (кв, J=7,0 Гц, 2H), 5,25-5,40 (м, 10Н), 6,42 (т, J=7,6 Гц, 1H), 10,74 (ушир.с, 1Н).

Е-изомер: 0,86 (т, 3H), 1,34 (т, J=7,0 Гц, 3H), 1,42 (м, 2H), 1,98-2,09 (м, 4H), 2,54 (кв, J=7,6 Гц, 2H), 2,70-2,90 (м, 8H), 3,75 (кв, J=6,9 Гц, 2H), 5,20-5,40 (м, 11H), 10,74 (ушир.c, 1H), (минор изомер);

E- и Z-изомер: ¹³C-ЯМР (75 МГц, CDCl₃): 14,23, 15,33, 20,53, 25,52 (2 сигнала), 25,61 (3 сигнала), 26,94, 28,45, 28,55, 30,05, 30,34, 68,30, 98,01, 126,99, 127,85, 128,05, 128,07 (2 сигнала), 128,18, 128,22, 128,25, 128,46, 128,53, 129,33, 131,72, 132,00, 174,90, (оба изомеры); MC (электрораспыление): 371,2 [M-H]^-.

Пример 14

(2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-

1-ол (27) и (полностью Z) 2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ол (34)

LAH (0,021 г, 0,55 ммоль) суспендируют в сухом ТГФ (8 мл) и выдерживают при 0°C в инертной атмосфере. К этой суспензии добавляют по каплям раствор этил-(2E/Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаеноата (32) (1:1, 0,20 г, 0,50 ммоль) в сухом ТГФ (2 мл). Полученную смесь перемешивают при 0°C в течение десяти минут, а затем 50 минут при температуре окружающей среды. Добавляют насыщенный NH₄Cl (15 мл) и смесь дважды экстрагируют гептаном (20 мл). Объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (15 мл) и сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc 9:1) дает 0,033 г (18%) 2-этокси-докоза-2E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-гексаен-1-ола (27) в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,95 (т, J=7,49 Гц, 3H), 1,28 (т, J=6,96 Гц, 3H), 1,30-1,44 (кв, J=7,62 Гц, 2H), 1,95-2,09 (м, 6H), 2,70-2,90 (м, 8H), 3,68 (кв, J=6,97 Гц, 2H), 4,12 (д, J=5,31 Гц, 2H), 4,46 (т, J=7,58 Гц, 1H), 5,26-5,38 (м, 10H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl ₃): 14,24, 14,56, 20,53, 25,51, 25,60, 25,74, 26,62, 30,91, 59,43, 62,20, 99,42, 126,99, 127,86, 127,98, 128,05, 128,11, 128,20, 128,39, 128,54, 129,85, 132,01, 153,48 (2 сигнала скрыты); MC (электрораспыление): 381,3 [M+Na]⁺.

0,11 г (61%) (полностью Z) 2-этокси-докоза-2,7,10,13,16,19-гексаен-1-ола (34) также выделяют в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,94 (т, J=7,51 Гц, 3H), 1,25 (т, J=7,02 Гц, 3H), 1,30-1,50 (кв, J=7,82 Гц, 2H), 1,98-2,15 (м, 6H), 2,70-2,85 (м, 8H), 3,84 (кв, J=7,02 Гц, 2H), 4,05 (ушир.c, 1H), 4,78 (т, J=7,21 Гц, 1H), 5,20-5,45 (м, 10H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃ ): 14,24, 15,53, 20,52, 24,45, 25,51, 25,60, 26,94, 29,61, 62,45, 64,77, 112,63, 126,99, 127,86, 127,92, 128,12, 128,18, 128,45, 128,53, 129,99, 131,99, 152,87 (3 сигнала скрыты); MC (электрораспыление): 381,3 [M+Na]⁺.

Пример 15

Этил (2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-икоза-2,4,6,11,14,17-гексаеноат (12)

Добавляют карбонат калия (395 мг, 2,9 ммоль) в воде (286 мкл) к энергично перемешиваемой смеси (2E,6Z,9Z,12Z,15Z)-октадека-2,6,9,12,15-пентаенала (370 мг, 1,4 ммоль) и триэтилфосфоноацетата (344 мл, 1,72 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивают в течение 48 часов при комнатной температуре, добавляют воду и фазы разделяют. Водную фазу экстрагируют гексаном. Объединенные органические фазы промывают водой и сушат (MgSO₄). Выпаривание растворителей при пониженном давлении, а затем флэш-хроматография на силикагеле (95:5, гексан:EtOAc) дают сложный эфир (180 мг, 39%) и извлеченный альдегид (80 мг). _H (300 МГц): 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 1,26 (т, J=7,1 Гц, 3H), 2,04 (м, 2Н), 2,1-2,3 (м, 4Н), 2,7-2,9 (м, 6Н), 4,17 (кв, J=7,1 Гц, 2H), 5,2-5,5 (м, 8Н), 5,77 (д, J=15,4 Гц, 1H), 6,1-6,2 (м, 2Н), 7,22 (дд, J=15,4 Гц, J=9,9 Гц, 1H); _C(75 МГц) 14,23, 14,28, 20,53, 25,51, 25,60, 25,65, 26,41, 32,88, 60,14, 119,56, 126,97, 127,81, 128,02, 128,20, 128,53, 128,64, 128,75, 132,00, 143,45, 144,77, 167,18.

Пример 16

(2E,4E,8Z,11Z,14Z,172)-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеновая кислота (13)

Этил (2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-икоза-2,4,6,11,14,17-гексаеноат (340 мг, 1,04 ммоль) растворяют в изопропаноле (13 мл), и добавляют LiOH (87 мг, 2,1 ммоль) в воде (5 мл), и смесь перемешивают при комнатной температуре течение ночи. Реакционную смесь выливают в воду и доводят pH до pH 2-3 с помощью HCl. Раствор экстрагируют этилацетатом/гексаном, сушат (MgSO₄), и выпаривание растворителей при пониженном давлении дает кислоту 13. Кислоту очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (8:2, гексан:EtOAc); 0,96 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃), 2,04 (м, 2Н), 2,1-2,3 (м, 4Н), 2,7-2,9 (м, 6Н), 5,2-5,5 (м, 8Н), 5,77 (д, J=15,3 Гц, 1H), 6,1-6,2 (м, 2Н), 7,31 (дд, J=15,4 Гц, J=10,1 Гц, 1H); _C(75 МГц) 14,25, 20,55, 25,54, 25,63, 25,67, 26,33, 32,96, 118,49, 126,99, 127,82, 128,00, 128,26, 128,58, 128,64, 128,88, 132,05, 145,05, 147,26, 172,08.

Пример 17

Этил (2E,4E,7Z,10Z,13Z-16Z-19Z)-докоза-2,4,7,13,16,19-гептаеноат (14)

Стадия 1:

Этил (полностью Z)-2-метансульфанил-докоза-4,7,10,13,16,19-гексаеноат (2,00 г, 4,97 ммоль) растворяют в CH₂Cl₂ (50 мл) и охлаждают до -20°C в инертной атмосфере. Раствор 3-хлорпербензойной кислоты (mCPBA, 1,01 г, 4,97 моль) в CH ₂Cl₂ (20 мл) добавляют по каплям к этой смеси в течение пяти минут, и полученную смесь перемешивают при -20°C в течение одного часа. Холодную смесь распределяют между насыщенным Na₂SO₃ (100 мл) и диэтиловым эфиром (100 мл). Органический слой дважды промывают насыщенным NaHCO ₃ (100 мл) и сушат (Na₂SO₄).

Очистка с помощью флэш-хроматографи (гептан:EtOAC, 4:1, затем, 1:1, затем гептан:EtOAc) дает 0,73 г (35%) этил (полностью Z)-2-метансульфинил-докоза-4,7,10,13,16,19-гексаеноата в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,95 (т, 3H), 1,28 (т, 3H), 2,05 (м, 2H), 2,64 (c, 3H), 2,71-2,86 (м, 12H), 3,48 (м, 1H), 4,21 (кв, 2H), 5,27-5,49 (м, 12H); MC (электрораспыление): 441,2 [M+Na]⁺.

Стадия 2:

Этил (полностью Z)-2-метансульфинил-докоза-4,7,10,13,16,19-гексаеноат (PRB-66, 0,68 г, 1,62 ммоль) растворяют в сухом толуоле (40 мл) и добавляют CaCO₃ (0,16 г, 1,62 ммоль). Эту смесь перемешивают при 105°C в инертной атмосфере в течение трех часов, охлаждают, разбавляют гептаном (50 мл) и промывают 1M HCl (50 мл) и насыщенным раствором соли (50 мл). Органический слой сушат (Na₂SO₄) и очищают с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 97:3) с получением 0,38 г (66%) указанного в заголовке соединения 14 в виде бледно-желтого масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,95 (т, J=7,51 Гц, 3H), 1,25 (т, J=7,13 Гц, 3H), 2,05 (кв, J=7,35 Гц, 2H), 2,76-2,88 (м, 8H), 3,06 (т, J=7,25 Гц, 2H), 4,19 (квинт., J=7,13 Гц, 2H), 5,28-5,44 (м, 10H), 5,70-5,79 (м, 1H), 5,87 (д, J=15,22 Гц, 1H), 6,12 (дт, J=11,53 Гц, J=0,71 Гц, 1H), 7,53-7,67 (ддд, J=15,24 Гц, J=11,61 Гц, J=1,02 Гц, 1H); ¹³C-ЯМР (75 МГц, CDCl₃): 14,20, 14,24, 20,49, 25,48, 25,57, 25,59, 25,62, 26,50, 60,23, 121,80, 126,45, 126,58, 126,96, 127,68, 127,79, 127,92, 128,26, 128,43, 128,50, 129,40, 131,94, 138,53, 138,86, 167,01; MC (электрораспыление): 377,2 [M+Na]⁺.

Пример 18

(2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаеновая кислота (15)

Этил (2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-докоза-2,4,7,13,16,19-гептаеноат (14), (0,26 г, 0,73 ммоль) растворяют в EtOH (10 мл) и добавляют смесь LiOH (0,25 г, 5,9 ммоль) в воде (2,5 мл). Смесь перемешивают при температуре окружающей среды в инертной атмосфере в течение 17 часов, добавляют воду (20 мл) и 1M HCl до установления рН=1. Эту смесь экстрагируют дважды гептаном (20 мл) и органический слой сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 2:1, затем 1:1) дает 0,050 г (21%) указанного в заголовке соединения 15 в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,95 (т, J=7,54 Гц, 3H), 2,05 (квинт., J=7,51 Гц, 2H), 2,76-2,88 (м, 9H), 3,06 (т, 2H), 5,31-5,43 (м, 10H), 5,84-5,91 (м, 1H), 5,88 (д, J=15,17 Гц, 1H), 6,16 (дт, J=11,36 Гц, 0,70, 1H), 7,63-7,77 (ддд, J=15,21 Гц, J=11,66 Гц, J=0,90 Гц, 1H); MC (электрораспыление): 325,1 [M-H]^-.

Пример 19

(2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаен-1-ол (16)

Этил (2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаеноат (14) (0,12 г, 0,34 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (3 мл) и добавляют по каплям к перемешиваемой суспензии LAH (0,013 г, 0,35 ммоль) в сухом ТГФ (7 мл) при 0°C. Смесь перемешивают при 0°C в течение 45 минут, добавляют насыщенный NH₄Cl (5 мл) и фильтруют через тонкий пад из целита. Целит промывают водой (10 мл) и гептаном (10 мл) и объединенный водный слой экстрагируют гептаном (10 мл). Объединенный органический слой сушат (MgSO ₄) и очищают с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 7:1). Это дает 0,070 г (66%) указанного в заголовке соединения 16 в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,95 (т, J=7,52 Гц, 3H), 2,05 (квинт., J=7,34 Гц, 2H), 2,76-2,91 (м, 8H), 2,96 (м, 2H), 4,20 (д, J=5,67 Гц, 2H), 5,28-5,46 (м, 11H), 5,78-5,87 (дт, J=15,12 Гц, 5,80 Гц, 1H), 6,00 (т, J=10,81 Гц, 1H), 6,52 (дд, J=15,12 Гц, 11,05 Гц, 1H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 14,26, 20,55, 22,68, 25,53, 25,65, 26,08, 31,87, 63,49, 126,37, 127,00, 127,60, 127,86, 127,91, 128,02 (2 сигнала), 128,30 (2 сигнала), 128,59, 130,40, 132,05, 132,32 (один сигнал скрыт); MC (электрораспыление): 335,2 [M+Na]⁺.

Пример 20

Этил (2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-метил-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеноат (10)

Триэтил 2-фосфонопропионат (458 мкл, 2,13 ммоль) добавляют к суспензии гидрида натрия (88 мг, 60% дисперсия в минеральном масле, 2,2 ммоль) в сухом ТГФ (6 мл) при 0°C. Через 50 минут при 0°C смесь охлаждают до -40°C и добавляют (2E,6Z,9Z,12Z,15Z)-октадека-2,6,9,12,15-пентаенал (500 мг, 1,94 ммоль) в ТГФ (1 мл). Смесь перемешивают в течение 60 минут при температуре от -40°C до -20°C. Добавляют насыщенный водный раствор NH₄Cl и фазы разделяют. Водную фазу экстрагируют диэтиловым эфиром. Объединенные органические фазы промывают насыщенным раствором соли, водой и сушат (MgSO ₄). Выпаривание растворителей при пониженном давлении дает сложный эфир 10.

Пример 21

(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-метил-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеновая кислота (11)

К раствору этил (2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-метил-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеноата (10) в метаноле добавляют водный раствор KOH (8 экв.) и смесь нагревают до 60-70°C в течение 2 часов. Раствор охлаждают, добавляют воду и смесь подкисляют. Затем смесь экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы промывают водой и сушат (MgSO ₄). Выпаривание растворителей при пониженном давлении, а затем флэш-хроматография на силикагеле (гексан-EtOAc, 8:2) дает кислоту 11. _Н(300 МГц): 0,96 (т, J=7,5 Гц, 3Н, СН₃ ), 1,91 (д, J=0,75 Гц, 3Н, CH₃), 2,08 (м, 2H), 2,2-2,4 (м, 4H), 2,7-2,9 (м, 6Н), 5,2-5,5 (м, 8Н), 6,11 (дт, J=15,0, J=6,5 Гц, 1Н), 6,37 (дд, J=15,0 Гц, J=11,3 Гц, 1Н), 7,26 (ушир.д, J=11,3 Гц, 1Н); _С(75 МГц), 12,16, 14,24, 20,53, 25,52, 25,61, 25,67, 26,57, 33,24, 124,44, 126,34, 126,97, 127,82, 128,04, 128,21, 128,54, 128,70, 128,74, 132,01, 140,79, 143,47, 174,28.

Пример 22

Этил (2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-икоза-2,4,8,11,14,17-гексаеноат 17

Суспензию NaH (60% в минеральном масле, 0,11 г, 2,79 ммоль) в сухом ТГФ (15 мл) доводят до 0°C в инертной атмосфере и добавляют по каплям триэтил 2-фосфонобутират (0,66 мл, 2,79 ммоль). Смесь перемешивают при 0°C в течение десяти минут, добавляют раствор (2E,6Z,9Z,12Z,15Z)-октадека-2,6,9,12,15-пентаенала (0,48 г, 1,86 ммоль) в сухом ТГФ (5 мл) и перемешивают при 0°C в течение дополнительных 30 минут. Смесь разбавляют диэтиловым эфиром (30 мл), промывают водой (30 мл) и сушат (Na₂ SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 98:2) дает 0,39 г (59%) сложного эфира 17 (2E:2Z=9:1) в виде бесцветного масла.

Смесь этих продуктов очищают второй раз, на этот раз с помощью флэш-хроматографии, с использованием инструмента для флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 99:1). Это дает 0,095 г (14%) чистого этил-(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаноата (17) в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,95 (т, J=7,53 Гц, 3H), 1,01 (т, J=7,44 Гц, 3H), 1,28 (т, J=7,12 Гц, 3H), 1,98-2,15 (м, 2H), 2,15-2,29 (м, 4H), 2,38 (кв, J=7,44 Гц, 2H), 2,70-2,90 (м, 6H), 4,18 (кв, J=7,11 Гц, 2H), 5,22-5,44 (м, 8H), 5,98-6,12 (м, 1H), 6,28-6,41 (дд, J=11,20 Гц, J=11,20 Гц, 1H), 7,09 (д, J=11,17 Гц, 1H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 14,22, 14,30, 20,24, 20,54, 25,52, 25,61, 25,67, 26,65, 33,18, 60,30, 126,05, 126,98, 127,84, 128,09, 128,17, 128,54, 128,64, 128,82, 131,86, 132,01, 137,93, 142,14, 173,05 (один сигнал скрыт); MC (электрораспыление): 379,2 [M+Na]⁺ .

Малое количество (20 мг, 3%) этил (2Z,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаноата (35) также выделяют в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,95 (т, J=7,52 Гц, 3H), 1,04 (т, J=7,36 Гц, 3H), 1,29 (т, J=7,14 Гц, 3H), 1,95-2,12 (м, 2Н), 2,15-2,25 (м, 6Н), 2,27 (кв, J=7,36 Гц, 2H), 2,75-2,90 (м, 6Н), 4,18 (кв, J=7,14 Гц, 2H), 5,22-5,44 (м, 8Н), 5,77-5,95 (м, 1Н), 6,29-6,34 (дд, J=0,82 Гц, J=11,09 Гц, 1Н), 6,97-7,11 (дд, J=11,10 Гц, J=11,08 Гц, 1H).

Пример 23

(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-икоза-2,4,8,11,14,17-

гексаеновая кислота (18)

Этил-(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаноат (17) (0,040 г, 0,112 ммоль) растворяют в этаноле (4 мл) и добавляют раствор LiOH × H₂O (0,038 г, 0,898 ммоль) в воде (1 мл). Смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 15 часов, а затем пять часов при 70°C. Смесь охлаждают, добавляют 1M HCl до установления рН=1 и разбавляют водой (2 мл). Смесь экстрагируют дважды гептаном (10 мл) и объединенные органические экстракты сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 95:5, затем 4:1) дает 0,028 г (76%) указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,90-1,07 (2×т, 6H), 2,00-2,10 (м, 2H), 2,20-2,30 (м, 4H), 2,35-2,50 (кв, 2H), 2,75-2,90 (м, 6H), 5,27-5,44 (м, 8H), 6,05-6,20 (м, 1H), 6,30-6,43 (м, 1H), 7,50-7,70 (м, 1H); MC (электрораспыление): 327,2 [M-H]^-.

Пример 24

(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-икоза-2,4,11,14,17-гексаен-1-ол (19)

Суспензию LAH (0,007 г, 0,168 ммоль) в сухом ТГФ (2 мл) охлаждают до 0°C в инертной атмосфере. К этой суспензии добавляют по каплям раствор этил-(2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаноата (17) (E:Z=9:1, 0,060 г, 0,168 ммоль). Смесь перемешивают при 0°C в течение двух часов, а затем перемешивают при температуре окружающей среды в течение 17 часов, а затем добавляют насыщенный NH₄Cl (5 мл). Смесь дважды экстрагируют гептаном (10 мл), и объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (10 мл) и сушат (Na₂SO₄).

Очистка с помощью флэш-хроматографи (гептан:EtOAc, 6:1) дает 0,030 г (57%) (2E,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаен-1-ола (19) в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H), 1,02 (т, J=7,5 Гц, 3H), 1,98-2,09 (м, 2H), 2,12-2,26 (м, 6H), 2,77-2,89 (м, 6H), 4,07 (c, 2H), 5,27-5,41 (м, 8H), 5,61-5,75 (м, 1H), 5,96 (д, J=10,9 Гц, 1H), 6,20-6,34 (дд, J=10,9 Гц, 14,9 Гц, 1H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 13,46, 14,24, 20,53, 21,52, 25,51, 25,59, 25,67, 27,11, 32,89, 66,63, 124,91, 125,95, 127,00, 127,90, 128,07, 128,25 (2 сигнала), 128,51, 129,28, 132,01, 134,33, 141,07; MC (электрораспыление): 337,2 [M+Na]⁺.

Малое количество (2Z,4E,8Z,11Z,14Z,17Z)-2-этил-эйкоза-2,4,8,11,14,17-гексаен-1-ола (36, 0,004 г, 7%) также выделяют в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H), 1,05 (т, J=7,5 Гц, 3H), 1,95-2,09 (м, 2H), 2,14-2,24 (м, 6H), 2,76-2,84 (м, 6H), 4,23 (c, 2H), 5,23-5,45 (м, 8H), 5,59-5,74 (м, 1H), 5,89 (д, J=10,9 Гц, 1H), 6,29-6,42 (дд, J=10,9 Гц, J=16,8 Гц, 1H).

Пример 25

Этил (2E/Z,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаеноат (37)

Триэтил-3-метил-4-фосфоно-2-бутеноат (0,32 мл, 1,09 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (12 мл) и сухом DMPU (3 мл) и доводят до 0°C в инертной атмосфере. Добавляют по каплям н-BuLi (0,68 мл, 1,09 ммоль), смесь перемешивают при 0°C в течение 20 минут, а затем доводят до -78°C. Смесь перемешивают при -78°C в течение пяти минут, добавляют по каплям (полностью Z)-октадека-9,12,15-триенал (0,22 г, 0,84 ммоль) в сухом ТГФ (3 мл) и смеси позволяют медленно достичь -10°C в течение 80 минут. Добавляют насыщенный NH₄Cl (20 мл) и смесь экстрагируют дважды гептаном (30 мл). Органический слой сушат (Na₂SO₄) и очищают с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 98:2). Это дает 0,31 г (95%) указанного в заголовке соединения в виде смеси E- и Z-изомера 1:1 в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,95 (т, 6H), 1,20-1,50 (м, 26H), 1,95 (c, 3H), 1,98-2,35 (м, 12H), 2,40 (c, 3H), 2,78 (м, 8H), 4,13 (кв, 4H), 5,25-5,40 (м, 12H), 5,57 (c, 1H), 5,66 (c, 1H), 6,04-6,16 (м, 2H), 7,54 (д, 1H); MC (электрораспыление): 395,3 [M+Na]⁺.

Пример 26

(2E,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаеновая кислота (20)

Этил (2E/Z,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаеноат (37) (2E:2Z=1:1, 0,30 г, 0,81 ммоль) растворяют в EtOH (10 мл) и добавляют LiOH × H₂O (0,27 г, 6,44 ммоль) в воде (2,5 мл). Смесь перемешивают при 70°C в инертной атмосфере в течение двух часов, охлаждают и добавляют 1M HCl до установления рН=1. Смесь экстрагируют дважды гептаном (30 мл) и объединенный органический слой сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 4:1) дает 0,090 г (32%) указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,95 (т, 3H), 1,25-1,50 (м, 10H), 1,98-2,15 (м, 7H), 2,20-2,30 (м, 2H), 2,79 (м, 4H), 5,27-5,42 (м, 6H), 5,61 (c, 1H), 6,11-6,21 (дт, J=15,8 Гц, J=7,0 Гц, 1H), 7,53 (д, J=15,8 Гц, 1H), 11,70 (ушир.c, 1H); ¹³C-ЯМР (75 МГц, CDCl₃): 14,25, 20,53, 21,33, 25,51, 25,60, 27,21, 29,06, 29,20, 29,26, 29,36, 29,61, 33,41, 115,01, 127,11, 127,59, 127,66, 128,24, 128,26, 130,32, 131,92, 140,31, 153,89, 171,81; MC (электрораспыление): 345,3 [M+H]⁺, 367,3 [M+Na]⁺.

Пример 27

(2E,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаеновая кислота (21)

Суспензию LAH (0,011 г, 0,282 ммоль) в сухом ТГФ (8 мл) доводят до 0°C в инертной атмосфере и добавляют по каплям раствор этил (2E/Z,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаеноата (2E:2Z=1:1, 0,10 г, 0,268 ммоль) в сухом ТГФ (2 мл). Смесь перемешивают при 0°C в течение одного часа, затем при температуре окружающей среды в течение 30 минут, а затем добавляют 10% NH₄ Cl (10 мл). Смесь дважды экстрагируют гептаном (20 мл) и объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (20 мл) и сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 9:1) дает 0,030 г (34%) (2E,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаен-1-ола (21) в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,96 (т, J=7,5 Гц, 3H), 1,20-1,40 (м, 10H), 1,76 (c, 3H), 1,99-2,13 (м, 6H), 2,76-2,82 (м, 4H), 4,24 (д, J=6,93 Гц, 2H), 5,26-5,41 (м, 6H), 5,54 (т, J=6,9 Гц, 1H), 5,60-5,75 (дт, J=15,6 Гц, J=6,9 Гц, 1H), 6,05 (д, J=15,6 Гц, 1H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 12,59, 14,26, 20,54, 25,51, 25,61, 27,22, 29,18, 29,23, 29,38, 29,48, 29,62, 32,83, 59,35, 127,11, 127,66 (2 сигнала), 128,26 (2 сигнала), 130,34, 130,66, 131,94, 133,88, 136,62; MC (электрораспыление): 353,3 [M+Na]⁺.

(2Z,4E,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,13,16,19-пентаен-1-ол (38) выделяют в виде бесцветного масла (0,04 г, 45%)

¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,96 (т, J=7,5 Гц, 3H), 1,20-1,45 (м, 10H), 1,83 (c, 3H), 1,98-2,15 (м, 6H), 2,76-2,82 (м, 4H), 4,25 (д, J=7,19 Гц, 2H), 5,26-5,49 (м, 7H), 5,68-5,83 (дт, J=15,50 Гц, 6,95, 1H), 6,39 (д, J=15,5 Гц, 1H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃ ): 14,07, 20,59, 22,68, 25,51, 25,60, 27,22, 29,01, 29,22, 29,39, 29,63, 31,87, 33,24, 58,38, 126,06, 126,21, 127,11, 127,67, 128,25 (2 сигнала), 130,32, 131,93, 133,16, 135,76; MC (электрораспыление): 353,3 [M+Na]⁺.

Пример 28

Этил (2Z/2E,4E,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,13,16,19-гептаеноат (22)

Стадия 1:

Диизопропиламин (0,84 мл, 5,98 ммоль) растворяют в сухом ТГФ (20 мл) и охлаждают до 0°C в инертной атмосфере. Добавляют по каплям н-BuLi (1,6 M в гексане, 3,58 мл, 5,72 ммоль), смесь перемешивают при 0°C в течение десяти минут, а затем охлаждают до -78°C. Добавляют по каплям смесь этил (полностью Z)-2-этил-докоза-4,7,10,13,16,19-гексаеноата (2,00 г, 5,20 ммоль) в сухом ТГФ (20 мл) в течение 20 минут, полученный темно-зеленый раствор перемешивают при -78°C в течение десяти минут, а затем добавляют раствор I₂ (1,98 г, 7,80 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл). Затем смеси дают возможность достичь температуры окружающей среды в течение 80 минут, распределяют между насыщенным Na₂SO₃ (40 мл) и гептаном (40 мл). Водный слой экстрагируют гептаном (40 мл) и объединенные органические экстракты промывают 1M HCl (40 мл) и сушат (Na ₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 98:2) дает 1,70 г (64%) этил (полностью Z)-2-этил, 2-йод-докоза-4,7,10,13,16,19-гексаеноата. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,88-0,99 (м, 6H), 1,19-1,31 (м, 4H), 1,98-2,19 (м, 4H), 2,75-2,95 (м, 12H), 5,28-5,45 (м, 12H); MC (электрораспыление): 533,2 [M+Na]⁺.

Стадия 2:

Этил (полностью Z)-2-этил-2-йод-докоза-4,7,10,13,16,19-гексаеноат (1,55 г, 3,04 ммоль) растворяют в сухом диэтиловом эфире (50 мл) в инертной атмосфере и добавляют DBU (0,45 мл, 3,04 ммоль). Смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 23 часов, разбавляют гептаном (50 мл) и органический слой промывают насыщенным NH₄Cl (50 мл). Водный слой экстрагируют гептаном (40 мл) и объединенные органические экстракты промывают 0,1M HCl (40 мл) и сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 98:2) дает 1,16 г (количественн.) указанного в заголовке соединения 22 (E/Z=4:1) в виде бесцветного масла.

¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃):

E-изомер: 0,84-0,99 (2×т, 6H), 1,19-1,28 (т, 3H), 2,01-2,09 (м, 4H), 2,76-2,95 (м, 10H), 4,11 (кв, 2H), 5,20-5,45 (м, 10H), 5,55-5,75 (м, 1H), 6,00-6,20 (м, 2H).

Z-изомер: 0,84-0,99 (2×т, 6H), 1,19-1,28 (т, 3H), 1,70-1,90 (м, 2H), 2,01-2,09 (м, 2H), 2,76-2,95 (м, 10H), 4,23 (кв, 2H), 5,20-5,45 (м, 11H), 5,55-5,75 (м, 1H), 6,10-6,20 (м, 1H). MC (электрораспыление): 405,3 [M+Na]⁺.

Пример 29

(2E,4E,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,13,16,19-гептаен-1-ол (23)

Суспензию LAH (0,044 г, 1,15 ммоль) в сухом ТГФ (10 мл) в инертной атмосфере доводят до 0°C и добавляют по каплям смесь этил (2E/Z,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаеноата (2E:2Z=1:1, 0,40 г, 1,05 ммоль) в сухом ТГФ (5 мл). Смесь перемешивают при 0°C в течение одного часа, затем при температуре окружающей среды в течение одного часа и гасят посредством добавления насыщенного NH₄Cl (10 мл). Смесь дважды экстрагируют гептаном (20 мл) и объединенные органические экстракты промывают насыщенным раствором соли (20 мл) и сушат (Na₂SO₄). Очистка с помощью флэш-хроматографии (гептан:EtOAc, 9:1) дает 0,110 (31%) (2E,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаен-1-ола (23) в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl ₃): 0,84-0,99 (2×т, 6H), 2,01-2,20 (м, 4H), 2,77-2,90 (м, 8H), 2,92-2,98 (м, 2H), 3,50 (м, 2H), 5,28-5,41 (м, 10H), 6,00-6,45 (м, 3H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃ ): 11,64, 14,25, 20,54, 24,00, 25,52, 25,62, 25,63, 26,16, 47,80, 65,78, 126,80, 126,99, 127,70, 127,83, 127,97, 128,30, 128,50, 128,56, 128,71, 130,03, 132,02, 132,68, 133,09, 135,51; MC (электрораспыление): 363,2 [M+Na]⁺.

0,040 г (11%) (2Z,4E,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-2-этил-докоза-2,4,7,10,13,16,19-гептаен-1-ола (39) также выделяют в виде бесцветного масла. ¹H-ЯМР (200 МГц, CDCl₃): 0,86-0,99 (2×т, 6H), 2,02-2,19 (м, 4H), 2,76-2,90 (м, 10H), 3,53 (м, 2H), 5,23-5,44 (м, 13H); ¹³C-ЯМР (50 МГц, CDCl₃): 11,38, 14,25, 20,54, 23,41, 25,52, 25,63 (2 сигнала), 28,51, 42,58, 65,23, 126,99, 127,86, 128,10, 128,12, 128,14, 128,16, 128,26 (2 сигнала), 128,56, 129,09, 132,03, (3 сигнала скрыты).

Пример 30

Этил (2E,4E,6E,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,6,10,13,16,19-гептаеноат (24)

Раствор триэтил 3-метил-4-фосфоно-2-бутеноата (485 мкл, 1,96 ммоль) в смеси безводного ТГФ-DMPU 5:1 (20 мл) охлаждают до 0°C и добавляют н-BuLi (2,5 M в гексане, 760 мкл, 1,90 ммоль). Смесь перемешивают при 0°C в течение 20 мин, а затем охлаждают до -78°C. Добавляют раствор (2E,6Z,9Z,12Z,15Z)-октадека-2,4,6,10,13,16,19-пентаенала в ТГФ (2 мл) и реакционную смесь перемешивают при -78°C в течение часа. Затем смеси позволяют нагреваться до 0°C в течение часа. Затем добавляют насыщенный водный раствор NH ₄Cl и фазы разделяют. Водную фазу экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы промывают водой и сушат (MgSO ₄). Выпаривание растворителей при пониженном давлении, а затем флэш-хроматография на силикагеле (95:5, гексан-EtOAc) дают сложный эфир (120 мг).

Пример 31

Этил (2E,4E,6E,10Z,13Z,16Z,19Z)-3-метил-докоза-2,4,6,10,13,16,19-гептаеновая кислота (25)

К раствору сложного эфира в метаноле добавляют водный раствор KOH (8 экв.) и смесь нагревают до 60-70°C в течение 2 часов. Раствор охлаждают, добавляют воду и смесь подкисляют. Затем смесь экстрагируют этилацетатом. Объединенные органические фазы промывают водой и сушат (MgSO₄). ВЫпаривание растворителей при пониженном давлении дает кислоту. _Н(300 МГц): 0,95 (т, J=7,5 Гц, 3H, CH₃ ), 2,05 (2H, м), 2,15-2,25 (4H, м), 2,28 (д, J=0,93 Гц, 3H), 2,7-2,9 (м, 6H), 5,2-5,5 (м, 8H), 5,75 (ушир.c, 1H), 5,85-5,95 (м, 1H), 6,10-6,25 (2H, м), 6,60 (дд, J=15,3 Гц, J=10,4 Гц, 1H); _С(75 МГц) 13,91, 14,27, 20,55, 25,54, 25,63, 25,69, 26,76, 32,92, 117,70, 126,99, 127,86, 128,13, 128,17, 128,56, 128,60, 128,92, 130,48, 132,05, 133,54, 135,78, 139,02, 155,21, 172,15.

Биологическая активность

Пример исследования 1: Активирование и связывание с доменом связывания лиганда PPAR , , и RXR человека

Измеряют активирование и связывание новых соединений с доменом связывания лигандов (LBD) ядерных рецепторов PPAR , PPAR , PPAR или RXR человека (h).

Для этого исследования используют нестационарную систему трансфекции ген/клетка. Химерные конструкты получают из LBD человека. DBD PPAR , PPAR , PPAR или RXR замещают GAL4DBD. Получают следующие конструкты плазмид: pSG5-GAL4-hPPAR , pSG5-GAL4-hPPAR , pSG5-GAL4-hPPAR и pSG5-GAL4-hRXR . Плазмиды, LUC химер и репортерные LUC трансфицируются в клетки COS-1, и белок люцифераза анализируется, как описывается в способах.

Лиганд для PPAR (Wy 14,643), лиганд для RXR (9-цис-ретиноевая кислота) и лиганд для PPAR : розиглитазон, и лиганд для PPAR : безафибрат используют в качестве положительных контролей.

Способ:

Жирные кислоты/лиганды

Wy-14.643, 9-цис-ретиноевая кислота (9-цис-RA) или розиглитазон и новые соединения (исходные растворы) разбавляют до конечной концентрации 0,1 M в ДМСО. Затем их разбавляют до 10 мМ в ДМСО и хранят в 1,5-мл пробирках (гомополимерные, пластиковые пробирки), продувают аргоном и хранят при -20°C.

Культуры клеток

Клетки COS-1 (ATCC № CRL 1650) культивируют в DMEM, дополненной L-глутамином (2 мМ), пенициллином (50 Ед./мл), стрептомицином (50 мкг/мл), фунгизоном (2,5 мкг/мл) и 10% инактивированной FBS. Клетки инкубируют при 37°C в увлажненной атмосфере 5% CO₂ и 95% воздуха и используют для нестационарного трансфицирования. Каждый третий день клетки в каждой колбе отделяют в новые колбы, содержащие свежие среды.

Трансфицирование

Клетки (1,5×1 миллион) помещают в 30 мм чашки для тканей (шестилуночные планшеты), за 1 день перед трансфицированием. Нестационарное трансфицирование с помощью липофектамина 2000 осуществляют, как описано (Invitrogen, Carlsbad, CA). Каждая лунка принимает 990 нг плазмиды: 320 нг репортера ((UAS)5-tk-LUC (UAS = расположенная выше активирующая последовательность и LUC = люцифераза), 640 нг pGL3 основного (пустой вектор) и 30 нг плазмиды экспрессии из pSG5-GAL4-hPPAR , pSG5-GAL4-hPPAR , pSG5-GAL4-hPPAR или pSG5-GAL4-hRXR , которые представляют собой химерные конструкты экспрессии, содержащие домен связывания лиганда (LBD) PPAR , PPAR , PPAR и RXR человека (h). LPG, Wy 14.643, 9-цис-RA или BRL (10 мкМ) и ДМСО (контроль) добавляют к средам через 5 час после трансфицирования. Трансфицированные клетки поддерживают в течение 24 часов перед лизированием с помощью репортерного лизисного буфера. Связывание LPG или лигандов с LBD PPAR активирует связывание GAL4 с UAS, что, в свою очередь, стимулирует промотор tk к запуску экспрессии люциферазы. Активность люциферазы измеряют с использованием люминометра (люминометр TD-20/20; Turner Designs, Sunnycvale, CA) и нормируют на содержание белка.

Результаты:

Результаты, в соответствии с таблицей 1, показывают, что некоторые из новых соединений, охватываемых настоящим изобретением, имеют потенциал селективных модуляторов/активаторов PPAR (соединение 4, 11 и 13). Результаты также показывают, что некоторые из соединений представляют собой модуляторы/активаторы pan PPAR, в дополнение к тому, что они являются лигандами RXR (соединение 25).

Таблица 1 Активирование люциферазы (кратное активирование) в результате связывания лиганда с новыми соединениями при концентрации 10 мкМ, с доменом связывания лиганда PPAR , и человека, в дополнение к RXR человека
Соединение	hPPAR	hPPAR	hPPAR	hRXR
Отрицательный контроль	1,00	1,00	1,00	1,00
Wy14643	2,27±0,04
9-(Z)-ретиноевая кислота				2,72±0,32
Безафибрат			0,99±0,01
Розиглитазон		13,27±0,56
DHA	1,57±0,19	1,86±0,17	1,09±0,01	0,83±0,09
4	4,51±0,52	1,56±0,12	1,28±0,08	0,90±0,08
11	6,79±0,21	1,67±0,11	1,17±00,20	0,84±0,09
13	4,89±0,31	1,63±0,06	1,11±0,16	0,81±0,05
25	8,27±0,81	4,32±0,29	1,47±0,38	1,57±0,08

Примеры исследования 2: Ингибирование NF- B в линиях клеток моноцитов человека.

Способ

Вещества

Новые соединения и DHA растворяют до 12,5 мкМ в ДМСО, продувают аргоном и хранят при -20°C. 10 мкМ дексаметазона в ДМСО используют в качестве положительного контроля.

Культуры клеток

Клетки U937-3xkB-LUC (Carlsen, J. Immun, 2002) культивируют в среде RPMI-1640 с L-глутамином (2 нМ), пенициллином (50 Ед./мл), стрептомицином (50 мг/мл), гигромицином (75 мкг/мл), 10% фетальной сывороткой теленка при 37°C и 5% CO₂. Клетки высевают в 24-луночные планшеты, где к среде добавляют 1% фетальную сыворотку теленка. Активность NF-kB индуцируют с помощью липополисахарида (LPS) (1 мкг/мл) или TNF- человека (10 нг/мл). Выживаемость клеток измеряют с помощью окрашивания трипаном голубым.

Анализ активности люциферазы

Активность люциферазы измеряют посредством получения изображений с помощью IVIS Imaging System от Xenogen Corp., USA. Люминесценцию детектируют через 1 мин и 5 мин после добавления 0,2 мг d-люциферина на мл клеточной среды. Количество фотонов в каждой лунке в секунду вычисляют с использованием программного обеспечения Living Image Software (Xenogen Corp., USA).

Результаты

Некоторые из соединений, охватываемых настоящим изобретением, являются сильнодействующими ингибиторами пути NF- B (соединение 13 и 25). Эти два соединения имеют сильное ингибирующее действие, сходное с дексаметазоном, см. фиг.1.